Leica CRYOEMBEDDING User Manual

Système de
cryoinclusion de précision

Les coupes congelées deviennent des œuvres d’art !

Système de cryoinclusion de précision

Réalisez une bonne orientation des échantillons et un enrobage parfait

sans difficulté, avec le système unique de cryoinclusion de précision.

Le système de précision a été mis au point par le docteur Stephen Peters,

pathologiste américain, pour accélérer et améliorer les coupes

congelées et écourter le processus d’apprentissage des internes

pathologistes. Les composants individuels du système peuvent s’utiliser

dans une variété de procédures d’inclusion permettant l’enrobage

parfait et l’orientation adéquate de la quasi-totalité des types

d’échantillons. Confort d’exécution du processus à l’intérieur du

cryostat grâce aux barres de puits, mandrins et blocs de congélation

en acier inoxydable. Grâce au stockage à basse température des

composants du système de cryoinclusion de précision, la congélation

de la plupart des échantillons intervient dans un délai compris entre 20

et 60 secondes suivant leur taille et la technique de congélation

sélectionnée. Ceci réduit considérablement le temps d’exécution.

Et, les échantillons plats bien orientés sont conservés pendant le

processus de coupe ! Que demander de plus ?

Composition du système de cryoinclusion de précision :

•3 barrettes de puits en 3 dimensions (18, 24 et 30 mm)

•6 petits mandrins

•4 grands mandrins

•4 extracteurs de chaleur sur mandrin

•1 cellule de stockage des mandrins

• 16 lames

•1 planche à découper/plaque de congélation

•1 extracteur de chaleur surélevé

•1 paire de pinces coudées pour inclusion et accessoires

Composants de cryoinclusion de la cuve cryogénique Leica CM1850

Accessoires de cryoinclusion de précision

Orientation plate parfaite

Tous les échantillons, simples ou multiples, grands ou petits, solides ou
liquides peuvent être inclus à plat et en plan simple.

Technique

1. Orientez le(s) échantillon(s), face en dessous, sur une fine lame

en plastique.

2. Mettez l’extrémité d’un échantillon en contact avec l’enceinte

froide du puits d’inclusion et retirez délicatement la lame en
positionnant l’échantillon. Répétez l’opération si nécessaire.

3. Surchargez légèrement le puits de milieu d’inclusion.

4. Placez un mandrin par-dessus le puits.

5. Placez un bloc de congélation sur le mandrin par-dessus la tige

du mandrin.

6. Retirez le bloc de congélation et percez la tige du mandrin

lorsque la congélation est terminée (habituellement entre 20 et 60
secondes) pour retirer le bloc enrobé du puits d’inclusion.

1 2

3 4

5 6

Résultats

A: Bloc fini
B: Coupe colorée sur lame
C: Photomicrographie

A B C

Cryoinclusion face en dessous

Résultats

A: Bloc fini
B: Coupe colorée sur lame
C: Photomicrographie

(coupes repositionnées en
photographie)

Orientation précise et verticale

Inclusion et congélation des échantillons entiers, puis mappage et
découpage en fragments plats et rigides. Les fragments plats congelés
sont ensuite enrobés verticalement. Cette technique est parfaite dans
le cas d’échantillons peu résistants, tubulaires, bouclés ou angulaires
et s’avère particulièrement utile dans les recoupes.

Technique

1. Placez l’échantillon face en dessous sur la plaque de con-

gélation.

2. Recouvrez l’échantillon d’une couche de milieu d’inclusion.

3. Recouvrez l’échantillon du bloc de congélation surélevé

approprié.

4. Après congélation complète, procédez au mappage de l’échan-

tillon.

5. Fragmentez le bloc enrobé sur la planche à découper froide, en

conservant les fragments froids sur la surface métallique adja­cente (la photo principale, #5 à gauche illustre la coupe centrale
et l’encart une coupe longitudinale.)

6. Placez les fragments face en dessous (dans l’encart de la photo

#6 les fragments sont face au-dessus) dans le puits d’inclusion et
congelez-les en utilisant la procédure décrite sous la cryo­inclusion face en dessous.

1 2

3 4

5 6

A

B C

Cryoinclusion de blocs de congélation

1 2

3 4

A B

C D

Positionnement convenable d’échantillons difficiles

Cette technique sert à maintenir l’orientation d’échantillons délicats
ou peu résistants ou à disposer des échantillons multiples de façon à
ce qu’ils restent dans le même plan de coupe.

Technique

1. Trempez un petit fragment de papier lentille dans un milieu

d’inclusion et mettez-le à plat sur la lame.

2. Placez l’échantillon(s) sur le papier lentille en prenant soin de

bien l’orienter. Laissez le papier surplomber la lame à une
extrémité.

3. Mettez le papier lentille en contact avec le fond froid du puits

d’inclusion et tirez légèrement sur la lame. L’échantillon restera
correctement positionné sur le papier lentille.

4. Coupez à travers le papier sur la partie de coupe de la lame puis

passez à une partie propre pour découper l’échantillon. (bloc
non ébarbé dans la partie supérieure de la photo #4 et bloc fini
dans la partie inférieure.)

Résultats

A: Grand échantillon non disséqué, lame et papier lentille
B: Échantillon disséqué à bord encré
C: Bloc enrobé
D: Coupes colorées sur lame

Cryoinclusion papier

Bestellnummer: B708 2210809/2004

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