Leica Pax-5 User Manual

Bond™ Ready-To-Use Primary Antibody
Pax-5 (1EW)

Catalog No: PA0552

SV EL DAEN IT ES PTDEFR

Instructions for Use

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Mode d’emploi

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Istruzioni per L’uso

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Gebrauchsanweisung

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Instrucciones de Uso

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Instruções de Utilização

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Bond™ Ready-To-Use Primary Antibody
Pax-5 (1EW)

Catalog No: PA0552

Intended Use

This reagent is for in vitro diagnostic use.

Pax-5 (1EW) monoclonal antibody is intended to be used for the qualitative identication by light microscopy of human Pax-5 in formalin­xed, parafn-embedded tissue by immunohistochemical staining using the automated Bond

The clinical interpretation of any staining or its absence should be complemented by morphological studies and proper controls and
should be evaluated within the context of the patient’s clinical history and other diagnostic tests by a qualied pathologist.

Summary and Explanation

Immunohistochemical techniques can be used to demonstrate the presence of antigens in tissue and cells (see “Using Bond Reagents”
in your Bond user documentation). Pax-5 (1EW) primary antibody is a ready to use product that has been specically optimized for use
with Bond Polymer Rene Detection. The demonstration of human Pax-5 is achieved by rst, allowing the binding of Pax-5 (1EW) to the
section, and then visualizing this binding using the reagents provided in the detection system. The use of these products, in combination
with the automated Bond system, reduces the possibility of human error and inherent variability resulting from individual reagent dilution,
manual pipetting and reagent application.

Reagents Provided

Pax-5 (1EW) is a mouse anti-human monoclonal antibody produced as a tissue culture supernatant, and supplied in Tris buffered saline
with carrier protein, containing 0.35% ProClinTM 950 as a preservative.

Total volume = 7 mL.

Clone

1EW.

Immunogen

Recombinant protein corresponding to part of the C-terminus of the human Pax-5 molecule.

Specicity

Human Pax-5.

Subclass

IgG1.

Total Protein Concentration

Approx 10 mg/mL.

Antibody Concentration

Greater than or equal to 0.34 mg/L as determined by ELISA.

Dilution and Mixing

Pax-5 (1EW) primary antibody is optimally diluted for use on the Bond system. Reconstitution, mixing, dilution or titration of this reagent

is not required.

Materials Required But Not Provided

Refer to “Using Bond Reagents” in your Bond user documentation for a complete list of materials required for specimen treatment and

immunohistochemical staining using the Bond system.

Storage and Stability

Store at 2–8 °C. Do not use after the expiration date indicated on the container label.
The signs indicating contamination and/or instability of Pax-5 (1EW) are: turbidity of the solution, odor development, and presence of

precipitate.
Return to 2–8 °C immediately after use.
Storage conditions other than those specied above must be veried by the user

1

Precautions

• This product is intended for in vitro diagnostic use.

• The concentration of ProClin
the skin, eyes, mucous membranes and upper respiratory tract. Wear disposable gloves when handling reagents.

• To obtain a copy of the Material Safety Data Sheet contact your local distributor or regional ofce of Leica Biosystems, or
alternatively, visit the Leica Biosystems’ Web site, www.LeicaBiosystems.com.

• Specimens, before and after xation, and all materials exposed to them, should be handled as if capable of transmitting infection and
disposed of with proper precautions
reagents or specimens. If reagents or specimens come in contact with sensitive areas, wash with copious amounts of water. Seek

medical advice.

™

950 is 0.35%. It contains the active ingredient 2-methyl-4-isothiazolin-3-one, and may cause irritation to

2

. Never pipette reagents by mouth and avoid contacting the skin and mucous membranes with

TM

system.

.

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• Consult Federal, State or local regulations for disposal of any potentially toxic components.

• Minimize microbial contamination of reagents or an increase in non-specic staining may occur.

• Retrieval, incubation times or temperatures other than those specied may give erroneous results. Any such change must be

validated by the user.

