GE ÄKTApurifier User Guide
ÄKTApurifier
UNICORN 5.0
はじめてお使いの方へ
版
71-1944-37
ÄKTApurifier
シリーズをお使いの方へ
本マニュアル「
ブを追加した組み合わせで記載しています。
ÄKTApurifier 100
異なります。また
＜機種名とコンポーネントの組合せ＞
ÄKTApurifier
はポンプ、オンラインフィルター、UVモニターが「はじめてお使いの方へ」に記載されている内容と
ÄKTApurifier 10
はじめてお使いの方へ」は
は構成が異なることがあります。
ÄKTApurifier 10
ÄKTApurifier UPC 10、ÄKTApurifier UPC 100、ÄKTApurifier 100 plus
にオプションの
pH/C-900
、スイッチバル
P-903 P-901
UV-900
UV-900
UPC-900
※
＜各機種の構成＞
（標準）、
（標準）、
（標準）
pH/C-900
pH/C-900
ÄKTApurifier 10 plus
ニングキット（カラム選択バルブ）とサンプルアプリケーションキット（サンプルポンプ
が標準で装着されています。なお、本マニュアルではサンプルアプリケーションキットの説明は割愛します。
（標準）
（オプション）
ÄKTApurifier 10 plus ÄKTApurifier 100 plus
ÄKTApurifier 10 ÄKTApurifier 100
ÄKTApurifier UPC 10 ÄKTApurifier UPC 100
はカラムスクリーニングキット（カラム選択バルブ）が、
ÄKTApurifier 100 plus
P-960
はカラムスクリー
とサンプルバルブ）
、
ÄKTApurifier 10 ÄKTApurifier 100 ÄKTApurifier UPC 10 ÄKTApurifier UPC 100
ポンプ
流速範囲
耐圧
オンライン
フィルター
スイッチバルブ
モニター
UV
波長
光路長（内容積）
電気伝導度モニター
モニター
pH
P-903 P-901 P-903 P-901
0.001〜10 ml/min 0.01〜100 ml/min 0.001〜10 ml/min 0.01〜100 ml/min
25 MPa 10 MPa 25 MPa 10 MPa
チタン製
焼結フィルター
UV-900 UPC-900
190〜700 nm
10 mm（8 µl
pH/C-900
、任意3波長まで
）
（オプション
*1、ÄKTApurifier 10 plus、ÄKTApurifier 100 plus
*2、pH
電極はオプション
ポリプロピレン製
フィルター
SV-903
2 mm（2 µl
1
*
は標準品として構成
（オプション
）
）
チタン製
焼結フィルター
1
*
）
280 nm、254 nm（1
5 mm（6 µl
UPC-900（UV
）
モニターと同一ユニット）
ポリプロピレン製
フィルター
波長フィルター切換）
2 mm（2 µl
）
*
2
＜「はじめてお使いの方へ」に記載されていないコンポーネントについて＞
◆
◆
◆オンラインフィルター（ポリプロピレン製）
バックプレッシャーが高くなった場合は、新しいフィルター（
◆カラムスクリーニングキット（カラム選択バルブ
バイパスラインを確保する場合や、複数のカラムを並列に接続する場合に使用
インジェクションバルブ（
ポンプ
P-901
ポンプ、流速
2
UPC-900
：オンラインで
UV
光路長
＜オプション＞フィルターを交換すると、
コンダクティビティー：オンラインで電気伝導度のモニタリング
：オンラインでpHのモニタリング（オプション）
pH
0.01〜100 ml/min
モニター
280 nm
2 mm（2 µl
フィルターを
または
）または
、耐圧
10 MPa
254 nmの1
5 mm（6 µl
214 nm
、ランプをZnランプに交換すると、
波長によるモニタリング
）
313、365、405、463、546 nm
18-1027-11、10
およびV3）
V2
）とUVフローセルの中間に接続
V1
のモニタリングが可能
214 nm
枚入り）と交換
のモニタリングが可能
カラムの接続時には、必ず
・センターポート（
：インジェクションバルブから
V2
V3：UV
・ポジション
・ポジション
i/o
フローセルへ
：バイパス（初期ポジション）
1
：任意のカラム
2〜8
V2とV3
）
で同じポート番号を使用
＜操作手順の違い＞
◆ポンプウォッシュのコマンド
オプションバルブの有無および組み合わせにより、表示されるコマンドが異なります。
オプション無し スイッチバルブのみ追加バッファーバルブの
み追加
Pump Wash Basic
Pump Wash Purifier
Pump Wash Explorer
○：使用します。
△：表示されますが使用しません。
−：表示されません。
◆カラムポジションの選択のコマンド
カラムの接続、溶液交換など、カラムへ送液する場合に使用します。カラムへ送液する際は必ず耐圧設定を行ってか
ら送液を開始します。
Manual ↓ Flowpath → ColumnPosition →
＜メソッド作成＞
◆
Main Selection
○△△△
−○−△
−−○○
任意のポジション →
Execute
スイッチバルブ・バ
ッファーバルブ追加
・カラムスクリーニングキットが追加された場合のみ、カラムポジションの選択ができます。実際に接続するポジション
を選択します。
・スイッチバルブが追加された場合のみ、バッファープレップが選択できます。
◆
Wavelength and Buffer inlets
・UVモニターにより波長設定の表示が異なります。
UV-900
UPC-900
・バッファーインレットのオプションバルブ（スイッチバルブ、バッファーバルブ）の追加状況により表示が異なります。
オプション無し バッファーインレットの選択画面はありません。
オプションあり バッファーインレットの選択画面が追加されます。
本表示は溶出時に
ウィザードで設定した項目は、バリアブルでも変更可能です（項目によっては
※
させます）。
第3波長まで入力可能です。
表示されません。
Segmented gradient advanced
を選択した場合にも該当します。
