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PrimeSTAR® HS
DNA Polymerase with GC Buffer
使 用 说 明 书
TaKaRa Code：DR044A
●包装量：
●制品说明
PrimeSTAR® HS DNA Polymerase with GC
Buffer适用于高保真扩增具有复杂二级结构的
DNA模板（GC rich、重复序列等）。PrimeSTAR
HS DNA Polymerase具 有 极强的 3’→5’
Exonuclease活性，显示出超群的校正功能，同
时还具有优于
率。本制品对cDNA克隆等要求高保真的PCR反
应能够发挥强大威力,并能对高GC含量模板进行
高效扩增。使用本制品扩增得到的PCR产物几乎
都为平滑末端，经磷酸化后可直接克隆于具有平
滑末端的载体中。
● 制品内容
PrimeSTAR® HS DNA Polymerase（2.5 U/ μ
2×
PrimeSTAR® GC Buffer
dNTP Mixture（2.5 mM each）
* Mg2+浓度为 2 mM。
●保 存
-20℃。
●活性定义
用活性化的大马哈鱼精子 DNA 作为模板/引物，
在 74℃，30 分钟内，摄入 10 nmol 的全核苷酸
为酸性不溶物的活性定义为 1 个活性单位（U）。
●纯 度
1）10 U 的本酶和 0.6 μg的λDNA-
74℃下反应 1 小时，DNA 的电泳谱带不发生
变化。
2）10 U 的本酶和 0.6 μg 的 Supercoiled
pBR322 DNA 在 74℃下反应 1 小时，DNA
的电泳谱带不发生变化。
250 U
Taq
DNA Polymerase的高扩增效
(Mg2+plus)*
l）
1.7 ml×3
Hin
d III 在
®
100 μl
800 μl
●用 途
PCR 法高保真扩增 DNA 片段。
●PCR 反应性能
1） 以λDNA 为模板，可以很好地扩增 8、10、
12、15 kbp 的 DNA 片段。
2） 以人基因组 DNA 为模板，可以很好地扩增
APO E
DNA 片段
●反应条件
1. 按下列组份配制 PCR 反应液。
2×PrimeSTAR® GC Buffer
dNTP Mixture（2.5 mM each）
Primer 1
Primer 2
Template*
PrimeSTAR® HS DNA Polymerase（2.5 U/μl）
dH2O
*【50 μl PCR 反应体系中模板 DNA 推荐使用量】
人基因组 DNA
大肠杆菌基因组 DNA
λDNA
质粒 DNA
cDNA Library
2. PCR 反应条件*。
98℃ 10 sec
68℃ 1 min/kbp
98℃ 10 sec
60℃ 5 sec 30 Cycles
72℃ 1 min/kbp
* ① 通常进行 2 Step PCR 反应，当 2 Step PCR
② 本酶具有高退火效率，在进行 3 Step 的 PCR
基因 520 bp（GC 含量 74.8%）的
。
25 μl
4
μ
0.2-0.3 μM（final conc.）
0.2-0.3 μM（final conc.）
<200 ng
0.5
μ
up to 50
μ
5 ng～200 ng(<200 ng)
100 pg～100 ng
10 pg～10 ng
10 pg～1 ng
1～200 ng
30 Cycles
or
反应得不到良好反应结果时，可以试用 3
Step PCR 反应进行实验。
条件设定时，可以缩短退火时间。
l
l
l
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●实验例
使用
Taq
DNA Polymeras 、PrimeSTAR® HS
DNA Polymeras 、 PrimeSTAR
Polymerase with GC Buffer，按照各自的反应
条件，分别扩增了人APO E基因（520 bp，GC
含量 74.8%）和
GC含量 73.2%），进行了各种DNA聚合酶的反应
性能比较，结果如下：
【APO E 520 bp DNA 片段的扩增结果】
Taq
DNA pol. PrimeSTAR® HS PrimeSTAR®HS
with GC Buffer
3Step
1 2 3 M 1 2 3 M 1 2 3 M 1 2 3 M
M
M: 100 bp DNA Ladder
1: 1 ng Human Genomic DNA 的 PCR 扩增产物
2: 10 ng Human Genomic DNA 的 PCR 扩增产物
3: 100 ng Human Genomic DNA 的 PCR 扩增产物
【
Tth
HB8 3,005 bp DNA 片段的扩增结果】
Taq
DNA PrimeSTAR® HS PrimeSTAR®HS
pol. with GC Buffer
3Step 3Step
M 1 2 3 M 1 2 3 M 1 2 3 M 1 2 3 M 1 2 3 M
Hin
M: λ1: 100 pg
2: 1 ng
3: 10 ng
Tth
Tth
HB8 基因（3，005 bp，
3Step 2Step 2Step
2Step
d III digest
Tth
HB8 Genomic DNA 的 PCR 扩增产物
HB8 Genomic DNA 的 PCR 扩增产物
Tth
HB8 Genomic DNA 的 PCR 扩增产物
®
HS DNA
2Step 3Step
【结论】
以上两基因的扩增结果显示，对于GC含量高的模
板，PrimeSTAR
Buffer的扩增效果优于其它DNA 聚合酶。
®
HS DNA Polymerase with GC
●注意事项
PCR 的反应液请在冰中配制，然后置于 PCR 反
应仪上进行 PCR 反应。这种冷启动法（Cool Start
Method）可增强 PCR 扩增的特异性，减少 PCR
过程中的非特异性反应，能得到良好的 PCR 结
果。
520 bp
3,005 bp
V2010.02
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