Agilent Sicheres Trennenund User Manual

Produkte Anwendungen Software Dienstleistungen

Sicheres Trennenund

Charakterisieren von

Biomolekülen mit Agilent BioHPLC-Säulen

Größenausschluss-BioHPLC-Säulen

Ionenaustausch-BioHPLC-Säulen

2

„Mein Team steht unter dem

hohen Druck, unsere führenden

Proteintherapeutika besser

charakterisieren zu müssen. Gibt

es eine neue Analysetechnologie

auf dem Markt, die uns

möglicherweise helfen kann?“

„Es ist ein Kampf,

Ladungsvarianten unserer

monoklonalen Antikörper zu

isolieren und zu identifizieren.

Wie kann ich die Isoformen von

Proteinen besser trennen?“

„Wie können wir sicher sein, dass

unsere Analysemethoden in der

Qualitätssicherung konsistent

bleiben werden?“

Ganz egal, ob Sie
das nächste
Biopharmazeutikum
charakterisieren oder
ein Zielprotein isolieren
müssen, Agilent kann
Ihnen helfen, die vielen
Herausforderungen,
die bei der Entwicklung
dieser Analysemethoden
auftreten, zu meistern.

3

Weitere Informationen erhalten Sie unter

www.agilent.com/chem/BioHPLC.

Die neuen Größenausschluss- und Ionenaustausch-BioHPLC-Säulen von
Agilent umfassen vier neue Säulenfamilien, die eine hohe Reproduzierbarkeit
und hochauflösende analytische Isolationen von monoklonalen Antikörpern,
Proteinen, Peptiden und anderen Biomolekülen bieten.

Agilent Bio SEC-3 HPLC-Säulen (Seite 4) liefern

schärfere Peaks und schnellere größenbasierte Trennungen
von Biomolekülen und wasserlöslichen Polymeren. Sie sind mit
3 µm porösen Kieselgelpartikeln gefüllt, die mit einer proprietären,
hydrophilen Beschichtung versehen sind, für eine maximale
Trennungseffizienz und -auflösung.

Agilent Bio SEC-5 HPLC-Säulen (Seite 7) bieten eine

optimierte Peak-Kapazität und -Auflösung für eine größere Bandbreite
größenbasierter Biomolekül-Trennungen. Sie sind mit 5 µm
Kieselgelpartikeln gefüllt, die mit einer neutralen hydrophilen
Beschichtung versehen sind, durch die sekundäre Interaktionen
vermindert wird.

Agilent Bio MAb HPLC-Säulen (Seite 10) sind speziell für

hochauflösende monoklonale Antikörper (MAb)-Trennungen konzipiert.
Die Säulen sind mit polymeren, nicht-porösen schwachen
Kationenaustauschpartikeln gefüllt, die von einer hydrophilen
Beschichtung umgeben sind, welche für Antikörper eine
einzigartige Selektivität bietet und die meisten unspezifischen
Interaktionen eliminiert.

Agilent Bio IEX HPLC-Säulen (Seite 13) gewährleisten

hochauflösende, ausbeutereiche und hocheffiziente Trennungen von
Proteinen, Peptiden, Oligonukleotiden und anderen Biomolekülen.
Die Säulen sind mit polymeren, nicht-porösen Partikeln gefüllt, die mit
einer einzigartigen hydrophilen Beschichtung versehen sind, durch die
praktisch alle unspezifischen Interaktionen unterbunden werden. Multiple
Ionenaustauschgruppen sind an jeder Bindungsstelle fixiert und bieten
eine hervorragende Kapazität und Selektivität.

Als führender Anbieter von Analyselösungen für die biopharmazeutische
Industrie weiß Agilent, dass Qualität und Konsistenz für die Herstellung
von sicheren und hocheffizienten therapeutischen Produkten
ausschlaggebend sind. Die BioHPLC-Analysesäulen von Agilent bieten

die Geschwindigkeit, Auflösung und Reproduzierbarkeit, die Sie für die
schnelle und kostengünstige Bereitstellung von lebensverändernden
Produkten für diejenigen, die sie benötigen, brauchen.

4

Agilent Bio SEC-3 HPLC-Säulen sind eine einzigartige Technologie für die
Größenausschlusschromatographie (SEC). Sie sind mit kugelförmigen,
eng dispensierten 3 µm Kieselgelpartikeln gefüllt, die mit einer propri­etären, hydrophilen Beschichtung versehen sind. Diese dünne
Polymerschicht wird chemisch und unter kontrollierten Bedingungen an
reines, mechanisch stabiles Silica gebunden, wobei ein hocheffizientes
Größenausschlusspartikel erhalten wird.

Andere Säulenvorteile sind u. a.:

• Außergewöhnliche Ladekapazität, Stabilität und Reproduzierbarkeit
für größenbasierte Biomolekül-Trennungen

• Schärfere Peaks, höhere Auflösung und bessere Proteinrückgewinnung

• In vielen Fällen schnellere Trennungen als bei Großpartikel-SEC-Säulen

• Kompatibilität mit den meisten wässrigen Puffern

• Hervorragende Stabilität unter salzreichen und salzarmen Bedingungen

Agilent Bio SEC-3 HPLC-Säulen sind in den Porengrößen 100 Å,
150 Å und 300 Å erhältlich, für die meisten Peptid- und Protein­größenausschluss-Trennungen.