Show details
にチェックを入れて表示
UNICORN Ver.5.0
からコマンドの機能が変更されています。
UNICORN Ver.5.0
正常に動作しない恐れがあります。
PumpWash Purifier
PumpWash
イタスをとります。
動的に終了するまでお待ちください。
Frac-950
①を入力しない場合、液流が
でマニュアルフラクション回収をする際のコマンド入力について
必ず以下の2点を入力してください。
①
Manual↓Flowpath → OutletValve; F2→
②
Manual↓Frac↓Man_Fractionation
以前のバージョンで作成したメソッドは、決して使用しないでください。
実行中には決して
中は自動プログラムであり、実行中はマニュアル操作を受け付けないよう
Continue
ボタンにより強制中止すると、誤動作することがありますので、自
Frac-950
をお使いの方へ
Frac-950
Continue
ボタンを押さないようにお願いします！
Execute
→（パラメータ入力）→
方向へ切り替わりませんのでご注意ください！
Execute
Pause
ステ
Wizard
Start at；First Tube
その後、
Fraction Volume；0
と入力した場合、
→
でのメソッド作成時、
とし、
Segment1のFraction Volume
（回収しない）
First Tube
次のSegment
ば、前回のランで最後に滴下した試験管の次の試験管へ進んでしまいます。
では、
Elution Fractionation
を入力する際、
から回収開始する指定が無視されますのでご注意ください。
Segment1
の続きから回収されます。
画面で
First Tube
指定が無視されていれ
低温室、クロマトチャンバー内で装置をお使いの方へ
毎回お使いになる直前に、一度システムメインスイッチを入れなおしてください。
低温環境下にてシステムを使用する場合にはシステム電源は常時入れていただくようお願いし
ていますが、使用直前に一度、
メインスイッチ
UV、Cond/pH
なお、この操作はコンピュータの電源が落ちている状態で行ってください。
OFF→（10
の各ユニットは自動的に動作テストをし、エラーがあれば表示されます。
秒ほどしてから）ONの作業をお願いします。この作業によりポンプ、
Frac-900
Wizard
Segmented Gradient Advanced
その他の溶出方法では、フラクションが指定どおりに動作しないことがあります。
＊
でのメソッド作成時、
Segmented Gradient Advanced
をお使いの方へ
Elution TechniqueでGradient
＊
をお選びください！
は、溶出方法の設計法の中でも最もフレキシビリティーのある使いやすい方法です。
を作る際には必ず
Contents
● ●
●
はじめに
1.
起動
2.
システムの準備
3.
.......................................................................................................4
1.1 ÄKTApurifier
1.2 ÄKTApurifier
...............................................................................................................9
2.1 UNICORN
2.2 UNICORN
3.1
3.2
3.3
3.4
3.5
3.6
本体の構成
での準備から後片づけまでの流れ
の起動
の操作モード
............................................................................................4
...............................................8
...........................................................................................................9
.......................................................................................... 11
..........................................................................................13
廃液チューブの確認
リンス液のチェック
ポンプのパージ（エア抜き）
圧力安定性のチェック
ポンプ洗浄（
システム洗浄
................................................................................................. 13
................................................................................................. 13
................................................................................. 14
............................................................................................ 15
PumpWash） ....................................................................................15
...............................................................................................................16
カラムの接続
4.
インジェクションバルブの準備
5.
フラクションコレクターの準備
6.
メソッド作成
7.
