GE GeneQuant pro User Guide

GeneQuant pro 用户手册

GE imagination at work

合格证

兹证明 GeneQuant pro 紫外/可见光分光光度计

货号(Part number) 80-2114-98/99, 80-2115-04/05

序列号(Serial number) 79000 以上

其为 Biochrom 有限公司制造，符合下列管理技术要求:

73/23/EEC & 89/336/EEC

即符合下列标准：

EN 61010-1: 2001 对测量、控制和实验室用电器的安全要求。

EN 61326:1998 对测量、控制和实验室用电器的电磁兼容性要求。

签名: 日期：2002 年 10 月 23 日

David Parr

Biochrom 有限公司

执行总监

地址(Postal address): 电话(Telephone): 传真(Telefax):

Biochrom Ltd [phone] [phone]
22 Cambridge Science Park

Milton Road

Cambridge CB4 0FJ

England

E-mail:[e-mail]
Website:http://www.biochrom.co.uk

英国注册号(Registered in England No)：974213
注册办公室(Registered Office)：22 Cambridge Science Park, Milton Road, Cambridge CB4 4FJ,

England

1

目 录

开箱、定位和安装 ………………………………………………………………………………4

主要安全标志 ……………………………………………………………………………………4

背面板 ……………………………………………………………………………………………4

• 操作 …………………………………………………………………………………………5

 引言 ………………………………………………………………………………………5
 仪器介绍 …………………………………………………………………………………5

* 功能键 ………………………………………………………………………………6
* 读数键

………………………………………………………………………………6

• 方法……………………………………………………………………………………………7

 DNA，RNA 和寡核苷酸测定 ……………………………………………………………7

* 核酸定量（NAQ） ……………………………………………………………………7
* 核酸纯度检查
* 使用背景校正

 蛋白检测……………………………………………………………………………………9

* 在 595，546 和 562nm 检测蛋白 ………………………………………………………9
* 在 280nm 检测蛋白

 细菌培养物测定 …………………………………………………………………………10

…………………………………………………………………………8

…………………………………………………………………………8

…………………………………………………………………10

• 仪器设置和样品测定 ……………………………………………………………………11

 设置 ………………………………………………………………………………………11
 样品测定 …………………………………………………………………………………11
 DNA，RNA 和寡核苷酸…………………………………………………………………12
 碱基序列 …………………………………………………………………………………14
 解链温度(Tm) ……………………………………………………………………………15
 595nm 检测蛋白 …………………………………………………………………………16
 280nm 检测蛋白 …………………………………………………………………………17
 细菌培养物 ………………………………………………………………………………18

• 信息 …………………………………………………………………………………………18

• 结果输出

 使用并口打印机 …………………………………………………………………………19
 使用 PC 机…………………………………………………………………………………19

……………………………………………………………………………………19

• 比色杯 ………………………………………………………………………………………20

2

 选择合适的比色杯…………………………………………………………………………20
 与其它分光光度计之间的结果比较………………………………………………………20
 比色杯加样…………………………………………………………………………………21
 样品测定……………………………………………………………………………………21
 清洗比色杯…………………………………………………………………………………21
 使用减小孔径的超微量比色杯和毛细管比色杯的重复性 ……………………………22

• 附件……………………………………………………………………………………………22

• 仪器保养

 售后服务……………………………………………………………………………………22
 性能验证检查(校准检查功能键) …………………………………………………………23
 仪器清洁及一般注意事项…………………………………………………………………23
 更换保险丝…………………………………………………………………………………23
 氘灯保修……………………………………………………………………………………23
 更换氘灯……………………………………………………………………………………24

……………………………………………………………………………………22

• 技术规格 ……………………………………………………………………………………25

3

开箱、定位和安装

• 检查仪器在运输过程中是否有损坏痕迹，如果发现任何损坏，请立即与供应商联系。

• 保证您打算安装仪器的场所具有符合安全操作的环境条件：

 仅用于室内
 温度 10℃至 40℃
 31℃时最大相对湿度为 80％，40℃时线性减少至 50％

• 仪器必须放在硬的、水平的、能承重 4 公斤的实验台或桌子上，并使空气能在仪器周围自由

循环流动。

• 保证冷却风扇进出口不被阻塞，仪器后部至少离墙壁 5cm。

• 仪器必须用厂家提供的电缆与电源连接，必须接地，其可用电源为 100~240V。

• 开关在仪器的背面板上，仪器启动要几秒，然后进入校准程序，大约需一分钟，直到显示器

出现“Instrument Ready”以及仪器序列号、软件版本、日期和样品号等信息为止。

• 如果仪器未按规定方法使用或者工作环境不符合安全操作条件，仪器具有的保护装置可能被

损坏，公司将撤消对仪器的保修。

主要安全标志

在您的仪器上有一些警告标签和符号，这是为了告诉您在哪儿存在着潜在的危险或需要特别小
心。在开始安装前，请您花时间弄清这些符号和它们的含意。

注意（参阅附带文件）
黄底，惊叹号和边为黑色

背面板

1. 多用途接口

2. 电源开关(1= 开,0 = 关)

