Leica ChromoPlex User Manual [en, de, es, fr, it]
ChromoPlex™ 1 Dual Detection for BOND
Catalog No: DS9477
Leica Biosystems Newcastle Ltd
Balliol Business Park West
Benton Lane
Newcastle Upon Tyne NE12 8EW
United Kingdom
( +44 191 215 4242
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www.LeicaBiosystems.com
DS9477
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ChromoPlex™ 1 Dual Detection for BOND
Catalog No: DS9477
Intended Use
This detection system is for in vitro diagnostic use.
ChromoPlex™ 1 Dual Detection is a biotin-free, polymeric horseradish peroxidase (HRP)-linker and polymeric alkaline phosphatase
(AP)-linker antibody conjugate system for the detection of tissue-bound mouse and rabbit IgG primary antibodies. It is intended for
staining sections of formalin-xed, parafn-embedded tissue on the BOND automated system.
The clinical interpretation of any staining or its absence should be complemented by morphological studies. Proper controls should be
evaluated within the context of the patient’s clinical history and other diagnostic tests by a qualied pathologist.
The ChromoPlex 1 Dual Detection must be used with laboratory best practice in the use of tissue controls. For assurance, laboratories
should stain each patient sample in conjunction with positive, negative and other tissue specic controls as needed.
Summary and Explanation
Immunohistochemical techniques can be used to demonstrate the presence of antigens in tissue and cells (see “Using BOND Reagents”
in your BOND user documentation).
ChromoPlex 1 Dual Detection utilizes a novel controlled polymerization technology to prepare polymeric HRP-linker and AP-linker
antibody conjugates. The detection system avoids the use of streptavidin and biotin, and therefore eliminates non-specic staining as a
result of endogenous biotin.
ChromoPlex 1 Dual Detection works as follows:
The specimen is incubated with hydrogen peroxide to quench endogenous peroxidase activity.•
A user-supplied specic primary mouse and rabbit antibody cocktail is applied.•
Poly-HRP IgG reagent localizes mouse antibodies.•
Poly-AP IgG reagent localizes rabbit antibodies.•
The rst substrate chromogen, 3,3’-Diaminobenizidine tetrahydrochloride (DAB), visualizes mouse antibodies via a brown precipitate.•
The second substrate chromogen (Fast Red) visualizes rabbit antibodies via a red precipitate.•
Hematoxylin (blue) counterstaining allows the visualization of cell nuclei.•
Using ChromoPlex 1 Dual Detection in combination with the BOND automated system reduces the possibility of human error and
inherent variability resulting from individual reagent dilution, manual pipetting and reagent application.
Reagents Provided
The reagents provided are sufcient for 25 individual BOND staining runs, or a maximum of 100 slides.
To achieve a maximum of 100 slides from this detection system, slides must be batched in quantities of 4 or greater, per Slide Staining
Assembly. Batching in quantities of less than 4 will result in fewer stained slides.
Peroxide Block (15 mL) 3-4% Hydrogen peroxide.1.
Polymer mHRP (15 mL) Poly-HRP anti-mouse containing 10% (v/v) animal serum in Tris-buffered saline and 0.09% ProClin2.
Polymer rAP (15 mL) Poly-AP anti-rabbit containing 10% (v/v) animal serum in Tris-buffered saline and 0.09% ProClin 950.3.
DAB Part 1 (2 mL) 66 mM 3,3’-Diaminobenzidine tetrahydrochloride in a stabilizer solution.4.
DAB Part B (35 mL) ≤0.1% (v/v) Hydrogen peroxide in a stabilizer solution.5.
Red Part A (5.5 mL) Activator containing 0.5% ProClin 950.6.
Red Part B (1.0 mL) Substrate.7.
Red Part C (1.0 mL) Substrate.8.
Red Part D (35 mL) Buffer solution containing 0.5% ProClin 950.9.
Hematoxylin DS9477 (15 mL) <0.1% Hematoxylin.10.
Dilution and Mixing
ChromoPlex 1 Dual Detection is optimized for use on the BOND system.
Reconstitution, mixing, dilution, or titration of these reagents is not required.
Materials Required But Not Provided
Mounting media compatible with ChromoPlex 1 Dual Detection (see Precautions).
Refer to “Using BOND Reagents” in your BOND user documentation for a complete list of materials required for specimen treatment and
immunohistochemical staining using the BOND system.
Storage and Stability
Store at 2–8 °C. Do not freeze. Do not use after the expiration date indicated on the tray handle label. Return to 2–8 °C immediately after
use.
There are no obvious signs to indicate instability of this product; therefore positive and negative controls should be run simultaneously
with unknown specimens (refer to “Quality Control” in the “Using BOND Reagents” section of your BOND user documentation).
If unexpected staining is observed that cannot be explained by variations in laboratory procedures, and a problem with the detection
system is suspected, contact your local distributor or the regional ofce of Leica Biosystems immediately.
Storage conditions other than those specied above must be veried by the user1.
™
950.
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Precautions
WARNING - some mounting media may cause the red chromogen to crystallize or fade.•
DO NOT USE DPX, Entellan•
Pertex mounting media as they are not suitable for use with this product.