..............................................................................................17
4.1
4.2
4.3
4.4
5.1
5.2
6.1 Frac-950 .......................................................................................................................22
6.2 Frac-900 .......................................................................................................................26
接続コネクター変換
カラムの接続と耐圧設定
カラムの水置換
バッファーでの溶液交換
シリンジを用いたマニュアルサンプル充填
マニュアル操作でのスーパーループへのサンプル充填
..............................................................................................30
7.1
7.2
7.3
7.4
7.5
7.6
7.7
7.8 Segment 1
7.9 Segment 2
7.10 Variables
メソッド作成〜
クロマトグラフィー手法・カラム等の設定
スタート条件（モニター波長、バッファーインレット）の設定
カラム平衡化（
サンプル添加方法の設定
フラクションコレクターの設定
溶出方法（
Elution
の溶出条件の設定（グラジエント溶出）
の溶出条件の設定（ステップワイズ溶出）
画面での入力確認項目
................................................................................................. 17
........................................................................................18
.......................................................................................................... 18
........................................................................................19
................................................................20
................................................... 20
............................ 21
................................................................22
画面の表示
Wizard
Equilibration
........................................................................................33
）の設定
.................................................................... 30
................................................... 31
..........32
）の設定
.................................................................................. 36
............................................................. 32
.......................................................................... 33
................................... 37
.............................. 39
.........................................................................40
7.11 Run Setup
7.12
7.13
メソッドの実行
8.
8.1
8.2
8.3
8.4
8.5
8.6
8.7
8.8
データ処理（プリントアウト）
9.
9.1
9.2
9.3
メソッドの保存
作成したメソッドの確認、表示
..........................................................................................43
サンプル準備
サンプルループへのマニュアルサンプル充填
フラクションコレクターの確認
メソッド実行
強制終了
実行中の画面表示
ウィンドウ表示
メソッド実行中のマニュアル操作
データの呼び出し
画面表示
クロマトグラムのプリントアウト
の他のページ（タブ）での確認項目
...............................................................................................................43
...............................................................................................................44
........................................................................................................................ 45
........................................................................................................................ 53
........................................... 41
.......................................................................................................... 42
.......................................................................... 42
.............................................. 43
.......................................................................... 44
......................................................................................................45
.......................................................................................................... 46
..................................................................... 51
..................................................................52
......................................................................................................52
..................................................................... 56
システム終了
10.
10.1
10.2
10.3
10.4
メンテナンス
11.
11.1
11.2
11.3
11.4
11.5
11.6
ファイル管理（データのバックアップ）
12.
12.1
12.2
12.3 UNICORN
12.4
12.5
12.6
............................................................................................57
ポンプ洗浄
システムおよびカラムの洗浄
フラクションラインの洗浄
システムの終了
................................................................................................................... 57
.......................................................................................................... 59
............................................................................................60
システムの保存
リンス液の交換
オンラインフィルター
インレットフィルター
フラクションコレクター
インジェクションフィルポート
フロッピーディスクのフォーマット
データのバックアップ（
バックアップしたデータをハードディスクにコピー
（
