Leica Pax-5 User Manual

Download

Page 1

Bond™ Ready-To-Use Primary Antibody Pax-5 (1EW)

Catalog No: PA0552

SV EL DAEN IT ES PTDEFR

Instructions for Use

Please read before using this product.

Mode d’emploi

Á lire avant d’utiliser ce produit.

Istruzioni per L’uso

Si prega di leggere, prima di usare il prodotto.

Gebrauchsanweisung

Bitte vor der Verwendung dieses Produkts lesen.

Instrucciones de Uso

Por favor, leer antes de utilizar este producto.

Instruções de Utilização

Leia estas instruções antes de utilizar este produto.

Instruktioner vid Användning

Var god läs innan ni använder produkten.

Οδηγίες χρήσης

Παρακαλούμε διαβάστε τις οδηγίες πριν χρησιμοποιήσετε το προϊόν αυτό.

Brugsanvisning

Læs venligst før produktet tages i brug.

Check the integrity of the packaging before use.

Vérier que le conditionnement est en bon état avant l’emploi.

Prima dell’uso, controllare l’integrità della confezione. Vor dem Gebrauch die Verpackung auf Unversehrtheit überprüfen. Comprobar la integridad del envase, antes de usarlo.

Verique a integridade da embalagem antes de utilizar o produto.

Kontrollera att paketet är obrutet innan användning.

Ελέγξτε την ακεραιότητα της συσκευασίας πριν από τη χρήση.

Kontroller, at pakken er ubeskadiget før brug.

www.LeicaBiosystems.com

Page 2

PA0552 Rev B Page 1

Page 3

Bond™ Ready-To-Use Primary Antibody Pax-5 (1EW)

Catalog No: PA0552

Intended Use

This reagent is for in vitro diagnostic use.

Pax-5 (1EW) monoclonal antibody is intended to be used for the qualitative identication by light microscopy of human Pax-5 in formalinxed, parafn-embedded tissue by immunohistochemical staining using the automated Bond

The clinical interpretation of any staining or its absence should be complemented by morphological studies and proper controls and should be evaluated within the context of the patient’s clinical history and other diagnostic tests by a qualied pathologist.

Summary and Explanation

Immunohistochemical techniques can be used to demonstrate the presence of antigens in tissue and cells (see “Using Bond Reagents” in your Bond user documentation). Pax-5 (1EW) primary antibody is a ready to use product that has been specically optimized for use with Bond Polymer Rene Detection. The demonstration of human Pax-5 is achieved by rst, allowing the binding of Pax-5 (1EW) to the section, and then visualizing this binding using the reagents provided in the detection system. The use of these products, in combination with the automated Bond system, reduces the possibility of human error and inherent variability resulting from individual reagent dilution, manual pipetting and reagent application.

Reagents Provided

Pax-5 (1EW) is a mouse anti-human monoclonal antibody produced as a tissue culture supernatant, and supplied in Tris buffered saline with carrier protein, containing 0.35% ProClinTM 950 as a preservative.

Total volume = 7 mL.

Clone

1EW.

Immunogen

Recombinant protein corresponding to part of the C-terminus of the human Pax-5 molecule.

Specicity

Human Pax-5.

Subclass

IgG1.

Total Protein Concentration

Approx 10 mg/mL.

Antibody Concentration

Greater than or equal to 0.34 mg/L as determined by ELISA.

Dilution and Mixing

Pax-5 (1EW) primary antibody is optimally diluted for use on the Bond system. Reconstitution, mixing, dilution or titration of this reagent

is not required.

Materials Required But Not Provided

Refer to “Using Bond Reagents” in your Bond user documentation for a complete list of materials required for specimen treatment and

immunohistochemical staining using the Bond system.

Storage and Stability

Store at 2–8 °C. Do not use after the expiration date indicated on the container label. The signs indicating contamination and/or instability of Pax-5 (1EW) are: turbidity of the solution, odor development, and presence of

precipitate. Return to 2–8 °C immediately after use. Storage conditions other than those specied above must be veried by the user

Precautions

• This product is intended for in vitro diagnostic use.

• The concentration of ProClin the skin, eyes, mucous membranes and upper respiratory tract. Wear disposable gloves when handling reagents.

• To obtain a copy of the Material Safety Data Sheet contact your local distributor or regional ofce of Leica Biosystems, or alternatively, visit the Leica Biosystems’ Web site, www.LeicaBiosystems.com.

• Specimens, before and after xation, and all materials exposed to them, should be handled as if capable of transmitting infection and disposed of with proper precautions reagents or specimens. If reagents or specimens come in contact with sensitive areas, wash with copious amounts of water. Seek

medical advice.

™

950 is 0.35%. It contains the active ingredient 2-methyl-4-isothiazolin-3-one, and may cause irritation to

. Never pipette reagents by mouth and avoid contacting the skin and mucous membranes with

system.

PA0552 Rev B Page 2

Page 4

• Consult Federal, State or local regulations for disposal of any potentially toxic components.

• Minimize microbial contamination of reagents or an increase in non-specic staining may occur.

• Retrieval, incubation times or temperatures other than those specied may give erroneous results. Any such change must be

validated by the user.

Instructions for Use

Pax-5 (1EW) primary antibody was developed for use on the automated Bond system in combination with Bond Polymer Rene Detection. The use of Peroxide Block as the rst step in IHC Staining Protocol F will affect the staining achieved with this antibody, for this reason the recommended staining protocol for Pax-5 (1EW) is an edited version of IHC Staining Protocol F, where the Peroxide Block step before the MARKER has been deleted and a peroxide block step has been inserted after the MARKER. This modied staining protocol needs to be created by the user. For instructions on how to edit protocols Refer to “Adding and removing protocol steps ” in your Bond user documentation. Heat induced epitope retrieval is recommended using Bond Epitope Retrieval Solution 2 for 20 minutes.

Results Expected

Normal Tissues

Pax-5 is a B cell specic nuclear transcription factor that is expressed in pro B, pre B and mature B cells. Clone 1EW detected the Pax-5 protein in follicular and non-follicular B cells of tonsil 3/3, spleen 3/3, colon 3/3 and small bowel 3/3. Staining of occasional B lymphocytes was also seen in a variety other tissues 33/69, including adrenal, kidney, esophagus, stomach, liver, pancreas, lung, skin, prostate, cervix, breast, thyroid, thymus, bone marrow, and pituitary.

Tumor Tissues

Clone 1EW stained 14/14 diffuse large B cell lymphomas, 6/6 follicle center lymphomas, 3/3 MALTomas, 1/1 mantle cell lymphomas, 1/1 Burkitt’s lymphoma, 1/1 T cell rich B cell lymphoma, 5/5 Hodgkin’s disease and 0/11 T cell lymphomas. No staining was observed in a variety of non-hematological malignancies (n=41).

Pax-5 (1EW) is recommended for use as part of a panel of antibodies for the identication of malignancies of B cell origin.

Product Specic Limitations

Pax-5 (1EW) has been optimized at Leica Biosystems for use with Bond Polymer Rene Detection and Bond ancillary reagents. Users who deviate from recommended test procedures must accept responsibility for interpretation of patient results under these circumstances. The protocol times may vary, due to variation in tissue xation and the effectiveness of antigen enhancement, and must be determined empirically. Negative reagent controls should be used when optimizing retrieval conditions and protocol times.

Troubleshooting

Refer to reference 3 for remedial action. Contact your local distributor or the regional ofce of Leica Biosystems to report unusual staining.

Further Information

Further information on immunostaining with Bond reagents, under the headings Principle of the Procedure, Materials Required, Specimen Preparation, Quality Control, Assay Verication, Interpretation of Staining, Key to Symbols on Labels, and General Limitations can be found in “Using Bond Reagents” in your Bond user documentation.

Bibliography

1. Clinical Laboratory Improvement Amendments of 1988, Final Rule 57 FR 7163 February 28, 1992.

2. Villanova PA. National Committee for Clinical Laboratory Standards (NCCLS). Protection of laboratory workers from infectious

diseases transmitted by blood and tissue; proposed guideline. 1991; 7(9). Order code M29-P.

3. Bancroft JD and Stevens A. Theory and Practice of Histological Techniques. 4th Edition. Churchill Livingstone, New York. 1996.

4. Hansson M, Jerkeman M and Dictor M. Biphenotypic bigenotypic lymphoma with simultaneous expression of PAX5/BSAP and B- and T-cell markers. European Journal of Haematology. 2007; 79:159–165.

™

ProClin

950 is a trademark of Supelco, a part of Sigma-Aldrich Corporation.

Date of Issue

05 February 2013

PA0552 Rev B

Page 3

Page 5

Anticorps Primaire Prêt À L’Emploi Bond™ Pax-5 (1EW)

Référence: PA0552

Utilisation prévue

Ce réactif est destiné au diagnostic in vitro.

L’anticorps monoclonal Pax-5 (1EW) est conçu pour l’identication qualitative en microscopie optique de l’antigène Pax-5 humain sur tissu xé au formol, inclus en parafne, par marquage immunohistochimique automatisé Bond

L’interprétation clinique de tout marquage ou de son absence doit être complétée par des études morphologiques utilisant des contrôles appropriés et évaluée dans le contexte des antécédents cliniques du patient et des autres tests diagnostiques par un pathologiste qualié.

Résumé et explications

Les techniques immunohistochimiques peuvent être utilisées pour la mise en évidence d’antigènes sur tissus ou cellules (voir “Utilisation des réactifs Bond” dans votre manuel d’utilisation Bond). L’anticorps primaire Pax-5 (1EW) est prêt à l’emploi et a été spécialement optimisé pour Bond Polymer Rene Detection. La mise en évidence de la molécule Pax-5 humaine est effectuée en hybridant Pax-5 (1EW) sur la coupe, puis en visualisant le complexe avec les réactifs du système de détection. L’utilisation de ces produits, en association avec l’automate Bond, réduit les possibilités d’erreurs humaines et de variations lors des dilutions, du pipetage manuel et de l’application des réactifs.

Réactifs fournis

Pax-5 (1EW) est un anticorps monoclonal anti-humain de souris, produit par surnageant de culture de tissu et conditionné dans du tampon salin Tris avec une protéine de transport, contenant 0,35% de ProClinTM 950 comme conservateur.

Volume total = 7 ml.

Clone

1EW.

Immunogène

Protéine recombinante correspondant à la partie C-terminale de la molécule Pax-5 humaine.

Spécicité

Pax-5 humaine.

Sous-classe

IgG1.

Concentration totale en protéine

Environ 10 mg/ml.

Concentration en anticorps

Supérieure ou égale à 0,34 mg/l, déterminée par ELISA.