Instructions for Use

Pax-5 (1EW) primary antibody was developed for use on the automated Bond system in combination with Bond Polymer Rene
Detection. The use of Peroxide Block as the rst step in IHC Staining Protocol F will affect the staining achieved with this antibody, for
this reason the recommended staining protocol for Pax-5 (1EW) is an edited version of IHC Staining Protocol F, where the Peroxide
Block step before the MARKER has been deleted and a peroxide block step has been inserted after the MARKER. This modied staining
protocol needs to be created by the user. For instructions on how to edit protocols Refer to “Adding and removing protocol steps ” in your
Bond user documentation. Heat induced epitope retrieval is recommended using Bond Epitope Retrieval Solution 2 for 20 minutes.

Results Expected

Normal Tissues

Pax-5 is a B cell specic nuclear transcription factor that is expressed in pro B, pre B and mature B cells. Clone 1EW detected the
Pax-5 protein in follicular and non-follicular B cells of tonsil 3/3, spleen 3/3, colon 3/3 and small bowel 3/3. Staining of occasional B
lymphocytes was also seen in a variety other tissues 33/69, including adrenal, kidney, esophagus, stomach, liver, pancreas, lung, skin,
prostate, cervix, breast, thyroid, thymus, bone marrow, and pituitary.

Tumor Tissues

Clone 1EW stained 14/14 diffuse large B cell lymphomas, 6/6 follicle center lymphomas, 3/3 MALTomas, 1/1 mantle cell lymphomas, 1/1
Burkitt’s lymphoma, 1/1 T cell rich B cell lymphoma, 5/5 Hodgkin’s disease and 0/11 T cell lymphomas. No staining was observed in a
variety of non-hematological malignancies (n=41).

Pax-5 (1EW) is recommended for use as part of a panel of antibodies for the identication of malignancies of B cell origin.

Product Specic Limitations

Pax-5 (1EW) has been optimized at Leica Biosystems for use with Bond Polymer Rene Detection and Bond ancillary reagents.
Users who deviate from recommended test procedures must accept responsibility for interpretation of patient results under these
circumstances. The protocol times may vary, due to variation in tissue xation and the effectiveness of antigen enhancement, and must
be determined empirically. Negative reagent controls should be used when optimizing retrieval conditions and protocol times.

Troubleshooting

Refer to reference 3 for remedial action.
Contact your local distributor or the regional ofce of Leica Biosystems to report unusual staining.

Further Information

Further information on immunostaining with Bond reagents, under the headings Principle of the Procedure, Materials Required,
Specimen Preparation, Quality Control, Assay Verication, Interpretation of Staining, Key to Symbols on Labels, and General Limitations
can be found in “Using Bond Reagents” in your Bond user documentation.

Bibliography

1. Clinical Laboratory Improvement Amendments of 1988, Final Rule 57 FR 7163 February 28, 1992.

2. Villanova PA. National Committee for Clinical Laboratory Standards (NCCLS). Protection of laboratory workers from infectious

diseases transmitted by blood and tissue; proposed guideline. 1991; 7(9). Order code M29-P.

3. Bancroft JD and Stevens A. Theory and Practice of Histological Techniques. 4th Edition. Churchill Livingstone, New York. 1996.

4. Hansson M, Jerkeman M and Dictor M. Biphenotypic bigenotypic lymphoma with simultaneous expression of PAX5/BSAP and B- and
T-cell markers. European Journal of Haematology. 2007; 79:159–165.

™

ProClin

950 is a trademark of Supelco, a part of Sigma-Aldrich Corporation.

Date of Issue

05 February 2013

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Anticorps Primaire Prêt À L’Emploi Bond™
Pax-5 (1EW)

Référence: PA0552

Utilisation prévue

Ce réactif est destiné au diagnostic in vitro.

L’anticorps monoclonal Pax-5 (1EW) est conçu pour l’identication qualitative en microscopie optique de l’antigène Pax-5 humain sur
tissu xé au formol, inclus en parafne, par marquage immunohistochimique automatisé Bond

L’interprétation clinique de tout marquage ou de son absence doit être complétée par des études morphologiques utilisant des contrôles
appropriés et évaluée dans le contexte des antécédents cliniques du patient et des autres tests diagnostiques par un pathologiste
qualié.