Fading or crystallization has not been observed with: Leica CV Ultra Mounting Media (Cat 14070937891), Poly-Mount•
Inc. Cat 08381), VectaMount™ (Vector Laboratories Cat H-5000) and Limonene Mount (Electron Microscopy Sciences Cat 17987-01).
The compatibility of other mounting media should be fully validated by the user prior to use. Failure to do so may result in a reduction •
of staining due to fading or crystallization.
The concentration of ProClin 950, the preservative used in some BOND detection system components, is 0.5% or 0.09%. It contains •
the active ingredient 2-methyl-4-isothiazolin-3-one, and may cause irritation to the skin, eyes, mucous membranes and upper
respiratory tract. Wear disposable nitrile gloves when handling reagents.
3,3’-Diaminobenzidine tetrahydrochloride (a constituent of DAB Part 1) is a potential carcinogen•
eyes, mucous membranes and upper respiratory tract. Wear disposable nitrile gloves, handle with care and do not breathe fumes.
Dispose of according to local regulations.
The activator and substrate solutions may cause irritation to the skin, eyes, mucous membranes and upper respiratory tract. Wear •
disposable nitrile gloves when handling reagents. Dispose of according to local regulations.
To obtain a copy of the Material Safety Data Sheet contact your local distributor or regional ofce of Leica Biosystems. Alternatively, •
visit the Leica Biosystems’ Web site, www.LeicaBiosystems.com
Specimens, before and after xation, and all materials exposed to them, should be handled as if capable of transmitting infection and •
disposed of with proper precautions3. Never pipette reagents by mouth and avoid contacting the skin and mucous membranes with
reagents or specimens. If reagents or specimens come in contact with sensitive areas, wash with copious amounts of water. Seek
medical advice.
Consult Federal, State or local regulations for disposal of any potentially toxic components. •
Minimize microbial contamination of reagents or an increase in non-specic staining may occur.•
Incubation times or temperatures other than those specied may give erroneous results. Any such change must be validated by the •
user1.
Do not mix reagents from different detection systems.•
®
, Leica CV Mount, Eukitt® quick-hardening mounting medium, Surgipath MM 24®, Surgipath Sub-X® and
®
(Polysciences
2
and may cause irritation to the skin,
Instructions for Use
The ChromoPlex 1 Dual Detection was developed for use on the BOND automated system using *IHC Protocol K. Operating parameters
for application of the detection system reagents on the BOND Processing Module have been optimized by Leica Biosystems. These can
be displayed by following the instructions in your BOND user documentation.
Use rapid alcohol/xylene dehydration.
After completing or aborting *IHC Protocol K there is a delay of approximately 15 minutes before the BOND system will start another run
on the same Slide Staining Assembly.
Product Specic Limitations
ChromoPlex 1 Dual Detection has been optimized at Leica Biosystems for use with BOND ancillary reagents. Laboratories may use their
own primary antibody cocktails provided they have been diluted to an appropriate concentration with BOND Primary Antibody Diluent
(Catalog No. AR9352). Users who deviate from recommended test procedures must accept responsibility for interpretation of patient
results under these circumstances.
The appropriate concentration of user’s own primary antibodies may vary due to variation in tissue xation and the effectiveness
of antigen enhancement, and must be determined empirically. Negative reagent controls should be used when optimizing retrieval
conditions and primary antibody concentrations.
The clinical interpretation of any staining or its absence should be complemented by morphological studies and proper controls.
They should be evaluated within the context of the patient’s clinical history and other diagnostic tests by a qualied pathologist.
Some mounting media are not compatible with ChromoPlex 1 Dual Detection (see Precautions).
Contact your local distributor or regional ofce of Leica Biosystems for further information.
Troubleshooting
Refer to reference 4 for remedial action.
Contact your local distributor or the regional ofce of Leica Biosystems to report unusual staining.
Further Information
Further information on immunostaining with BOND reagents, under the headings Principle of the Procedure, Materials Required,
Specimen Preparation, Quality Control, Assay Verication, Interpretation of Staining, Key to Symbols on Labels and General Limitations
can be found in “Using BOND Reagents” in your BOND user documentation.
Bibliography
Clinical laboratory Improvement Amendments of 1988, Final Rule 57 FR 7163 February 28, 1992.1.
List of substances which may be candidates for further scientic review and possible identication, classication and regulation as 2.
potential occupational carcinogens. Fed Reg 1980; 45:157.
Villanova PA. National Committee for Clinical Laboratory Standards (NCCLS). Protection of laboratory workers from infectious 3.
diseases transmitted by blood and tissue; proposed guideline. 1991; 7(9). Order code M29-P.
Bancroft JD and Stevens A. Theory and Practice of Histological Techniques. 44.
th
Edition. Churchill Livingstone, New York. 1996.
ProClin 950 is a trademark of Supelco, a part of Sigma-Aldrich Corporation.
Date of Issue
16 November 2011
DS9477
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ChromoPlex™ 1 Dual Detection for BOND
Référence: DS9477
Utilisation prévue
Le présent système de détection est destiné à une utilisation diagnostique in vitro.