Säulencharakteristika

Agilent Bio SEC-3 HPLC-Säulen (Partikelgröße 3 µm)

Hocheffiziente und hochauflösende
größenbasierte Trennungen für Biomoleküle

Säulenphase Größenausschluss

Füllkörper

Kugelförmiges, hochreines poröses Silica mit einer
hydrophilen Polymerbeschichtung

Partikelgröße

3 µm

Porenstruktur

100 Å, 150 Å, 300 Å

Säulenausschlusslimits (in Dalton)

100 Å MW-Bereich: 100 ~ 100 000
150 Å MW-Bereich: 500 ~ 150 000
300 Å MW-Bereich: 5000 ~ 1 250 000

pH-Wert-Stabilität

2–8,5

Betriebstemperaturlimit

Empfohlener Bereich: 10 bis 30 °C, max.: 80 °C

Betriebsdrucklimit

Empfohlener Betriebsdruck: 135 bar (2000 psi)
Maximaler Druck: 240 bar (3500 psi)

Mobile Phasenkompatibilität

Empfohlen: 150 mM Phosphatpuffer, pH-Wert 7,0,
es können auch andere wässrige Puffer mit hohem
und niedrigem Salzanteil verwendet werden

Arbeitsströmungsrate

0,1–1,25 mL/min bei Säulen mit einem ID von 7,8 mm
0,1–0,4 mL/min bei Säulen mit einem ID von 4,6 mm

5

Empfohlene Anwendungen

Antikörper- und Proteinaggregationsanalyse, Trennung von Proteinen in Zelllysaten,
Trennung von Proteinmischungen, natürlichen Polymeren, Nanomaterialien,
Oligonukleotiden, Polysacchariden und anderen Biomolekülen.

min

0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15

Agilent Bio SEC-3, 300 Å,
7,8 x 300 mm

Säule: Bio SEC-3 300 Å

und Bio SEC-5 300 Å

Puffer: 150 mM Phosphatpuffer,

pH-Wert 7

Strömungsrate: 1,0 mL/min bei 7,8 x 300 mm
Temperatur: Umgebungstemperatur

(~23 °C)

Erkennung: UV 214 nm
Injektion: 10 µL (3 µL bei 4,6 x 300 mm)
Probe: 1) Thyroglobulin

(1,0 mg/mL), 670 kD;

2) BSA-Dimer, 132 kD;

3) BSA (1,0 mg/mL), 66 kD;

4) Ribonuclease A
(1,0 mg/mL), 13,7 kD und

5) Uracil (2,5 µg/mL), 120 D.

Agilent Bio SEC-5, 300 Å,
7,8 x 300 mm

Die Kombination aus einzigartiger Oberflächenchemie und kleinen Partikeln: Diese Trennung von fünf Proteinen zeigt, wie kleinere Partikel schärfere Peaks

bei höheren Strömungsraten liefern und somit die Auflösung verbessern und die Laufzeiten verkürzen.

Säule Druck

Bio SEC-3 (7,8 x 300 mm) 90 bar
Bio SEC-5 (7,8 x 300 mm) 45 bar

Peak-Effizienzen für Säulen mit einer Partikelgröße von 3 µm und 5 µm

Peak Protein

Agilent Bio SEC-3,

300 Å, 7,8 x 300 mm

Agilent Bio SEC-5,

300 Å, 7,8 x 300 mm

1 Thyroglobulin 2460 1120
2 BSA Dimer 5100 2720
3 BSA 13 090 6590
4 Ribonuclease A 22 000 11 160
5 Uracil 38 500 27 860

6

min

0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15

-.005

.000

.005

.010

.015

.020

.025

.030

.035

AU

Aggregationsanalyse eines humanisierten monoklonalen Antikörpers (MAb); die Agilent Bio SEC-3 HPLC-Säulen bieten eine Baseline-Trennung
des Antikörperaggregats und Monomerpeaks innerhalb von 15 Minuten.

min

0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15

Säule: Bio SEC-3 150 Å, 7,8 x 300 mm

und Bio SEC-3 300 Å, 7,8 x 300 mm

Mobile Phase: 0,15 mM Phosphat, pH-Wert 7,0
Strömungsrate: 1,0 mL/min
Temperatur: Umgebungstemperatur
Erkennung: UV 214 nm
Injektion: 10 µL
Probe: E. coli-Lysat (2,5 mg/mL)

Bio SEC-3 150 Å, 7,8 x 300 mm

Bio SEC-3 300 Å, 7,8 x 300 mm

Trennung eines E. coli-Lysats in einer 150 Å und 300 Å Agilent Bio SEC-3 HPLC-Säule. Die verschiedenen Proteine zeigen bei Verwendung von Säulen
mit verschiedenen Ausschlusslimits eine gute Auflösung.

Weitere Informationen erhalten Sie unter
www.agilent.com/chem/BioHPLC, unter dieser Adresse
können Sie auch Online-Bestellungen vornehmen.