Copy from External ）............................................................................................65
ファイルの削除
ファイル名の変更（
.......................................................................................................... 60
.......................................................................................................... 60
............................................................................................ 61
............................................................................................ 61
のデータをCDにコピーする方法
.......................................................................................................... 66
Rename） ............................................................................. 66
...............................................................................57
................................................................................... 57
........................................................................................61
.......................................................................... 61
................................................62
.................................................................62
Copy to External） .................................................. 63
.................................................... 63
1
INV-908
PV-
908
M-925
1
2
7
3
6
4
5
B2 B1
Pump B Pump A
Mixer
Column
Sample loop
Fraction
Collector
Outlet Valve (V4)
Injection
Valve (V1)
UV
COND
Flow restrictor
A2
NC NO NC NO
B3
G1 G2
W1
W2
G5 (Bypass)
G9 (H9)
G8
(H8)
G6
(H6)
W3
G3
G4
On-line
filter
A3
A1
1
2
8
3
6
4
5
7
F3
pH Flow cell
New capillary of
180 mm
New capillary of
130 mm
はじめに
このマニュアルは、はじめて
ÄKTApurifier
用方法は、機器付属の英文マニュアル、
1.1 ÄKTApurifier
Box-900
モニター
pH/C-900
モニター
UV-900
ポンプ
P-903
本体の構成
カラムホルダー
をお使いになる方への取扱い説明のために書かれたものです。より詳しい使
On-line Help
をご参照ください。
カラム
インジェクションバルブ
INV-907
アウトレットバルブ
PV-908
オンラインフィルター
フラクションコレクターへ
フローリストリクター
ミキサーチャンバー
ミキサー
M-925
廃液ビンへ
(W1, W2 and W3)
um
4
ポンプ
A
ÄKTApurifier
ポンプ
オンライン
フィルター
ミキサー
B
インジェクション
バルブ
サンプルループ
スイッチバルブ
SV-903
（バイパス）
G5
スイッチバルブ
A
SV-903
長さ
新しいキャピラリー
の
180 mm
カラム
フローセル
pH
コンダクティビティーセル
（フタの下）
セル
B
UV
長さ
新しいキャピラリー
フローリストロクター
130 mm
の
フラクション
コレクター
アウトレット
バルブ
P-903
11
ポンプ
ポンプ、流速
2
UV-900
波長レンジ
光路長
ローセルはオプションになります。
モニター
10mm（8µl
pH/C-900
、コンダクティビティ（電気伝導度）のオンラインモニタリング
pH
0.001〜10ml/min
190-700nm可変UV-Vis
）のフローセルが装備されています。
モニター
、耐圧
25MPa
モニター。任意の3波長同時測定可能。
2mm（2µl
）のフ
5
フラクションコレクター（詳細は6章参照）
Frac-900
エスカルゴ型フラクションコレクター。95本（10〜
ション）の
種類のラックを使用可能。
3
18 mm
Frac-950
型フラクションコレクター。下記の4種類のラックを使用可能。
XY
ラック
ラック
ラック
ラック
（黄）
A
B
C
D
120本（18 & 30 mm
（紫）
240本（12 mm
（青）96穴マイクロプレート4枚＋
（赤）45本（
30 mm
：標準装備）
径：オプション）
径：オプション）
30 mm径 8
径）、
175本（12 mm
本（オプション）
径）または40本（
30 mm
径：オプ
Frac-900 Frac-950
インジェクションバルブ
つのポジションがある7方バルブです。ポジションを切替えることによって、チュー
3
V1
ビングを外すことなくサンプルを添加できます。
Load
初期ポジション。バッファーはポンプからカラムに流れます。サンプルループに
サンプルを充填するポジションです。
Inject
バッファーはポンプからサンプルループを通ってカラムに流れます。カラムにサ
ンプルを添加するポジションです。
Waste
ポンプから廃液ビンに流れるポジションです。
Column
Sample
syringe
1
2
3
4
7
Pump
6
5
Column
PumpWash
2
時には、自動的にこのポジションに切り替わります。
1
7
3
4
Pump
6
5
Column
3
1
2
3
4
7
Pump
6
5
um
Waste
Waste
Load
WasteWaste
Waste
Inject
6
サンプルループ、スーパーループ
インジェクションバルブV1のポート2、ポート6に接続します。
11
サンプルループは
150 ml
ン）を使用します。スーパーループは、
ます。
までの大量のサンプルを添加する場合は、スーパーループ（オプショ
10 µl、100 µl、1 ml
が標準で添付されています。
10 ml、50 ml、150 mlの3
種類があり
フローリストリクター
フローセルでの気泡発生を防止するためにバックプレッシャーをかけるパーツで、
（
0.2 MPa）とFR-904（0.4 MPa）の2
逆相クロマトグラフィーなどの高圧カラムを使用する場合には
に交換します。
FR-904
種類があります。標準では
FR-902
フローセル後の
を取り付けますが、
FR-902
FR-902
を
オンラインフィルター
バッファー中の不溶物を除去するために、ミキサーとインジェクションバルブの間に接続し
ます。
フィルターはポアサイズ
は、分解して内部の焼結フィルターを
のフィルター（
※
圧力の目安については、巻末（67ページ）のチェックシートをご参照ください。フィルターの交換法は
インフィルターの項をご参照ください。
18-1120-94、2
のチタン製焼結フィルターです。目詰まりによりバックプレッシャーが高くなった場合
2 µm
2M NaOH
個入り）と交換してください。
中で超音波洗浄してください。洗浄しても圧が下がらない場合は、新品
11.3
オンラ
外観
7
1.2 ÄKTApurifier
● 準備するもの
□ カラム&コネクター類
□
サンプル
□
脱気した超純水
□
精製で使用するバッファー（用時調製してください）
□
□
□
●システムの準備とチェックポイント
エタノール
20 %
ディスポーザブルシリンジ（サンプルの量に合わせた容量）
フラクションコレクター用の試験管
での準備から後片づけまでの流れ
500 ml
（用時調製してください）
コンピュータ、
システム内配管の水置換
カラム接続とカラムの水置換
システム内配管のバッファーへの溶液交換
フラクションコレクターの準備
メソッド作成
メソッド実行
システムの起動
ÄKTA
↓
↓
ポンプのパージ（エア抜き）、圧力安定性チェック
↓
オンラインフィルターの目詰まりチェック
↓
サンプルインジェクションバルブ周辺の配管確認
↓ カラム耐圧入力
↓ 圧力安定性チェック
↓
↓
↓
2章
章
3
章
5
章
4
4章
6章
7章
8章
（既存のメソッドを使用する場合は、このステップはとばしてください。）
システム内の水洗浄、カラムの水洗浄
システム・カラムの
データの
（
コンピュータ、
um
8
↓
20 %
↓
Evaluation
↓
システムの終了
ÄKTA
エタノール置換
、レポート作成
10章
10章
9章
）
10章
2
12
起動
2.1 UNICORN
システムでは、電源口が2口必要です。1つは
ÄKTA
タップには
やクロマトチャンバーに設置し、
なぎます。
1. CU-950
ケーブルをつなぎ直したりして、
2. ÄKTA
注意
低温室内で使用する場合、結露防止のため本体の電源は常時
OFF
コンピュータ、ディスプレイ、プリンタのスイッチをONにします。
3.