Résumé et explications

Les techniques immunohistochimiques peuvent être utilisées pour la mise en évidence d’antigènes sur tissus ou cellules (voir “Utilisation
des réactifs Bond” dans votre manuel d’utilisation Bond). L’anticorps primaire Pax-5 (1EW) est prêt à l’emploi et a été spécialement
optimisé pour Bond Polymer Rene Detection. La mise en évidence de la molécule Pax-5 humaine est effectuée en hybridant Pax-5
(1EW) sur la coupe, puis en visualisant le complexe avec les réactifs du système de détection. L’utilisation de ces produits, en
association avec l’automate Bond, réduit les possibilités d’erreurs humaines et de variations lors des dilutions, du pipetage manuel et de
l’application des réactifs.

Réactifs fournis

Pax-5 (1EW) est un anticorps monoclonal anti-humain de souris, produit par surnageant de culture de tissu et conditionné dans du
tampon salin Tris avec une protéine de transport, contenant 0,35% de ProClinTM 950 comme conservateur.

Volume total = 7 ml.

Clone

1EW.

Immunogène

Protéine recombinante correspondant à la partie C-terminale de la molécule Pax-5 humaine.

Spécicité

Pax-5 humaine.

Sous-classe

IgG1.

Concentration totale en protéine

Environ 10 mg/ml.

Concentration en anticorps

Supérieure ou égale à 0,34 mg/l, déterminée par ELISA.

Dilution et mélange

L’anticorps primaire Pax-5 (1EW) est à dilution optimale pour utilisation dans Bond. Reconstitution, mélange, dilution ou titration de ce
réactif non nécessaire.

Matériel nécessaire mais non fourni

Voir “Utilisation des réactifs Bond” dans votre manuel d’utilisation pour obtenir la liste complète du matériel nécessaire au traitement des
échantillons et au marquage immunohistochimique avec Bond.

Conservation et stabilité

Conserver à une température comprise entre 2–8 °C. Ne pas utiliser après la date de péremption indiquée sur l’étiquette du récipient.
Les signes indicateurs d’une contamination et/ou d’une instabilité de Pax-5 (1EW) sont les suivants : une turbidité de la solution, la

formation d’odeurs et la présence d’un précipité.
Remettre à 2–8 °C immédiatement après usage.
Des conditions de stockage différentes de celles ci-dessus doivent être contrôlées par l’utilisateur

Précautions

• Ce produit est conçu pour le diagnostic in vitro.

• La concentration en ProClin
peau, des yeux, des muqueuses et des voies aériennes supérieures. Porter des gants jetables lors de la manipulation des réactifs.

• Pour obtenir une copie de la che de données de sécurité, contactez votre distributeur local ou le bureau régional de Leica
Biosystems, ou allez sur le site Web de Leica Biosystems, www.LeicaBiosystems.com.

™

950 est de 0,35%. Contient du 2-méthyl-4-isothiazoline-3-one et peut entraîner des irritations de la

TM

.

1

.

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• Les échantillons, avant et après xation, et tous les matériels ayant été en contact avec eux, devraient être manipulés comme s’ils
étaient à risque infectieux et éliminés avec les précautions adéquates2. Ne jamais pipeter les réactifs à la bouche et éviter le contact
de la peau et des muqueuses avec les réactifs ou les échantillons. Si des réactifs ou des échantillons entrent en contact avec des
zones sensibles, rincer abondamment à l’eau. Consultez un médecin.

• Renseignez-vous sur les règlements fédéraux, nationaux et locaux pour l’élimination des composés potentiellement toxiques.

• Éviter une contamination microbienne des réactifs qui peut entraîner un marquage non spécique.

• Des durées ou températures de démasquage ou d’incubation autres que celles spéciées peuvent entraîner des résultats erronés.
Tout changement doit être validé par l’utilisateur.

Mode d’emploi

L’anticorps primaire Pax-5 (1EW) a été conçu pour être utilisé sur l’automate Bond conjointement avec Bond Polymer Rene Detection.
L’utilisation de Peroxide Block comme première étape du protocole de maquage IHC Protocol F affecte le marquage obtenu avec cet
anticorps, c’est pourquoi le protocole de marquage recommandé pour Pax-5 (1EW) est une version modiée de IHC Protocol F, où
l’étape Peroxide Block avant le MARKER a été supprimée et une étape Peroxide Block insérée après le MARKER. Ce protocole de
marquage modié doit être créé par l’utilisateur. Pour des instructions sur la modication des protocoles, consultez la section “Ajout
et suppression d’étapes de protocole” dans la documentation de l’utilisateur Bond. Un démasquage d’épitope par la chaleur est
recommandé avec Bond Epitope Retrieval Solution 2 durant 20 minutes.