ChromoPlex™ 1 Dual Detection est un système sans biotine de conjugués d’anticorps et de polymères marqués à la peroxydase du
raifort (HRP) et à la phosphatase alcaline (AP) pour la détection d’anticorps IgG primaires de souris et de lapin liés à des tissus. Il est
prévu pour la coloration sur le système automatisé BOND de coupes de tissus xés au formol et inclus dans de la parafne.
L’interprétation clinique de toute coloration, ou de son absence, doit être complétée par des études morphologiques. Des contrôles
adéquats doivent être évalués par un pathologiste qualié dans le contexte de l’anamnèse clinique du patient et d’autres tests
diagnostiques.
Le ChromoPlex 1 Dual Detection doit être utilisé selon les meilleures pratiques de laboratoire dans les contrôles de tissus. À des ns
d’assurance, les laboratoires doivent colorer chaque échantillon de patient conjointement à des contrôles positifs, négatifs et à d’autres
contrôles spéciques de tissus le cas échéant.
Résumé et explication
Les techniques immunohistochimiques peuvent être utilisées pour démontrer la présence d’antigènes dans des tissus et des cellules (cf.
« Utilisation des réactifs du BOND » dans la documentation de l’utilisateur du BOND).
Le ChromoPlex 1 Dual Detection utilise une nouvelle technologie de polymérisation contrôlée pour préparer des conjugués d’anticorps
et de polymères marqués à la HRP et à la AP. Le système de détection évite l’utilisation de streptavidine et de biotine, et par conséquent
élimine une coloration non spécique provenant de biotine endogène.
Le ChromoPlex 1 Dual Detection fonctionne comme suit :
L’échantillon est incubé avec du peroxyde d’hydrogène pour bloquer l’activité de la peroxydase endogène.•
Un cocktail d’anticorps primaires spéciques de souris et de lapin fournis par l’utilisateur est appliqué.•
Le réactif IgG poly-HRP localise les anticorps de souris.•
Le réactif IgG poly-AP localise des anticorps de lapin.•
Le premier substrat chromogène, tétrahydrochlorure de 3,3’-diaminobenzidine (DAB), permet de visualiser les anticorps de souris •
sous forme d’un précipité marron.
Le deuxième substrat chromogène, le rouge nucléaire rapide (Fast Red), permet de visualiser les anticorps de lapin sous forme d’un •
précipité rouge.
Une contre-coloration à l’hématoxyline (bleu) permet la visualisation des noyaux cellulaires.•
L’utilisation du ChromoPlex 1 Dual Detection combiné au système automatisé BOND réduit la possibilité d’erreur humaine et de
variabilité inhérente à la dilution des réactifs individuels, au pipetage manuel et à l’application du réactif.
Réactifs fournis
Les réactifs fournis sont sufsants pour 25 colorations individuelles BOND, soit un maximum de 100 lames.
Pour réaliser un maximum de 100 lames avec ce système de détection, celles-ci doivent être groupées par 4 ou plus, par ensemble de
coloration de lames. Si la mise en lot se fait avec des quantités inférieures à 4, moins de lames seront colorées.
Peroxide Block (15 mL) 3 à 4 % de peroxyde d’hydrogène.1.
Polymer mHRP (15 mL) Poly-HRP anti-souris contenant (v/v) 10 % de sérum animal dans du sérum physiologique TBS et 0,09 % 2.
ProClin™ 950.
Polymer rAP (15 mL) Poly-AP anti-lapin contenant (v/v) 10 % de sérum animal dans du sérum physiologique TBS et 0,09 % ProClin 3.
950.
DAB Part 1 (2 mL) 66 mM tétrahydrochlorure de 3,3’-diaminobenzidine dans une solution de stabilisateur.4.
DAB Part B (35 mL) ≤ 0,1 % (v/v) peroxyde d’hydrogène dans une solution de stabilisateur.5.
Red Part A (5.5 mL) Activateur contenant 0,5 % ProClin 950.6.
Red Part B (1.0 mL) Substrat.7.
Red Part C (1.0 mL) Substrat.8.
Red Part D (35 mL) Solution tampon contenant 0,5 % ProClin 950.9.
Hematoxylin DS9477 (15 mL) < 0,1 % Hématoxyline.10.
Dilution et mélange
Le ChromoPlex 1 Dual Detection est optimisé pour l’utilisation avec le système BOND.
La reconstitution, le mélange, la dilution ou le titrage de ces réactifs n’est pas nécessaire.
Matériel nécessaire non fourni
Support de montage compatible avec le ChromoPlex 1 Dual Detection (cf. Précautions).
Se référer à « Utilisation des réactifs du BOND » dans la documentation de l’utilisateur du BOND pour une liste complète des matériels
exigés pour le traitement et la coloration immunohistochimique d’échantillons utilisant le système BOND.
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Conservation et stabilité
Entreposer à 2–8 °C. Ne pas congeler. Ne pas utiliser après la date de péremption indiquée sur l’étiquette du manche du plateau.
Retourner immédiatement à 2–8 °C après utilisation.
Il n’y a pas de signe évident indicatif de l’instabilité de ce produit ; par conséquent des contrôles positifs et négatifs doivent être effectués
simultanément avec les échantillons inconnus (cf. « Contrôle de la qualité » dans la section « Utilisation des réactifs du BOND » de la
documentation de l’utilisateur du BOND).