Agilent Bio SEC-3 HPLC-Säulen

Säule: Bio SEC-3 300 Å, 7,8 x 300 mm
Mobile Phase: 150 mM Phosphat, pH-Wert 7
Strömungsrate: 1,0 mL/min
Temperatur: Umgebungstemperatur
Probe: Monoklonaler Antikörper

(10 µL, 5 mg/mL)

7

Agilent Bio SEC-5 HPLC-Säulen sind mit 5 µm Kieselgelpartikeln gefüllt,
die mit einer proprietären, neutralen und hydrophilen Beschichtung
versehen sind, für maximale Effizienz und Stabilität. Die speziell konzi­pierten Füllkörper fördern zudem ein hohes Porenvolumen und
verbessern somit sowohl die Peak-Kapazität als auch die Auflösung.

Andere Säulenvorteile sind u. a.:

• Maximale Rückgewinnung für eine große Bandbreite an
größenbasierten Biomolekül-Trennungen

• Herausragende Reproduzierbarkeit und Säulen-Lebensdauer

• Hervorragende Stabilität, selbst bei hohen und niedrigen
Salzbedingungen und anderen schwierigen Pufferbedingungen

• Kompatibilität mit den meisten wässrigen Puffern

Partikel erhältlich in den Porengrößen:
100 Å, 150 Å, 300 Å, 500 Å, 1000 Å und 2000 Å,
mit einer großen Auswahl an Ausschlusslimits

Säulencharakteristika

Agilent Bio SEC-5 HPLC-Säulen

(Partikelgröße 5 µm)

Hocheffiziente und hochauflösende
größenbasierte Trennungen von Biomolekülen

Säulenphase Größenausschluss

Füllkörper Kugelförmiges, hochreines poröses Silica

mit einer hydrophilen Polymerbeschichtung

Partikelgröße 5 µm
Porenstruktur 100 Å, 150 Å, 300 Å, 500 Å, 1000 Å, 2000 Å

Säulenausschlusslimits (in Dalton)

100 Å MW-Bereich: 100 ~ 100 000
150 Å MW-Bereich: 500 ~ 150 000
300 Å MW-Bereich: 5000 ~ 1 250 000
500 Å MW-Bereich: 15 000 ~ 5 000 000
1000 Å MW-Bereich: 50 000 ~ 7 500 000
2000 Å MW-Bereich: >10 000 000

pH-Wert-Stabilität 2–8,5
Betriebstemperaturlimit Empfohlener Bereich: 10 bis 30 °C, max.: 80 °C

Betriebsdrucklimit Empfohlener Betriebsdruck: 135 bar (2000 psi)

Maximaler Druck: 240 bar (3500 psi)

Mobile Phasenkompatibilität

Empfohlen: 150 mM Phosphatpuffer, pH-Wert 7,0,
es können auch andere wässrige Puffer mit hohem
und niedrigem Salzanteil verwendet werden

Arbeitsströmungsrate

0,1–1,25 mL/min bei Säulen mit einem ID von 7,8 mm
0,1–0,4 mL/min bei Säulen mit einem ID von 4,6 mm

8

Empfohlene Anwendungen

Antikörper- und Proteinaggregationsanalyse, Trennung von Proteinen
in Zelllysaten, Trennung von Proteinmischungen, natürlichen
Polymeren, Nanomaterialien, Oligonucleotiden, Polysacchariden
und anderen Biomolekülen.

0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15

mAu 214 nm

0

200

400

min

0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15

mAu 214 nm

0

200

400

1. Thyroglobulin, 5,43 min

2. BSA-Dimer, 6,19 min

3. BSA-Monomer, 6,93 min

4. Ribonuclease A, 8,74 min

5. Poly-DL-alanin (1–5 kDa),
9,90 min

6. Uracil, 12,13 min

1. Thyroglobulin, 5,64 min

2. BSA-Dimer, 6,23 min

3. BSA-Monomer, 7,02 min

4. Ribonuclease A, 9,22 min

5. Poly-DL-alanin (1–5 kDa),
10,02 min

6. Uracil, 11,81 min

Agilent Bio SEC-5
150 Å

TSK
G2000SW

xl

Ein synaptischer Vergleich: Trennung einer Proteinmischung in einer Agilent Bio SEC-5 HPLC-Säule

und einer Tosoh TSK-Gel-Säule. Beachten Sie die schärferen Peaks und die bessere Auflösung
der Agilent Bio SEC-5 HPLC-Säule.

1

2

3

4

1

2

3

4

Lot 1

Lot 2

Lot 3

min min

0 2 4 6 8 10 12 14

AU

.10

.20

.30

.40

.50

.60

.70

.80

.00

0 2 4 6 8 10 12 14

150 Å, 7,8 x 300 mm
150 mM Phosphat
Puffer, pH-Wert 7,0

1. Thyroglobulin

2. BSA

3. Ribonuclease A

4. Uracil

3. Durchgang
Nach 300 Injektionen

Agilent Bio SEC-5 HPLC-Säulen

Außergewöhnlich gute Chargen-Reproduzierbarkeit: Die Mischung aus vier Proteinen zeigt eine
hervorragende Retentionszeit-Reproduzierbarkeit bei 300 Injektionen und an drei Säulen aus verschiedenen
Herstellungschargen.

9

min

0 1 2 3 4

1

2

3

4

5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15

Säule: Agilent Bio SEC-5, 300 Å,

7,8 x 300 mm

Puffer: 150 mM Phosphatpuffer,

pH-Wert 7,0

Strömungsrate: 1,0 mL/min
Detektor: 214 nm
Injektion: 10 µL

Selbst nach 300 Injektionen mit einer Mischung aus fünf Proteinen bieten die Agilent Bio SEC-5 HPLC-Säulen reproduzierbare Ergebnisse mit nur minimalem

Peak-Tailing innerhalb dieses Zeitraums.

