Page 1
TECHLAB® C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE
®
Page 2
Page 3
TECHLAB® C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE
ENGLISH p. 3
A Rapid Membrane Enzyme Immunoassay for the Simultaneous Detection of Clostridium difcile
Glutamate Dehydrogenase Antigen and Toxins A and B in Fecal Specimens
Catalog No. T30525C (25 Tests) or T30550C (50 Tests)
For Laboratory Use Only. Not intended for near patient or self-testing.
ESPAÑOL pág. 9
Inmunoensayo enzimático rápido de membrana para la detección simultánea del antígeno glutamato
deshidrogenasa de Clostridium difcile y de toxinas A y B en muestras fecales
N.º de catálogo T30525C (25 ensayos) o T30550C (50 ensayos)
Uso exclusivo en laboratorios. No apto para pruebas de cabecera o autodiagnóstico.
DEUTSCH s. 15
Ein Membranenzymimmunoassay-Schnelltest für den gleichzeitigen Nachweis des Clostridium
difcile-Antigens Glutamatdehydrogenase sowie Toxin A und B in Stuhlproben
Katalog-Nr. T30525C (25 Tests) bzw. T30550C (50 Tests)
Nur für den Laborgebrauch. Nicht für patientennahe oder Selbsttests bestimmt.
FRANCAISE p. 21
Dosage immunoenzymatique membranaire rapide pour la détection simultanée de l’antigène
glutamate déshydrogénase Clostridium difcile et des toxines A et B dans les échantillons deselles
Numéro de Catalogue T30525C (25 Tests) ou T30550C (50 Tests)
Réservé à un usage en laboratoire. Non destiné aux autotests ou tests à proximité des patients.
ČEŠTINA str. 27
Rychlá membránová enzymová imunoanalýza pro současnou detekci antigenu glutamát
dehydrogenázy a toxinů A a B Clostridium difcile ve vzorcích stolice
Katalogové číslo T30525C (25 testy) nebo T30550C (50 testů)
Pouze pro použití v laboratoři. Není určeno k testování v blízkosti pacienta ani k samotestování.
DANSK s. 33
En hurtig membran-enzym-immunoassay til påvisning af Clostridium difcile-antigenet
glutamatdehydrogenase samt toksin A og B i en enkelt reaktionsbrønd.
Katalog nr. T30525C (25 test) eller T30550C (50 test)
Kun til laboratoriebrug. Ikke beregnet til test i nærheden af patienten eller til selvtest.
ΕΛΛΗΝΙΚΑ σελ. 39
Μια ταχεία ανάλυση ενζυμικού ανοσοπροσδιορισμού σε μεμβράνη για την ταυτόχρονη ανίχνευση του
αντιγόνου «γλουταμικής δεσυδρογονάσης» του Clostridium difcile και των τοξινών A και B σε δείγματα
κοπράνων
Αρ. καταλόγου T30525C (25 αναλύσεις) ή T30550C (50 αναλύσεις)
Μόνο για εργαστηριακή χρήση. Δεν προορίζεται για διάγνωση κοντά σε ασθενείς ή για αυτοδιάγνωση.
MAGYAR 45. o.
Gyors membrán enzim immunoassay a Clostridium difcile glutamát-dehidrogenáz antigén, valamint az
A és a B toxin egyidejű kimutatásra székletmintákban
Katalógussz.: T30525C (25 teszt) vagy T30550C (50 teszt)
Csak laboratóriumi felhasználásra. Nem betegközeli laboratóriumi diagnosztikára vagy önellenőrzésre
szolgál.
®
ITALIANO p. 51
Un dosaggio immunoenzimatico rapido a membra per il rilevamento simultaneo dell’antigene
glutammato deidrogenasi e delle tossine A e B di Clostridium difcile in campioni fecali
N. di catalogo T30525C (25 test) o T30550C (50 test)
Solo per uso in laboratorio. Non indicato per test decentrati o eseguiti in autonomia.
NEDERLANDS p. 57
Een snel membraanenzymimmuno-assay voor de gelijktijdige detectie van Clostridium difcileglutamaatdehydrogenase-antigen en de toxinen A en B in fecale monsters
Catalogusnr. T30525C (25 testen) of T30550C (50 testen)
Alleen voor gebruik in het laboratorium. Niet bestemd voor gebruik nabij de patiënt of zelftests.
NORSK s. 63
En hurtig membranenzymimmunanalyse for samtidig påvisning av Clostridium difcile
glutamatdehydrogenase-antigen og toksin A og B i avføringsprøver
Katalognr. T30525C (25 tester) eller T30550C (50 tester)
Kun til laboratoriebruk. Ikke ment for å være i nærheten av pasient eller for selvtesting.