Dilution et mélange

L’anticorps primaire Pax-5 (1EW) est à dilution optimale pour utilisation dans Bond. Reconstitution, mélange, dilution ou titration de ce réactif non nécessaire.

Matériel nécessaire mais non fourni

Voir “Utilisation des réactifs Bond” dans votre manuel d’utilisation pour obtenir la liste complète du matériel nécessaire au traitement des échantillons et au marquage immunohistochimique avec Bond.

Conservation et stabilité

Conserver à une température comprise entre 2–8 °C. Ne pas utiliser après la date de péremption indiquée sur l’étiquette du récipient. Les signes indicateurs d’une contamination et/ou d’une instabilité de Pax-5 (1EW) sont les suivants : une turbidité de la solution, la

formation d’odeurs et la présence d’un précipité. Remettre à 2–8 °C immédiatement après usage. Des conditions de stockage différentes de celles ci-dessus doivent être contrôlées par l’utilisateur

Précautions

• Ce produit est conçu pour le diagnostic in vitro.

• La concentration en ProClin peau, des yeux, des muqueuses et des voies aériennes supérieures. Porter des gants jetables lors de la manipulation des réactifs.

• Pour obtenir une copie de la che de données de sécurité, contactez votre distributeur local ou le bureau régional de Leica Biosystems, ou allez sur le site Web de Leica Biosystems, www.LeicaBiosystems.com.

™

950 est de 0,35%. Contient du 2-méthyl-4-isothiazoline-3-one et peut entraîner des irritations de la

PA0552 Rev B

Page 4

Page 6

• Les échantillons, avant et après xation, et tous les matériels ayant été en contact avec eux, devraient être manipulés comme s’ils étaient à risque infectieux et éliminés avec les précautions adéquates2. Ne jamais pipeter les réactifs à la bouche et éviter le contact de la peau et des muqueuses avec les réactifs ou les échantillons. Si des réactifs ou des échantillons entrent en contact avec des zones sensibles, rincer abondamment à l’eau. Consultez un médecin.

• Renseignez-vous sur les règlements fédéraux, nationaux et locaux pour l’élimination des composés potentiellement toxiques.

• Éviter une contamination microbienne des réactifs qui peut entraîner un marquage non spécique.

• Des durées ou températures de démasquage ou d’incubation autres que celles spéciées peuvent entraîner des résultats erronés. Tout changement doit être validé par l’utilisateur.

Mode d’emploi

L’anticorps primaire Pax-5 (1EW) a été conçu pour être utilisé sur l’automate Bond conjointement avec Bond Polymer Rene Detection. L’utilisation de Peroxide Block comme première étape du protocole de maquage IHC Protocol F affecte le marquage obtenu avec cet anticorps, c’est pourquoi le protocole de marquage recommandé pour Pax-5 (1EW) est une version modiée de IHC Protocol F, où l’étape Peroxide Block avant le MARKER a été supprimée et une étape Peroxide Block insérée après le MARKER. Ce protocole de marquage modié doit être créé par l’utilisateur. Pour des instructions sur la modication des protocoles, consultez la section “Ajout et suppression d’étapes de protocole” dans la documentation de l’utilisateur Bond. Un démasquage d’épitope par la chaleur est recommandé avec Bond Epitope Retrieval Solution 2 durant 20 minutes.

Résultats attendus

Tissus sains

Pax-5 est un facteur de transcription nucléaire spécique des cellules B qui s’exprime dans les cellules pro B, pré B et B matures. Le clone 1EW a détecté la protéine Pax-5 dans les cellules B folliculaires et non folliculaires d’amygdales 3/3, de rate 3/3, de côlon 3/3 et d’intestin grêle 3/3. Le marquage occasionnel de lymphocytes B a aussi été observé dans divers autres tissus 33/69, notamment surrénales, reins, œsophage, estomac, foie, pancréas, poumons, peau, prostate, col de l’utérus, seins, thyroïde, thymus, moelle osseuse et hypophyse.

Tissus tumoraux

Le clone 1EW a marqué 14/14 lymphomes à grandes cellules B diffuses, 6/6 lymphomes centrofolliculaires, 3/3 MALTomes, 1/1 lymphome à cellules du manteau, 1/1 lymphome de Burkitt, 1/1 lymphome B riche en cellules T, 5/5 maladies de Hodgkin et 0/11 lymphomes à cellules T. Aucun marquage n’a été observé dans diverses malignités non hématologiques (n=41).

Pax-5 (1EW) est recommandé dans le cadre d’un panel d’anticorps pour l’identication de malignités dont l’origine est les cellules B.

Limites spéciques du produit

Le Pax-5 (1EW) a été optimisé par Leica Biosystems pour être utilisé avec Bond Polymer Rene Detection et les réactifs accessoires Bond. Les utilisateurs qui ne respectent pas les procédures recommandées prennent la responsabilité de l’interprétation des résultats des patients dans ces conditions. Les durées du protocole peuvent varier, en raison des variations de xation des tissus et de l’efcacité de la facilitation de l’antigène, et doivent être déterminées empiriquement. Des contrôles réactif négatifs devraient être testés lors de l’optimisation des conditions de démasquage et des durées du protocole.

Identication des problèmes

Voir la référence 3 pour connaître les mesures correctives. Prenez contact avec votre distributeur local ou avec le bureau régional de Leica Biosystems pour signaler tout marquage inattendu.

Informations complémentaires

Des informations complémentaires sur l’immunomarquage avec les réactifs Bond, les principes de la méthode, le matériel nécessaire, la préparation des échantillons, le contrôle qualité, les vérications d’analyse, l’interprétation du marquage, les légendes et symboles sur les étiquettes et les limites générales, peuvent être obtenues dans “Utilisation des réactifs Bond” dans votre manuel d’utilisation Bond.

Bibliographie

1. Clinical Laboratory Improvement Amendments of 1988, Final Rule 57 FR 7163 February 28, 1992.

2. Villanova PA. National Committee for Clinical Laboratory Standards (NCCLS). Protection of laboratory workers from infectious

diseases transmitted by blood and tissue; proposed guideline. 1991; 7(9). Order code M29-P.

3. Bancroft JD and Stevens A. Theory and Practice of Histological Techniques. 4th Edition. Churchill Livingstone, New York. 1996.

4. Hansson M, Jerkeman M and Dictor M. Biphenotypic bigenotypic lymphoma with simultaneous expression of PAX5/BSAP and B- and T-cell markers. European Journal of Haematology. 2007; 79:159–165.

™

ProClin

950 est une marque commerciale de Supelco, membre du groupe Sigma-Aldrich Corporation.

Date de publication

05 février 2013

PA0552 Rev B Page 5

Page 7

Anticorpo Primario Pronto All’uso Bond™ Pax-5 (1EW)

N. catalogo: PA0552

Uso previsto

Reagente per uso diagnostico in vitro.

L’uso dell’anticorpo monoclonale Pax-5 (1EW) è previsto per l’identicazione qualitativa con microscopio ottico del Pax-5 umano in tessuto ssato in formalina, incluso in parafna, con colorazione immunoistochimica, utilizzando il sistema automatizzato Bond

L’interpretazione clinica di un’eventuale colorazione, o della sua assenza, deve avvalersi di studi morfologici e di opportuni controlli ed essere effettuata da patologi qualicati, nel contesto dell’anamnesi clinica del paziente e di altri test diagnostici.

Sommario e spiegazione

Grazie alle tecniche di immunoistochimica è possibile dimostrare la presenza di antigeni nel tessuto e nelle cellule (vedere “Uso dei reagenti Bond” nella documentazione per l’utente Bond). L’anticorpo primario Pax-5 (1EW) è un prodotto pronto per l’uso che è stato ottimizzato in modo specico per l’impiego con il Bond Polymer Rene Detection. La dimostrazione del Pax-5 umano si ottiene in primo luogo consentendo il legame del Pax-5 (1EW) con la sezione, e quindi visualizzando il legame stesso per mezzo dei reagenti forniti nel sistema di rilevazione. L’impiego di questi prodotti, insieme al sistema automatizzato Bond, riduce la possibilità di un errore umano e la relativa variabilità che deriva dalla diluizione individuale del reagente e dal pipettamento e dall’applicazione del reagente eseguiti

manualmente.

Reagenti forniti

Il Pax-5 (1EW) è un anticorpo monoclonale murino anti-umano prodotto come surnatante di coltura tissutale e fornito in soluzione salina tamponata Tris con proteina carrier, contenente 0,35% di ProClinTM 950 come conservante.

Volume totale = 7 ml.

Clone

1EW.

Immunogeno

Proteina ricombinante che corrisponde alla porzione C-terminale della molecola del Pax-5 umano.

Specicità

Pax-5 umano.

Sottoclasse

IgG1.

Concentrazione proteica totale

Circa 10 mg/ml.

Concentrazione dell’anticorpo

Uguale o superiore a 0,34 mg/l, determinata mediante ELISA.

Diluizione e miscelazione

La diluizione dell’anticorpo primario Pax-5 (1EW) è stata ottimizzata per l’uso con il sistema Bond. Non è necessario ricostituire, miscelare, diluire o titolare il reagente.

Materiale necessario non fornito

Per un elenco completo del materiale necessario per il trattamento del campione e la colorazione immunoistochimica con il sistema Bond, consultare l’ “Uso dei reagenti Bond” nella documentazione per l’utente Bond.

Conservazione e stabilità

Conservare a 2–8 °C. Non utilizzare dopo la data di scadenza indicata sull’etichetta del contenitore. I segni di contaminazione e/o instabilità del Pax-5 (1EW) sono: torbidità della soluzione, formazione di odori e presenza di un precipitato. Dopo l’uso riportare immediatamente a 2–8 °C. L’utente deve vericare eventuali condizioni di conservazione diverse da quelle specicate

Precauzioni

• Il prodotto è destinato all’uso diagnostico in vitro.

• La concentrazione di ProClin cute, agli occhi, alle membrane mucose e alle alte vie respiratorie. Per la manipolazione dei reagenti usare guanti monouso.

• Una copia della Scheda di sicurezza può essere richiesta al distributore locale o all’ufcio di zona di Leica Biosystems o, in alternativa, visitando il sito di Leica Biosystems www.LeicaBiosystems.com.

• I campioni, prima e dopo la ssazione, e tutti i materiali esposti ad essi devono essere manipolati come potenziali vettori di infezione e smaltiti con le opportune precauzioni con la pelle e le mucose. Se un reagente o un campione viene a contatto con superci sensibili, lavare abbondantemente con acqua. Consultare un medico.

™

950 è 0,35%. Esso contiene il principio attivo 2-metil-4-isotiazolin-3-one e può causare irritazione alla

. Non pipettare mai i reagenti con la bocca ed evitare il contatto dei reagenti e dei campioni

PA0552 Rev B

Page 6

Page 8

• Consultare la normativa nazionale, regionale o locale vigente per lo smaltimento dei componenti potenzialmente tossici.