Injektions-Nr. Effizienz Tailing Linie

1 26 512 1192
2 25 959 1183

3 26 182 1180
10 25 682 1190
20 25 872 1194
64 25 811 1187

102 25 776 1170
140 25 910 1174
175 25 177 1208
192 24 300 1196
250 25 707 1172
300 25 720 1166

1. Thyroglobulin

2. BSA

3. Ribonuclease A

4. Uracil

Weitere Informationen erhalten Sie unter
www.agilent.com/chem/BioHPLC, unter dieser Adresse
können Sie auch Online-Bestellungen vornehmen.

10

Zur umfassenden Charakterisierung monoklonaler Antikörper gehört u. a.
auch die Identifizierung und das Monitoring von sauren und basischen
Isoformen. Die Agilent Bio MAb HPLC-Säulen beinhalten ein einzigartiges
Kunstharz, das speziell für hochauflösende, ladungsbasierte Trennungen
von monoklonalen Antikörpern konzipiert ist.

Das einzigartige Partikeldesign umfasst:

• Einen Füllkörperträger, der aus einer starren, kugelförmigen und in
hohem Maß querverbundenen und nichtporösen Styropordivinylbenzol
(PS/DVB)-Kugel besteht.

• Partikel, die mit einer hydrophilen Polymerbeschichtung versehen sind,
die praktisch jede unspezifische Bindung von Antikörperproteinen
unterbindet und somit die Effizienz und die Rückgewinnungsrate erhöhen.

Agilent Bio MAb HPLC-Säulen

Hochauflösende Ionenaustausch-Trennungen von monoklonalen Antikörpern

Modifiziertes

PS/DVB

Hydrophile Schicht

Dichte, homogene und WCX­Funktionsgruppenschicht

Agilent Bio MAb HPLC-Säulen:
überlegene Leistung von Innen heraus.

• Partikel, Beschichtung und Bindung sind
in hohem Maß druckfest und ermöglichen
so eine höhere Auflösung und schnellere
Trennungen

• Die hydrophile Beschichtung unterbindet
die meisten unspezifischen Interaktionen

• Eine sehr homogene, dicht gepackte schwache
Kationenaustausch (WCX)-Schicht, die chemisch an
die hydrophile Polymerbeschichtung gebunden ist

11

Die Partikel sind in den Größen 1,7 µm, 3 µm, 5 µm und 10 µm erhältlich,
wobei die kleineren Partikel eine höhere Auflösung bieten.

Säulencharakteristika

Agilent Bio MAb HPLC-Säulen sind mit
polymeren, nichtporösen, schwachen
Kationenaustauschpartikeln gefüllt
(in der Abbildung sehen Sie 1,7 µm
PS/DVD-Partikel). Diese Partikel sind
mit einer einzigartigen hydrophilen
Beschichtung versehen, durch
die sich die Rückgewinnung durch
eine signifikante Verringerung
der unspezifischen Bindungen
von Antikörperproteinen maßgeblich
verbessert.

Säulenphase Schwacher Kationenaustausch (Carboxylat)

Füllkörper

Nichtporöses Styropor(divinylbenzol) (PS/DVB),
mit einer hydrophilen Beschichtung versehen und an eine
homogene schwache Kationenaustauschschicht gebunden

Partikelgröße 1,7, 3, 5 und 10 µm
Porenstruktur Nichtporös
pH-Wert-Stabilität 2–12
Betriebstemperaturlimit 80 °C

Säulen-Hardware­Betriebsdrucklimit

600 bar (8700 psi) für die Edelstahl-Säulen-Hardware
400 bar (5800 psi) für die PEEK-Säulen-Hardware

Partikel­Betriebsdrucklimit

275 bar (4000 psi) bei 10 µm Partikeln
413 bar (6000 psi) bei 5 µm Partikeln
551 bar (8000 psi) bei 3 µm Partikeln
689 bar (10 000 psi) bei 1,7 µm Partikeln

Mobile Phasenkompatibilität

Kompatibel mit wässrigen Lösungspuffern,
Acetonitril/Aceton/Methanol- und Wassermischungen.
Gängige Puffer: Phosphat, Tris, MES und Acetat

Arbeitsströmungsrate Typisch 0,1–1,0 mL/min bei einer Säule mit einem ID von 4,6 mm

12

0 2

1

2

3

Lot A

Lot B

Lot C

4 6 8 10 12 14 min

16 18

Säulen: Agilent Bio MAb ,

NP10, 4,6 x 250 mm

Mobile Phase: A, 10 mM Phosphat, pH-Wert 6,0

B, A + 0,1 M NaCl

Gradient: 0–100 %B in 42 min
Strömungsrate: 1,0 mL/min
Probe: 1) Cytochrom C

2) Lysozym

3) Ribonuclese A

Injektion: 5 µL (1,5 mg/mL

für jedes Protein)

Temperatur: 25 °C
Erkennung: UV 214 nm

Die Kombination aus einer gut kontrollierten Kunstharzproduktion, Säulenoberflächenchemie und von Säulenfüllkörpern eliminiert praktisch jegliche
Retentionszeitschwankungen zwischen den Säulen und zwischen den Chargen.

min

0 14 16 18 20 22 24 26 28 30 32 34 36 38 4012 10 8 6 4 2

A

B

C

D

E

Optimierung der Verfahrensbedingungen für die Isoformcharakterisierung eines monoklonalen Antikörpers. Änderungen der Gradientenzustände schärfen die Peaks
und erhöhen die Auflösung von sauren und basischen Isoformen.