Si on observe une coloration inattendue qui ne peut être expliquée par des variations de procédures de laboratoire, et si un problème
avec le système de détection est suspecté, contactez immédiatement votre distributeur local ou le bureau régional de Leica Biosystems.
Les conditions de stockage autres que celles spéciées ci-dessus doivent être validées par l’utilisateur1.
Précautions
MISE EN GARDE - certains supports de montage peuvent causer une cristallisation ou décoloration du chromogène rouge.•
NE PAS UTILISER les supports de montage DPX, Entellan•
MM 24®, Surgipath Sub-X® et Pertex car leur utilisation n’est pas adéquate avec ce produit.
Une décoloration ou cristallisation n’a pas été observée avec : Leica CV Ultra Mounting Media (Réf. 14070937891), Poly-Mount•
(Polysciences Inc. Réf. 08381), VectaMount™ (Vector Laboratories Réf. H-5000) et Limonene Mount (Electron Microscopy Sciences
Réf. 17987-01).
La compatibilité d’autres supports de montage doit être complètement validée par l’utilisateur avant utilisation. À défaut de le faire, •
une réduction de la coloration due à une décoloration ou à une cristallisation peut avoir lieu.
La concentration en ProClin 950, l’agent de conservation utilisé dans certains composants du système de détection BOND, est de •
0,5 % ou 0,09 %. Il contient le principe actif 2-méthyle-4-isothiazoline-3-one, et peut causer une irritation de la peau, des yeux, des
muqueuses et des voies respiratoires supérieures. Mettre des gants jetables en nitrile lors de la manipulation des réactifs.
Le tétrahydrochlorure de 3,3’-diaminobenzidine (un composant de DAB Part 1) est un carcinogène•
de la peau, des yeux, des muqueuses et des voies respiratoires supérieures. Mettre des gants jetables en nitrile, manipuler avec soin
et ne pas en respirer les vapeurs. Éliminer conformément aux règlements locaux.
Les solutions d’activateur et de substrat peuvent causer l’irritation de la peau, des yeux, des muqueuses et des voies respiratoires •
supérieures. Mettre des gants jetables en nitrile lors de la manipulation des réactifs. Éliminer conformément aux règlements locaux.
Pour obtenir une copie de la che technique sur la sécurité du matériel, contacter votre distributeur local ou le bureau régional de •
Leica Biosystems. Sinon, visiter le site Web de Leica Biosystems, www.LeicaBiosystems.com
Les échantillons, avant et après xation, et tous les matériels qui leur sont exposés, doivent être manipulés comme s’ils étaient •
capables de transmettre une infection et éliminés en prenant les précautions adéquates3. Ne jamais pipeter de réactif à la bouche et
éviter tout contact des réactifs ou des échantillons avec la peau et les muqueuses. Si les réactifs ou échantillons entrent en contact
avec des régions sensibles, laver abondamment à l’eau. Demander un avis médical.
Consulter les règlements fédéraux, d’État ou locaux pour éliminer les composants potentiellement toxiques. •
Minimiser la contamination microbienne des réactifs sinon une augmentation de coloration non-spécique peut se produire.•
Les durées ou températures d’incubation autres que celles spéciées peuvent donner lieu à des résultats erronés. Tout changement •
de la sorte doit être validé par l’utilisateur1.
Ne pas mélanger les réactifs de différents systèmes de détection.•
®
, Leica CV Mount, Eukitt® quick-hardening mounting medium, Surgipath
2
potentiel et peut causer l’irritation
®
Mode d’emploi
Le ChromoPlex 1 Dual Detection a été développé pour l’utilisation avec le système automatisé BOND qui exploite le *IHC Protocol K.
Les paramètres d’utilisation pour l’application des réactifs du système de détection sur le Module de Traitement BOND ont été optimisés
par Leica Biosystems. Ceux-ci peuvent être afchés en suivant les instructions contenues dans la documentation de l’utilisateur du
BOND.
Utiliser une déshydratation rapide à l’alcool/xylène.
Après avoir terminé ou avorté *IHC Protocol K, il y a un délai d’environ 15 minutes avant que le système BOND ne recommence un
nouveau cycle sur le même ensemble de coloration de lames.
Limites spéciques du produit
ChromoPlex 1 Dual Detection a été optimisé chez Leica Biosystems pour une utilisation avec les réactifs auxiliaires du BOND.
Les laboratoires peuvent utiliser leurs propres cocktails d’anticorps primaires à condition qu’ils aient été dilués à une concentration
appropriée avec le BOND Primary Antibody Diluent (N° Catalogue AR9352). Les utilisateurs qui dévient des procédures d’analyse
recommandées doivent accepter la responsabilité de l’interprétation des résultats des patients dans de telles circonstances.
La concentration appropriée des anticorps primaires propres à l’utilisateur peut varier suite à des variations de xation des tissus et à
l’efcacité de l’augmentation de l’immunogénicité de l’antigène, et doit être déterminée empiriquement. Des contrôles négatifs de réactif
doivent être utilisés lors de l’optimisation des conditions de recouvrement et des concentrations d’anticorps primaires.