3. 电源插口

4

操作

引言

您的 GeneQuant pro RNA/DNA 计算器是一种极好的，为在生命科学领域工作的，包括生物
技术和药物开发研究的分子生物学家所专门设计的，易于使用的分光光度计。带有一个长寿
命的硼硅酸玻璃脉冲氘灯。它测定 230，260，280，320，546，562，595 和 600nm 的吸光
度，同时自动计算各种相关参数，并在按按钮时能将其显示出来。对许多分子生物学家的常
规工作来说，该仪器是很理想的：

• 它可检测经 PCR 扩增的、供杂交研究和小量制备定量用的核酸(DNA、RNA 和寡核苷酸)

的纯度和浓度(以µg/ml , ng/µl, µg/µl, pmole/µl 或皮摩尔磷酸盐表示)。260nm 波长用于定
量，其和 230 及 280nm 一起用于纯度检查计算（通过 260/230 和 260/280 比值），320nm
波长用 于背景校正，我们提供包括一次性 UV 透射的、各种规格的比色杯，可根据样品
浓度、稀释因子和可得到的体积进行选择以便于取样测定，核酸扫描功能使我们可以得
到样品的光谱吸收信息。

• 在做 PCR 前可根据输入的寡核苷酸序列、浓度及全部缓冲液的摩尔浓度一起计算引物的

退火温度；该 Tm 值是用核酸序列中每一个碱基与它邻近碱基的关系使用近邻热力学数
据算出的(Breslauer et al , Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 83, 3746, 1986)。

• 可采用在 595nm 的 Bradford 法、546nm 的双缩脲法和 562nm 的 BCA 法进行蛋白检测。

样品通过存贮的标准曲线进行测量，直线的线性回归结果可打印出来。

• 能对细菌培养液做 OD600 测量，以确定最佳诱导和收获时间。

为便于对实验结果做电子项目归档(electronic project archiving)，所有的数据用附件中的转换
接口能直接下载到 PC 机，结果同样能在标准并口打印机
（standard Centronics parallel printer）打印。

校准检查滤片装置(Calibration check filter set)可对仪器作有
关 GLP 目的（波长精确度，吸光度精确度和杂散光）的定
期检查，检查结果和仪器状态只能下载到 PC 机上查看或打
印以便作为资料保存。

友好的用户测定系统易于使用并保证灯的使用寿命更长，能
将产品使用成本降到最低。

仪器介绍

显示屏由 128×64 背光图形液晶组成，键盘有 28 个按键并分
成三个区：数字键盘、功能键和读数键，包括参数设置键。
打开仪器开关，经启动和校准程序后，仪器处于待用状态
(显示“Instrument Ready”等信息)。

请注意下述几点：

• 对您的测量做仪器设置(set up)可能是必要的，特别是对

小体积和使用减小孔径的比色杯进行核酸定量和做

Bradford 蛋白测量时更是必要。

5

• 在每种测量模式开始时总是要求设置对照；插入对照和样品比色杯使光路是沿仪器从后

至前的轴线方向。

• 样品插入后，按相应的读数键或“enter”键（测量时间的长短，是由所读波长数目决

定，全部波长读过的时间约为 12 秒）。

功能键（Utility Keys）

Setup

cal check

select

设置仪器各种功能参数（见 Set up），在按相应的读数键后再按设置键，将转
至相应测定方法的设置。

启动仪器用专门的滤光片检查吸收精确度，波长精确度和杂散光（见性能鉴定
检测）。

用来查看参数设置中的选项或显示碱基序列或核酸模式的结果（如果扫描模式
开启的话）。

print 输出数据到打印机,或通过多用途接口输出到 PC 机.

base Seq.

用来输入引物或寡核苷酸的碱基序列，计算理论吸光度、分子量和转换因子
（见碱基序列输入 ）。

Tm 用来确定 Tm（用 Abs260）以及显示对所输入序列计算出的 Tm 值（见 Tm）。

stop 相当于一个“退出（escape）”键，使用户返回仪器待用状态。

setref 在相应波长读对照值。

enter 输入或接受设置的选项，并可作为读数键。

读数键(Reading keys) 吸光度测量，计算及样品情况

abs

DNA

RNA

oligo

prot. 595

在 230，260，280，320，595，600nm 测量；结果不需计算；检测
单个样品

在 230，260，280，320nm 测量；计算 DNA 浓度，260/280 比值和
260/230 比值；检测单个样品

在 230，260，280，320nm 测量；计算 RNA 浓度，260/280 比值和
260/230 比值；检测单个样品

在 230，260，280，320nm 测量；计算寡核苷酸或引物浓度，
260/280 比值和 260/230 比值；检测单个样品

在 595，546 或 562nm 测量；计算蛋白浓度；检测相对于用已知标
准的校准曲线的单个样品

6

prot. 280 在 260，280，320nm 测量；计算蛋白浓度；检测单个样品

cell cult. 在 600nm 测量；计算校正的 OD 值；检测单个样品

方法

DNA，RNA 和寡核苷酸特性

核酸定量 (NAQ)