4. Windows
5. Logon
Passwordにdefault
6. ÄKTA
、ディスプレイ、プリンターをつなぎます。
PC
の電源がテーブルタップから供給されている場合には、テーブルタップのスイッチを入れ直したり、電源
本体のメインスイッチを入れます。
にし、再度ONにしてください。
デスクトップ上の
ダイアログボックスが表示されます。ここでは
本体とコンピュータが接続されると、
の起動
CU-950
CU-950
UNICORN
を入力します。
本体の電源、もう1つにはテーブルタップをつなぎ、テーブル
ÄKTA
CU-950はÄKTA
の電源を
の電源を入れ直します。
のアイコンをダブルクリックして起動します。
UNICORN Manager
本体から供給できない場合には、
ÄKTA
User nameでdefault
本体につながっています。
CU-950
にしますが、PC起動の前に一度メインスイッチを
ON
を選択し、
が表示されます。
をテーブルタップにつ
本体を低温室
ÄKTA
9
6. ÄKTA
本体とコンピュータが接続されたことを確認します。画面下方のタスクバーのうち、
クします。
ントロールボード
Run dataのInstruments
CU-950のLED
ランプは
の項目に
Power、PC
System Control
と表示されていることを確認してください。なお、この際コ
Ready
および
Systemの3
つすべてが点灯します。
をクリッ
um
10
12
2.2 UNICORN
2.2.1 UNCORN
UNICORN には4
下段のタスクバーにアイコンが表示されています。画面上段のツールバーには、このほかに
れています。
タスクバー
ツールバー
各アイコンの機能
つの操作モード（
の操作モード
ツールバーとタスクバー
UNICORN Manager、Method Editor、System Control、Evaluation
UNICORN Manager
ファイル管理
（
Copy, Rename, Delete, Move
ハードディスクに保存されたファイルのリ
スト表示
）があり、画面最
種類のアイコンが表示さ
6
など）
Method Editor
System Control
Evaluation
Instant Run
メソッドの作成、変更、編集
システムをマニュアル操作で動かす、また
はメソッドを実行
データ処理。クロマトグラムの
プリントアウト、ピーク面積計算など
手法及びカラムなどを選択し、標準メソッ
ドを実行
Logon/Logoff UNICORNのLogon/Logoff
Method Queue Method Queue
Display running
実行中の
Method Queue
の
Editor
表示
を表示
11
操作画面
2.2.2
．操作モードの切替：操作したいモードのアイコンを、ツールバーまたはタスクバーから選んでクリックします。
1
ここをクリック
コマンドは、メニューバーをクリックし、プルダウンメニューから選択します。または、ウインドウでマウスの右
2.
ボタンをクリックし、メニューからコマンドを選択します
モードのウィンドウを閉じる時は、
3.
モード間の移動は、移動したいモードのタスクバーをクリックします。
4.
マニュアル操作のコマンドは次のように表示します。
5.
メニューバーの
5-1
Manual
プルダウンメニューの
5-2
Manual
メニューから
5-3
Manual
パラメータのA2を選択
5-4
Manual
5-5 Execute
↓
↓
↓
↓
をクリックすると実行します。
Manual
Flowpath...
Pump A Inlet
Flowpath...
Flowpath...