L’interprétation clinique de toute coloration ou de son absence doit être complétée par des études morphologiques et des contrôles
adéquats. Ceux-ci doivent être évalués par un pathologiste qualié dans le contexte de l’anamnèse clinique du patient et d’autres
analyses diagnostiques.
Certains supports de montage ne sont pas compatibles avec ChromoPlex 1 Dual Detection (cf. Précautions).
Contacter votre distributeur local ou bureau régional Leica Biosystems pour des renseignements supplémentaires.
Résolution des problèmes
Consulter la référence 4 pour des mesures correctives.
Contacter votre distributeur local ou le bureau régional Leica Biosystems pour signaler une coloration inhabituelle.
Informations complémentaires
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Pour plus de renseignements sur l’immunocoloration avec les réactifs du BOND, sous les entêtes Principe de la procédure, Matériels
requis, Préparation des échantillons, Contrôle de la qualité, Vérication des dosages, Interprétation de la coloration, Clé des symboles
sur les étiquettes et Limitations générales, consulter « Utilisation des Réactifs BOND » dans la documentation de l’utilisateur du BOND.
Bibliographie
Clinical laboratory Improvement Amendments of 1988, Final Rule 57 FR 7163 February 28, 1992.1.
List of substances which may be candidates for further scientic review and possible identication, classication and regulation as 2.
potential occupational carcinogens. Fed Reg 1980; 45:157.
Villanova PA. National Committee for Clinical Laboratory Standards (NCCLS). Protection of laboratory workers from infectious 3.
diseases transmitted by blood and tissue; proposed guideline. 1991; 7(9). Order code M29-P.
Bancroft JD and Stevens A. Theory and Practice of Histological Techniques. 44.
th
Edition. Churchill Livingstone, New York. 1996.
ProClin 950 est une marque commerciale de Supelco, membre du groupe Sigma-Aldrich Corporation.
Date de publication
16 novembre 2011
DS9477
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ChromoPlex™ 1 Dual Detection for BOND
N. catalogo: DS9477
Uso previsto
Questo sistema di rilevazione è inteso per un uso diagnostico in vitro.
ChromoPlex™ 1 Dual Detection è un sistema di anticorpi coniugati alla perossidasi di rafano polimerica (HRP)-linker ed alla fosfatasi
lcalina polimerica (AP)-linker, senza biotina, per la rilevazione di anticorpi primari IgG di topo e di coniglio legati a tessuto. È previsto per
la colorazione di sezioni ssate in formalina, o di tessuto incluso in parafna con il sistema automatizzato BOND.
L’interpretazione clinica di qualsiasi colorazione o della sua assenza devono essere integrate da studi morfologici. Controlli appropriati
devono essere valutati da un patologo qualicato nel contesto della storia clinica del paziente e di altri test diagnostici.
Il sistema ChromoPlex 1 Dual Detection deve essere usato con le metodiche della buona pratica di laboratorio relative all’uso di controlli
di tessuto. Per sicurezza, i laboratori devono colorare i campioni di ciascun paziente insieme a controlli positivi e negativi ed altri controlli
specici del tessuto, come ritenuto necessario.
Sommario e spiegazione
Le tecniche immunoistochimiche possono essere usate per dimostrare la presenza di antigeni in tessuti e cellule (vedere “Utilizzo dei
reagenti BOND” nella documentazione di BOND per l’utilizzatore).
ChromoPlex 1 Dual Detection utilizza una nuova tecnologia di polimerizzazione controllata per preparare gli anticorpi coniugati polimerici
HRP-linker e AP-linker. Il sistema di rilevazione evita l’uso di streptavidina e biotina, eliminando quindi colorazioni non speciche che
risultano dalla biotina endogena.
ChromoPlex 1 Dual Detection funziona nel modo seguente:
Il campione viene incubato con perossido di idrogeno per attenuare l’attività della perossidasi endogena.•
Viene applicato un cocktail di anticorpi primari anti-topo e anti-coniglio fornito dall’utilizzatore.•
Il reagente Poly-HRP IgG localizza gli anticorpi anti-topo.•
Il reagente Poly-AP IgG localizza gli anticorpi anti-coniglio.•
Il primo substrato cromogeno, il 3,3’-Diaminobenzidina tetraidrocloruro (DAB), visualizza gli anticorpi anti-topo per mezzo di un •
precipitato marrone.
Il secondo substrato cromogeno (Fast Red), visualizza gli anticorpi anti-coniglio mediante un precipitato rosso.•
La colorazione di contrasto con ematossilina (blu) permette di visualizzare il nucleo delle cellule.•
L’utilizzo di ChromoPlex 1 Dual Detection in combinazione con il sistema automatizzato BOND riduce la possibilità di errore umano e la
variabilità intrinseca risultante dalla diluizione individuale del reagente, dalla pipettatura manuale e dall’applicazione del reagente.
Reagenti forniti
I reagenti forniti sono sufcienti per 25 corse individuali di colorazione con BOND o per un massimo di 100 vetrini.
