Roth 8852, 8853, 8855, 8858, 8860 User guide

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LB-Agars mit Antibiotika

Agars zur selektiven Kultivierung von rekombinanten Escherichia coli in der
Molekularbiologie. Fertigmischung.

8852, 8853, 8855, 8858, 8860

Zusammensetzung in g/l (angenähert):

Best.­Nr.

Nährmedium

Tryp-

ton*

Hefe-

extrakt

NaCl

Antibiotikum

Agar-

Agar

pH Wert

8852

LB-Agar (Lennox) / Amp100

10 g/l

5 g/l

5 g/l

Ampicillin 100 mg/l

15 g/l

7,0±0,2

8853

LB-Agar (Lennox) / Kana50

10 g/l

5 g/l

5 g/l

Kanamycin 50 mg/l

15 g/l

7,0±0,2

8855

LB- Agar (Luria/Miller) / Amp100

10 g/l

5 g/l

10 g/l

Ampicillin 100 mg/l

15 g/l

7,0±0,2

8858

LB- Agar (Luria/Miller) / Amp50

10 g/l

5 g/l

10 g/l

Ampicillin 50 mg/l

15 g/l

7,0±0,2

8860

LB-Agar (Luria/Miller) / Kana50

10 g/l

5 g/l

10 g/l

Kanamycin 50 mg/l

15 g/l

7,0±0,2

* Aus pankreatischem Verdau von Casein.

HERSTELLUNG

35 g (Lennox) bzw. 40 g (Luria/Miller) des Agarmediums werden in einem Liter destillierten Wassers
suspendiert. Gut mischen und unter häufigem Rühren/Schütteln erhitzen. Eine Minute kochen bis das
Pulver vollständig gelöst ist.

LB-Agar mit Ampicillin: Nicht überhitzen! Nicht autoklavieren!
LB-Agar mit Kanamycin oder Chloramphenicol: Nicht überhitzen! Nicht autoklavieren!

Im Wasserbad auf 45-50 °C abkühlen lassen. Gut mischen und in sterile Petrischalen gießen.
Die fertigen Platten sollten mit dem Deckel nach unten bei 8-15 °C aufbewahrt werden und können für etwa
2 Wochen verwendet werden, solange die Sterilität garantiert ist. Die Farbe des Agars ist bernsteinfarben,
leicht schillernd.

EINSATZGEBIET

Die Verwendung von LB-Agar mit Antibiotika wird empfohlen für die selektive Vermehrung von rekombinanten
E. coli, die Plasmide mit Resistenzen gegen Ampicillin, Kanamycin oder Chloramphenicol als Selektionsmarker
tragen. Die transformierten E. coli werden direkt auf den zubereiteten Selektivagar aufgetragen. Die weitere
Zugabe von Antibiotika während der Herstellung der Agarplatten ist nicht notwendig. IPTG und X--Gal können
zur Induktion der Proteinexpression zugegeben werden (Blau/Weiß-Selektion).
LB-Agars nach der von Lennox entwickelten Modifizierung (geringerer Salzgehalt) werden für die Vermehrung
von E. coli Stämmen empfohlen, die weniger salzreiches Medium bevorzugen.

LB (Lysogeny Broth) Medien bilden eine Gruppe von reichhaltigen Nährlösungen zur Anzucht und Kultivierung
von E. coli Bakterien. Das erste LB-Medium wurde ursprünglich von Guiseppe Bertani im Jahr 1951 entwickelt,
um das Wachstum von Shigella und die Plaquebildung von P1, P2 und P3 Phagen1 zu optimieren. Seitdem
werden die Medien äußerst häufig zur Vermehrung von E. coli im Allgemeinen und von rekombinanten E. coli
im Besonderen verwendet, sowie zur Plasmidpropagation und die Proteinexpression in vitro. In davon abgelei­teten Formulierungen wurde z.B. das Natriumchlorid reduziert

2,3

, unter anderem um optimale Bedingungen für
salzsensitive Bakterienstämme zu schaffen.
Trypton stellt Stickstoff, Vitamine, Mineralien und essentielle Aminosäuren für das Bakterienwachstum bereit.
Hefeextrakt ist eine reichhaltige Quelle für Vitamine, vor allem der B-Gruppe. Natriumchlorid liefert wichtige
Elektrolyte. In LB-Agar ist hochreiner Agar-Agar als Geliermittel zugegeben.

Produkt-Datenblatt

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MIKROBIOLOGISCHE TESTS

Die folgenden Ergebnisse wurden erzielt nach Inkubation von Referenzstämmen im angegebenen
Medium / Agar bei einer Temperatur von 35 ±2 °C für 18-24 Stunden.