SVENSKA sid. 69
En snabb immunoanalys av membranenzym för samtidigt påvisande av Clostridium
difcileglutamatdehydrogenasantigen och toxinerna A och B i feacesprover
Katalognr. T30525C (25 tester) eller T30550C (50 tester)
Endast för användning i laboratorie. Ej avsedd för nära patient eller självtestning.
TÜRKÇE syf. 75
Clostridium difcile Glutamat Dehidrojenazı Antijeni ile A ve B Toksinleri Saptaması için Hızlı Bir
Membran Enzimi Bağışıklık Testi
Katalog No. T30525C (25 Test) ya da T30550C (50 Test)
Yalnızca Laboratuvar Kullanımı İçindir. Hasta başında veya kendi kendine teste yönelik değildir.
РУССКИЙ с. 81
Мембранный иммуноферментный экспресс-анализ для одновременного обнаружения антигенов
глутаматдегидрогеназы и токсинов А и В Clostridium difcile в пробах фекалий
№ по каталогу: T30525C (25 тестов) или T30550C (50 тестов)
Исключительно для лабораторного использования. Не предназначено для использования в
окружении пациента или самостоятельных тестов.
PORTUGUÊS p. 87
Um Ensaio Imunoenzimático Rápido de Membrana para a Deteção Simultânea de Clostridium difcile,
Antígeno glutamato desidrogenase e Toxinas A e B em Amostras Fecais Specimens
Catálogo N.º T30525C (25 Testes) ou T30550C (50 Testes)
Apenas para utilização em laboratório. Não se destina a ser utilizado próximo do paciente ou como
autoteste.
U. S. Patent #8,343,726
Page 4
TECHLAB® C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE
INTENDED USE
The TECHLAB® C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE® test is a rapid membrane enzyme immunoassay for
the simultaneous detection of Clostridium difcile glutamate dehydrogenase antigen and toxins A and B
in a single reaction well. The test detects C. difcile antigen, glutamate dehydrogenase, as a screen for
the presence of C. difcile and conrms the presence of toxigenic C. difcile by detecting toxins A and
B in fecal specimens from persons suspected of having C. difcile disease. The test is to be used as an
aid in the diagnosis of C. difcile disease. As with other C. difcile tests, results should be considered in
conjunction with the patient history.
EXPLANATION
After treatment with antibiotics, many patients develop gastrointestinal problems ranging from mild
diarrhea to severe pseudomembranous colitis. Many cases of the milder forms of gastrointestinal illness
and most cases of pseudomembranous colitis are caused by toxigenic strains of Clostridium difcile (1).
This organism is an opportunistic anaerobic bacterium that grows in the intestine once the normal ora
has been altered by the antibiotic. Toxigenic strains of C. difcile carry the genes encoding the toxins
while non-toxigenic strains do not carry the toxin genes. Disease onset is associated with the toxins that
are produced by the toxigenic organism. The clinical symptoms associated with the disease are believed
to be primarily due to toxin A, which is a tissue-damaging enterotoxin (2,3). C. difcile also produces a
second toxin, designated toxin B. Toxin B, which has been referred to as the cytotoxin of the organism, is
the toxin detected by the tissue culture assay currently used by many laboratories. Toxigenic C. difcile
strains produce both toxins, or only toxin B (4-7). The glutamate dehydrogenase of C. difcile is a good
antigen marker for the organism in feces because it is produced in high amounts by all strains, toxigenic
or non-toxigenic (8-10). The antigen can be detected in fecal specimens by using the C. DIFF QUIK CHEK
COMPLETE® test. A positive result in the test for the glutamate dehydrogenase of C. difcile conrms the
presence of this organism in a fecal specimen; a negative result indicates the absence of the organism. A
positive result in the test for toxins A and B conrms the presence of toxigenic C. difcile.
PRINCIPLE OF THE TEST
The C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE® test uses antibodies specic for glutamate dehydrogenase and toxins A and B of C. difcile. The device contains a Reaction Window with three vertical lines of immobilized
antibodies. The antigen test line (“Ag”) contains antibodies against C. difcile glutamate dehydrogenase.
The control line (“C”) is a dotted line that contains anti-horseradish peroxidase (HRP) antibodies. The toxins
A and B test line (“Tox”) contains antibodies against C. difcile toxins A and B. The Conjugate consists of
antibodies to glutamate dehydrogenase and antibodies to toxins A and B coupled to horseradish peroxidase. To perform the test, the sample is added to a tube containing a mixture of Diluent and Conjugate.