• Ridurre al minimo la contaminazione microbica dei reagenti per evitare il rischio di una colorazione non specica.

• Tempi o temperature di incubazione o di riconoscimento diversi da quelli specicati possono fornire risultati erronei. Ogni eventuale modica deve essere validata dall’utente.

Istruzioni per l’uso

L’anticorpo primario Pax-5 (1EW) è stato sviluppato per essere utilizzato con il sistema automatizzato Bond in associazione con il Bond Polymer Rene Detection. L’impiego del Peroxide Block come prima fase dell’IHC Staining Protocol F inuisce sulla colorazione che si ottiene con questo anticorpo; per questo motivo il protocollo di colorazione consigliato per il Pax-5 (1EW) è una versione modicata dell’IHC Staining Protocol F, nella quale la fase del Peroxide Block prima del MARKER è stata eliminata ed è stata inserita una fase di blocco con il Peroxide Block il MARKER. Questo protocollo di colorazione modicato deve essere creato dall’utente. Per le istruzioni su come modicare i protocolli consultare “Aggiunta e rimozione delle fasi del protocollo” nella documentazione per l’utente Bond. Per lo smascheramento termoindotto dell’epitopo si consiglia l’uso della Bond Epitope Retrieval Solution 2 per 20 minuti.

Risultati attesi

Tessuti normali

Il Pax-5 è un fattore di trascrizione nucleare specico dei linfociti B, espresso nei prolinfociti B, nei linfociti pre-B e nei linfociti B maturi. Il clone 1EW ha rilevato la proteina Pax-5 nei linfociti B follicolari e non follicolari della tonsilla (3/3), della milza (3/3), del colon (3/3) e dell’intestino tenue (3/3). La colorazione di qualche linfocito B è stata osservata occasionalmente anche in diversi altri tessuti (33/69), tra i quali surrene, rene, esofago, stomaco, fegato, pancreas, polmone, cute, prostata, cervice uterina, mammella, tiroide, timo, midollo osseo e iposi (n= ).

Tessuti tumorali

Il clone 1EW ha colorato 14/14 linfomi diffusi a grandi cellule B, 6/6 linfomi centrofollicolari, 3/3 MALTomi, 1/1 linfoma a cellule del mantello, 1/1 linfoma di Burkitt, 1/1 linfoma a cellule B ricco in cellule T, 5/5 linfomi di Hodgkin e 0/11 linfomi a cellule T. Nessuna colorazione è stata osservata in diverse altre neoplasie non ematologiche (n=41).

Si raccomanda l’uso del Pax-5 (1EW) come parte di un gruppo di anticorpi per l’identicazione delle neoplasie che traggono origine dai

linfociti B.

Limitazioni speciche del prodotto

Il Pax-5 (1EW) è stato ottimizzato da Leica Biosystems per l’uso con il Bond Polymer Rene Detection e con i reagenti ausiliari Bond. Gli utenti che modicano le procedure raccomandate devono assumersi la responsabilità dell’interpretazione dei risultati relativi ai pazienti in tali circostanze. I tempi del protocollo possono variare in base alle variazioni nella ssazione del tessuto e nell’efcienza del potenziamento dell’antigene e devono essere deniti in modo empirico. Nell’ottimizzazione delle condizioni di riconoscimento e dei tempi del protocollo si devono impiegare dei controlli negativi del reagente .

Soluzione problemi

Per i provvedimenti consultare il riferimento bibliograco n. 3. Per riferire una colorazione inusuale rivolgersi al distributore locale o all’ufcio di zona di Leica Biosystems.

Ulteriori informazioni

Ulteriori informazioni sull’immunocolorazione con i reagenti Bond si trovano in “Uso dei reagenti Bond” nella documentazione per l’utente Bond, ai titoli Principio della procedura, Materiali necessari, Preparazione del campione, Controllo di qualità, Verica del saggio, Interpretazione della colorazione, Leggenda dei simboli e delle etichette e Limitazioni generali.

Bibliograa

1. Clinical Laboratory Improvement Amendments of 1988, Final Rule 57 FR 7163 February 28, 1992.

2. Villanova PA. National Committee for Clinical Laboratory Standards (NCCLS). Protection of laboratory workers from infectious

diseases transmitted by blood and tissue; proposed guideline. 1991; 7(9). Order code M29-P.

3. Bancroft JD and Stevens A. Theory and Practice of Histological Techniques. 4th Edition. Churchill Livingstone, New York. 1996.

4. Hansson M, Jerkeman M and Dictor M. Biphenotypic bigenotypic lymphoma with simultaneous expression of PAX5/BSAP and B- and T-cell markers. European Journal of Haematology. 2007; 79:159–165.

™

ProClin

950 è un marchio di fabbrica di Supelco, società del gruppo Sigma-Aldrich.

Data di pubblicazione

05 febbraio 2013

PA0552 Rev B Page 7

Page 9

Gebrauchsfertiger Bond™ Primärantikörper Pax-5 (1EW)

Bestellnr.: PA0552

Verwendungszweck

Dieses Produkt ist für die In-vitro-Diagnostik bestimmt.

Der monoklonale Antikörper Pax-5 (1EW) ist für den qualitativen lichtmikroskopischen Nachweis des humanen Pax-5 in formalinxiertem, in Parafn eingebettetem Gewebe durch immunhistochemische Färbung mit dem automatischen Bond

vorgesehen.

Die klinische Auswertung der An- oder Abwesenheit einer Färbung sollte durch morphologische Untersuchungen und geeignete Kontrollen ergänzt werden und sollte im Zusammenhang mit der Krankengeschichte des Patienten und anderen diagnostischen Tests von einem qualizierten Pathologen vorgenommen werden.

Zusammenfassung und Erläuterung

Immunhistochemische Methoden können dazu verwendet werden, die Anwesenheit von Antigenen in Geweben und Zellen zu demonstrieren (sehen Sie dazu “Das Arbeiten mit Bond-Reagenzien” in Ihrem Bond-Benutzerhandbuch). Der Primärantikörper Pax-5 (1EW) ist ein gebrauchsfertiges Produkt, das speziell für den Gebrauch mit dem Bond Polymer Rene Detection optimiert wurde. Der Nachweis des humanen Pax-5 erfolgt durch die Bindung von Pax-5 (1EW) an das Präparat und die anschließende Sichtbarmachung dieser Bindung mit den Reagenzien, die im Detektionssystem bereitgestellt werden. Die Verwendung dieser Produkte zusammen mit dem automatischen Bond-System reduziert die Wahrscheinlichkeit menschlicher Fehler und die natürlichen Schwankungen, die beim individuellen Verdünnen von Reagenzien, dem manuellen Pipettieren und dem Auftragen der Reagenzien entstehen.

Mitgelieferte Reagenzien

Pax-5 (1EW) ist ein monoklonaler Maus-Anti-Human-Antikörper, der aus Zellkulturüberstand hergestellt wurde, in Tris-gepufferter Salzlösung mit einem Trägerprotein geliefert wird und 0,35% ProClinTM 950 als Konservierungsmittel enthält.

Gesamtvolumen = 7 ml.

Klon

1EW.

Immunogen

Rekombinantes Protein, das einem C-terminalen Teil des humanen Pax-5-Moleküls entspricht.

Spezität

Humanes Pax-5.

Subklasse

IgG1.

Gesamtproteinkonzentration

Ca. 10 mg/ml.

Antikörperkonzentration

Größer als oder gleich 0,34 mg/l, bestimmt mit ELISA.

Verdünnung und Mischung

Der Primärantikörper Pax-5 (1EW) ist optimal für den Gebrauch mit dem Bond-System verdünnt. Rekonstitution, Mischen, Verdünnen oder Titrieren dieses Reagenzes ist nicht erforderlich.

Erforderliche, aber nicht mitgelieferte Materialien

Eine vollständige Liste der Materialien, die für die Probenbehandlung und die immunhistochemische Färbung mit dem Bond-System benötigt werden, bendet sich im Abschnitt “Das Arbeiten mit Bond-Reagenzien” in Ihrem Bond-Benutzerhandbuch.

Lagerung und Stabilität

Bei 2–8 °C lagern. Nach dem Ablauf des auf dem Behälteretikett angegebenen Verfallsdatums nicht mehr verwenden. Zeichen, die auf eine Kontamination und/oder Instabilität von Pax-5 (1EW) hinweisen, sind eine Trübung der Lösung,

Geruchsentwicklung und das Vorhandensein von Präzipitat. Unmittelbar nach Gebrauch wieder bei 2–8 °C aufbewahren. Andere als die oben angegebenen Lagerungsbedingungen müssen vom Anwender selbst getestet werden

Vorsichtsmaßnahmen

• Dieses Produkt ist für die In-vitro-Diagnostik bestimmt.

• Die Konzentration von ProClin Reizungen der Haut, Augen, Schleimhäute und oberen Atemwege verursachen. Tragen Sie beim Umgang mit Reagenzien

Einweghandschuhe.

• Ein Exemplar des Sicherheitsdatenblattes erhalten Sie von Ihrer örtlichen Vertriebsrma, von der Regionalniederlassung von Leica Biosystems oder über die Webseite von Leica Biosystems unter www.LeicaBiosystems.com.

™

950 beträgt 0,35%. Es enthält 2-Methyl-4-isothiazolin-3-on als aktiven Bestandteil und kann

System

PA0552 Rev B

Page 8

Page 10

• Behandeln Sie Präparate vor und nach der Fixierung sowie sämtliche damit in Berührung kommenden Materialien so, als ob diese Infektionen übertragen können und entsorgen Sie sie unter Beachtung der entsprechenden Vorsichtsmaßnahmen2. Pipettieren Sie Reagenzien niemals mit dem Mund und vermeiden Sie den Kontakt von Haut und Schleimhäuten mit Reagenzien oder Präparaten. Falls Reagenzien oder Präparate mit empndlichen Bereichen in Kontakt gekommen sind, spülen Sie diese mit reichlich Wasser. Holen Sie anschließend ärztlichen Rat ein.

• Beachten Sie bei der Entsorgung potentiell toxischer Bestandteile die behördlichen und örtlichen Vorschriften.

• Mikrobielle Kontaminationen sollten minimiert werden, da es sonst zu einer Zunahme unspezischer Färbungen kommen kann.

• Die Verwendung anderer als den angegebenen Retrievals, Inkubationszeiten oder Temperaturen kann zu fehlerhaften Ergebnissen führen. Diesbezügliche Änderungen müssen vom Anwender selbst getestet werden.