をクリック
Flowpath
コマンドを選択
→
→
ボタンをクリックします。
Close
をクリック
Pump A Inlet
Pump A Inlet
→ A2
um
12
システムの準備
W3
F2
F3
3
13
System Control
廃液チューブの確認
3.1
白いテフロン製の廃液チューブW1（インジェクションバルブ ポート5）、
ジェクションバルブ
チューブ）の4本のチューブを廃液瓶に接続します。
PEEK
注意
素通りフラクションをフラクションコレクターでなく一括で分画する場合は、
チューブを別の容器に接続しておきます。
リンス液のチェック
3.2
ポンプピストンの裏側をリンス液（
・
システム使用前にリンス液が減っていないか、濁っていないかを確認してくださ
い。減っていたり、濁っている場合は交換してください。
画面から
ポート4）、
Manual
を選択して操作します。
（アウトレットバルブ ポート1）とF3（オレンジの
W3
エタノール）で常時洗浄しています。
20%
W2
（イン
F3
ルアー
アダプター
AB
・
リンス液はポンプが動いている時に循環します。エアが入って循環しない場合はルアーアダプターにシリンジを接
続し、リンス液を吸引します。または、逆流防止弁［矢印が刻印されたチェックバルブ（
を超音波洗浄してください。
・
ポンプに接続されているリンスチューブが液もれしてないかも確認しておきます。
18-1132-75
、下図参照）］
13
ポンプのパージ（エア抜き）
3.3
ポンプ内部にエアを咬むと、実際の送液量が設定よりも少なくなります。ゲル
ろ過では溶出時間が遅れ、イオン交換のようなグラジエント溶出ではグラジエ
ントの再現性が悪くなります。
再現性のよい実験を行うためには、ポンプのパージ操作は必須です。
注意
インレットチューブから吸い込まれた溶液はスイッチバルブを経由して左
つのポンプヘッドを通ってミキサーへと流れます。溶液1本に付き、左
右
2
つのポンプヘッドのパージ操作を行うことになります。
右
2
ミキサー
システムポンプ
ここでは、
1．4
2．A
．パージバルブを反時計回りに半回転し、シリンジで超純水をゆっくり吸引します。
3
急激に吸引すると、陰圧となり気泡が発生します。
超純水がシリンジの中に入り始めたら、そのまま
4．
A1, A2, B1, B2 の4
本のインレットチュービングを十分に脱気した超純水のボトルに入れます。
ポンプの左側のポンプヘッドのパージバルブにパージシリンジを接続します。
注意
パージバルブ
つのインレットチュービングのパージ操作例を説明します。
A1, B1
左側ポンプヘッドのパージ 右側ポンプヘッドのパージ
吸引してバルブを閉めます。
10 ml
のパージから行います。
ポンプの右側のポンプヘッドについても、2〜4の操作をします。これで、インレットチューブA1のパージが終了
5．A
しました。
．引き続き、Bポンプの2つのポンプヘッドについても、同様な操作をします。
6
．次に、インレットチュービングを
7
Manual
Manual
8．2〜4
↓
↓
の操作で
Flowpath...
Flowpath...
A2, B2
→
→
をパージします。
A2, B2
PumpAInlet
PumpAInlet
に切替えるための操作を行います。
→ A2 →
→ B2 →
Execute
Execute
（A1からA2に切り替わります）
（B1からB2に切り替わります）
パージ 〜 ポンプウォッシュ
実際の精製で使用するインレットチュービングだけで結構です。たとえば1溶液しか使わないゲルろ過であ
um
れば、
14
インレットチュービングだけパージとポンプ洗浄をしてください。
A1
圧力安定性のチェック
3.4
パージ（エアー抜き）が完全に行われたかどうかを、送液時の圧力変動で確認します。
なお、このチェックは実験で使用するインレットのみで結構です。カラムは接続せず、インジェクションバルブと
ローセルはバイパスチューブで接続してチェックを行ってください。
UV
13
フ
1．System Control
ポンプ（A1）：
2．A
ディスプレイの
ポンプ（B1）：
3．B
→
4．B
5．A
→
Manual
6．End
Execute
ディスプレイの
ポンプ（B2）：
ポンプ（A2）：
Execute
ボタンをクリックして終了します。
A1, A2, B1, B2
ポンプヘッドのパージをもう一度行ってください。
ウィンドウを開き、
Manual
Pressure
Manual
Pressure
Manual
Manual
の圧力が同じで、変動が±
↓
カーブで圧力変動をチェックします。
↓
カーブで圧力変動をチェックします。
↓
↓
↓
Run DataとCurves
Pump...
Pump...
Flowpath...
Pump...
Flowpath...