Résultats attendus

Tissus sains

Pax-5 est un facteur de transcription nucléaire spécique des cellules B qui s’exprime dans les cellules pro B, pré B et B matures. Le
clone 1EW a détecté la protéine Pax-5 dans les cellules B folliculaires et non folliculaires d’amygdales 3/3, de rate 3/3, de côlon 3/3
et d’intestin grêle 3/3. Le marquage occasionnel de lymphocytes B a aussi été observé dans divers autres tissus 33/69, notamment
surrénales, reins, œsophage, estomac, foie, pancréas, poumons, peau, prostate, col de l’utérus, seins, thyroïde, thymus, moelle
osseuse et hypophyse.

Tissus tumoraux

Le clone 1EW a marqué 14/14 lymphomes à grandes cellules B diffuses, 6/6 lymphomes centrofolliculaires, 3/3 MALTomes, 1/1
lymphome à cellules du manteau, 1/1 lymphome de Burkitt, 1/1 lymphome B riche en cellules T, 5/5 maladies de Hodgkin et 0/11
lymphomes à cellules T. Aucun marquage n’a été observé dans diverses malignités non hématologiques (n=41).

Pax-5 (1EW) est recommandé dans le cadre d’un panel d’anticorps pour l’identication de malignités dont l’origine est les cellules B.

Limites spéciques du produit

Le Pax-5 (1EW) a été optimisé par Leica Biosystems pour être utilisé avec Bond Polymer Rene Detection et les réactifs accessoires
Bond. Les utilisateurs qui ne respectent pas les procédures recommandées prennent la responsabilité de l’interprétation des résultats
des patients dans ces conditions. Les durées du protocole peuvent varier, en raison des variations de xation des tissus et de l’efcacité
de la facilitation de l’antigène, et doivent être déterminées empiriquement. Des contrôles réactif négatifs devraient être testés lors de
l’optimisation des conditions de démasquage et des durées du protocole.

Identication des problèmes

Voir la référence 3 pour connaître les mesures correctives.
Prenez contact avec votre distributeur local ou avec le bureau régional de Leica Biosystems pour signaler tout marquage inattendu.

Informations complémentaires

Des informations complémentaires sur l’immunomarquage avec les réactifs Bond, les principes de la méthode, le matériel nécessaire, la
préparation des échantillons, le contrôle qualité, les vérications d’analyse, l’interprétation du marquage, les légendes et symboles sur
les étiquettes et les limites générales, peuvent être obtenues dans “Utilisation des réactifs Bond” dans votre manuel d’utilisation Bond.

Bibliographie

1. Clinical Laboratory Improvement Amendments of 1988, Final Rule 57 FR 7163 February 28, 1992.

2. Villanova PA. National Committee for Clinical Laboratory Standards (NCCLS). Protection of laboratory workers from infectious

diseases transmitted by blood and tissue; proposed guideline. 1991; 7(9). Order code M29-P.

3. Bancroft JD and Stevens A. Theory and Practice of Histological Techniques. 4th Edition. Churchill Livingstone, New York. 1996.

4. Hansson M, Jerkeman M and Dictor M. Biphenotypic bigenotypic lymphoma with simultaneous expression of PAX5/BSAP and B- and
T-cell markers. European Journal of Haematology. 2007; 79:159–165.

™

ProClin

950 est une marque commerciale de Supelco, membre du groupe Sigma-Aldrich Corporation.

Date de publication

05 février 2013

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Anticorpo Primario Pronto All’uso Bond™
Pax-5 (1EW)

N. catalogo: PA0552

Uso previsto

Reagente per uso diagnostico in vitro.

L’uso dell’anticorpo monoclonale Pax-5 (1EW) è previsto per l’identicazione qualitativa con microscopio ottico del Pax-5 umano in
tessuto ssato in formalina, incluso in parafna, con colorazione immunoistochimica, utilizzando il sistema automatizzato Bond

L’interpretazione clinica di un’eventuale colorazione, o della sua assenza, deve avvalersi di studi morfologici e di opportuni controlli ed
essere effettuata da patologi qualicati, nel contesto dell’anamnesi clinica del paziente e di altri test diagnostici.

