TOYOBO LGK-100 User Manual

-DNA Ligation Kit-

Ligation high

(Code No.:LGK-100)

08-03

使用说明书

科研用

TOYOBO CO., LTD. Life Science Department

OSAKA JAPAN

目 录

[1] 前言.........................................................................................................................1

[2] 操作程序.................................................................................................................1

1．使用方法 ..............................................................................................................1

2．进行高效连接 ......................................................................................................1

[3] LIGATION HIGH的特征*1................................................................................2

1．优良的连接反应效率 ..........................................................................................2

2．少量液体便可进行反应 ......................................................................................2

3．优良的稳定性 ......................................................................................................2

[4] 实例.......................................................................................................................3

1．插入连接 ..............................................................................................................3

2． LINKER连接 ...........................................................................................................4

3．噬菌体连接 ..........................................................................................................5

4．通过电泳进行确认 ..............................................................................................6

5．盐浓度的影响 ......................................................................................................7

[5] 相关产品一览表.....................................................................................................8

【 注意 】

本试剂盒包含的试剂均为研究用试剂，请不要当作诊断和临床试剂使用。

在本试剂盒使用过程中，请务必严格遵守实验室的各项注意事项，注意安全。

2

[1] 前言

DNA 片段的连接反应是在遗传基因操作实验中的常用操作。在以往的连接

反应中，要根据不同的底物设置不同的条件，还要分别添加各自不同的反应组成

成分，比较复杂麻烦。另外，在进行插入连接时，要得到较高的转化效率也十分
困难。
因此，东洋纺公司为了解决此类问题，开发了操作简便而高效的试剂盒。本

试剂盒的反应液中包括了所有连接反应所需要的试剂，适用于多种类型的连接反
应。另外，本说明书介绍了使用 Ligation high 时的标准结果。

[2] 操作程序

1．使用方法

·请将本品保存在-20℃以下环境中。

·在冰上使 Ligation high 融解。将其放置在冰上 5-10 分钟便会自然融解。

·配制准备连接用的 DNA 溶液。

·取 DNA 溶液加入等量至半量的 Ligation high，混匀。

·在 16℃下反应 30 分钟。

·反应完成后，其反应液可以直接使用于转化。

2．进行高效连接

·连接效率较低时，使用乙醇沉淀等提纯 DNA。

·要控制反应液量时，可减少 DNA 液体的使用量，和相当于其半量的 Ligation
high 进行混合。(参照第二页)

·注意在活性细胞中添加大量的反应液会降低转化的效率。需要添加大量反应
液时，要先用乙醇沉淀等将 DNA 进行浓缩。

·连接效率受盐浓度的影响。要进行高效率的连接反应时，先用不含盐的TE

buffer*1将DNA溶解后再进行连接反应。(参照第 7 页)

*1

10mM Tris-HCI, pH8.0/1mM EDTA

1

http://www.bio-toyobo.cn

东洋纺（上海）生物科技有限公司

稳

性

[3] Ligation high的特征

*1

1．优良的连接反应效率

和单独使用 T4 DNA Ligase 相比能获得 50 倍以上的效率。

2．少量液体便可进行反应

将等量到半量的 Ligation high 和 DNA 溶液混合使用。

图 1 体积比的不同(DNA 溶液:Ligation high)导致的转换效率的不同

3．优良的稳定性

即使反复进行 50 次冻结和融解仍然未见连接效率下降。

定

图 2 冻结融解对转化效率的影响

*1

本页的实验结果全部是自身连接的结果。自身连接使用和第 7 页相同(用TE buffer溶解)的

方法。

垂询电话：[phone]

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