Per ottenere un massimo di 100 vetrini da questo sistema di rilevazione, i vetrini devono essere raggruppati in gruppi di 4 o superiori,
nell’assemblaggio di colorazione dei vetrini. Il raggruppamento in quantità inferiori a 4 porterà alla colorazione di un numero inferiore di
vetrini.
Peroxide Block (15 mL) 3-4% perossido di idrogeno.1.
Polymer mHRP (15 mL) anti-topo Poly-HRP contenente il 10% (v/v) di siero animale in soluzione salina tamponata con Tris e 0,09% 2.
ProClin™ 950.
Polymer rAP (15 mL) anti-coniglio Poly-AP contenente il 10% (v/v) di siero animale in soluzione salina tamponata con Tris e 0,09% 3.
ProClin 950.
DAB Part 1 (2 mL) 66 mM 3,3’-Diaminobenzidina tetraidrocloruro in una soluzione stabilizzante.4.
DAB Part B (35 mL) ≤0,1% (v/v) perossido di idrogeno in una soluzione stabilizzante.5.
Red Part A (5,5 mL) Catalizzatore contenente 0,5% ProClin 950.6.
Red Part B (1,0 mL) Substrato.7.
Red Part C (1,0 mL) Substrato.8.
Red Part D (35 mL) Soluzione tampone contenente 0,5% ProClin 950.9.
Hematoxylin DS9477 (15 mL) <0,1% Ematossilina.10.
Diluizione e miscelazione
ChromoPlex 1 Dual Detection è ottimizzato per l’utilizzo con il sistema BOND.
La ricostituzione, la miscelazione, la diluizione o la titolazione di questi reagenti non è richiesta.
Materiali richiesti ma non forniti
Mezzi di supporto compatibili con il ChromoPlex 1 Dual Detection (vedere Precauzioni).
Fare riferimento a “Utilizzo dei reagenti BOND” nella documentazione di BOND per l’utilizzatore per un elenco completo di materiali
richiesti per il trattamento del campione e della colorazione immunoistochimica con il sistema BOND.
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Conservazione e stabilità
Conservare a 2-8 °C. Non congelare. Non usare dopo la data di scadenza indicata nell’etichetta dell’impugnatura del vassoio. Riporre a
2–8 °C immediatamente dopo l’uso.
Non vi sono ovvi segni che indicano l’instabilità di questo prodotto; pertanto, contemporaneamente ai campioni non noti, devono
essere corsi i controlli positivi e negativi (fare riferimento al “Controllo di qualità” nel paragrafo “Utilizzo dei reagenti BOND”della
documentazione di BOND per l’utilizzatore).
Qualora si osservi una colorazione inaspettata che non possa essere spiegata da variazioni delle procedure di laboratorio, e si sospetta
un problema con il sistema di rilevazione, contattare immediatamente il distributore locale o l’ufcio regionale di Leica Biosystems.
Le condizioni di conservazione, oltre a quelle sopra specicate, devono essere vericate dall’utilizzatore1.
Precauzioni
AVVERTENZE - alcuni mezzi di supporto possono provocare la cristallizzazione o lo scolorimento del cromogeno rosso.•
NON USARE mezzi di supporto quali DPX, Entellan•
Surgipath Sub-X® e Pertex poiché non sono adatti ad essere utilizzati con questo prodotto.
Lo scolorimento e la cristallizzazione non sono stati osservati con: Leica CV Ultra Mounting Media (Cat 14070937891), Poly-Mount•
(Polysciences Inc. Cat 08381), VectaMount™ (Vector Laboratories Cat H-5000) e Limonene Mount (Electron Microscopy Sciences Cat
17987-01).
La compatibilità di altri mezzi di supporto deve essere convalidata in modo completo dall’utilizzatore prima dell’uso. Non fare questo •
può portare ad una riduzione della colorazione a causa di scolorimento o cristallizzazione.
La concentrazione di ProClin 950, il conservante usato in alcuni componenti del sistema di rilevazione BOND, è 0,5% o 0,09%. •
Contiene l’ingrediente attivo 2-metil-4-isotiazolina-3-one, e può provocare irritazione cutanea, agli occhi, alle membrane mucose ed
alle vie aeree superiori. Indossare guanti usa e getta di nitrile durante la manipolazione dei reagenti.
La 3,3’-diaminobenzidina tetraidrocloruro (un componente di DAB Part 1) è un potenziale agente carcinogeno•
irritazione cutanea, agli occhi, alle membrane mucose ed alle vie aeree superiori. Indossare guanti usa e getta di nitrile, maneggiare
con cura e non inalare i fumi. Smaltire in accordo con le direttive locali.
L’attivatore e le soluzioni substrato possono provocare irritazione cutanea, agli occhi, alle membrane mucose ed alle vie respiratorie •
superiori. Indossare guanti usa e getta di nitrile durante la manipolazione dei reagenti. Smaltire in accordo con le direttive locali.
