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CLOSTRIDIEN-DIFFERENTIAL-BOUILLON
Zur Anreicherung und Zählung von Clostridien aus Lebensmitteln und anderen Proben
CL78
Zusammensetzung in g/l (angenähert):
Trypton ....................................................................... 10,0
Rindfleischextrakt ...................................................... 10,0
Hefeextrakt .................................................................. 1,5
Lösliche Stärke ............................................................ 1,0
Glucose ........................................................................ 1,0
L-Cystin ........................................................................ 0,5
Natriumacetat .............................................................. 5,0
Natriumsulfit ................................................................ 0,4
Ammoniumeisen(III)-Citrat .......................................... 0,7
pH-Wert ........................................................... 7,1 ± 0,2
HERSTELLUNG
30,1 g des Mediums werden in einem Liter destillierten Wasser suspendiert. Man mische gut und erhitze unter
häufigem Rühren/Schütteln bis das Medium vollständig gelöst ist. Man koche das Medium eine Minute. Man
gieße es in geeignete Behälter und sterilisiere für 15 Minuten bei 121 °C. Gekühlt lagern für bis zu 2 Wochen.
EINSATZGEBIET
Clostridien-Differenzial-Bouillon stellt eine Modifikation des Clostridien-Anreicherungsmediums dar (Best.-Nr.
AE66.1), das durch Addition von Reagenzien zur Schwarzfärbung des Mediums verbessert wurde. Clostridien
reduzieren Sulfit zu Sulfid, das mit dem Ammoniumeisen(III)-Citrate Eisensulfid bildet und hierdurch das
Medium schwärzt (siehe: Gibbs, 1973, J. Appl. Bact. 36:23-3).
Da das Medium für Clostridien nicht selektiv ist, können auch andere anaerobe Bakterien wie Lactobacillen und
Streptokokken wachsen. Da weiterhin auch andere Bakterienarten Sulfide produzieren können, können durch
Pasteurisierung für 15 Minuten bei 75 °C vegetative Begleitkeime aus der Kultur entfernt werden. Allerdings
können auch Clostridien hierdurch verloren werden, so dass dieser Prozess nur als Vergleichsansatz zu
empfehlen ist. Das Wachstum der meisten nicht-sporenbildenden Mikroorganismen kann durch Zugabe von
70 IU/ ml Polymyxin zum Medium verhindert werden (Best.-Nr. 0235) (Gibbs und Freame, 1965,
J. Appl. Bact. 28:95-111).
Die Kultur wird bei 30 ºC anaerob inkubiert und nach 4-7 Tagen begutachtet. Da die Sporenkeimung bei
Clostridien einige Zeit benötigen kann, sollten die Kulturen für bis zu 4 Wochen beobachten werden,
um falsch-negative Ergebnisse sicher auszuschließen.
MIKROBIOLOGISCHE TESTS
Die folgenden Ergebnisse wurden erzielt nach Inkubation von Referenzstämmen im angegebenen Medium bei
einer Temperatur von 30 °C für 4-7 Tage.
Mikroorganismen
Wachstum
Schwarzfärbung des Mediums
Escherichia coli ATCC 25922
Gut
-
Clostridium perfringens ATCC 10543
Gut
+
Clostridium perfringens ATCC13124
Gut
+
Clostridium sporogenes ATCC 19404
Gut
+
CLOSTRIDIEN-DIFFERENTIAL-BOUILLON 500 g CL78.1
Produkt-Datenblatt
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DIFFERENTIAL REINFORCED CLOSTRIDIAL MEDIUM
For enrichment and enumeration of clostridiae derived from food and other samples
CL78
Approximate formula in g/l:
Tryptone ..................................................................... 10.0
Beef extract ................................................................ 10.0
Yeast extract ................................................................ 1.5
Soluble Starch ............................................................. 1.0
Glucose ........................................................................ 1.0
L-Cystine ...................................................................... 0.5
Sodium acetate ............................................................ 5.0
Sodium sulfite .............................................................. 0.4
Ammonium iron(III)-citrate ........................................... 0.7
Final pH ......................................................... 7.1 ± 0.2
PREPARATION
Suspend 30.1 g of the medium in one liter of distilled or deionized water. Mix well and heat with frequent agitation
until the medium is completely dissolved. Boil for one minute and dispense into appropriate containers and
sterilize in the autoclave at 121ºC for 15 minutes. Store cooled for up to 2 weeks.
USES
Differential Reinforced Clostridial Medium is a modification of the Reinforced Clostridial Medium (Art. No. AE66.1)
which has been improved by addition of reagents for blackening of the medium. Clostridia are known to reduce
sulfite to sulfide, which (with ammonium iron(III)-citrate) forms iron sulfide and, therefore, causes blackening of the
culture medium.
(See: Gibbs, 1973, J. Appl. Bact. 36:23-3)
This medium is not selective for Clostridiae, hence other anaerobe bacteria like Lactobacilli and Streptococci may
grow. Since furthermore also other bacteria are able to also produce sulfide, removal of vegetative germs from
the culture may be appropriate, e.g. by pasteurization for 15 mins. at 75 °C. However, this process may also
result in the loss of Clostridiae and can only be recommended for comparative studies. In order to inhibit the
growth of most non-spore-forming microorganisms, add 70 IU/ ml polymyxin to the broth (Art. No. 0235)
(Gibbs and Freame, 1965, J. Appl. Bact. 28:95-111).
Incubate at 30 ºC and observe after 4-7 days. In order to exclude false-negative results, we recommend to follow
up cultures for up to 4 weeks, since occasionally some time is required for spore germination of Clostridiae.
MICROBIOLOGICAL TEST
The following results were obtained in the performance of the given medium from type cultures after incubation
at a temperature of 30 °C and observed after 4-7 days.
Microorganisms
Growth
Black medium colour
Escherichia coli ATCC 25922
Good
-
Clostridium perfringens ATCC 10543
Good
+
Clostridium perfringens ATCC13124
Good
+
Clostridium sporogenes ATCC 19404
Good
+
DIFFERENTIAL REINFORCED CLOSTRIDIAL MEDIUM 500 g CL78.1
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Product Data Sheet
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