The diluted sample-conjugate mixture is added to the Sample Well and the device is allowed to incubate at
room temperature for 15 minutes. During the incubation, any glutamate dehydrogenase and toxins A and
B in the sample bind to the antibody-peroxidase conjugates. The antigen-antibody-conjugate complexes
migrate through a lter pad to a membrane where they are captured by the immobilized glutamate
dehydrogenase-specic and toxins A and B-specic antibodies in the lines. The Reaction Window is
subsequently washed with Wash Buffer, followed by the addition of Substrate. After a 10 minute incubation
period, the “Ag” reaction is examined visually for the appearance of a vertical blue line on the “Ag” side of
the Reaction Window. A blue line indicates a positive test. If the “Ag” is positive, then the “Tox” reaction
should be examined visually for the appearance of a blue line on the “Tox” side of the Reaction Window.
®
EN
A blue line indicates a positive test. A positive “C” reaction, indicated by a vertical dotted blue line under
the “C” portion of the Reaction Window, conrms that the test is working properly and the results are valid.
MATERIALS PROVIDED
Membrane Devices – each pouch contains 1 device
DEV
Diluent (22 mL per bottle) – Buffered protein solution with graduated
dropper assembly (contains 0.05% ProClin® 300)*
H412: Harmful to aquatic life with long lasting effects
Wash Buffer (12 mL per bottle) – Buffered solution with graduated
REAGWASH
dropper assembly (contains 0.05% ProClin® 300)*
H412: Harmful to aquatic life with long lasting effects
Substrate (3.5 mL per bottle) – Solution containing tetramethylbenzidine
REAGSUBS
Conjugate (2.5 mL per bottle) – Antibody specic for glutamate
ENZCONJ
dehydrogenase coupled to horseradish peroxidase and antibodies
specic for toxins A and B coupled to horseradish peroxidase in a
buffered protein solution (contains 0.05% ProClin® 300)*
Positive Control (2 mL) – Antigen in a buffered protein solution
Disposable plastic transfer pipettes – graduated at 25 µL, 100 µL, 200 µL, 300 µL, 400 µL and 500 µL
IVD
*Signal Word: Warning
H317: May cause an allergic skin reaction
P261, P272, P280, P302, P352, P333, P313, P321, P362, P364, P501
MATERIALS AND EQUIPMENT REQUIRED BUT NOT PROVIDED
Small test tubes (e.g., plastic microcentrifuge tubes or glass tubes)
Applicator sticks Timer Vortex mixer
Disposable gloves for handling fecal samples Pipettor and tips
SHELF LIFE AND STORAGE
The expiration date of the kit is given on the label and is assigned 24 months from the date of manufacture.
Expiration dates for each component are listed on the individual labels. The kit should be stored between 2°C
and 8°C. The kit and all components remain stable for listed expiration dates after rst opening when stored
between 2°C and 8°C. Bring all components to room temperature before use. The kit will remain stable at
room temperature for subsequent 8 hour work shifts if returned to refrigerated storage between shifts.
PRECAUTIONS
1. For in vitro diagnostic use. For professional use only.
2. Reagents from different kits should not be mixed or interchanged. Do not use a kit past the
3. Each component in the kit should be inspected for any signs of leakage. Upon arrival, inspect the kit
4. Caps, tips and dropper assemblies are color-coded; do NOT mix or interchange!
For in vitro diagnostic use
expiration date.
to ensure that components are not frozen or warm to the touch due to improper shipping conditions.
3
Page 5
5. Do not freeze the reagents. The kit should be stored between 2°C and 8°C.
25 μL100 μL200 μL300 μL400 μL500 μL
6. The pouch containing the Membrane Device should be at room temperature before opening. Keep
the membrane devices dry before use.
7. Use fecal specimens within 72 hours of collection to obtain optimal results. Specimens that are frozen
may lose activity due to freezing and thawing. If using frozen specimens, thaw at room temperature.
8. Hold reagent bottles vertically to dispense reagents to ensure consistent drop size and correct volume.
9. Specimens and membrane devices should be handled and disposed of as potential biohazards after use.
10. Membrane devices cannot be reused.
11. The test has been optimized for sensitivity and specicity. Alterations of the specied procedure
and/or test conditions may affect the sensitivity and specicity of the test. Do not deviate from the
specied procedure.
