Roth HP02 User guide

verdünnt) auftropfen und einwirken lassen.

Gebrauchsanweisung

Gram-Färbekit

HP02

Unterscheidung Gram-positiver und Gram-negativer Bakterien

Die Gram-Färbung ist die weltweit wichtigste Färbetechnik zur Unterscheidung und Identifikation von Bakterien.
Die Probe wird zunächst mit Karbol-Gentianaviolett-Lösung gefärbt und mit Lugolscher Lösung gebeizt. Bei der
anschließenden Behandlung mit Entfärbelösung werden Gram-positive Bakterien nicht wieder entfärbt, da ihre
mehrschichtige Zellwand den entstandenen Farbkomplex zurückhält. Gram-negative Bakterien dagegen besitzen
nur eine einschichtige Zellwand, können daher leicht entfärbt und anschließend mit Karbol-Fuchsin-Lösung
gegengefärbt werden. Die Unterscheidung ist z.B. wichtig für die Behandlung von Infektionskrankheiten, bei denen
die Wahl des passenden Antibiotikums vom jeweiligen Bakterientyp abhängt.

Der Kit enthält

 Karbol-Gentianaviolett-Lösung (CN00.1)

lg Achtung H226-H319 500 ml

 Jod-Kaliumjodidlösung nach Lugol (N052.3) n Achtung H373 500 ml
 Gram‘s Entfärbelösung (CN02.1)

lg Gefahr H225-H319-H336 EUH066 500 ml

 Karbol-Fuchsin-Lösung (A130.2)

hn Gefahr H314-H341 500 ml

Lösungen vor Gebrauch filtrieren! Die Lösungen können einzeln nachbestellt werden.

Weitere benötigte Reagenzien

 ROTI®Histol (Best.-Nr. 6640) oder Xylol p.a. (Best.-Nr. 4436)
 ROTI®Histokitt (Best.-Nr. 6638), kompatibel mit ROTI®Histol,

oder ROTI®Histokitt II (Best.-Nr. T160), kompatibel mit Xylol

 Safraninlösung (Best.-Nr. CN01) - optional

Durchführung Für luftgetrocknete, hitzefixierte Bakterienausstriche, dünn ausgestrichen

1. Karbol-Gentianaviolett-Lösung auftropfen und

einwirken lassen 2-3 min

2. Farblösung abgießen und mit Lugolscher Lösung
2-3 x abspülen - nicht mit Wasser.

3. Ausstrich in Lugolsche Lösung einstellen 3 min

4. Gram‘s Entfärbelösung tropfenweise über
Objektträger laufen lassen, bis keine Farbwolken
mehr abgehen. max. 20-30 sec

Nicht länger differenzieren, da sonst auch
Entfärbung Gram-positiver Strukturen möglich ist!

5. Vorsichtig mit Aqua dest. spülen, Entfärbelösung

muss vollständig abgespült werden.

Ergebnis: Gram-positive Bakterien: violett, Gram-negative Bakterien: rot

Hinweis: Die Farbintensität ist abhängig von der Vorbehandlung und Beschaffenheit der zu färbenden Probe.

Eine Anpassung der Methode an die jeweiligen Bedingungen kann also ggf. erforderlich sein.

Carl Roth GmbH + Co. KG

Schoemperlenstraße 3-5 • 76185 Karlsruhe
Postfach 100121 • 76231 Karlsruhe
Telefon: [phone]
Fax: [phone]
[e-mail] • www.carlroth.de sse 06/2021

Die Firm a ist ei ne Kommanditgesell schaft mit Sitz in Karlsr uhe, Reg. Gericht
Mannheim HRA 100055. Persönl ich haft ende Gesellschafterin ist die Roth C hemie
GmbH mit Sitz in Karlsruhe, Reg. Gericht Mann heim HRB 100428.

SDB SDB-Versionen: 10.2021

Geschäft sführer: A ndré Houdelet

6. Karbol-Fuchsin-Lösung (1:10 mit Aqua dest.

30-60 sec

7. Farblösung abgießen und mit Aqua dest. spülen.

8. Überschüssiges Wasser entfernen, lufttrocknen.

9. Aufsteigende Alkoholreihe (70-96-100 %)
Zwischenschritt mit ROTI®Histol bzw. Xylol
Eindecken mit ROTI®Histokitt oder ROTI®Histokitt II

Hinweis:
Für die Gegenfärbung der Gram-negativen Strukturen
kann man an Stelle von Karbol-Fuchsin-Lösung auch
Safraninlösung verwenden. Safraninlösung wird
unverdünnt angewandt.

Gram Färbekit HP02.1

Instructions for use

Gram Staining Kit

HP02

Differentiation of Gram positive and Gram negative bacteria

Gram staining is the most important technique for differentiation and identification of bacteria.
The probe is stained with gentianaviolet and fixed with Lugol solution as a mordant. During the decolourising step
Gram positive species remain stained, because its thick multilayer cellular walls retain the violet-iodine complex. In
contrast, due to its thinner cellular walls, Gram negative species are decolourised easily and subsequently can be
counterstained by carbolic fuchsine solution. The differentiation into Gram positive and Gram negative bacteria is
important e.g. for choosing appropriate antibiotic treatment of infections.

Kit contains

 Carbol gentianaviolet solution (CN00.1)

lg Warning H226-H319 500 ml

 Iodine-potassium iodide solution acc. to Lugol (N052.3) n Warning H373 500 ml
 Gram’s decolourising solution (CN02.1)

lg Danger H225-H319-H336 EUH066 500 ml

 Carbolic fuchsine solution (A130.2)

hn Danger H314-H341 500 ml

The staining solutions should be filtrated before use! Solutions may be bought separately.

Additional chemicals required

 ROTI®Histol (Art.-No. 6640) or xylene p.a. (Art.-No. 4436)
 ROTI®Histokitt (Art.-No. 6638), compatible with ROTI®Histol

or ROTI®Histokitt II (Art.-No. T160), compatible with xylene

 Safranin solution (Art.-No. CN01) - optional

Instructions Use air-dried, heat-fixed smears in a thin layer

1. Add a few drops of carbol gentianaviolet solution

and let incubate. 2-3 min

2. Decant the staining solution and rinse 2-3 times with
Lugol solution – do not use water.

3. Let the smear incubate in Lugol solution.
3 min

4. Let a few drops of Gram’s decolourising solution
trickle down the slide, until no more colour runs off.
max. 20-30 sec

Do not prolong differentiation time! Otherwise
Gram-positive species can be decolourised too!

5. Rinse carefully with distilled water to remove the

decolourising solution completely.

Results: Gram positive bacteria: violet, Gram negative bacteria: red

Note: The colour intensity depends on the pre-treatment and the composition of the samples to be stained.

It may initially be necessary to adapt the method to the respective conditions.

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André H oudelet. Sales tax i dentification n umber: DE 14 3621073.

SDB SDB-Versionen: 10.2021

6. Add a few drops of carbolic fuchsine solution
(diluted with distilled water at a ratio of 1:10) and
let incubate. 30-60 sec

7. Decant the staining solution and rinse with distilled

water.

8. Shake off the excess water and dry at the air.

9. Dehydrate by ascend. alcohol series (70-96-100 %)
Clear with ROTI®Histol or xylene
Mount with ROTI®Histokitt or ROTI®Histokitt ll

Note:

Instead of carbolic fuchsine solution it is possible to use
safranine solution for counterstaining Gram negative
bacteria. Safranin solution is used undiluted.

Gram Staining Kit HP02.1