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PRV
PRV
PRVPRV
操作手冊
操作手冊
操作手冊操作手冊
产品编号
产品编号:
产品编号产品编号
: V03
V03----01
: :
V03V03
01----1130
1130
0101
11301130
一步法猪伪狂犬病毒 PCR
检测临床样本和环境样本
包括 50 个扩增反应所需的试剂
修订
修订 1111
修订修订
2010
2010 年年年年 1111 月月月月
20102010
海康生命科技有限公司
海康生命科技有限公司
海康生命科技有限公司海康生命科技有限公司
请在使用前通读操作手册
1.
1. 试剂盒组成
试剂盒组成
1.1.
试剂盒组成试剂盒组成
￭
2 x 500 μl PRV 反应试剂 (Mastermix; -20oC 保存)
￭
2 x 25 μl 阳性对照 (Positive Control; -20oC 保存)
￭
1 x 25 μl
Taq
酶 (
Taq
Polymerase; -20oC 保存)
保存条件
保存条件
保存条件保存条件
试剂需保存在零下 20oC。使用前在冰上溶解各试剂并充分混合，不要
旋涡振荡含酶的反应试剂。
注意
注意
注意注意
反复冻融试剂可能降低试剂盒灵敏度。请按你检测的频密度将反应试剂
以适当体积分管保存，以避免反复冻融。
2.
2. 操作程序
操作程序
2.2.
操作程序操作程序
反应
反应试剂
试剂
反应反应
试剂试剂
1. 实验中除从样本中获得的 DNA 模板外，我们还建议设置阳性和阴
性（水）对照
2. 按照下表准备扩增反应试剂：
反应组分
反应组分
反应组分反应组分
每个反应体积
每个反应体积
每个反应体积每个反应体积
反应试剂 19.5 μl
Taq
酶 0.5μl
样品 DNA 5 μl
总体积 25 μl
注意:
￭
实验时 DNA 应放在冰上。
￭
阳性对照建议加 5 μl 试剂盒提供的阳性对照。
￭
建议 PCR 过程中检测样本设置重复，以便得到可靠的实验结果。
￭
为了验证阴性实验结果不是由于样本中存有 PCR 抑制物而导致
PCR 呈 阴性反 应，我们 建 议实 验 过程 中 设置 spiking 对 照
*(spiking control)：在测试样本中加 1 μl 的阳性对照作为 spiking
对照，同时进行 PCR 反应。
PCR 循环:
1 个循环 95oC 10 分钟
40 个循环 95oC 30 秒
61.5oC 30 秒
72oC 30 秒
3.
3. 实验数据分析
实验数据分析
3.3.
实验数据分析实验数据分析
PCR 的产物需要通过琼脂糖凝胶电泳检测。
产物长度 : 194 b.p.
****Spiking
Spiking 对照
Spiking Spiking
对照
对照对照
阴性的实验结果有几个可能性：1. 样本中不存在目的片段；2. 样本中
目的片段的量低于检测值；3. 样本中存有 PCR 抑制物。实验过程中
设计 spiking 对照 (spiking control) 是为了确定没有发生 PCR 抑制。
如果样本中加了阳性对照以后得出阴性结果，说明样本中存在 PCR 抑
制物，那么此次阴性的实验结果就不能作为正确的结果，需要重新开始
样本核酸的提取和 PCR 扩增。
如果您需要详细的资料，请与海康生命科技有限公司的技术支持联系。
4.
4. 技术支持
技术支持
4.4.
技术支持技术支持
在使用试剂盒过程中，如阁下有任何技术查询，在办公时间内可致电：
中国大陆地区 其它国家/地区
电话： +（86）10-5802 2828 +（852）2111 2123
周一至五
09:00-17:45 09:00-17:30 办公
时间 周六： ￚ 09:00-13:00
工作日外的时间可以选择电话留言，或发传真、电邮与我们的技术人员
联系。
传真号码： +（86）10-5802 2500（中国大陆地区）
+（852）2111 9762（其它国家/地区）
电邮地址: [email protected]
公司网址： http://www.haikanglife.com
5.
5. 担保和责任
担保和责任
5.5.
担保和责任担保和责任
海康生命科技有限公司担保当使用方遵循以下条款时，本公司生产的产品原料和工艺不存在任何质量问题：1.产
品在出货日期一年或更短时间内使用，或在产品外包装上注明的有效期内使用；2.产品储存条件完全符合技术指
导和（或）包装上的说明；3.产品使用依照使用说明进行。海康生命科技有限公司发布的操作手册是指导产品购
买者的唯一指定使用说明。每位产品购买者务必确保所获得的操作手册与其购买的产品配套。除此之外，海康生
命科技有限公司不做其它明确或隐含的担保，如其它商业性或特殊用途。
前述担保的相关条款中，海康生命科技有限公司的唯一责任是：仅当购买者发现在遵循担保条款的情况下产品存
在原料或生产工艺上的质量问题，并且及时通知海康生命科技有限公司后，公司将视情况而定，替换有缺陷的产
品，或部分或全部退购物款。海康生命科技有限公司不对购买者或产品使用人的任何因产品缺陷、间接破坏而导
致经济损失和财产损失负责。
注意
注意：：：：
注意注意
PCR技术采用罗氏公司（F. Hoffman-La Roche, Inc.）的美国专利技术。采用PCR技术需要获得许可，未经授权
不得使用罗氏公司的任何专利技术。
修订 1 (2010 年 1 月) | V03-01-1130 | 中文版本
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