12. Be attentive to the total assay time when testing more than one fecal specimen. Add Diluent rst,
and then add the Conjugate to each tube of Diluent. Then add specimen to the tube of Diluent/
Conjugate. Thoroughly mix all of the diluted specimens, and transfer to the Membrane Device.
The 15-minute incubation step begins after the last diluted sample-conjugate mixture has been
transferred to the nal Membrane Device.
13. If the Substrate reagent changes to a dark blue/violet color call technical services for replacement.
14. Fecal specimens may contain potentially infectious agents and should be handled at “Biosafety Level 2”
as recommended in the CDC/NIH Manual “Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories.”
15. Wear disposable gloves when doing the test.
16. The Conjugate, Diluent, and Wash Buffer reagents contain 0.05% ProClin® 300 as a preservative.
Although the concentration is low, ProClin® 300 is known to be harmful (skin sensitization may occur).
If skin sensitization/irritation or rash occurs, get medical advice/attention. Take off contaminated
clothing and wash it before reuse. Handle reagents according to existing regulations for laboratory
safety and good laboratory practice. Safety Data Sheets for this product are available upon request,
contact technical support.
17. Follow your national, regional, and local ordinances accordingly for waste disposal regulations.
18. Report any serious incident to TECHLAB and the competent authority of the EEA Member State in
which the user and/or patient is established.
COLLECTION, HANDLING AND STORAGE OF FECAL SPECIMENS
Acceptable Sample Types Do Not Use
Fresh Fecal Specimens
Frozen Fecal Specimens
Specimens in transport media (Cary Blair, C&S)
Sample Storage
Temperature
Acceptable length
of storage
2°C – 8°C 72 hours Ideal specimens are less than 24 hours old
Frozen ≤ -10°C
4
Longer than
72hours
Fecal specimens in Formalin-based xative
(e.g. sodium acetate formalin, 10% formalin,
merthiolate formalin)
Fecal specimens in alcohol-based xative (e.g.
polyvinyl alcohol)
Comments
Thaw at room temperature. Freezing and thawing multiple times may result in loss of specimen
activity due to toxin degradation.
1. Standard collection and handling procedures used in-house for fecal specimens are appropriate.
2. Fecal specimens should be collected in clean, leak-proof containers.
3. Storing fecal specimens in the Diluent is NOT recommended.
4. Do not allow the fecal specimens to remain in the Diluent/Conjugate mixture for >24 hours.
SPECIMEN PREPARATION
1. Bring all reagents and the required number of devices to room temperature before use. It is
recommended to remove the reagents from the foam insert to reduce the time needed to warm to
room temperature.
2. Set up and label one small test tube for each specimen, and optional external controls as necessary.
3. Using the black graduated dropper assembly, add 750 µL (2nd graduation from the tip) Diluent to
each tube for fecal specimens. For specimens in transport media such as Cary Blair or C&S,
add 650 µL (1st graduation from the tip) of Diluent to the tube.
Sample Type Volume of Diluent
Fresh Fecal Specimens 750 µL (2nd graduation from tip)
Frozen Fecal Specimens (frozen
undiluted)
Specimens in transport media (Cary
Blair, C&S)
External Controls (positive and
negative)
4. Add one drop of Conjugate (red capped bottle) to each tube.
5. Obtain one disposable plastic transfer pipette (supplied with the kit) for each sample – the pipettes
have raised graduations at 25 µL, 100 µL, 200 µL, 300 µL, 400 µL and 500 µL.
750 µL (2nd graduation from tip)
650 µL (1st graduation from the tip)
750 µL (2nd graduation from tip)
750
650
µL
Graduated Transfer Pipette:
6. Mix all specimens thoroughly regardless of consistency- it is essential that the specimens
be evenly suspended before transferring.
Liquid/Semi-solid specimens – pipette 25 µL of specimen with a transfer pipette and dispense
into the Diluent/Conjugate mixture. Use the same transfer pipette to mix the diluted specimen.
Formed/Solid specimens – Care must be taken to add the correct amount of formed feces to
the sample mixture. Mix the specimen thoroughly using a wooden applicator stick and transfer
a small portion (approximately 2 mm diameter, the equivalent of 25 μL) of the specimen into the
Diluent/Conjugate mixture. Emulsify the specimen using the applicator stick.
EN
Page 6
Fecal specimens in Cary Blair or C&S transport media - pipette 100 µL (2nd graduation from tip of
transfer pipette) of sample into the Diluent/Conjugate mixture.
7. Optional External Control Samples:
External Positive Control - add one drop of Positive Control (gray-capped bottle) into the Diluent/
Conjugate mixture.