Analytische Trennungen von monoklonalen Antikörperisoformen
basierend auf den Differenzen in ihren Ladungszuständen.

Säulen: Agilent Bio MAb, NP10,

4,6 x 250 mm

Mobile Phase: A, 10 mM Phosphat, pH-Wert 7,5

B, A + 0,1 M NaCl

Gradient: A) 15–75 %B in 30 min

B) 15–65 %B in 30 min
C) 15–55 %B in 30 min
D) 15–47,5 %B in 30 min
E) 15–40 %B in 30 min

Strömungsrate: 0,8 mL/min
Probe: Monoklonaler Antikörper
Injektion: 10 µL (1,5 mg/mL)
Temperatur: 25 °C
Erkennung: UV 214 nm

Agilent Bio MAb HPLC-Säulen

Empfohlene Anwendungen

Weitere Informationen erhalten Sie unter
www.agilent.com/chem/BioHPLC, unter dieser Adresse
können Sie auch Online-Bestellungen vornehmen.

13

Agilent Bio IEX HPLC-Säulen sind mit polymeren, nichtporösen
Ionenaustauschpartikeln gefüllt und für hochauflösende, aus­beutereiche und hocheffiziente Trennungen von Proteinen,
Peptiden, Oligonukleotiden und anderen Biomolekülen konzipiert.

Zu den einzigartigen Merkmalen dieser Säulen zählen u. a.:

• Stark querverbundene und starre nichtporöse Styropor(divinylbenzol)
(PS/DVB)-Partikel mit einer hydrophilen, polymeren Beschichtung,
durch die unspezifische Bindungen unterbunden und die Effizienz
und Rückgewinnungsrate erhöht werden

• Homogene, dicht gepackte Ionenaustausch-Funktionsgruppen,
die chemisch an die hydrophile Schicht gebunden sind (multiple
Ionenaustauschgruppen pro Verankerung), um so die Säulenkapazität
zu steigern

• Beinhaltet Phasen mit starkem Kationenaustausch (SCX), schwachem
Kationenaustausch (WCX), starkem Anionenaustausch (SAX)
und schwachem Anionenaustausch (WAX).

Agilent Bio IEX HPLC-Säulen

Hochauflösende, ladungsbasierte analytische Trennungen
von Proteinen, Peptiden und anderen Biomolekülen

Modifiziertes

PS/DVB

Hydrophile Schicht

Ionenaustauschgruppen
(SCX, WCX, SAX, WAX)

Agilent Bio IEX HPLC-Säulen:
überlegene Leistung von Innen heraus.

• Partikel, Beschichtung und Bindung sind
in hohem Maß druckfest und ermöglichen
so eine höhere Auflösung und schnellere
Trennungen

• Die hydrophile Beschichtung unterbindet
die meisten unspezifischen Interaktionen

• Multiple Ionenaustauschgruppen werden an einer
Verankerung erfasst, um so die Kapazität zu steigern

14

Säulencharakteristika

Säulenphasen

SCX (Strong Cation Exchange:
Starker Kationenaustausch)–SO

3

H
WCX (Weak Cation Exchange:
Schwacher Kationenaustausch)–COOH
SAX (Strong Anion Exchange:
Starker Anionenaustausch)–N(CH

3)3

WAX (Weak Anion Exchange:
Schwacher Anionenaustausch)–N(C

2

H5)

2

Füllkörper

Nichtporöses Styropor(divinylbenzol) (PS/DVB),
mit einer hydrophilen Beschichtung und an eine
homogene Ionenaustauschschicht gebunden

Partikelgröße

1,7, 3, 5 und 10 µm

Porenstruktur

Nichtporös

Dynamische Bindungskapazität

SCX NP3: 53 mg/mL, SCX NP5: 38 mg/mL, SCX NP10: 20 mg/mL
WCX NP3: 19 mg/mL, WCX NP5: 15 mg/mL, WCX NP10: 10 mg/mL
SAX NP3: 35 mg/mL, SAX NP5: 28 mg/mL, SAX NP5: 17 mg/mL
WAX NP3: 26 mg/mL, WAX NP5: 18 mg/mL, WAX NP3: 12 mg/mL

pH-Wert-Stabilität

2–12

Betriebstemperaturlimit

80 °C

Säulen-Hardware­Betriebsdrucklimit

600 bar (8700 psi) für die Edelstahl-Säulen-Hardware
400 bar (5800 psi) für die PEEK-Säulen-Hardware

Partikel­Betriebsdrucklimit

275 bar (4000 psi) bei 10 µm Partikeln
413 bar (6000 psi) bei 5 µm Partikeln
551 bar (8000 psi) bei 3 µm Partikeln
689 bar (10 000 psi) bei 1,7 µm Partikeln

Mobile Phasenkompatibilität

Kompatibel mit wässrigen Lösungspuffern,
Acetonitril/Aceton/Methanol- und Wassermischungen.
Gängige Puffer: Phosphat, Tris, MES und Acetat

Arbeitsströmungsrate

Typisch 0,1–1,0 mL/min bei einer Säule mit einem ID von 4,6 mm

Alle Phasen sind in den nichtporösen Partikelgrößen 1,7 µm, 3 µm,
5 µm und 10 µm sowie einer Vielzahl von Säulenmaßen erhältlich.