Gebrauchsanleitung

Der Primärantikörper Pax-5 (1EW) wurde für die Verwendung mit dem automatischen Bond-System in Verbindung mit dem Bond Polymer Rene Detection entwickelt. Durch die Verwendung von Peroxide Block im ersten Schritt des IHC Protocol F wird die mit diesem Antikörper erreichte Färbung beeinträchtigt. Aus diesem Grund ist das empfohlene Färbeprotokoll für Pax-5 (1EW) eine angepasste Version des IHC-Färbeprotokolls F, bei dem der Schritt mit Peroxide Block vor dem MARKER gelöscht und nach dem MARKER ein Schritt zum Peroxide Block eingefügt wurde. Dieses modizierte Färbeprotokoll muss vom Benutzer erstellt werden. Informationen zum Bearbeiten von Protokollen nden Sie im Abschnitt “Hinzufügen und Entfernen von Protokollschritten” in Ihrem Bond-Benutzerhandbuch. Das hitzeinduzierte Epitop-Retrieval wird unter Verwendung der Bond Epitope Retrieval Solution 2 für 20 Minuten empfohlen.

Erwartete Ergebnisse

Normale Gewebe

Pax-5 ist ein B-Zell-spezischer nukleärer Transkriptionsfaktor, der in Pro-B-, Prä-B- und reifen B-Zellen exprimiert wird. Klon 1EW erkannte das Pax-5-Protein in follikulären und nicht follikulären B-Zellen der Tonsillen (3/3), Milz (3/3) und des Dünndarms (3/3). Eine Färbung von vereinzelten B-Lymphozyten wurde auch in verschiedenen anderen Geweben beobachtet (33/69), darunter in der Nebenniere, Niere, Speiseröhre, dem Magen, der Leber, dem Pankreas, der Lunge, Haut, Prostata, Cervix, Mamma, Schilddrüse, dem Thymus, Knochenmark und der Hypophyse.

Tumorgewebe

Klon 1EW färbte 14/14 diffusen großzelligen B-Zell-Lymphomen, 6/6 follikulären Lymphomen, 3/3 MALTomen, 1/1 Mantelzell-Lymphom, 1/1 Burkitt-Lymphom, 1/1 T-Zell-reichen B-Zell-Lymphom, 5/5 Hodgkin-Lymphomen und 0/11 T-Zell-Lymphomen. Bei verschiedenen anderen nicht-hämatologischen Malignitäten wurde keine Färbung beobachtet (n=41).

Pax-5 (1EW) wird zur Verwendung als Teil einer Reihe von Antikörpern zur Identizierung von Malignitäten mit B-Zell-Herkunft empfohlen.

Produktspezische Einschränkungen

Pax-5 (1EW) wurde von Leica Biosystems zur Verwendung mit dem Bond Polymer Rene Detection und Bond-Zusatzreagenzien optimiert. Anwender, die andere als die empfohlenen Testverfahren verwenden, müssen unter diesen Umständen die Verantwortung für die Auswertung der Patientenergebnisse übernehmen. Die Verfahrenszeiten können aufgrund von Unterschieden in der Gewebexierung und der Wirksamkeit der Antigenverstärkung variieren und müssen empirisch bestimmt werden. Bei der Optimierung der Retrieval-Bedingungen und Verfahrenszeiten sollten negative Reagenzkontrollen eingesetzt werden.

Fehlersuche

Maßnahmen zur Abhilfe beim Auftreten von Fehlern nden Sie in Referenz 3. Falls Sie ungewöhnliche Färbeergebnisse beobachten, wenden Sie sich an Ihre örtliche Vertriebsrma oder an die

Regionalniederlassung von Leica Biosystems.

Weitere Informationen

Weitere Informationen zur Immunfärbung mit Bond-Reagenzien nden Sie in den Abschnitten Grundlegende Vorgehensweise, Erforderliches Material, Probenvorbereitung, Qualitätskontrolle, Assay-Verizierung, Deutung der Färbung, Schlüssel der Symbole auf den Etiketten und Allgemeine Einschränkungen in “Das Arbeiten mit Bond-Reagenzien” in Ihrem Bond-Benutzerhandbuch.

Bibliograe

1. Clinical Laboratory Improvement Amendments of 1988, Final Rule 57 FR 7163 February 28, 1992.

2. Villanova PA. National Committee for Clinical Laboratory Standards (NCCLS). Protection of laboratory workers from infectious

diseases transmitted by blood and tissue; proposed guideline. 1991; 7(9). Order code M29-P.

3. Bancroft JD and Stevens A. Theory and Practice of Histological Techniques. 4th Edition. Churchill Livingstone, New York. 1996.

4. Hansson M, Jerkeman M and Dictor M. Biphenotypic bigenotypic lymphoma with simultaneous expression of PAX5/BSAP and B- and T-cell markers. European Journal of Haematology. 2007; 79:159–165.

™

ProClin

950 ist eine Marke von Supelco, einem Unternehmen der Sigma-Aldrich Corporation.

Ausgabedatum

05 Februar 2013

PA0552 Rev B Page 9

Page 11

Anticuerpo Primario Listo Para Usar Bond™ Pax-5 (1EW)

Catálogo Nº.: PA0552

Indicaciones de uso

Este reactivo es para uso diagnóstico in vitro.

El anticuerpo monoclonal Pax-5 (1EW) está destinado a utilizarse en la identicación cualitativa por microscopía óptica de la molécula Pax-5 humana en tejidos jados en formalina e incluidos en parana, mediante tinción inmunohistoquímica con el sistema automatizado

Bond

La interpretación clínica de cualquier tinción o de la ausencia de ésta debe complementarse con estudios morfológicos y controles adecuados, y debe evaluarla un patólogo cualicado junto con el historial clínico del paciente y con otras pruebas diagnósticas.

Resumen y explicación

Las técnicas inmunohistoquímicas pueden ser utilizadas para detectar la presencia de antígenos en tejidos y células (véase “Utilización de reactivos Bond” en la documentación de usuario suministrada por Bond). El anticuerpo primario Pax-5 (1EW) es un producto listo para usar que se ha optimizado especícamente para su uso con Bond Polymer Rene Detection. La demostración de la molécula Pax-5 humana se consigue, en primer lugar, permitiendo la unión de Pax-5 (1EW) a la sección y, a continuación, visualizando esta unión con los reactivos que proporciona el sistema de detección. El uso de estos productos, en combinación con el sistema automatizado Bond, reduce la posibilidad de errores humanos y la variabilidad inherente resultante de la dilución de cada reactivo, el pipeteo manual y la aplicación del reactivo.

Reactivos proporcionados

Pax-5 (1EW) es un anticuerpo monoclonal antihumano de ratón que se produce como sobrenadante en cultivos de tejido, y se suministra en solución salina tamponada de Tris con proteína portadora, que contiene el 0,35% de ProClinTM 950 como conservante.

Volumen total = 7 mL.

Clon

1EW.

Inmunógeno

Proteína recombinante correspondiente a parte de la región terminal C de la molécula Pax-5 humana.

Especicidad

Molécula Pax-5 humana.

Subclase

IgG1.

Concentración total de proteína

Aprox. 10 mg/mL.

Concentración de anticuerpos

Mayor o igual que 0,34 mg/L según lo determinado mediante ELISA.

Dilución y mezcla

El anticuerpo primario Pax-5 (1EW) se presenta en dilución óptima para su uso en el sistema Bond. No es necesaria la reconstitución, mezcla, dilución o titulación de este reactivo.

Material necesario pero no suministrado

Consulte, en el apartado “Uso de reactivos Bond” de la documentación de usuario de Bond, la lista completa del material necesario para el tratamiento de las muestras y la tinción inmunohistoquímica cuando se utiliza el sistema Bond.

Conservación y estabilidad

Ddebe conservarse a 2–8 °C. No se debe utilizar después de la fecha de caducidad que aparece en la etiqueta del recipiente. Los signos que indican la contaminación y/o inestabilidad de Pax-5 (1EW) son: turbidez de la solución, aparición de olor y presencia de

precipitado. Volver a guardar a 2–8 °C inmediatamente después de su uso. Si las condiciones de conservación son diferentes de las especicadas, el usuario debe realizar las comprobaciones necesarias

Precauciones

• Este producto es para uso diagnóstico in vitro.

• La concentración de ProClin la piel, ojos, mucosas y tracto respiratorio superior. Lleve siempre guantes desechables cuando manipule los reactivos.

• Si desea obtener un ejemplar de la Hoja de datos de seguridad de las sustancias, póngase en contacto con su distribuidor o con la ocina regional de Leica Biosystems, o visite la página Web de Leica Biosystems, www.LeicaBiosystems.com.

™

950 es 0,35%. Contiene el principio activo 2-metil-4-isotiazolin-3-ona, que puede producir irritación en

PA0552 Rev B Page 10

Page 12

• Las muestras, antes y después de ser jadas, y cualquier material en contacto con ellas, deben ser tratadas como sustancias capaces de transmitir infecciones y deben ser eliminadas con las precauciones correspondientes2. No pipetee nunca los reactivos con la boca, y evite el contacto de la piel y las mucosas con reactivos o muestras. Si los reactivos o las muestras entran en contacto con zonas sensibles, lávelas enseguida con abundante agua. Consulte a un médico.

• Consulte la normativa federal, nacional o local referente a la eliminación de sustancias potencialmente tóxicas.

• Minimice la contaminación microbiana de los reactivos, ya que puede producir un aumento de las tinciones inespecícas.

• Los tiempos de exposición e incubación, y las temperaturas diferentes de las especicadas pueden dar resultados erróneos. Cualquier cambio que se produzca deberá ser validado por el usuario.

Instrucciones de uso

El anticuerpo primario Pax-5 (1EW) se ha desarrollado para su uso en el sistema automatizado Bond en combinación con Bond Polymer Rene Detection. El uso de Peroxide Block como primer paso de IHC Staining Protocol F afectará a la tinción lograda con este anticuerpo; por este motivo, el protocolo de tinción recomendado para Pax-5 (1EW) es una versión modicada de IHC Staining Protocol F, donde el paso Peroxide Block anterior a MARKER se ha eliminado y se ha insertado un paso de Peroxide Block después de MARKER. Este protocolo de tinción modicado debe ser creado por el usuario. Para ver instrucciones sobre cómo modicar protocolos, consulte “Añadir y eliminar pasos de protocolo” en la documentación del usuario de Bond. Se recomienda la exposición de epítopos inducida por calor usando Bond Epitope Retrieval Solution 2 durante 20 minutos.

Resultados esperados

Tejidos normales Pax-5 e un factor de transcripción nuclear especíco de células B que se expresa en las células pro B, pre B y B maduras. El clon 1EW detectó la proteína Pax-5 en células B foliculares y no foliculares de amígdala 3/3, bazo 3/3, colon 3/3 e intestino delgado 3/3. También se observó tinción ocasional de linfocitos B en otros diversos tejidos 33/69, incluidos glándula adrenal, riñón, esófago, estómago, hígado, páncreas, pulmón, piel, próstata, cérvix, mama, tiroides, timo, médula ósea y pituitaria.