External Negative Control - add 25 μL Diluent into the Diluent/Conjugate mixture.
NOTE: Transferring too little specimen, or failure to mix and completely suspend the specimen in the Diluent/Conjugate mixture, may result in a false-negative test result. The addition of too much fecal specimen
may cause invalid results due to restricted sample ow.
TEST PROCEDURE
1. Obtain one Membrane Device per specimen, and one device per optional external positive or
negative control as necessary. The foil bags containing the devices should be brought to room
temperature before opening. Use the device immediately after opening. Label each device
appropriately and orient it on a at surface so the “C. DIFF COMPLETE” print is at the bottom of the
device, and the small Sample Well is located in the top right corner of the device.
Membrane Device Sample Well
Reaction Window
2. Close each tube of diluted specimen and mix thoroughly. Proper mixing can be achieved by
vortexing or inverting the tube. Once a patient sample or Positive Control has been diluted in the
Diluent/Conjugate mixture, it may be incubated at room temperature for any period of time up to 24
hours prior to addition to the Membrane Device.
3. Using a new transfer pipette, transfer 500 µL of the diluted sample-conjugate mixture into the
Sample Well (smaller hole in the top right corner of the device) of a Membrane Device, making
certain to expel the liquid sample onto the wicking pad inside of the Membrane Device. When
loading the sample into the sample well, make sure that the tip of the transfer pipette is angled
towards the Reaction Window (larger hole in the middle of the device).
4. Incubate the device at room temperature for 15 minutes – the sample will wick through the device
and a wet area will spread across the Reaction Window.
NOTE FOR SAMPLES THAT FAIL TO MIGRATE:
Occasionally, a diluted sample fails to migrate properly and the Reaction Window does not fully
wet. If the Reaction Window does not appear to be completely wet within 5minutes of adding the
sample to the Sample Well, then add 100 µL (4 drops) of Diluent to the Sample Well and wait an
additional 5 minutes (for a total of 20 minutes).
5. After the incubation, add 300 μL of Wash Buffer to the Reaction Window using the graduated
white dropper assembly. Allow the Wash Buffer to ow through the Reaction Window membrane
and be absorbed completely.
EN
6. Add 2 drops of Substrate (white-capped bottle) to the Reaction Window. Read and record results
visually after 10 minutes.
INTERPRETATION OF RESULTS
1. Interpretation of the test is most reliable when the device is read immediately at the end of the 10
minute reaction period. Read the device at a normal working distance in a well-lit area. View with a
line of vision directly over the device.
2. Observe device for the appearance of blue dots in the middle of the Reaction Window representing
the internal positive control. The appearance of any control dot(s) represents a valid internal control.
The background may appear white to light blue in color. Observe device for the appearance of blue
lines on the “Ag” and “Tox” sides of the Reaction Window representing the test lines. The lines may
appear faint to dark in intensity.
3. Positive Antigen (“Ag”) Result: A positive antigen result may be interpreted at any time between
the addition of Substrate and the 10-minute read time. For a positive antigen result, the blue “Ag”
line and the dotted blue control line below “C” are visible (Figure 1a). The lines may appear faint to
dark in intensity. An obvious partial line is interpreted as a positive result. Do not interpret membrane
discoloration as a positive result. A positive result indicates the presence of C. difcile.
4. Positive Antigen and Toxin (“Tox”) Result: If the antigen result is positive (i.e., a blue “Ag” line
and a dotted blue control below “C” are visible), proceed to the interpretation of the toxin result.
A positive toxin result may be interpreted at any time between the addition of Substrate and the
10-minute read time. For a positive toxin result, a blue “Tox” line is visible (Figure 1b). The line may
appear faint to dark in intensity. An obvious partial line is interpreted as a positive result. Do not
interpret membrane discoloration as a positive result. A positive result indicates the presence of C.
difcile toxin.
5. Negative Result: A test cannot be interpreted as negative or invalid until 10 minutes following the
addition of Substrate. A single blue dotted line is visible in the middle of the Reaction Window,
below the “C” and no test lines are visible on the “Ag” side or the “Tox” side of the Reaction Window,
(Figure 1c). A negative result in the antigen portion indicates C. difcile antigen is either absent in the
specimen or is below the detection limit of the test. A negative result in the toxin portion indicates
C. difcile toxin is either absent in the specimen or is below the detection limit of the test.
6. Invalid Result: No lines are visible in the Reaction Window (Figure 1d). The test result is invalid if a blue
dotted line is not present below the “C” at the completion of the reaction period (Figures 1e, 1f, 1g).