Sommario e spiegazione

Grazie alle tecniche di immunoistochimica è possibile dimostrare la presenza di antigeni nel tessuto e nelle cellule (vedere “Uso dei
reagenti Bond” nella documentazione per l’utente Bond). L’anticorpo primario Pax-5 (1EW) è un prodotto pronto per l’uso che è stato
ottimizzato in modo specico per l’impiego con il Bond Polymer Rene Detection. La dimostrazione del Pax-5 umano si ottiene in primo
luogo consentendo il legame del Pax-5 (1EW) con la sezione, e quindi visualizzando il legame stesso per mezzo dei reagenti forniti
nel sistema di rilevazione. L’impiego di questi prodotti, insieme al sistema automatizzato Bond, riduce la possibilità di un errore umano
e la relativa variabilità che deriva dalla diluizione individuale del reagente e dal pipettamento e dall’applicazione del reagente eseguiti

manualmente.

Reagenti forniti

Il Pax-5 (1EW) è un anticorpo monoclonale murino anti-umano prodotto come surnatante di coltura tissutale e fornito in soluzione salina
tamponata Tris con proteina carrier, contenente 0,35% di ProClinTM 950 come conservante.

Volume totale = 7 ml.

Clone

1EW.

Immunogeno

Proteina ricombinante che corrisponde alla porzione C-terminale della molecola del Pax-5 umano.

Specicità

Pax-5 umano.

Sottoclasse

IgG1.

Concentrazione proteica totale

Circa 10 mg/ml.

Concentrazione dell’anticorpo

Uguale o superiore a 0,34 mg/l, determinata mediante ELISA.

Diluizione e miscelazione

La diluizione dell’anticorpo primario Pax-5 (1EW) è stata ottimizzata per l’uso con il sistema Bond. Non è necessario ricostituire,
miscelare, diluire o titolare il reagente.

Materiale necessario non fornito

Per un elenco completo del materiale necessario per il trattamento del campione e la colorazione immunoistochimica con il sistema
Bond, consultare l’ “Uso dei reagenti Bond” nella documentazione per l’utente Bond.

Conservazione e stabilità

Conservare a 2–8 °C. Non utilizzare dopo la data di scadenza indicata sull’etichetta del contenitore.
I segni di contaminazione e/o instabilità del Pax-5 (1EW) sono: torbidità della soluzione, formazione di odori e presenza di un precipitato.
Dopo l’uso riportare immediatamente a 2–8 °C.
L’utente deve vericare eventuali condizioni di conservazione diverse da quelle specicate

1

.

Precauzioni

• Il prodotto è destinato all’uso diagnostico in vitro.

• La concentrazione di ProClin
cute, agli occhi, alle membrane mucose e alle alte vie respiratorie. Per la manipolazione dei reagenti usare guanti monouso.

• Una copia della Scheda di sicurezza può essere richiesta al distributore locale o all’ufcio di zona di Leica Biosystems o, in
alternativa, visitando il sito di Leica Biosystems www.LeicaBiosystems.com.

• I campioni, prima e dopo la ssazione, e tutti i materiali esposti ad essi devono essere manipolati come potenziali vettori di infezione
e smaltiti con le opportune precauzioni
con la pelle e le mucose. Se un reagente o un campione viene a contatto con superci sensibili, lavare abbondantemente con acqua.
Consultare un medico.

™

950 è 0,35%. Esso contiene il principio attivo 2-metil-4-isotiazolin-3-one e può causare irritazione alla

2

. Non pipettare mai i reagenti con la bocca ed evitare il contatto dei reagenti e dei campioni

TM

.

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• Consultare la normativa nazionale, regionale o locale vigente per lo smaltimento dei componenti potenzialmente tossici.

• Ridurre al minimo la contaminazione microbica dei reagenti per evitare il rischio di una colorazione non specica.

• Tempi o temperature di incubazione o di riconoscimento diversi da quelli specicati possono fornire risultati erronei. Ogni eventuale
modica deve essere validata dall’utente.