Generelle QC-Assays

Mikroorganismen

Wachstum

Escherichia coli ATCC 25922

Inhibiert

Escherichia coli ATCC 8739

inhibiert

Spezifische QC-Assays

Best.­Nr.

Agarmedium

Mikroorganismen

Wachs-

tum

8852

LB-Agar (Lennox) / Amp100

Escherichia coli DH5 alpha + pUC19

Gut

8853

LB-Agar (Lennox) / Kana50

Escherichia coli DH5 alpha + pHSG 298

Gut

8855

LB- Agar (Luria/Miller) / Amp100

Escherichia coli DH5 alpha + pUC19

Gut

8858

LB- Agar (Luria/Miller) / Amp50

Escherichia coli DH5 alpha + pUC19

Gut

8860

LB-Agar (Luria/Miller) / Kana50

Escherichia coli DH5 alpha + pHSG 298

Gut

Nach:

1.) Bertani, G. Studies on lysogenesis. I. The mode of phage liberation by lysogenic Escherichia coli.
J. Bacteriol. 62:293-300 (1951)

2.) Lennox, E. S. Transduction of linked genetic characters of the host by bacteriophage P1.
Virology 1:190-206 (1955)

3.) Luria, S. E.; Adams, J. N.; Ting, R. C. Transduction of lactose-utilizing ability among strain of E. coli
and S. dysenteriae and the properties of the transducing phage particles. Virology 12:348-390 (1960)

4.) Miller, J. H. Experiments in molecular genetics. Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor,
N.Y. (1972)

5.) Atlas, R.M., Parks L.C. Handbook of Microbiological Media. CRC Press, Inc. London (1993)

6.) Sambrook and Russell. Molecular cloning: a laboratory manual, 3rd ed. Cold Spring Harbor Laboratory
Press, Cold Spring Harbor, N.Y. (2001)

LB-Agar (Lennox) / 500 g 8852.1
Amp100 1 kg 8852.2

2,5 kg 8852.3

LB-Agar (Luria/Miller) / 500 g 8855.1
Amp100 1 kg 8855.2

2,5 kg 8855.3

LB-Agar (Luria/Miller) / 500 g 8860.1
Kana50 1 kg 8860.2

LB-Agar (Lennox) / 500 g 8853.1
Kana50 1 kg 8853.2

LB-Agar (Luria/Miller) / 500 g 8858.1
Amp50 1 kg 8858.2

2,5 kg 8858.3

Carl Roth GmbH + Co. KG

Schoemperlenstraße 3-5 • 76185 Karlsruhe • Postfach 100121 • 76231 Karlsruhe
Telefon: [phone] • Fax: [phone] • [e-mail] • www.carlroth.de

Die Firma ist eine Kommanditgesellschaft mit Sitz in Karlsruhe, Reg. Gericht Mannheim HRA 100055. Persönlich haftende Gesells chafterin ist die Roth Chemie GmbH
mit Sitz in Karlsruhe, Reg. Gericht Mannheim HRB 100428. Geschäftsführer: André Houdelet jh 09/2022

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LB Agars with Antibiotics

Agars for selective growth of recombinant Escherichia coli in genetic engineering.
Premixed agar formulation including antibiotics.

8852, 8853, 8855, 8858, 8860

Approximate formulation in g/l:

Art.
No.

Nutrient Medium

Tryp­tone*

Yeast

extract

NaCl

Antibiotic

Agar-

Agar

pH value

8852

LB-Agar (Lennox) / Amp100

10 g/l

5 g/l

5 g/l

Ampicillin 100 mg/l

15 g/l

7,0±0,2

8853

LB-Agar (Lennox) / Kana50

10 g/l

5 g/l

5 g/l

Kanamycin 50 mg/l

15 g/l

7,0±0,2

8855

LB- Agar (Luria/Miller) / Amp100

10 g/l

5 g/l

10 g/l

Ampicillin 100 mg/l

15 g/l

7,0±0,2

8858

LB- Agar (Luria/Miller) / Amp50

10 g/l

5 g/l

10 g/l

Ampicillin 50 mg/l

15 g/l

7,0±0,2

8860

LB-Agar (Luria/Miller) / Kana50

10 g/l

5 g/l

10 g/l

Kanamycin 50 mg/l

15 g/l

7,0±0,2

* Pancreatically digested peptone from casein.

PREPARATION

Suspend 35 g (Lennox) or 40 g (Luria/Miller), respectively, in one litre of distilled or deionized water.
Mix well and heat with frequent agitation. Boil for one minute until fully dissolved.