7. Negative Antigen (“Ag”), Positive Toxin (“Tox”): A low percentage of specimens may test negative
for antigen but positive for toxin. These samples should be considered indeterminate and retested
using a fresh specimen (Figure 1h). If sample retests negative for antigen but positive for toxin,
report as positive toxin result.
FIGURE 1: C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE® INTERPRETATION OF RESULTS
Figure 1a
Positive Antigen Result
Positive Antigen and Toxin Result
Figure 1b
Figure 1c
Negative Result
5
Page 7
Figure 1d
Invalid Result
Figure 1g
Invalid Result
QUALITY CONTROL
Internal: A dotted blue line must be visible in the middle of the Reaction Window, below the “C” on
every Membrane Device that is tested. The appearance of the blue control dots conrms that the sample
and reagents were added correctly, that the reagents were active at the time of performing the assay,
and that the sample migrated properly through the Membrane Device. It also conrms the reactivity of
the other reagents associated with the assay. A uniform background in the result area is considered an
internal negative control. If the test has been performed correctly and reagents are working properly, the
background will be white to give a discernible result.
External: The reactivity of the C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE® kit should be veried upon receipt
using the Positive Control and negative control (Diluent). The Positive Control is supplied with the kit
(gray-capped bottle). The Positive Control conrms the reactivity of the other reagents associated with
the assay, and is not intended to ensure precision at the analytical assay cut-off. Diluent is used for the
negative control. Additional tests can be performed with the controls to meet the requirements of local,
state and/or federal regulations and/or accrediting organizations.
LIMITATIONS
1. The C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE® test is used to detect C. difcile antigen and toxin(s) in fecal
specimens. The test conrms the presence of toxin in feces and this information should be taken
under consideration by the physician in light of the clinical history and physical examination of the
patient. The C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE® test will detect levels of toxin A at ≥0.63 ng/mL, toxin
B at ≥0.16 ng/mL, and glutamate dehydrogenase at ≥0.8 ng/mL.
2. Fecal specimens are extremely complex. Optimal results with the C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE® test
are obtained with specimens that are less than 24 hours old. Most undiluted specimens can be stored
between 2°C and 8°C for 72 hours before signicant degradation of the toxin is noted. If specimens are
not assayed within this time period, they may be frozen and thawed. However, repeated freezing and
thawing may result in loss in the immunoreactivity of antigen and toxins A and B.
Figure 1e
Invalid Result
Figure 1h
See #7 for Interpretation
Figure 1f
Invalid Result
3. Some specimens may give weak reactions. This may be due to a number of factors such as the
presence of low levels of antigen and/or toxin, the presence of binding substances, or inactivating
enzymes in the feces. The lines may appear faint to dark in intensity. These specimens should be
reported as positive if any blue line, even a partial line is observed. An obvious partial blue line is
interpreted as a positive result.
4. Fecal specimens preserved in 10% Formalin, merthiolate formalin, sodium acetate formalin, or
polyvinyl alcohol cannot be used.
5. The C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE® test is qualitative. The intensity of the color should not be
interpreted quantitatively.
6. Some isolates of C. sordellii may react in the C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE® test due to the
production of immunologically related toxins (1).
7. Colonization rates of up to 50% have been reported in infants. A high rate has also been reported
in cystic brosis patients (1,3). Results may appear positive in these groups, but should be viewed
in conjunction with the potential to be a colonized carrier.
8. The only non-C. difcile organism to react in the toxin portion of the C. DIFF QUIK CHEK
COMPLETE® test was Clostridium sordellii VPI 9048. This strain produces toxins HT and LT, which
are homologous to toxins A and B, respectively.
9. No data exists on the effects of colonic washes, barium enemas, laxatives, or bowel preparations on
the performance of the C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE® test. All of these procedures can result in
extensive dilution or the presence of additives that may affect test performance.
EXPECTED VALUES
Clostridium difcile disease is primarily a nosocomial disease of elderly patients, and the frequency of
the disease is dependent on factors such as patient population, type of institution and epidemiology. The
reported incidence of C. difcile disease in patients with antibiotic-associated diarrhea may range from
5 to 20%, and hospitals may experience rates lower or higher than this range. It is important to consider
any test results in conjunction with clinical symptoms because some healthy adults and large numbers
of healthy infants (up to 50%) will be positive for C. difcile toxin. In addition, C. difcile carriage rates of
22% to 32% have been reported in cystic brosis patients (1,3). In the studies conducted for this device,
using symptomatic patients, the incidence of toxins A and B was 12% and GDH was 18%. A positive
result in the antigen portion of the C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE® test conrms the presence of C. dif-
cile in a fecal specimen; a negative result indicates the absence of the organism. A positive result in the
toxin portion of the C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE® conrms the presence of C. difcile toxin in a fecal
specimen; a negative result indicates the absence of toxin or insufcient levels of toxin for detection.