• 核酸能在 260nm 定量，是因为在 10mm 光径比色杯中，光密度为 1.0 的 DNA 或 RNA 溶

液的浓度为 50 或 40µg/ml，根据经验，寡核苷酸的相应系数为 33µg/ml。虽然它会随着碱基
组成而变化，但是如果碱基序列已知，该系数可以通过计算得出（见设置中的碱基序列部分
和下列内容）。

浓度=系数×Abs 260

• 对 DNA，RNA 和寡核苷酸，仪器分别使用缺省因子 50，40 和 33，并对稀释和使用不是
10mm 光径的比色杯进行校正；稀释系数和比色杯光径通过“Set up”输入。

• 如果使用减小了孔径的超微量体积或毛细管比色杯，要保证它们是按照随比色杯一起提
供的说明书（见相应说明书）小心正确地装进样品，同时已经输入了正确的光径。

• 缺省浓度单位为µg/ml，但是 ng/µ1， µg/µ1，pmol/µl 和 pmol 磷酸盐等单位均可通过
“Set up”做选择(对测序和 PCR 计算引物浓度时，pmo1/µ1 浓度单位是有用的)。采用下式进
行换算：

1µg/ml = 1ng/µl = 0.001µg/µ1

pmol/µl =

pmol 磷酸盐 =

• DNA 寡核苷酸的分子量(MW)通过下式计算：

µg/ml×1000

寡核苷酸分子量

核苷酸浓度, µg/ml

315

MW(g/mole) = (dA×312.2 + dc× 288.2 + dG× 328.2 + dT× 303.2)

+（带相反电荷离子的分子量×寡核苷酸的碱基长度）

对 RNA 寡核苷酸，用(dU×298.2)代替(dT×303.2)；用这个公式计算分子量(MW)必须校正在
寡核苷酸 5’和 3’端的原子的影响。

磷酸化的寡核苷酸加： 17+2 ×带相反电荷离子分子量

7

非磷酸化的寡核苷酸减：61+带相反电荷离子分子量

普通寡核苷酸的带相反电荷的离子的分子量(g/mole)为：钠(Na, Sodium，23.0)，钾(K,
Potassium，39.1)，和三乙胺(TEA，Triethylammonium，102.2)。

核酸纯度检查

• 从细胞中提取的核酸多带有蛋白质，通常需要进一步地纯化来除去蛋白质杂质。260/280

比值给出一个纯度指标，但仅此而已，它不是一种肯定的鉴定方法，纯的 DNA 和 RNA
制品分别具有平均≥1.8 和≥2.0 的比值，偏离这个数值表明在样品中存在着杂质，但是在
判断结果时必须小心。

• 对核酸来说，260nm 的读数是在吸收光谱的宽峰顶部附近读出的，而 280nm 数值是在其

峰肩上读出的，(也就是说波长上的一点变化会导致吸光度有很大改变)。因此在 280nm
波长微小的变化对 260/280 比值的影响将比在 260nm 的变化造成的影响大。因此，相同
和不同型号的不同仪器，由于波长精确度的变化可能会给出略为不同的比率，但是每台
仪器本身给出的结果是一致的。

• 浓度将同样影响 260/280 读数，如果溶液太稀，读数将是在仪器的检测极限得到的，因

此结果可能变化很大，因为 260nm 峰和 280nm 峰肩与背景的吸光度差别是很小的，这就
是为什么要做精确测量的话，吸光度应当>0.05 的原因之一。

• 在 230nm 吸光度增高同样表示存在杂质，230nm 接近肽键的最大吸光度，同样它也表明

缓冲液污染，因为 Tris，EDTA 和其它缓冲液的盐在这个波长有吸收。当测定 RNA 样品
时，260/230 比值应当>2.0，比值低于此数，一般表示有硫氰酸胍(guanidinium
thiocyanate)污染，硫氰酸胍是一种在 RNA 提纯中常用的试剂，在 230~260nm 范围内有
吸收。核酸扫描对 RNA 样品有一定帮助。

• 仪器能显示 260/280 和 260/230 比值，并能为稀释和使用光径不是 10mm 的比色杯做校

正，稀释系数和比色杯光径通过“Set up”选定。

使用背景校正

• 背景校正所在的波长远离核酸和蛋白的吸收波长 260 和 280nm，有时用来校正背景吸收

的影响。使用 320nm 波长通常用于处理混浊、高吸光度的缓冲溶液，及使用减小光径的
比色杯的影响，通过在“Set up”中的选择，可以设定仪器做背景校正。

• 如果用了 320nm 波长，那么所得的结果将会和不用它的结果不同，因为在计算公式中，

260 和 280nm 吸光度中已经预先减去了 320nm 的吸光度：

浓度=(A260-A320)×系数

Abs 的比值=(A260-A320)/(A280-320)

Abs 的比值=(A260-A320)/(A280-320)

• 如果您的实验室以前不用背景校正，那么设置此选项为 NO。

• 如果使用毛细管比色杯和超微量比色杯（见比色杯），使用背景校正能消除由于操作而

造成的改变。

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