→
→
→
0.05MPa
を表示させます。
→
Flow
Gradient
→
PumpBInlet
Gradient
→
PumpAInlet
以内であることを確認してください。変動が大きい場合はその
5 ml/min
→
→
→
Execute
Target 100 %B, Length 0 min
→ B2 →
Target 0 %B
→ A2 →
→
Execute
Length 0 min
Execute
ポンプ洗浄（
3.5
インレットチューブからインジェクションバルブの間を新しい溶液に交換します。
．タスクバーの
1
．ポンプ洗浄コマンドを入力します（約5分で自動終了）。
2
Manual
注意
PumpWash
Pause
終了するまでお待ちください。
PumpWash
System Control
↓
Pump...
中は、決して
ステイタスをとります。
の流路：ポンプ→ミキサー→インジェクションバルブ（
PumpWash
をクリックします。
→
PumpWash Purifier
Continue
ボタンを押さないでください。実行中はマニュアル操作を受け付けないよう
Continue
）
→
ON, ON, ON, ON
ボタンにより強制中止すると、誤動作することがありますので、自動的に
waste
→
）→廃液チューブ
Execute
W1
15
システム洗浄
3.6
インジェクションバルブからアウトレットバルブまでの流路を洗浄します。
インジェクションバルブとUVセルの間にG5（バイパスチューブ）を接続して下さい。
1.
システム洗浄コマンドを入力します。
2.
Manual
約5分で洗浄は終了します。（UV、
3. END
システム洗浄の流路：
↓
Pump...
ボタンをクリックし終了します
UV
→
ポンプ → ミキサー → インジェクションバルブ（
フローセル → コンダクティビティーセル → pHセル → アウトレットバルブ →
廃液チューブ
→
Flow
5ml/min
Cond、Pressure
W3
→
のカーブが安定するまで流します）
Execute
）→ バイパスチューブ（G5）→
Load
um
16
カラムの接続
18-3858-01
18-1112-58
M6
オスネジ
HiPrep
カラム（旧タイプ）
18-1112-57 18-1112-55
4
接続コネクター変換
4.1
14
ÄKTAdesign
ムで使用されている
PEEK
0.5 mm
PEEK
（青）の
mm
RESOURCE
変換ユニオンなしにそのまま接続できます。
HiTrap
旧
システムのカラム接続部分のネジ規格は
規格の製品を接続する場合には、変換ユニオンが必要になります。
M6
valco（1/16
チュービングは付属の専用チュービングカッターで切断します。
（オレンジ）の
チュービングを使用します。
チュービングを使用します。
PEEK
カラム、
18-1112-55
カラム（旧型M6タイプ）、
FPLC（HR
18-1112-55
）カラムなどのM6ネジのカラム
18-3858-01
18-1112-58
18-1112-57
チュービングを、
PEEK
カラムなどの
Tricorn
HiTrap
19-2143-01
ÄKTApurifier 100、ÄKTApurifier UPC 100
ÄKTApurifier 10、ÄKTApurifier UPC 10
インチ規格ねじのカラム
1/16
18-1112-55
HiLoad（XK
カラム（旧タイプ）
）カラム（M6タイプ）、
18-1112-57 18-1112-55
インチ）です。旧タイプの
HiTrap
カラムや旧
ÄKTApurifier 10、ÄKTApurifier UPC 10
では内径
で逆相クロマトグラフィーの場合は内径
オスネジを
M6
インチオスネジをM6オスネジに変換
1/16
インチオスネジに変換
1/16
0.75 mm
カラ
FPLC
では内径
（緑）の
0.25
変換ユニオンが必要になります。
HiLoad（XK
）カラム（
カラム
28-4010-81 11-0003-39 18-1112-55
製品
Union M6 female / 1/16 male PEEK 5 18-3858-01
Union 1/16
Union 1/16
Union 1/16
Fingertight connector, 1/16
HiTrap / HiPrep 1/16
Stop plug, 1/16
Stop plug, 1/16
Union, Luer female 1/16
Union 1/16
Union M6 female / 1/16
SRTC-2, M6 female (1.5 mm i.d.) PEEK 5 19-2143-01
Tubing (0.25 mm id, blue) PEEK 2 m 18-1120-95
Tubing (0.50 mm id, orange) PEEK 2 m 18-1113-68
Tubing (0.75 mm id, green) PEEK 2 m 18-1112-53
Tubing (1.0 mm id, beige) PEEK 2 m 18-1115-83
female / M6 male PEEK 6 18-1112-57
male / M6 female PEEK 8 18-1112-58
male / Union 1/16 male PEEK 2 18-1120-93
male PEEK 5 18-1112-52
female PEEK 5 11-0004-64
female / 1/16 female PEEK 5 11-0003-39
male PEEK 10 18-1112-55
male connector for ÄKTAdesign PP 8 28-4010-81
male PEEK 2 18-1112-51
female PEEK 2 18-1123-94
）を接続する際に配管を延長が必要な場合
valco
材質
ÄKTAdesign
コンポーネント
包装
コード番号
17
カラムの接続と耐圧設定
INV-
908
PV-
908
4.2
カラムの破損を防ぐために、システムの耐圧設定をします。
入力する耐圧値はカラムによって異なります。カラムの説明書でご確認ください。なお、
ては次ページをご参照ください。
UNICORN
Manual
．ポンプから送液します。
1
Manual
．インジェクションバルブ（または接続するチューブ）から水が出てきたら、
2
への入力は、マニュアル操作画面から、
↓
Alarms&Mon...