PERFORMANCE CHARACTERISTICS
Clinical evaluation of the antigen portion of the C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE® test
The antigen portion of the C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE® test was compared to bacterial culture.
Specimens included in the evaluation were submitted to the clinical laboratories for routine testing. The
bacterial culture test was performed according to in-house procedures. The results are shown in Table 1.
6
EN
Page 8
Table 1. Summary of clinical performance comparing C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE® test to
bacterial culture
n = 1126
C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE
Antigen Line Positive
C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE
Antigen Line Negative
Bacterial Culture
Positive
®
®
201 62
21 842
Bacterial Culture
Negative
95% Condence Limits
Sensitivity 90.5% 85.7 – 93.9
Specicity 93.1% 91.2 – 94.7
Predictive Positive Value 76.4% 70.7 – 81.3
Predictive Negative Value 97.6% 96.2 – 98.4
Correlation 92.6% 91.8 – 93.4
Discrepant samples were evaluated using current ELISA tests for C. difcile glutamate dehydrogenase.
Twenty-nine of the 62 false positive samples were positive by another GDH test, and were
considered true positives.
Thirteen of the 21 false negative samples were negative by another GDH test, and were considered
true negatives.
The antigen portion of the C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE® test was compared to the tissue culture
assay for the detection of C. difcile toxin. Specimens included in the evaluation were submitted to the
clinical laboratories for routine testing. The results are shown in Table 2. The antigen portion of the C.
DIFF QUIK CHEK COMPLETE® test detected 98,7% of the tissue culture-positive samples.
Table 2. Summary of clinical performance comparing C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE® test to
the tissue culture assay
n = 1126
C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE
Antigen Line Positive
C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE
Antigen Line Negative
Tissue Culture
Positive
®
®
154 109
2 861
Tissue Culture
Negative
Clinical evaluation of the toxin portion of the C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE® test
The toxin portion of the C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE® test was compared to the tissue culture assay
at two clinical laboratories and in-house at TECHLAB, Inc. Specimens included in the evaluation were
submitted to the clinical laboratories for routine testing. The results are shown in Table 3.
Table 3. Summary of clinical performance comparing C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE® test to
tissue culture assay
n = 1126
C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE
Toxin Line Positive
C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE
Toxin Line Negative
Tissue Culture
Positive
®
®
137 6
19 964
Tissue Culture
Negative
95% Condence Limits
Sensitivity 87.8% 81.4 - 92.3
Specicity 99.4% 98.6 - 99.7
Predictive Positive Value 95.8% 90.7 - 98.3
Predictive Negative Value 98.1% 96.9 - 98.8
Correlation 97.8% 97.6 - 98.0
Discrepant samples were evaluated using current ELISA tests for toxins A and B.
Five of the 6 false positive samples were positive by ELISA and were considered true positives.
Twelve of the 19 false negative samples were negative by ELISA and were considered true negatives.
EFFECT OF FECAL SPECIMEN CONSISTENCY
Effect of fecal specimen consistency on the C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE® test
The reaction of fecal specimens of varying consistencies in the antigen portion (n=978) and toxin portion
(n=981) of the C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE® test is shown in Tables 4 and 5. The percentages
of positive reactions using either culture assay or the C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE® test were
similar in all three types of fecal specimens (liquid, semi-solid, and solid). All of the specimens were
submitted for C. difcile testing. The basis of the submission was the clinical history of the patient and
not the consistency of the specimen. In the antigen portion, the results show that the C. DIFF QUIK CHEK
COMPLETE® test performed similarly to bacterial culture when testing samples of different consistencies.
In the toxin portion, the results show the C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE® test performed similarly to
the tissue culture assay when testing samples of different consistencies.
EN
7
Page 9
Table 4. Reaction of fecal specimens of varying consistencies in the antigen portion of the
Table 5. Reaction of fecal specimens of varying consistencies in the toxin portion of the
ANALYTICAL SENSITIVITY
The cutoff for the assay was established at concentrations of 0.63 ng/mL for toxin A, 0.16 ng/mL for
toxin B, and 0.8 ng/mL for glutamate dehydrogenase.