Per ottenere una copia delle schede sulla sicurezza dei materiali contattare il distributore locale o l’ufcio regionale di Leica •
Biosystems. Alternativamente, visitare il web site di Leica Biosystems, www.LeicaBiosystems.com
I campioni, prima e dopo il ssaggio, e tutti i materiali esposti ad essi, devono essere maneggiati come se fossero infettivi e smaltiti •
con le precauzioni appropriate3. Non pipettare mai i reagenti con la bocca ed evitare il contatto della pelle e delle membrane mucose
con i reagenti o i campioni. Se i reagenti o i campioni vengono in contatto con aree sensibili, lavare con abbondante quantità di
acqua. Chiedere assistenza medica.
Consultare i regolamenti Statali, Regionali o locali per lo smaltimento dei componenti potenzialmente tossici. •
Minimizzare la contaminazione microbica dei reagenti per evitare un potenziale aumento della colorazione non specica.•
Tempi o temperature di incubazione diversi da quelli specicati possono portare a risultati errati. Ciascuno di tali cambiamenti deve •
essere convalidato dall’utilizzatore1.
Non miscelare i reagenti di altri sistemi di rilevazione.•
®
, Leica CV Mount, Eukitt® quick-hardening mounting medium, Surgipath MM 24®,
2
e può provocare
®
Istruzioni per l’uso
Il ChromoPlex 1 Dual Detection è stato sviluppato per essere utilizzato sul sistema automatizzato BOND con il *IHC Protocol K. I
parametri operativi per l’applicazione dei reagenti del sistema di rilevazione sul modulo di elaborazione di BOND sono stati ottimizzati da
Leica Biosystems. Questi possono essere mostrati seguendo le istruzioni nella documentazione per l’utilizzatore di BOND.
Utilizzo di disidratazione rapida in alcol/xilene.
Dopo aver completato o abortito l’*IHC Protocol K c’è un ritardo di circa 15 minuti prima che il sistema BOND inizi una ulteriore corsa
sullo stesso assemblaggio di colorazione dei vetrini.
Limitazioni speciche del prodotto
ChromoPlex 1 Dual Detection è stato ottimizzato da Leica Biosystems per essere usato con i reagenti ausiliari del sistema BOND. I
laboratori possono usare i loro cocktail di anticorpi primari, a condizione che siano stati diluiti alle concentrazioni appropriate con BOND
Primary Antibody Diluent (numero di catalogo AR9352). Gli utilizzatori che non effettuano le procedure di controllo raccomandate devono
accettare la responsabilità per l’interpretazione dei risultati del paziente in queste circostanze.
La concentrazione appropriata dell’anticorpo primario dell’utilizzatore può variare a causa di variazioni nel ssaggio del tessuto e
l’aumento dell’efcacia dell’antigene e deve essere determinata sperimentalmente. Devono essere usati controlli negativi del reagente
per ottimizzare le condizioni di recupero e le concentrazioni degli anticorpi primari.
L’interpretazione clinica di qualsiasi colorazione o la sua assenza devono essere integrate da studi morfologici e da controlli appropriati.
Questi devono essere valutati da un patologo qualicato nel contesto della storia clinica del paziente e di altri test diagnostici.
Alcuni mezzi di supporto non sono compatibili con il ChromoPlex 1 Dual Detection(vedere Precauzioni).
Contattare il rivenditore locale o l’ufcio regionale di Leica Biosystems per ulteriori informazioni.
Soluzione problemi
Fare riferimento alla voce bibliograca 4 per procedure riparatrici.
Contattare il rivenditore locale o l’ufcio regionale di Leica Biosystems per riportare colorazioni anomale.
Altre informazioni
Altre informazioni sull’immuno-colorazione con i reagenti BOND, nei paragra Principio della procedura, Materiali richiesti, Preparazione
dei campioni, Controllo di qualità, Verica del dosaggio, Interpretazione della colorazione, Chiave ai simboli sulle etichette e Limitazioni
generali possono essere trovate in “Utilizzo dei reagenti BOND” nella documentazione di BOND per l’utilizzatore.
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Bibliograa
Clinical laboratory Improvement Amendments of 1988, Final Rule 57 FR 7163 February 28, 1992.1.
List of substances which may be candidates for further scientic review and possible identication, classication and regulation as 2.
potential occupational carcinogens. Fed Reg 1980; 45:157.
Villanova PA. National Committee for Clinical Laboratory Standards (NCCLS). Protection of laboratory workers from infectious 3.
diseases transmitted by blood and tissue; proposed guideline. 1991; 7(9). Order code M29-P.
Bancroft JD and Stevens A. Theory and Practice of Histological Techniques. 44.
th
Edition. Churchill Livingstone, New York. 1996.
ProClin 950 è un marchio di fabbrica di Supelco, società del gruppo Sigma-Aldrich.
Data di pubblicazione
16 novembre 2011
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ChromoPlex™ 1 Dual Detection for BOND
Bestellnr.: DS9477
Verwendungszweck
Dieses Nachweissystem ist für die In-vitro-Diagnostik bestimmt.
ChromoPlex™ 1 Dual Detection ist ein biotinfreies, Polymer-Meerrettichperoxidase-(HRP)-Linker sowie Polymer-Alkaliphosphatase-(AP)-
Linker enthaltendes Antikörperkonjugatsystem zum Nachweis der gewebegebundenen Primärantikörper Maus-IgG und Kaninchen-IgG.
