Roth HP64 User guide

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MRS BOUILLON pH 5,7

Zur Kultivierung pH-sensitiver Lactobacilli

HP64

Zusammensetzung in g/l:

Caseinpepton .......................... 10,0

Hefeextrakt ...............................4,0

Tween 80 .................................1,08

Natriumacetat ............................5,0

Magnesiumsulfat-Heptahydrat ..0,2

Rindfleischextrakt .....................10,0

Glucose ....................................20,0

Dikaliumphosphat .....................2,0

Triammoniumcitrat .....................2,0

Mangansulfat-Tetrahydrat .......0,05

pH ................................... 5,7 ± 0,1

HERSTELLUNG

54 g des Mediums werden in einem Liter destillierten Wassers suspendiert. Gut mischen. Man erhitze
langsam, um das Medium vollständig zu lösen. Man gebe die Lösung in geeignete Behälter und sterilisiere
12 Minuten lang bei 121 °C.

EINSATZGEBIET

MRS Bouillon wurde von deMan, Rogosa und Sharpe entwickelt, um ein einfach zu handhabendes
Kulturmedium zum Wachstum aller Lactobazillen zur Hand zu haben, vor allem auch in Hinblick auf die
anspruchsvollen und langsam wachsenden Stämme wie L. brevis und L. fermenti. Die ISO-Norm 15214
schreibt dieses Medium vor zur Koloniezählung mesophiler, Milchsäurebakterien bei 30 °C. Das Medium ist
geeignet zur Kultur von Milchsäurebakterien im Allgemeinen, einschließlich Lactobacillus, Streptococcus,
Pediococcus und Leuconostoc. Im Besonderen verwendet man MRS Bouillon mit pH 5,7 zur Kultivierung von
Lactobazillen, die höheren pH Werten gegenüber sensitiv sind oder verminderte Proteinexpression zeigen.
Ammoniumcitrat inhibiert bei niedrigem pH die meisten Mikroorganismen, einschließlich anderer Streptokokken
und Schimmelpilze.
Als Inkubationsparameter empfehlen wir 3 Tage bei 35 °C oder besser 5 Tage bei 30 °C. Von den Röhrchen,
die Wachstum zeigen werden Subkulturen auf MRS Agar angelegt, um die Anwesenheit von Lactobacillen
zu bestätigen. MRS Bouillon kann auch in nachfolgenden Tests für die Identifizierung von Lactobacillen
genutzt werden, wie Abhängigkeit des Wachstums von der Inkubationstemperatur oder Wachstum in 4 %
Natriumchlorid.

MIKROBIOLOGISCHE TESTS

Die folgenden Ergebnisse wurden erzielt nach Inkubation von Referenzstämmen im angegebenen
Medium / Agar bei einer Temperatur von 37 ± 2 °C für 3 Tage oder bei 30 ± 2 °C für 5 Tage unter aeroben

Bedingungen.

Mikroorganismen

Wachstum

Lactobacillus acidophilus ATCC 4356

Gut

Lactobacillus casei ATCC 393

Gut

Lactobacillus fermentum ATCC 9338

Gemäßigt-Gut

Escherichia coli ATCC 25922

Gemäßigt-Gut

Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853

Gehemmt

MRS BOUILLON pH 5,7 500 g HP64.1

Lagerung bei 4 °C

Nach:
ISO 15214: Mikrobiologische Untersuchung
von Lebensmitteln und Tierfutter.
deMan, J.D., Rogosa M., und Sharpe M.E.
(1960) A Medium for the Cultivation of
Lactobacilli. J. Appl. Bact. 23:130-135

Produkt-Datenblatt

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Acc. to:
ISO 15214, Microbiology of food and animal
feeding stuffs.
deMan, J.D., Rogosa M., and Sharpe M.E.
(1960) A Medium for the Cultivation of
Lactobacilli. J. Appl. Bact. 23:130-135

MRS BROTH pH 5.7

For the cultivation of pH sensitive lactobacilli
HP64

Formulation in g/l:

Casein peptone ........................................... 10.0

Yeast extract .................................................. 4.0

Tween 80 ..................................................... 1.08

Sodium acetate ............................................. 5.0

Magnesium sulphate heptahydrate ............... 0.2

Beef extract ................................................. 10.0

Glucose ....................................................... 20.0

Dipotassium phosphate ................................. 2.0

Triammonium citrate...................................... 2.0

Manganese sulphate tetrahydrate .............. 0.05

pH ......................................................... 5.7 ± 0.1

PREPARATION

Dissolve 54 g of the medium in one liter of deionized or distilled water. Mix well. Heat slowly in order to dissolve
the medium completely. Dispense and sterilize at 121 C for 12 minutes.

USES

MRS Bouillon was developed by deMan, Rogosa and Sharpe to grow luxuriantly all strains of lactobacilli
especially the fastidious, slower-growing types such as L. brevis and L. fermenti. Normative ISO 15214
recommends this medium for colony count of mesophilic lactic acid bacteria at 30 °C. The medium is apt for the
growth of lactic acid bacteria in general, including Lactobacillus, Streptococcus, Pediococcus and Leuconostoc.
MRS Broth pH 5.7 in particular is used for cultivation of Lactobacilli which have proven to be sensitive to higher
pH values or which have shown to reduce protein expression rates under these circumstances. Ammonium
citrate at a low pH inhibits most microorganisms, including other Streptococci and molds.
For times and temperatures of incubation we recommend 35 C for 3 days or better, 30 C for 5 days. Tubes
showing growth are subcultured to MRS Agar to confirm the presence of lactobacilli. MRS Broth can also be
utilized in subsequent tests for the identification of lactobacilli such as dependency on the incubation
temperature for growth or growth in 4% sodium chloride.

MICROBIOLOGICAL TEST

The following results were obtained in the performance of the given medium from type cultures after
incubation at a temperature of 37 ± 2 °C for 3 days or of 30 ± 2 °C for 5 days under aerobic atmosphere.

Microorganisms

Growth

Lactobacillus acidophilus ATCC 4356

Good

Lactobacillus casei ATCC 393

Good

Lactobacillus fermentum ATCC 9338

Moderate-Good

Escherichia coli ATCC 25922

Moderate-Good

Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853

Inhibited

MRS BROTH pH 5.7 500 g HP64.1

Store at 4 °C

Product Data Sheet

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