Tejidos tumorales El clon 1EW tiñó 14/14 linfomas difusos de células B grandes, 6/6 linfomas centrales foliculares, 3/3 MALTomas, 1/1 linfomas de células del manto, 1/1 linfoma de Burkitt, 1/1 linfoma de células B rico en células T, 5/5 linfomas de Hodgkin y 0/11 linfomas de células T. No se observó ninguna tinción en diversos tumores malignos no hematológicos (n=41).

Pax-5 (1EW) se recomienda para su uso como parte de un panel de anticuerpos para la identicación de tumores malignos con origen en células B.

Limitaciones especícas del producto

Pax-5 (1EW) se ha optimizado en Leica Biosystems para su uso con Bond Polymer Rene Detection y reactivos auxiliares Bond Los usuarios que se aparten de los procedimientos de análisis recomendados deben asumir la responsabilidad de interpretar los resultados del paciente tomando en cuenta estas circunstancias. Los tiempos del protocolo pueden diferir debido a las variaciones en la jación de los tejidos y en la ecacia de la preservación del antígeno, y deben determinarse empíricamente. Se debe utilizar controles negativos con reactivos a la hora de optimizar las condiciones de detección y los tiempos de protocolo.

Resolución de problemas

Consulte la referencia 3 para ver las acciones correctoras. Contacte con su distribuidor local o con la ocina regional de Leica Biosystems para informar de cualquier tinción anómala.

Para obtener más información

Para obtener más información sobre inmunotinciones con reactivos Bond, consulte los apartados Principio del procedimiento, Material necesario, Preparación de las muestras, Control de calidad, Vericación del análisis, Interpretación de la tinción, Clave de símbolos en las etiquetas y Limitaciones generales de la sección “Utilización de reactivos Bond” de la documentación de usuario suministrada por

Bond.

Bibliografía

1. Clinical Laboratory Improvement Amendments of 1988, Final Rule 57 FR 7163 February 28, 1992.

2. Villanova PA. National Committee for Clinical Laboratory Standards (NCCLS). Protection of laboratory workers from infectious

diseases transmitted by blood and tissue; proposed guideline. 1991; 7(9). Order code M29-P.

3. Bancroft JD and Stevens A. Theory and Practice of Histological Techniques. 4th Edition. Churchill Livingstone, New York. 1996.

4. Hansson M, Jerkeman M and Dictor M. Biphenotypic bigenotypic lymphoma with simultaneous expression of PAX5/BSAP and B- and T-cell markers. European Journal of Haematology. 2007; 79:159–165.

™

ProClin

950 es una marca registrada de Supelco, parte de Sigma-Aldrich Corporation.

Fecha de publicación

05 de febrero de 2013

PA0552 Rev B Page 11

Page 13

Anticorpo Primário Pronto a Usar Bond

™

Pax-5 (1EW)

Nº de catálogo: PA0552

Utilização a que se destina

Este reagente destina-se a utilização diagnóstica in vitro.

O anticorpo monoclonal Pax-5 (1EW) destina-se a ser utilizado na identicação qualitativa por microscopia óptica de Pax-5 humano em tecidos xos com formalina e incluídos em parana por coloração imunohistoquímica utilizando o sistema Bond

A interpretação clínica de qualquer coloração ou da sua ausência deve ser complementada por estudos morfológicos utilizando controlos adequados, e deve ser avaliada no contexto da história clínica do doente e de outros testes complementares de diagnóstico por um anátomo-patologista qualicado.

Resumo e Explicação

As técnicas de imunohistoquímica podem ser utilizadas para demonstrar a presença de antigénios em tecidos e células (ver “Utilizar os Reagentes Bond” na documentação do utilizador Bond). O anticorpo primário Pax-5 (1EW) consiste num produto pronto usar que foi especicamente optimizado para utilização com Bond Polymer Rene Detection. A demonstração de Pax-5 humano é obtida por, primeiro, permitindo a ligação de Pax-5 (1EW) à secção e visualizando-a posteriormente utilizando os reagentes fornecidos no sistema de detecção. A utilização destes produtos, em combinação com o sistema Bond automatizado, reduz a possibilidade de erro humano e da variabilidade inerente resultante da diluição do reagente individual, pipetagem manual e aplicação de reagente.

Reagentes Fornecidos

Pax-5 (1EW) é um anticorpo monoclonal anti-humano de ratinho produzido como sobrenadante de cultura tecidular e fornecida em solução salina com tampão Tris com proteína transportadora, contendo 0,35% de ProClinTM 950 como conservante.

Volume total = 7 mL.

Clone

1EW.

Imunogénio

Proteína recombinante procariota correspondente à região C-terminal da molécula Pax-5 humana.

Especicidade

Pax-5 humana.

Subclasse

IgG1.

Concentração de Proteínas Totais

Aproximadamente 10 mg/mL.

Concentração de anticorpos

Maior ou igual a 0,34 mg/L conforme determinado por ELISA.

Diluição e mistura

O anticorpo primário Pax-5 (1EW) apresenta-se com uma diluição ideal para utilização no sistema Bond. Não é necessária reconstituição, mistura, diluição ou titulação deste reagente.

Material necessário, mas não fornecido

Consultar “Usar os reagentes Bond” na sua documentação do utilizador Bond para uma lista completa de materiais necessários para tratamento de amostras e coloração imunohistoquímica usando o sistema Bond.

Armazenamento e Estabilidade

Armazene a uma temperatura de 2–8 °C. Não utilize após o m do prazo de validade referido no rótulo do recipiente. Os sinais que indicam contaminação e/ou instabilidade de Pax-5 (1EW) são: turvação da solução, desenvolvimento de odor e presença

de precipitado. Coloque entre 2–8 °C imediatamente depois de utilizar Condições de armazenamento diferentes das acima especicadas devem ser conrmadas pelo utilizador

Precauções

• Esteproduto destina-se a utilização diagnóstica in vitro.

• A concentração de ProClin pele, olhos, membranas mucosas e vias aéreas superiores. Use luvas descartáveis quando manipular os reagentes. Use luvas descartáveis quando manipular os reagentes.

• Para obter uma cópia da Ficha de Dados de Segurança do Material, entre em contacto com o seu distribuidor local ou sucursal regional da Leica Biosystems ou, em alternativa, visite o site da Leica Biosystems na internet, www.LeicaBiosystems.com.

™

950 é de 0,35%. Contém o ingrediente activo 2-metil-4-isotiazolina-3-a e pode provocar irritação da

automatizado.

PA0552 Rev B Page 12

Page 14

• As amostras, antes e depois da xação, e todo o material que a elas seja exposto, devem ser manipulados como se fossem capazes de transmitir infecção e eliminados usando as precauções adequadas2. Nunca pipete reagentes com a boca e evite o contacto entre a pele e membranas mucosas com reagentes ou amostras. Se reagentes ou amostras entrarem em contacto com os olhos, lave-os com uma quantidade abundante de água. Consultar um médico.

• Consulte os regulamentos federais, estatais e locais relativamente à eliminação de quaisquer componentes potencialmente tóxicos.

• Minimize a contaminação microbiana dos reagentes ou poderá ocorrer um aumento da coloração inespecíca.

• A utilização de tempos e temperaturas de recuperação e incubação diferentes dos especicados pode produzir resultados erróneos. Qualquer alteração deste tipo deve ser validada pelo utilizador.

Instruções de utilização

O anticorpo primário Pax-5 (1EW) foi desenvolvido para utilização no sistema Bond automatizado em combinação com a Bond Polymer Rene Detection. A utilização do Peroxide Block como o primeiro passo no Protocolo de Coloração IHC F irá afectar a coloração obtida com este anticorpo, pelo que o protocolo de coloração recomendado para Pax-5 (1EW) consiste numa versão editada do IHC Protocol F, em que o passo do Peroxide Block antes do MARKER foi apagado e inserido um bloco de bloqueio com peroxide depois do MARKER. O protocolo de coloração modicado tem que ser criado pelo utilizador. Para instruções sobre como editar os protocolos, Consulte “Adicionar e remover passos do protocolo” na sua documentação do utilizador Bond. Recomenda-se a recuperação de epitopos induzida por calor utilizando a Bond Epitope Retrieval Solution 2 durante 20 minutos.

Resultados esperados

Tecidos normais

Pax-5 consiste num factor de transcrição nuclear especíco para linfócitos B que é expresso em linfócitos pró-B, pré-B e B maduros. O Clone 1EW detectou a proteína Pax-5 em linfócitos B foliculares e não foliculares da amígdala 3/3, baço 3/3, cólon 3/3 e intestino delgado 3/3. Também se observou uma coloração ocasional de linfócitos B numa ampla variedade outros tecidos 33/69, incluindo suprarenal, rim, esófago, estômago, fígado, pâncreas, pulmão, pele, próstata, colo do útero, mama, tiróide, timo, medula óssea e pituitária.

Tecidos tumorais

O clone 1EW corou 14/14 linfomas difusos B, 6/6 linfomas de centro folicular, 3/3 MALTomas, 1/1 linfomas de células do manto, 1/1 linfoma de Burkitt, 1/1 linfoma B rico em linfócitos T, 5/5 casos de doença de Hodgkin e 0/11 linfomas T. Não foi observada coloração em várias outras doenças malignas não hematológicas (n=41).

Pax-5 (1EW) está recomendado para utilização como parte de um painel de anticorpos para a identicação de doenças malignas com origem nos linfócitos B.

Limitações Especícas para o Produto

Pax-5 (1EW) foi optimizado na Leica Biosystems para utilização com Bond Polymer Rene Detection e reagentes auxiliares Bond. Utilizadores que se desviem dos procedimentos de teste recokmendados devem assumir a responsabilidade pela interpretação dos resultados dos doentes nestas circunstâncias. Os tempos de protocolo podem variar, devido a variações na xação tecidular e na ecácia de valorização com antigénios, devendo ser determinados de forma empírica. Os controlos de reagente negativos devem ser usados quando se optimizam as condições de recuperação e os tempos do protocolo.

Resolução de problemas

Consulte a referência 3 para acções de resolução. Entre em contacto com o seu distribuidor local ou com a sucursal regional da Leica Biosystems para noticar qualquer coloração pouco

habitual.

Informações Adicionais

Poderá encontrar informações adicionais sobre imunocoloração com reagentes Bond nas secções de Princípios do Procedimento, Material Necessário, Preparação da Amostra, Controlo de Qualidade, Vericação do Ensaio, Interpretação da Coloração, Signicado dos Símbolos nos Rótulos e Limitações Gerais em “Utilizar os Reagentes Bond”na sua documentação do utilizador Bond.