Agilent Bio IEX HPLC-Säulen

15

min

0 2 4 6 8 10 12 14 22

16 18 20

1.7 µm

3 µm

5 µm

10 µm

Peak N

Peak N

Probe:

1. Ribonuclease A

2. Cytochrom C

3. Lysozym

Konzentration: 1,0 mg/mL
Detektor: 280 nm

Mittelwert N ~ 80 000 bei WCX-NP1,7

Säule: Bio WCX-NP, 4,6 x 50 mm
Puffer A: 20 mM PBS
Puffer B: A + 1,0 M NaCl
Gradient: 0–100 %B (20 min)
Strömungsrate: 1,0 mL/min bei NP10, NP5,

NP3 0,75 mL/min bei NP1,7

Bio SAX, NP10
4,6 x 50 mm

Peak-Kapazität > 40

Bio SAX, NP5
4,6 x 50 mm

Peak-Kapazität > 60

Bio SAX, NP3
4,6 x 50 mm

Peak-Kapazität > 70

Die oben aufgeführten Trennungen zeigen, wie Ihnen eine kleinere Partikelgröße die Flexibilität gibt, schärfere Peaks und eine bessere Auflösung zu erhalten.
Beachten Sie die Schärfe der Peaks bei einer Partikelgröße von 1,7 µm.

Puffer A: 20 mM Tris, pH-Wert 9,0
Puffer B: A + 0,5 M NaCl
Gradient: 0–100 %B (30 min)
Strömungsrate: 0,5 mL/min
Injektion: 10 µL/min (2,5 mg/mL)

0 2 4 6 8 10 12 14 22

16 18 20 24 26 3428 30 32

min

16

Empfohlene Anwendungen

Analytische Trennungen von Peptiden, Proteinen, Kohlenhydraten,
Oligonucleotiden, Polynucleotiden, Zelllysaten und mehrdimensionale
Trennungen

0 2 4 6 8 10 12 min

mAU

10

20

30

40

1

2

3

4

5

Säule: Bio SCX, NP3, 4,6 x 50 mm
Puffer: 10 mM Phosphate, pH-Wert 6,0
Gradient: 0–1,0 M NaC (15 min)
Strömungsrate: 0,5 mL/min
Detektor: 280 nm

Proben pI

1. Ovalbumin 4,6

2. Ribonuclease A 8,7

3. Cytochrom C 9,6

4. Aprotinin 10,0

5. Lysozym 11,0

N > 100 000/50 mm für Lysozym

Außergewöhnliche Trennungskraft: Die hydrophile, polymere Schicht und die dicht gepackten
Ionenaustausch-Funktionsgruppen bieten außergewöhnlich scharfe Peak-Formen und eine hohe
Auflösung bei einem Proteingemisch mit einer großen Bandbreite an isoelektrischen Punkten (pI).

0 2 4 6 8 10 12 14 min

Säule: Bio SEC-3.300 Å, 7,8 x 50 mm
Puffer: 20 mM Tris,

pH-Wert 8,0

Gradient: 0–0,3 M NaCl (15 min)
Strömungsrate: 0,5 mL/min
Gegendruck: 1600 psi
Detektor: 214 nm

Mit einer Agilent Bio SAX, NP3 (3 µm Partikel)-Säule lassen sich die Isoforme und die Unreinheiten sowohl
von Ovalbumin als auch von BSA leicht erkennen.

Ovalbumin

BSA

Stark querverbundene

und starre nichtporöse

Stypropordivinylbenzol-Partikel

(in der Abbildung 5 µm PS/DVD)

mit einer hydrophilen, polymeren

Beschichtung, durch die

unspezifische Bindungen

unterbunden und die Effizienz

und Rückgewinnungsrate

erhöht werden

Agilent Bio IEX HPLC-Säulen

Weitere Informationen erhalten Sie unter
www.agilent.com/chem/BioHPLC, unter dieser Adresse
können Sie auch Online-Bestellungen vornehmen.

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Verwenden Sie die Diagramme auf den nächsten Seiten, um festzustellen,
welche BioHPLC-Säulen für Ihre jeweilige Anwendung am besten geeignet ist.

Mit Agilent BioHPLC-Säulen den Einstieg
in die Verfahrensentwicklung und -validierung schaffen:

Agilent Bio SEC-3 HPLC-Säulen

Beschreibung Größe

(mm)

Partikel­größe (µm)

Art.-Nr.