↓
Pump...
カラムにエアーが入らない様に、ポンプより送液しながら接続します。
インジェクションバルブと
→
→
Alarm_Pressure
→
Flow
セルの間にカラムを接続します。
UV
0.5 ml/min
→
→
High Alarm
Execute
（カラムの耐圧） →
HiTrap、HiPrep
Execute
カラムについ
3．END
4.3
20%
1
2
3
ボタンをクリックして終了します。
カラムの水置換
エタノールに置換されているカラムは、使用前に必ず超純水で置換します。
．カラムの
Manual
．流速の設定
20%
で流してください。
Manual
注意
低温環境でご使用になる場合は、液の粘性が上昇するので至適流速の
．カラムのベッドボリュームの3倍以上流し、UV、
します。
Pressure limit
↓
Alarms&Mon...
エタノールがカラムに残っている間はバックプレッシャーが高くなります。水に置き変わるまで、少し低流速
↓
Pump...
の設定
→
→
Alarm_Pressure
→ カラムの至適流速の
Flow
Cond、Pressure
→
High Alarm
→
1/2
（カラムの耐圧） →
Execute
で送液してください。
1/4
カーブが安定したら
Execute
ボタンをクリックし終了
END
um
18
144
HiPrep
カタログに記載のカラムの最大流速値は、室温で超純水を送液する場合の流速です。低
温では液の粘性が上昇するために送液圧力が上昇します。
0.15MPa
停止する可能性もあります。
粘性の高いバッファー（高濃度の硫安やウレア、グリセロールなどを含むもの）を使用す
る場合には十分ご注意ください。
ÄKTA
をプレッシャーリミットに設定してください。
粘性の高い溶液をご使用の際には、この設定圧を超えない流速範囲でのご使用をお願い
いたします。
と低いため、低温では、ご使用中にプレッシャーリミットが働いてシステムが
システムでご使用の場合には、
カラムを低温で
0.35 MPa
「フローリストリクター
＝「
HiTrap
システムにて使用する場合の注意点
ÄKTA
HiPrep
HiPrep
カラムの耐圧
0.15 MPa
FR-902の0.2 MPa
カラムの注意点
カラムは耐圧が
」＋
」
システムで
ÄKTA
をプレッシャーリミットに設定してください。
バッファーでの溶液交換
4.4
ポンプのインレットチューブに使用する溶液（バッファー）を接続します。
1.
Manual
使用するインレットチューブ
液送液（ゲルろ過）の時：
1
液送液（イオン交換等）の時：
2
BufferPrep
A2（Acid/Base
B1（Water
B2（Salt
↓
Pump...
機能を使用する時：
→
A1
A1（Buffer
カラムをご使用の際は、
HiTrap
）
）
）
＝「
）
HiTrap
0.5 MPa
＋「フローリストリクター
Pumpwash Purifier
A1/B1
カラムの耐圧
→
（使用するインレットチューブ）
0.3 MPa
FR-902
ON, OFF, ON, OFF
分の
」
0.2 MPa
→
」
Execute
19
インジェクションバルブの準備
5
Column
Sample
syringe
1
2
4
7
Pump
3
6
5
WasteWaste
Column
Load
シリンジを用いたマニュアルサンプル充填
5.1
1
2
4
Inject
3
5
Waste
7
Pump
6
Column
1
2
3
4
Waste
5
Waste
7
Pump
6
ここでは、サンプルループを使用して、シリンジでサンプルを注入するマニュアル添加法について説明します。
最初に、正しく配管がされているかを確認します。
インジェクションバルブのポート2〜6間にサンプルループを接続します。
1.
インジェクションバルブのポート3にインジェクションフィルポートを接続します。
2.
インジェクションバルブのポート4および5に繋がっているテフロンチュービングが廃液ボトルに入っていることを
3.
確認します。
3
アドバイス
サンプルが微量の場合は、ディスポーザブルシリンジの先端に溜まった液が無駄になります。シリンジとニードル
が一体になったガラスシリンジをお使いいただくとサンプルのロスを減らせます。外径
で先端90度カットの
0.7mm
シリンジをお使いください。
um
20
Loading...