Bibliograa

1. Clinical Laboratory Improvement Amendments of 1988, Final Rule 57 FR 7163 February 28, 1992.

2. Villanova PA. National Committee for Clinical Laboratory Standards (NCCLS). Protection of laboratory workers from infectious

diseases transmitted by blood and tissue; proposed guideline. 1991; 7(9). Order code M29-P.

3. Bancroft JD and Stevens A. Theory and Practice of Histological Techniques. 4th Edition. Churchill Livingstone, New York. 1996.

4. Hansson M, Jerkeman M and Dictor M. Biphenotypic bigenotypic lymphoma with simultaneous expression of PAX5/BSAP and B- and T-cell markers. European Journal of Haematology. 2007; 79:159–165.

™

ProClin

950 é uma marca registada de Supelco, parte da Sigma-Aldrich Corporation.

Data de Emissão

05 de Fevereiro de 2013

PA0552 Rev B

Page 13

Page 15

Bond™ Primär Antikropp - Färdig Att Användas Pax-5 (1EW)

Artikelnummer: PA0552

Användningsområde

Reagenset är avsett för in vitro-diagnostik.

Den monoklonala antikroppen Pax-5 (1EW) är avsedd att användas för kvalitativ bestämning i ljusmikroskopi av human Pax-5-antigen i formalinxerad, parafninbäddad vävnad, genom immunhistokemisk färgning i det automatiska systemet Bond

Den kliniska tolkningen av varje infärgning, eller utebliven infärgning, måste alltid kompletteras med morfologiska studier och lämpliga kontroller. Utvärderingen bör göras av kvalicerad patolog och inkludera patientens anamnes och övriga diagnostiktester.

Förklaring och sammanfattning

Med immunhistokemiska metoder kan man påvisa förekomsten av antigener i vävnad och celler (se “Använda Bond-reagens” i användardokumentationen från Bond). Primär antikropp Pax-5 (1EW) är en bruksfärdig produkt som speciellt optimerats för användning med Bond Polymer Rene Detection. Påvisande av human Pax-5 uppnås genom att man först låter Pax-5 (1EW) binda till snittet och därefter visualiserar denna bindning med hjälp av de reagens som ingår i detektionssystemet. Användning av dessa produkter tillsammans med det automatiska Bond-systemet reducerar risken för mänskliga misstag och för den inherenta spridning som orsakas av individuell reagensutspädning, manuell pipettering och manuell reagenstillsättning.

Ingående reagenser

Pax-5 (1EW) är en anti-human monoklonal antikropp från mus, producerad som supernatant från cellkultur. Den levereras i trisbuffrad koksaltlösning med bärarprotein. Lösningen innehåller 0,35% ProClinTM 950 som konserveringsmedel.

Total volym = 7 ml.

Klon

1EW.

Immunogen

Rekombinant protein motsvarande en del av den C-terminus av den humana Pax-5-molekylen.

Specicitet

Humant Pax-5.

Subklass

IgG1.

Total proteinkoncentration

Ungefär 10 mg/ml.

Antikroppskoncentration

Större än eller lika med 0,34 mg/l, enligt bestämning med ELISA.

Spädning och blandning

Primär antikropp Pax-5 (1EW) är optimalt utspädd för användning på systemet Bond. Denna reagens behöver varken rekonstitueras, blandas, spädas eller titreras.

Nödvändig materiel som ej medföljer

I “Använda Bond-reagens” i Bond-användardokumentationen nns en fullständig lista med den materiel du behöver för att behandla ett prov och göra en immunhistokemisk färgning med Bond-systemet.

Förvaring och stabilitet

Förvara vid 2–8 °C. Använd inte efter det utgångsdatum som anges på askans etikett. Tecken som indikerar kontaminering och/eller instabilitet hos Pax-5 (1EW) är: grumling i lösningen, luktutveckling och förekomst av

fällning. Ställ tillbaka i 2–8 °C omedelbart efter användning. Andra förvaringsbetingelser än de ovan angivna måste verieras av användaren

Säkerhetsåtgärder

• Produkten är avsedd för in vitro-diagnostik.

• Koncentrationen av ProClin slemhinnor och de övre luftvägarna. Använd engångshandskar när du hanterar reagens.

• Du kan få tag på ett säkerhetsdatablad genom att kontakta en lokal distributör eller Leica Biosystems regionkontor, eller besöka Leica Biosystems webbplats www.LeicaBiosystems.com.

• Prover, både före och efter xering, samt all materiel som exponeras för dem, bör behandlas och avfallshanteras som potentiellt smittbärande material Om reagens eller prover skulle komma i kontakt med känsliga områden bör du tvätta dig med rikliga mängder vatten. Kontakta läkare.

™

950 är 0,35%. Den aktiva ingrediensen 2-metyl-4-isotiazolin-3-on kan orsaka irritationer i hud, ögon,

. Munpipettera aldrig reagens och undvik att hud eller slemhinnor kommer i kontakt med reagens eller prover.

PA0552 Rev B

Page 14

Page 16

• Angående avfallshantering av potentiellt toxiska material hänvisar vi till gällande europeiska, nationella och lokala bestämmelser och förordningar.

• Minimera mikrobiologisk kontamination av reagenser, annars kan en ökad icke-specik infärgning bli resultatet.

• Retrieval, inkubationstider eller temperaturer som avviker mot dem angivna kan ge felaktiga resultat. Varje sådan förändring måste valideras av användaren.

Bruksanvisning

Den primära antikroppen Pax-5 (1EW) har utvecklats för användning på det automatiserade systemet Bond i kombination med Bond Polymer Rene Detection. Användningen av Peroxide Block som det första steget i IHC Staining Protocol F påverkar den färgning som åstadkoms med denna antikropp, och av denna orsak är det rekommenderade färgningsprotokollet för Pax-5 (1EW) en redigerad version av IHC Staining Protocol F, där Peroxide Block-steget före MARKER har tagits bort och ett peroxide block har infogats efter MARKER. Detta modierade färgningsprotokoll måste skapas av användaren. För instruktioner om hur man redigerar protokoll, se “Lägga till och ta bort steg i protokoll” i Bond-användardokumentationen. Värmeinducerat epitop-retrieval rekommenderas med användande av Bond Epitope Retrieval Solution 2 i 20 minuter.

Förväntade resultat

Normala vävnader Pax-5 är en B-cellsspecik nukleär transkriptionsfaktor som är uttryckt i pro B-, pre B- och mogna B-celler. Clone 1EW detekterade Pax5-protein i follikulära och icke-follikulära B-celler av tonsill 3/3, mjälte 3/3, tarm 3/3 och tunntarm 3/3. Färgning av enstaka B-lymfocyter observerades också i ett ertal andra vävnader 33/69, inklusive från binjure, njure, matstrupe, magsäck, lever, pankreas, lunga, hud, prostata, livmoderhals, bröst, sköldkörtel, tymus, benmärg och hypofys.

Tumörvävnader Klon 1EW färgade 14/14 diffusa stora B-cellslymfom, 6/6 follikelcenterlymfom, 3/3 MALT-lymfom, 1/1 mantelcellslymfom, 1/1 Burkitts lymfom, 1/1 T-cellsrikt B-cellslymfom, 5/5 Hodkins sjukdom och 0/11 T-cellslymfom. Ingen färgning observerades i ett ertal ickehematologiska maligniteter (n=41).

Pax-5 (1EW) rekommenderas för användning i en panel av antikroppar för identiering av maligniteter av B-cellsursprung.

Produktspecika begränsningar

Pax-5 (1EW) har optimerats vid Leica Biosystems för användning med Bond Polymer Rene Detection och Bond hjälpreagenser. Användare som inte följer rekommenderade testprotokoll måste ta på sig ansvaret för att korrekt tolka patientresultat under dessa förhållanden. Som följd av variationer i vävnadsxering och effektivitet hos antigensförstärkningen kan protokollets tider variera och de måste fastställas empiriskt. Negativa reagenskontroller bör användas när man optimerar betingelser för retrieval och protokolltider.

Felsökning

Se referens 3 för förslag till åtgärder. Kontakta en lokal distributör eller Leica Biosystems regionkontor för att rapportera onormal infärgning.

Mer information

Mer information om immunfärgning med Bond-reagens nns under rubrikerna Bakgrund till metoden, Nödvändig materiel, Förbereda provet, Kvalitetskontroll, Veriering av assayer, Tolka infärgningsresultat, Symbolförklaring för etiketter och Allmänna begränsningar i “Använda Bond-reagens” i Bonds användardokumentation.

Bibliogra

1. Clinical Laboratory Improvement Amendments of 1988, Final Rule 57 FR 7163 February 28, 1992.

2. Villanova PA. National Committee for Clinical Laboratory Standards (NCCLS). Protection of laboratory workers from infectious

diseases transmitted by blood and tissue; proposed guideline. 1991; 7(9). Order code M29-P.

3. Bancroft JD och Stevens A. Theory and Practice of Histological Techniques. 4th Edition. Churchill Livingstone, New York. 1996.

4. Hansson M, Jerkeman M and Dictor M. Biphenotypic bigenotypic lymphoma with simultaneous expression of PAX5/BSAP and B- and T-cell markers. European Journal of Haematology. 2007; 79:159–165.

™

ProClin

950 är ett varumärke för Supelco som ingår i Sigma-Aldrich Corporation.

Utgivningsdatum

05 februari 2013

PA0552 Rev B Page 15

Page 17

Έτοιμο Για Χρήση Πρωτογενές Αντίσωμα Bond™

Pax-5 (1EW)

Αρ. καταλόγου: PA0552

Σκοπός χρήσης

Αυτό το αντιδραστήριο προορίζεται για in vitro διαγνωστική χρήση.

Το μονοκλωνικό αντίσωμα Pax-5 (1EW) προορίζεται για χρήση για την ποιοτική ταυτοποίηση με μικροσκοπία φωτός του ανθρώπινου Pax-5 σε μονιμοποιημένο σε φορμόλη και ενσωματωμένο σε παραφίνη ιστό με ανοσοϊστοχημική χρώση, με χρήση του αυτοματοποιημένου συστήματος Bond

Η κλινική ερμηνεία οποιασδήποτε χρώσης ή της απουσίας της θα πρέπει να συμπληρώνεται με μορφολογικές μελέτες και σωστούς μάρτυρες και θα πρέπει να αξιολογείται στα πλαίσια του κλινικού ιστορικού του ασθενούς και άλλων διαγνωστικών εξετάσεων από ειδικευμένο παθολογοανατόμο.