Bio SEC-3, 100 Å 7,8 x 300 3 5190–2501
Bio SEC-3, 100 Å 7,8 x 150 3 5190–2502
Bio SEC-3, 100 Å 4,6 x 300 3 5190–2503
Bio SEC-3, 100 Å 4,6 x 150 3 5190–2504
Bio SEC-3, 100 Å, Guard 7,8 x 50 3 5190–2505
Bio SEC-3, 150 Å 7,8 x 300 3 5190–2506
Bio SEC-3, 150 Å 7,8 x 150 3 5190–2507
Bio SEC-3, 150 Å 4,6 x 300 3 5190–2508
Bio SEC-3, 150 Å 4,6 x 150 3 5190–2509
Bio SEC-3, 150 Å, Guard 7,8 x 50 3 5190–2510
Bio SEC-3, 300 Å 7,8 x 300 3 5190–2511
Bio SEC-3, 300 Å 7,8 x 150 3 5190–2512
Bio SEC-3, 300 Å 4,6 x 300 3 5190–2513
Bio SEC-3, 300 Å 4,6 x 150 3 5190–2514
Bio SEC-3, 300 Å, Guard 7,8 x 50 3 5190–2515

Agilent Bio MAb HPLC-Säulen

Beschreibung Größe

(mm)

Partikel­größe (µm)

Art.-Nr.

Bio MAb, Edelstahl 4,6 x 50 1,7 5190–2401
Bio MAb, Edelstahl, Guard 4 x 10 1,7 5190–2402
Bio MAb, Edelstahl 4,6 x 50 3 5190–2403
Bio MAb, Edelstahl, Guard 4 x 10 3 5190–2404
Bio MAb, Edelstahl 4,6 x 250 5 5190–2405
Bio MAb, Edelstahl, Guard 4 x 10 5 5190–2406
Bio MAb, PEEK 4,6 x 250 5 5190–2407
Bio MAb, PEEK, Guard 4,6 x 50 5 5190–2408
Bio MAb, Edelstahl 2,1 x 250 5 5190–2409
Bio MAb, Edelstahl, Guard 2 x 10 5 5190–2410
Bio MAb, PEEK 2,1 x 250 5 5190–2411
Bio MAb, PEEK, Guard 2,1 x 50 5 5190–2412
Bio MAb, Edelstahl 4,6 x 250 10 5190–2413
Bio MAb, Edelstahl, Guard 4 x 10 10 5190–2414
Bio MAb, PEEK 4,6 x 250 10 5190–2415
Bio MAb, PEEK, Guard 4,6 x 50 10 5190–2416
Bio MAb, Edelstahl 2,1 x 250 10 5190–2417
Bio MAb, Edelstahl, Guard 2 x 10 10 5190–2418
Bio MAb, PEEK 2,1 x 250 10 5190–2419
Bio MAb, PEEK, Guard 2,1 x 50 10 5190–2420

18

Agilent Bio SEC-5 HPLC-Säulen

Beschreibung Größe

(mm)

Partikel­größe (µm)

Art.-Nr.

Bio SEC-5, 100 Å 7,8 x 300 5 5190–2516
Bio SEC-5, 100 Å 7,8 x 150 5

5190–2517
Bio SEC-5, 100 Å 4,6 x 300 5 5190–2518
Bio SEC-5, 100 Å 4,6 x 150 5

5190–2519
Bio SEC-5, 100 Å, Guard 7,8 x 50 5 5190–2520
Bio SEC-5, 150 Å 7,8 x 300 5

5190–2521
Bio SEC-5, 150 Å 7,8 x 150 5 5190–2522
Bio SEC-5, 150 Å 4,6 x 300 5

5190–2523
Bio SEC-5, 150 Å 4,6 x 150 5 5190–2524
Bio SEC-5, 150 Å, Guard 7,8 x 50 5

5190–2525
Bio SEC-5, 300 Å 7,8 x 300 5 5190–2526
Bio SEC-5, 300 Å 7,8 x 150 5

5190–2527
Bio SEC-5, 300 Å 4,6 x 300 5 5190–2528
Bio SEC-5, 300 Å 4,6 x 150 5

5190–2529
Bio SEC-5, 300 Å, Guard 7,8 x 50 5 5190–2530
Bio SEC-5, 500 Å 7,8 x 300 5

5190–2531
Bio SEC-5, 500 Å 7,8 x 150 5 5190–2532
Bio SEC-5, 500 Å 4,6 x 300 5

5190–2533
Bio SEC-5, 500 Å 4,6 x 150 5 5190–2534
Bio SEC-5, 500 Å, Guard 7,8 x 50 5

5190–2535
Bio SEC-5, 1000 Å 7,8 x 300 5 5190–2536
Bio SEC-5, 1000 Å 7,8 x 150 5

5190–2537
Bio SEC-5, 1000 Å 4,6 x 300 5 5190–2538
Bio SEC-5, 1000 Å 4,6 x 150 5

5190–2539
Bio SEC-5, 1000 Å, Guard 7,8 x 50 5 5190–2540
Bio SEC-5, 2000 Å 7,8 x 300 5

5190–2541
Bio SEC-5, 2000 Å 7,8 x 150 5 5190–2542
Bio SEC-5, 2000 Å 4,6 x 300 5

5190–2543
Bio SEC-5, 2000 Å 4,6 x 150 5 5190–2544
Bio SEC-5, 2000 Å, Guard 7,8 x 50 5

5190–2545

Agilent BioHPLC-Säulen (Fortsetzung)

Säulen mit einem ID von 4,6 mm sind ab März 2010 erhältlich
Säulen mit einem ID von 2,1 mm sind ab Mai 2010 erhältlich

Agilent Bio IEX HPLC-Säulen

Beschreibung Größe

(mm)

Partikelgröße

(µm)

Bio SCX
Art.-Nr.