Es dient der Färbung von Bereichen von formalinxiertem, in Parafn eingebetteten Gewebe auf dem automatisierten BOND-System.
Die klinische Auswertung einer Fäbung bzw. das Nichtvorhandensein einer Färbung sollte von morphologischen Untersuchungen
begleitet werden. Geeignete Kontrollen sollten unter Berücksichtigung der Krankengeschichte des Patienten und anderer diagnostischer
Tests durch einen qualizierten Pathologen durchgeführt werden.
Beim Umgang mit Gewebeproben muss ChromoPlex 1 Dual Detection gemäß den Grundsätzen der Guten Laborpraxis eingesetzt
werden. Zur Sicherheit sollten Laboratorien jede Patientenprobe je nach Bedarf in Verbindung mit positiven, negativen und anderen
gewebespezischen Kontrollen färben.
Zusammenfassung und Erläuterung
Immunhistochemische Verfahren dienen dem Nachweis von Antigenen in Geweben und Zellen (siehe „Verwendung der BONDReagenzien“ in Ihrer BOND-Benutzerdokumentation).
Bei ChromoPlex 1 Dual Detection kommt eine neuartige Technologie zur kontrollierten Polymerisation zum Einsatz, um polymeren
HRP-Linker und AP-Linker enthaltende Antikörperkonjugate herzustellen. Das Detektionssystem funktioniert ohne die Verwendung von
Streptavidin und Biotin und eliminiert dadurch eine nichtspezische Färbung durch endogenes Biotin.
ChromoPlex 1 Dual Detection funktioniert wie folgt:
Die Probe wird mit Wasserstoffperoxid behandelt, um endogene Peroxidase-Aktivität zu löschen.•
Ein vom Benutzer bereitgestellter Cocktail aus spezischen Maus- und Kaninchen-Primärantikörpern wird aufgetragen.•
Das Poly-HRP IgG-Reagenz lokalisiert Maus-Antikörper.•
Das Poly-AP IgG-Reagenz lokalisiert Kaninchen-Antikörper.•
Das erste Substratchromogen 3,3’-Diaminobenizidintetrahydrochlorid (DAB) macht Maus-Antikörper durch einen braunen •
Niederschlag sichtbar.
Das zweite Substratchromogen (Fast Red) macht Kaninchen-Antikörper durch einen roten Niederschlag sichtbar.•
Hämatoxylin (blau)-Gegenfäbung ermöglicht das Sichtbarmachen von Zellkernen.•
Die Verwendung von ChromoPlex 1 Dual Detection in Verbindung mit dem automatisierten BOND-System verringert die Möglichkeit
menschlicher Fehler und die inhärente Variabilität, die sich aus Verdünnungen des Reagenzes, manuellem Pipettieren und
Reagenzauftragung ergeben.
Mitgelieferte Reagenzien
Die mitgelieferten Reagenzien reichen für 25 einzelne BOND-Färbungen oder maximal 100 Objektträger.
Um die Höchstzahl von 100 Objektträgern mit diesem Detektionssystem zu erreichen, müssen Objektträger in Mengen von 4 oder höher
gemäß der Objektträgerfärbungsanordnung zusammengefasst werden. Werden weniger als 4 Objektträger zusammengefasst, wird eine
geringere Anzahl gefärbter Objektträger erhalten.
Peroxide Block (15 mL) 3-4 % Wasserstoffperoxid. 1.
Polymer mHRP (15 mL) Anti-Maus-Poly-HRP mit 10 % (Vol./Vol.) tierischem Serum in Tris-gepufferter Kochsalzlösung und 0,09 % 2.
ProClin™ 950.
Polymer rAP (15 mL) Anti-Kaninchen-Poly-AP mit 10 % (Vol./Vol.) tierischem Serum in Tris-gepufferter Kochsalzlösung und 0,09 % 3.
ProClin 950.
DAB Part 1 (2 mL) 66 mM 3,3’-Diaminobenzidintetrahydrochlorid in einer Stabilisatorlösung.4.
DAB Part B (35 mL) ≤0,1 % (Vol./Vol.) Wasserstoffperoxid in einer Stabilisatorlösung.5.
Red Part A (5.5 mL) Aktivator mit 0,5 % ProClin 950.6.
Red Part B (1.0 mL) Substrat.7.
Red Part C (1.0 mL) Substrat.8.
Red Part D (35 mL) Pufferlösung mit 0,5 % ProClin 950.9.
Hematoxylin DS9477 (15 mL) <0,1 % Hämatoxylin.10.
Verdünnung und Mischung
ChromoPlex 1 Dual Detection wurde für den Einsatz auf dem BOND-System optimiert.
Rekonstitution, Vermischung, Verdünnung oder Titration dieser Reagenzien ist nicht erforderlich.
Erforderliche, aber nicht mitgelieferte Materialien
Mit ChromoPlex 1 Dual Detection kompatibles Einbettmittel (siehe Vorsichtsmaßnahmen).
Eine vollständige Liste der Materialien, die für die Behandlung von Proben und die immunhistochemische Färbung mit dem BOND-
System erforderlich sind, bendet sich im Abschnitt „Verwendung der BOND-Reagenzien“ in ihrer BOND-Benutzerdokumentation.
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