Περίληψη και επεξήγηση

Μπορούν να χρησιμοποιηθούν ανοσοϊστοχημικές μέθοδοι για την κατάδειξη της παρουσίας αντιγόνων στον ιστό και τα κύτταρα (δείτε “Χρήση αντιδραστηρίων Bond” στο υλικό τεκμηρίωσης χρήσης του Bond). Το πρωτογενές αντίσωμα Pax-5 (1EW) είναι ένα έτοιμο για χρήση προϊόν που έχει βελτιστοποιηθεί ειδικά για χρήση με το Bond Polymer Rene Detection. Η κατάδειξη του ανθρώπινου Pax-5 επιτυγχάνεται πρώτα επιτρέποντας τη δέσμευση του Pax-5 (1EW) στην τομή και μετά οπτικοποιώντας αυτή τη δέσμευση με τη χρήση των αντιδραστηρίων που παρέχονται στο σύστημα ανίχνευσης. Η χρήση αυτών των προϊόντων, σε συνδυασμό με το αυτοματοποιημένο σύστημα Bond, μειώνει την πιθανότητα του ανθρώπινου σφάλματος και την εγγενή ποικιλότητα που προκαλείται από αραίωση συγκεκριμένου αντιδραστηρίου, χειροκίνητη αναρρόφηση με πιπέτα και εφαρμογή αντιδραστηρίου.

Αντιδραστήρια που παρέχονται

Το Pax-5 (1EW) είναι ένα μονοκλωνικό αντι-ανθρώπινο αντίσωμα ποντικού που παράγεται ως υπερκείμενο ιστοκαλλιέργειας και παρέχεται σε αλατούχο ρυθμιστικό διάλυμα Tris με πρωτεΐνη φορέα, που περιέχει 0,35% ProClinTM 950 ως συντηρητικό.

Συνολικός όγκος = 7 mL

Κλώνος

1EW.

Ανοσογόνο

Ανασυνδυασμένη πρωτεΐνη που αντιστοιχεί σε ένα τμήμα του C-τελικού άκρου του ανθρώπινου μορίου Pax-5.

Ειδικότητα

Ανθρώπινο Pax-5.

Υποκατηγορία

IgG1.

Συνολική συγκέντρωση πρωτεΐνης

Περίπου 10 mg/mL.

Συγκέντρωση αντισώματος

Μεγαλύτερη ή ίση με 0,34 mg/L, όπως προσδιορίζεται με ELISA.

Αραίωση και ανάμειξη

Το πρωτογενές αντίσωμα Pax-5 (1EW) είναι βέλτιστα αραιωμένο για χρήση στο σύστημα Bond. Δεν απαιτείται ανασύσταση, ανάμειξη, αραίωση ή τιτλοδότηση αυτού του αντιδραστηρίου.

Υλικά που απαιτούνται αλλά δεν παρέχονται

Για μια πλήρη λίστα των υλικών που απαιτούνται για την επεξεργασία δειγμάτων και την ανοσοϊστοχημική χρώση με τη χρήση του συστήματος Bond, ανατρέξτε στην ενότητα “Χρήση αντιδραστηρίων Bond” στο υλικό τεκμηρίωσης χρήσης του Bond.

Φύλαξη και σταθερότητα

Φυλάσσετε στους 2–8 °C. Μη το χρησιμοποιήσετε μετά την ημερομηνία λήξης που αναγράφεται στην ετικέτα του δοχείου. Tα σημεία που υποδεικνύουν μόλυνση ή και αστάθεια του Pax-5 (1EW) είναι: θολότητα του διαλύματος, δημιουργία οσμής και παρουσία

ιζήματος. Επαναφέρετε στους 2–8 °C αμέσως μετά τη χρήση. Συνθήκες φύλαξης εκτός από αυτές που καθορίζονται παραπάνω πρέπει να επαληθεύονται από τον χρήστη

Προφυλάξεις

• Αυτό το προϊόν προορίζεται για in vitro διαγνωστική χρήση.

• Η συγκέντρωση του ProClin ερεθισμό του δέρματος, των ματιών, των βλεννογόνων μεμβρανών και της ανώτερης αναπνευστικής οδού. Φοράτε γάντια μίας χρήσης όταν χειρίζεστε αντιδραστήρια.

• Για να λάβετε ένα αντίτυπο του δελτίου δεδομένων ασφαλείας υλικού (Material Safety Data Sheet), επικοινωνήστε με τον τοπικό σας διανομέα ή τα περιφερειακά γραφεία της Leica Biosystems ή, εναλλακτικά, επισκεφθείτε τον ιστότοπο της Leica Biosystems,

www.LeicaBiosystems.com.

™

950 είναι 0,35%. Περιέχει το ενεργό συστατικό 2-methyl-4-isothiazolin-3-one και μπορεί να προκαλέσει

PA0552 Rev B

Page 16

Page 18

• Ο χειρισμός των δειγμάτων, πριν και μετά τη μονιμοποίηση και όλων των υλικών που εκτίθενται σε αυτά, θα πρέπει να γίνεται ως εάν ήταν ικανά να μεταδώσουν μόλυνση και θα πρέπει να απορρίπτονται λαμβάνοντας κατάλληλες προφυλάξεις2. Μην κάνετε ποτέ αναρρόφηση αντιδραστηρίων με πιπέτα με το στόμα και αποφύγετε να έρθει σε επαφή το δέρμα και οι βλεννογόνοι με τα αντιδραστήρια ή τα δείγματα. Αν αντιδραστήρια ή δείγματα έρθουν σε επαφή με ευαίσθητες περιοχές, πλύνετέ τις με άφθονο νερό. Ζητήστε ιατρική συμβουλή.

• Συμβουλευτείτε τους ομοσπονδιακούς, πολιτειακούς ή τοπικούς κανονισμούς για απόρριψη τυχόν δυνητικώς τοξικών συστατικών.

• Ελαχιστοποιήστε τη μικροβιακή μόλυνση των αντιδραστηρίων, διότι ενδέχεται να συμβεί αύξηση μη ειδικής χρώσης.

• Ανάκτηση, χρόνοι επώασης ή θερμοκρασίες διαφορετικές από τις καθορισμένες, μπορεί να οδηγήσουν σε εσφαλμένα αποτελέσματα. Οποιαδήποτε τέτοια αλλαγή πρέπει να επικυρώνεται από τον χρήστη.

Οδηγίες χρήσης

Το πρωτογενές αντίσωμα Pax-5 (1EW) αναπτύχθηκε για χρήση στο αυτοματοποιημένο σύστημα Bond σε συνδυασμό με το Bond Polymer Rene Detection. Η χρήση του Peroxide Block ως το πρώτο βήμα στο ανοσοϊστοχημικό πρωτόκολλο χρώσης IHC Staining Protocol F θα επηρεάσει την χρώση που επιτυγχάνεται με αυτό το αντίσωμα. Για το λόγο αυτό, το συνιστώμενο πρωτόκολλο χρώσης για το Pax-5 (1EW) είναι μια τροποποιημένη εκδοχή του IHC Staining Protocol F, όπου το βήμα Peroxide Block πριν το MARKER έχει διαγραφεί και έχει εισαχθεί ένα βήμα Peroxide Block μετά το MARKER. Αυτό το τροποποιημένο πρωτόκολλo xρώσης πρέπει να δημιουργηθεί από τον χρήστη. Για οδηγίες για τον τρόπο τροποποίησης πρωτοκόλλων ανατρέξτε στην ενότητα “Προσθήκη και αφαίρεση βημάτων πρωτοκόλλων “ στο υλικό τεκμηρίωσης χρήσης του Bond. Συνιστάται ανάκτηση επιτόπου επαγόμενη με θερμότητα χρησιμοποιώντας το Bond Epitope Retrieval Solution 2 για 20 λεπτά.

Αναμενόμενα αποτελέσματα

Φυσιολογικοί ιστοί Το Pax-5 είναι ένας πυρηνικός παράγων μεταγραφής ειδικός των B κυττάρων που εκφράζεται σε προ-Β (pro-B), πρε-Β (pre-B) και ώριμα B κύτταρα. Ο κλώνος 1EW ανίχνευσε την πρωτεΐνη Pax-5 σε θυλακιώδη και μη θυλακιώδη κύτταρα B αμυγδαλής 3/3, σπλήνα 3/3, κόλου 3/3 και λεπτού εντέρου 3/3. Χρώση περιστασιακών B λεμφοκυττάρων παρατηρήθηκε επίσης σε μια ποικιλία άλλων ιστών 33/69, συμπεριλαμβανομένων του επινεφριδίου, νεφρού, οισοφάγου, στομάχου, ήπατος, παγκρέατος, πνεύμονα, δέρματος, προστάτη, τραχήλου, μαστού, θυρεοειδή, θύμου, μυελού των οστών και υπόφυσης.

Νεοπλασματικοί ιστοί Με τον κλώνο 1EW χρώστηκαν 14/14 διάχυτα λεμφώματα εκ μεγάλων κυττάρων B, 6/6 λεμφοζιδιακά λεμφώματα, 3/3 λεμφώματα MALT, 1/1 λέμφωμα από το κύτταρο του μανδύα, 1/1 λέμφωμα Burkitt, 1/1 B κυτταρικό λέμφωμα πλούσιο σε Τ-κύτταρα, 5/5 νόσοι του Hodgkin και 0/11 λεμφώματα κυττάρων T. Δεν παρατηρήθηκε χρώση σε μια ποικιλία μη αιματολογικών κακοηθειών (n=41).

Το Pax-5 (1EW) συνιστάται για χρήση ως τμήμα ομάδας αντισωμάτων για την αναγνώριση των κακοηθειών με προέλευση εκ Β κυττάρων.

Ειδικοί περιορισμοί του προϊόντος

Το Pax-5 (1EW) έχει βελτιστοποιηθεί στην Leica Biosystems για χρήση με το Bond Polymer Rene Detection και τα βοηθητικά αντιδραστήρια Bond. Οι χρήστες που παρεκκλίνουν από τις συνιστώμενες διαδικασίες εξέτασης, πρέπει να αναλάβουν την ευθύνη για την ερμηνεία των αποτελεσμάτων των ασθενών υπό αυτές τις συνθήκες. Οι χρόνοι του πρωτοκόλλου μπορεί να διαφέρουν λόγω της διαφοροποίησης στη μονιμοποίηση του ιστού και την αποτελεσματικότητα της ενίσχυσης του αντιγόνου και συνεπώς πρέπει να προσδιορίζονται εμπειρικά. Για τη βελτιστοποίηση των συνθηκών ανάκτησης και των χρόνων του πρωτοκόλλου θα πρέπει να χρησιμοποιούνται δείγματα αντιδραστηρίου αρνητικού ελέγχου.