Bio WCX
Art.-Nr.

Bio SCX
Art.-Nr.

Bio WCX
Art.-Nr.

Agilent Bio IEX, Edelstahl 4,6 x 50 1,7 5190–2421 5190–2441 5190–2461 5190–2481
Agilent Bio IEX, Edelstahl, Guard 4 x 10 1,7 5190–2422 5190–2442 5190–2462 5190–2482
Agilent Bio IEX, Edelstahl 4,6 x 50 3 5190–2423 5190–2443 5190–2463 5190–2483
Agilent Bio IEX, Edelstahl, Guard 4 x 10 3 5190–2424 5190–2444 5190–2464 5190–2484
Agilent Bio IEX, Edelstahl 4,6 x 250 5 5190–2425 5190–2445 5190–2465 5190–2485
Agilent Bio IEX, Edelstahl, Guard 4 x 10 5 5190–2426 5190–2446 5190–2466 5190–2486
Agilent Bio IEX, PEEK 4,6 x 250 5 5190–2427 5190–2447 5190–2467 5190–2487
Agilent Bio IEX, PEEK, Guard 4,6 x 50 5 5190–2428 5190–2448 5190–2468 5190–2488
Agilent Bio IEX, Edelstahl 2,1 x 250 5 5190–2429 5190–2449 5190–2469 5190–2489
Agilent Bio IEX, Edelstahl, Guard 2 x 10 5 5190–2430 5190–2450 5190–2470 5190–2490
Agilent Bio IEX, PEEK 2,1 x 250 5 5190–2431 5190–2451 5190–2471 5190–2491
Agilent Bio IEX, PEEK, Guard 2,1 x 50 5 5190–2432 5190–2452 5190–2472 5190–2492
Agilent Bio IEX, Edelstahl 4,6 x 250 10 5190–2433 5190–2453 5190–2473 5190–2493
Agilent Bio IEX, Edelstahl, Guard 4 x 10 10 5190–2434 5190–2454 5190–2474 5190–2494
Agilent Bio IEX, PEEK 4,6 x 250 10 5190–2435 5190–2455 5190–2475 5190–2495
Agilent Bio IEX, PEEK, Guard 4,6 x 50 10 5190–2436 5190–2456 5190–2476 5190–2496
Agilent Bio IEX, Edelstahl 2,1 x 250 10 5190–2437 5190–2457 5190–2477 5190–2497
Agilent Bio IEX, Edelstahl, Guard 2 x 10 10 5190–2438 5190–2458 5190–2478 5190–2498
Agilent Bio IEX, PEEK 2,1 x 250 10 5190–2439 5190–2459 5190–2479 5190–2499
Agilent Bio IEX, PEEK, Guard 2,1 x 50 10 5190–2440 5190–2460 5190–2480 5190–2500

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Säulen mit einem ID von 4,6 mm sind ab März 2010 erhältlich
Säulen mit einem ID von 2,1 mm sind ab Mai 2010 erhältlich

Weitere Informationen erhalten Sie unter
www.agilent.com/chem/BioHPLC,
unter dieser Adresse können Sie auch
Online-Bestellungen vornehmen.

Ganz gleich, ob Sie monoklonale Antikörper charakterisieren,
ein Zielprotein trennen oder Ihre Verfahrensskala-Reinigungen
überwachen, Agilent BioHPLC-Instrumente lassen sich leicht in Ihren
Workflow einbinden und liefern hochwertige Ergebnisse – jedes Mal.

Unsere umfassende Reihe an BioHPLC-Säulen umfasst:

Größenausschluss-BioHPLC-Säulen

• Agilent Bio SEC-3

• Agilent Bio SEC-5

• ZORBAX GFC-250/450

Ionenaustausch-BioHPLC-Säulen

• Agilent Bio MAb

• Agilent Bio IEX

• Bio-Monolith

Phasenumkehr-BioHPLC-Säulen

• Poroshell 300

• Poroshell 120

• StableBond 300 Å

• Extend 300 Å

Proteomik- und LC/MS BioHPLC-Säulen

• ZORBAX Capillary, Nano und MicroBore

• MARS (Multiple Affinity Removal System;
Mehrfach-Affinitätseliminierungssystem)

• mRP für eine hohe Proteinrückgewinnung

Agilent besitzt eine über 40-jährige Erfahrung auf dem Gebiet
der Chromatographie und wir bieten eine 90 tägige Garantie
ab Leiferdatum für unsere Agilent-Säulen.

Weitere Informationen zu Agilent BioHPLC-Säulen
erhalten Sie online unter

www.agilent.com/chem/BioHPLC

Oder rufen Sie uns gebührenfrei an unter: 1-800-227-9770, Option 3,
dann erneut Option 3

(in den USA und in Kanada)

In anderen Ländern wenden Sie sich bitte an Ihre lokale
Agilent-Vertretung oder Ihren autorisierten Agilent-Fachhändler.

Agilent BioHPLC-Säulen

Weitere Informationen

Die Informationen, Beschreibungen und die technischen Daten
in dieser Veröffentlichung können jederzeit ohne vorherige
Ankündigung geändert werden.

© Agilent Technologies, Inc. 2010
Gedruckt in den USA am 19. März 2010
5990-5195DEE