Istruzioni per l’uso

L’anticorpo primario Pax-5 (1EW) è stato sviluppato per essere utilizzato con il sistema automatizzato Bond in associazione con il Bond
Polymer Rene Detection. L’impiego del Peroxide Block come prima fase dell’IHC Staining Protocol F inuisce sulla colorazione che
si ottiene con questo anticorpo; per questo motivo il protocollo di colorazione consigliato per il Pax-5 (1EW) è una versione modicata
dell’IHC Staining Protocol F, nella quale la fase del Peroxide Block prima del MARKER è stata eliminata ed è stata inserita una fase di
blocco con il Peroxide Block il MARKER. Questo protocollo di colorazione modicato deve essere creato dall’utente. Per le istruzioni su
come modicare i protocolli consultare “Aggiunta e rimozione delle fasi del protocollo” nella documentazione per l’utente Bond. Per lo
smascheramento termoindotto dell’epitopo si consiglia l’uso della Bond Epitope Retrieval Solution 2 per 20 minuti.

Risultati attesi

Tessuti normali

Il Pax-5 è un fattore di trascrizione nucleare specico dei linfociti B, espresso nei prolinfociti B, nei linfociti pre-B e nei linfociti B maturi.
Il clone 1EW ha rilevato la proteina Pax-5 nei linfociti B follicolari e non follicolari della tonsilla (3/3), della milza (3/3), del colon (3/3) e
dell’intestino tenue (3/3). La colorazione di qualche linfocito B è stata osservata occasionalmente anche in diversi altri tessuti (33/69),
tra i quali surrene, rene, esofago, stomaco, fegato, pancreas, polmone, cute, prostata, cervice uterina, mammella, tiroide, timo, midollo
osseo e iposi (n= ).

Tessuti tumorali

Il clone 1EW ha colorato 14/14 linfomi diffusi a grandi cellule B, 6/6 linfomi centrofollicolari, 3/3 MALTomi, 1/1 linfoma a cellule del
mantello, 1/1 linfoma di Burkitt, 1/1 linfoma a cellule B ricco in cellule T, 5/5 linfomi di Hodgkin e 0/11 linfomi a cellule T. Nessuna
colorazione è stata osservata in diverse altre neoplasie non ematologiche (n=41).

Si raccomanda l’uso del Pax-5 (1EW) come parte di un gruppo di anticorpi per l’identicazione delle neoplasie che traggono origine dai

linfociti B.

Limitazioni speciche del prodotto

Il Pax-5 (1EW) è stato ottimizzato da Leica Biosystems per l’uso con il Bond Polymer Rene Detection e con i reagenti ausiliari Bond.
Gli utenti che modicano le procedure raccomandate devono assumersi la responsabilità dell’interpretazione dei risultati relativi ai
pazienti in tali circostanze. I tempi del protocollo possono variare in base alle variazioni nella ssazione del tessuto e nell’efcienza del
potenziamento dell’antigene e devono essere deniti in modo empirico. Nell’ottimizzazione delle condizioni di riconoscimento e dei tempi
del protocollo si devono impiegare dei controlli negativi del reagente .

Soluzione problemi

Per i provvedimenti consultare il riferimento bibliograco n. 3.
Per riferire una colorazione inusuale rivolgersi al distributore locale o all’ufcio di zona di Leica Biosystems.

Ulteriori informazioni

Ulteriori informazioni sull’immunocolorazione con i reagenti Bond si trovano in “Uso dei reagenti Bond” nella documentazione per
l’utente Bond, ai titoli Principio della procedura, Materiali necessari, Preparazione del campione, Controllo di qualità, Verica del saggio,
Interpretazione della colorazione, Leggenda dei simboli e delle etichette e Limitazioni generali.

Bibliograa

1. Clinical Laboratory Improvement Amendments of 1988, Final Rule 57 FR 7163 February 28, 1992.

2. Villanova PA. National Committee for Clinical Laboratory Standards (NCCLS). Protection of laboratory workers from infectious

diseases transmitted by blood and tissue; proposed guideline. 1991; 7(9). Order code M29-P.

3. Bancroft JD and Stevens A. Theory and Practice of Histological Techniques. 4th Edition. Churchill Livingstone, New York. 1996.

4. Hansson M, Jerkeman M and Dictor M. Biphenotypic bigenotypic lymphoma with simultaneous expression of PAX5/BSAP and B- and
T-cell markers. European Journal of Haematology. 2007; 79:159–165.

™

ProClin

950 è un marchio di fabbrica di Supelco, società del gruppo Sigma-Aldrich.

Data di pubblicazione

05 febbraio 2013

PA0552 Rev B
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