Αντιμετώπιση προβλημάτων

Ανατρέξτε στην παραπομπή 3 για τις διορθωτικές ενέργειες. Για να αναφέρετε περιπτώσεις ασυνήθιστης χρώσης, επικοινωνήστε με τον τοπικό σας διανομέα ή τα περιφερειακά γραφεία της Leica

Biosystems.

Πρόσθετες πληροφορίες

Μπορείτε να βρείτε περισσότερες πληροφορίες σχετικά με την ανοσοχρώση με αντιδραστήρια Bond, υπό τους τίτλους “Αρχή της διαδικασίας”, “Απαιτούμενα υλικά”, “Προετοιμασία δείγματος”, “Ποιοτικός έλεγχος”, “Επαλήθευση προσδιορισμού”, “Ερμηνεία της χρώσης”, “Υπόμνημα για τα σύμβολα στις ετικέτες” και “Γενικοί περιορισμοί” στην ενότητα “Χρήση αντιδραστηρίων Bond” στο υλικό τεκμηρίωσης χρήσης του Bond.

Bιβλιογραφία

1. Clinical Laboratory Improvement Amendments of 1988, Final Rule 57 FR 7163 February 28, 1992.

2. Villanova PA. National Committee for Clinical Laboratory Standards (NCCLS). Protection of laboratory workers from infectious

diseases transmitted by blood and tissue; proposed guideline. 1991; 7(9). Order code M29-P.

3. Bancroft JD and Stevens A. Theory and Practice of Histological Techniques. 4th Edition. Churchill Livingstone, New York. 1996.

4. Hansson M, Jerkeman M and Dictor M. Biphenotypic bigenotypic lymphoma with simultaneous expression of PAX5/BSAP and B- and T-cell markers. European Journal of Haematology. 2007; 79:159–165.

™

Το ProClin

950 είναι εμπορικό σήμα της Supelco, τμήμα της Sigma-Aldrich Corporation.

Ημερομηνία έκδοσης

05 Φεβρουαρίου 2013

PA0552 Rev B Page 17

Page 19

Bond™ Brugsklart Primaert Antistof Pax-5 (1EW)

Katalognummer.: PA0552

Tilsigtet anvendelse

Dette reagens er beregnet til in vitro diagnostik.

Monoklonalt Pax-5 (1EW)-antistof er beregnet til brug ved kvalitativ identikation med lysmikroskopi af humant Pax-5 i formalinkserede, parafnindstøbte væv vha. immunhistokemisk farvning med det automatiske Bond

Den kliniske fortolkning af enhver farvning eller fravær af samme skal ledsages af morfologiske undersøgelser og egnede kontroller samt evalueres af en uddannet patolog, som ser fortolkningen i kontekst med patientens anamnese samt andre diagnostiske prøver.

Resumé og forklaring

Immunhistokemiske teknikker kan anvendes til at påvise tilstedeværelsen af antigener i væv og celler (se “Anvendelse af Bondreagenser” i Bond-brugervejledningen). Pax-5 (1EW) primært antistof er et brugsklart produkt, som er optimeret specielt til brug med Bond Polymer Rene Detection. Påvisningen af humant Pax-5 opnås ved først at lade Pax-5 (1EW) binde sig til præparatet, og derefter visualisere denne binding ved hjælp af de reagenser, der leveres med detektionssystemet. Brugen af disse produkter sammen med det automatiske Bond-system reducerer risikoen for menneskelige fejl og variabilitet som følge af individuel reagensfortynding, manuel pipettering og reagenspåførsel.

Leverede reagenser

Pax-5 (1EW) er et murint antihumant monoklonalt antistof produceret som en vævskultursupernatant leveret i Tris-bufferjusteret saltvandsopløsning med bærerprotein, indeholder 0,35% ProClinTM 950 som konserveringsmiddel.

Volumen i alt = 7 ml.

Klon

1EW.

Immunogen

Rekombinant protein svarende til en del af C-terminalen på det humane Pax-5-molekyle.

Specicitet

Humant Pax-5.

Underklasse

IgG1.

Total proteinkoncentration

Ca. 10 mg/ml.

Antistofkoncentration

Større end eller lig med 0,34 mg/l bestemt med ELISA.

Fortynding og blanding

Pax-5 (1EW) primært antistof er optimalt fortyndet til brug på Bond-systemet. Rekonstitution, blanding, fortynding eller titrering af dette reagens er ikke påkrævet.

Nødvendige materialer, der ikke medfølger

Der henvises til “Anvendelse af Bond-reagenser” i Bond-brugervejledningen for en komplet liste over materialer, der er nødvendige til præparatbehandling og immunhistokemisk farvning ved hjælp af Bond-systemet.

Opbevaring og stabilitet

Opbevares ved 2–8 °C. Må ikke anvendes efter udløbsdatoen, som er angivet på etiketten på beholderen. Tegn, som indikerer, at Pax-5 (1EW) er kontamineret og/eller ustabilt: turbiditet af opløsningen, lugtudvikling og forekomst af præcipitat. Sættes tilbage til opbevaring ved 2–8 °C straks efter brug. Opbevaringsbetingelser, der adskiller sig fra de oven for specicerede, skal vericeres af brugeren

Forholdsregler

• Dette produkt er beregnet til in vitro diagnostik.

• Koncentrationen af ProClin til irritation af hud, øjne, slimhinder og øvre luftveje. Der skal anvendes engangshandsker ved håndtering af reagenserne.

• Det er muligt at få et sikkerhedsdatablad (Material Safety Data Sheet) ved henvendelse til den lokale forhandler, det regionale kontor for Leica Biosystems eller via Leica Biosystems’ hjemmeside www.LeicaBiosystems.com.

• Præparater, både før og efter ksering, samt alle materialer eksponeret for præparater, skal håndteres som værende i stand til at overføre infektion og skal bortskaffes efter passende forholdsregler eller præparater kommer i kontakt med hud og slimhinder. Hvis reagenser eller præparater kommer i kontakt med følsomme områder, skal disse områder vaskes med rigelige mængder vand. Søg læge.

• Bortskaffelse af potentielt toksiske komponenter skal ske i overensstemmelse med gældende statslig eller lokal lovgivning.

™

950 er 0,35%. Det indeholder den aktive ingrediens 2-methyl-4-isothiazolin-3-one og kan give anledning

system.

. Afpipettér ikke reagenser med munden og undgå, at reagenser

PA0552 Rev B

Page 18

Page 20

• Mikrobiel kontaminering af reagenser skal minimeres for at undgå en øget uspecik farvning.

• Gennding og inkubationstider eller -temperaturer, som afviger fra de specicerede, kan give fejlagtige resultater. Enhver ændring

heraf skal valideres af brugeren.

Brugsanvisning

Pax-5 (1EW) primært antistof er udviklet til brug på det automatiske Bond-system sammen med Bond Polymer Rene Detection. Anvendelsen af Peroxide Block som første trin i IHC-farvningsprotokol F vil påvirke den farvning, der er opnået med dette antistof, derfor er den anbefalede farvningsprotokol for Pax-5 (1EW) en tilpasset version af IHC-farvningsprotokol F, hvor trinnet med Peroxide Block før MARKER er slettet og et peroxide block trin er indsat efter MARKER. Den modicerede farvningsprotokol skal oprettes af brugeren. For vejledning om tilpasning af protokoller henvises til “Tilføjelse og fjernelse af protokoltrin” i Bond brugervejledningen. Varmeinduceret epitopgennding anbefales ved anvendelse af Bond Epitope Retrieval Solution 2 i 20 minutter.

Forventede resultater

Normalt væv Pax-5 er en B-celle-specik nukleær transkriptionsfaktor, som udtrykkes i pro-B-, præ-B- og modne B-celler. Klon 1EW detekterede Pax-5-proteinet i follikulære og non-follikulære B-celler fra tonsil 3/3, milt 3/3, colon 3/3 og tyndtarm 3/3. Farvning af lejlighedsvise B-lymfocytter sås også i en række andre væv 33/69, herunder binyre, nyre, øsofagus, gaster, lever, pancreas, lunge, hud, prostata, cervix, mamma, thyreoidea, thymus, knoglemarv og hypofyse.

Tumorvæv Klon 1EW farvede 14/14 diffust storcellede B-cellelymfomer, 6/6 follikelcenterlymfomer, 3/3 MALTomer, 1/1 mantlecellelymfom, 1/1 Burkitts lymfom, 1/1 T-cellerigt B-cellelymfom, 5/5 Mb. Hodgkin og 0/11 T-cellelymfomer. Der sås ingen farvning i en række nonhæmatologiske maligniteter (n=41).

Pax-5 (1EW) anbefales at indgå i et panel af antistoffer til identikation af maligne lidelser af B-celle-oprindelse.

Produktspecikke begrænsninger

Pax-5 (1EW) er optimeret af Leica Biosystems til brug med Bond Polymer Rene Detection og Bond hjælpereagenser. Brugere, som afviger fra de anbefalede undersøgelsesprocedurer, må under disse forhold selv tage ansvaret for fortolkningen af patientresultater. Protokoltiderne kan variere på grund af variation i vævsksering og effektiviteten i antigenfremhævning og skal bestemmes empirisk. Der skal anvendes negative reagenskontroller ved optimering af genndingsforhold og protokoltider.

Fejlnding

Se reference 3 for afhjælpende foranstaltninger. Kontakt venligst den lokale distributør eller Leica Biosystems’ regionale kontor for at rapportere usædvanlig farvning.

Yderligere oplysninger

Yderligere oplysninger om immunfarvning med Bond-reagenser kan ndes i “Anvendelse af Bond-reagenser” i Bond-brugervejledningen under overskrifterne Proceduremæssige principper, Nødvendige materialer, Præparatklargøring, Kvalitetskontrol, Analyseverikation, Fortolkning af farvning, Nøgle til symboler på etiketter og Generelle begrænsninger.

Bibliogra

1. Clinical Laboratory Improvement Amendments of 1988, Final Rule 57 FR 7163 February 28, 1992.

2. Villanova PA. National Committee for Clinical Laboratory Standards (NCCLS). Protection of laboratory workers from infectious

diseases transmitted by blood and tissue; proposed guideline. 1991; 7(9). Order code M29-P.

3. Bancroft JD and Stevens A. Theory and Practice of Histological Techniques. 4th Edition. Churchill Livingstone, New York. 1996.

4. Hansson M, Jerkeman M and Dictor M. Biphenotypic bigenotypic lymphoma with simultaneous expression of PAX5/BSAP and B- and T-cell markers. European Journal of Haematology. 2007; 79:159–165.

™

ProClin

950 er et varemærke tilhørende Supelco, en del af Sigma-Aldrich Corporation.

Udgivelsesdato

05 februar 2013

PA0552 Rev B Page 19

Page 21