LB agars with ampicillin: Do not overheat. Do not autoclave.
LB agars with kanamycin or chloroamphenicol: Do not overheat. Do not autoclave.

Cool to 45-50 °C in a water bath. Mix well and dispense into sterile petri dishes.
The hardened dishes should be stored bottom up at 8-15 °C and may be used for approx. 2 weeks,
as long as sterility is guaranteed. The colour of the agar is amber, slightly opalescent.

USES

Use of LB Agars with antibiotics is recommended for the selective propagation of E. coli recombinant with
plasmids that carry a selection marker in terms of resistance against ampicillin, kanamycin or chloroam­phenicol. The transformed E. coli are plated directly onto the prepared selective agar. Further addition of
antibiotics during preparation of the agar dish is not necessary. IPTG and X--Gal may be added for induction
of protein expression (blue/white selection).
LB agars according to the Lennox modification (less salt) are recommended for growth of E. coli strains that
require less salt concentration.

LB (Lysogeny Broth) media is a group of nutritionally rich growth solutions for the propagation and mainten­ance of E. coli bacteria. Originally, the first LB medium has been developed by Guiseppe Bertani in 1951 in
order to optimise growth of Shigella and plaque formation of P1, P2 and P3 phages1. Since then, the media
were, and still are, widely used for growth of E. coli in general and recombinant E. coli in particular, as well as
for propagation of plasmids and expression proteins in vitro. During the following years, some modifications
were implemented including the reduction of sodium chloride

2,3

, amongst other things in order to provide
optimised conditions for salt sensitive bacterial strains.
Tryptone provides nitrogen, vitamins, minerals and amino acids essential for growth. Yeast extract is a rich
source of vitamins, particularly the B-group. Sodium chloride supplies essential electrolytes for transport and
osmotic balance. In LB agars, high-pure agar-agar is added as solidifying agent.

Product Data Sheet

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MICROBIOLOGICAL TEST

The following results were obtained in the performance of the given medium from type cultures after
incubation at a temperature of 35±2 °C and observed after 18-24 hours.

General QC assays

Microorganisms

Growth

Escherichia coli ATCC 25922

Inhibited

Escherichia coli ATCC 8739

Inhibited

Specific QC assays

Art.
No.

Agar medium

Microorganisms

Growth

8852

LB-Agar (Lennox) / Amp100

Escherichia coli DH5 alpha + pUC19

Good

8853

LB-Agar (Lennox) / Kana50

Escherichia coli DH5 alpha + pHSG 298

Good

8855

LB- Agar (Luria/Miller) / Amp100

Escherichia coli DH5 alpha + pUC19

Good

8858

LB- Agar (Luria/Miller) / Amp50

Escherichia coli DH5 alpha + pUC19

Good

8860

LB-Agar (Luria/Miller) / Kana50

Escherichia coli DH5 alpha + pHSG 298

Good

Acc. to:

1.) Bertani, G. Studies on lysogenesis. I. The mode of phage liberation by lysogenic Escherichia coli.
J. Bacteriol. 62:293-300 (1951)

2.) Lennox, E. S. Transduction of linked genetic characters of the host by bacteriophage P1.
Virology 1:190-206 (1955)

3.) Luria, S. E.; Adams, J. N.; Ting, R. C. Transduction of lactose-utilizing ability among strain of E. coli
and S. dysenteriae and the properties of the transducing phage particles. Virology 12:348-390 (1960)

4.) Miller, J. H. Experiments in molecular genetics. Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor,
N.Y. (1972)

5.) Atlas, R.M., Parks L.C. Handbook of Microbiological Media. CRC Press, Inc. London (1993)

6.) Sambrook and Russell. Molecular cloning: a laboratory manual, 3rd ed. Cold Spring Harbor Laboratory
Press, Cold Spring Harbor, N.Y. (2001)

LB Agar (Lennox) / 500 g 8852.1
Amp100 1 kg 8852.2

2.5 kg 8852.3

LB Agar (Luria/Miller) / 500 g 8855.1
Amp100 1 kg 8855.2

2.5 kg 8855.3

LB Agar (Luria/Miller) / 500 g 8860.1
Kana50 1 kg 8860.2

LB Agar (Lennox) / 500 g 8853.1
Kana50 1 kg 8853.2

LB Agar (Luria/Miller) / 500 g 8858.1
Amp50 1 kg 8858.2

2.5 kg 8858.3

Carl Roth GmbH + Co. KG

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The company is a limited partnership with headquarters in Karlsruhe, reg. court Mannheim HRA 100055. Roth Chemie GmbH, with headquarters in Karlsruhe,
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