REPRODUCIBILITY
The reproducibility of the C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE® test was determined using 12 fecal
specimens that were coded to prevent their identication during testing. Testing was performed at 3
independent laboratories, which tested the samples for 3 days. The samples produced the expected
results 100% of the time.
8
C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE® test
Number of specimens
(n = 978)
Positive by bacterial culture
assay
C. DIFF QUIK CHEK
COMPLETE
Antigen Line Positive
Negative by bacterial
culture assay
C. DIFF QUIK CHEK
COMPLETE
Antigen Line Negative
Positive by tissue culture
assay
C. DIFF QUIK CHEK
COMPLETE
Toxin Line Positive
Negative by tissue culture
assay
C. DIFF QUIK CHEK
COMPLETE
Toxin Line Negative
®
®
C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE® test
Number of specimens
(n = 981)
®
®
Liquid Specimens
(n = 335)
59 (17.6%) 110 (21.1%) 19 (15.7%)
72 (21.5%) 128 (24.5%) 25 (20.7%)
276 (82.4%) 412 (78.9%) 102 (84.3%)
263 (78.5%) 394 (75.5%) 96 (79.3%)
Liquid Specimens
(n = 336)
43 (12.8%) 81 (15.5%) 8 (6.6%)
42 (12.5%) 72 (13.8%) 7 (5.7%)
293 (87.2%) 442 (84.5%) 114 (93.4%)
294 (87.5%) 451 (86.2%) 115 (94.3%)
Semi-solid
Specimens (n = 522)
Semi-solid
Specimens (n = 523)
Solid Specimens
(n = 121)
Solid Specimens
(n = 122)
CROSS REACTIVITY
Fecal specimens inoculated with the following microorganisms to a nal concentration of approximately
108 or higher organisms per mL did not react in the antigen or toxin portion of the C. DIFF QUIK CHEK
COMPLETE® test:
Bacterium or Pathogen: Aeromonas hydrophila, Bacillus cereus, Bacillus subtilis, Bacteroides fragilis,
Campylobacter coli, Campylobacter fetus, Campylobacter jejuni, Candida albicans, Clostridium
butyricum, Clostridium clostridiforme, Clostridium haemolyticum, Clostridium histolyticum, Clostridium
novyi, Clostridium perfringens, Clostridium septicum, Clostridium sordellii (nontoxigenic), Clostridium sporogenes, Enterobacter aerogenes, Enterobacter cloacae, Enterococcus faecalis, Escherichia
coli EIEC, Escherichia coli, Escherichia coli O157:H7, Escherichia coli ETEC, Klebsiella pneumoniae,
Peptostreptococcus anaerobius, Proteus vulgaris, Pseudomonas aeruginosa, Salmonella typhimurium,
Serratia liquifaciens, Shigella dysenteriae, Shigella exneri, Shigella sonnei, Staphylococcus aureus,
Staphylococcus aureus (Cowans), Staphylococcus epidermidis, Vibrio cholerae, Vibrio parahaemolyticus,
Yersinia enterocolitica
The only non-C. difcile organism to react in the toxin portion of the C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE®
test was Clostridium sordellii VPI 9048. This strain produces toxins HT and LT, which are homologous to
toxins A and B, respectively.
The following viruses of 10
COMPLETE® test:
Viruses: Adenovirus types 1, 2, 3, 5, 40, 41, Human coronavirus, Coxsackievirus B2, B3, B4, B5,
Echovirus 9, 11, 18, 22, 33, Enterovirus type 68, 69, 70, 71, Rotavirus.
INTERFERING SUBSTANCES
The following substances (U.S. formulation) had no effect on test results when present in feces in the
concentrations indicated: mucin (3.5% w/v), human blood (40% v/v), barium sulfate (5% w/v), Imodium®
(5% v/v), Kaopectate® (5% v/v), Pepto-Bismol® (5% v/v), steric/palmitic acid (40% w/v), Metronidazole
(0.25% w/v), Vancomycin (0.25% w/v).
3,3
8,25
to 10
TCID units per 0.2 mL did not react in the C. DIFF QUIK CHEK
REACTION OF CLINICAL ISOLATES OBTAINED ON CYCLOSERINECEFOXITIN-FRUCTOSE AGAR (CCFA)
A total of 103 C. difcile clinical isolates, obtained by anaerobic bacterial culture on CCFA after 3 days
at 37°C, were tested in the C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE® test. For the analysis, individual colonies
were picked and suspended in Diluent as recommended for fecal specimens. All 103 isolates gave a
positive antigen reaction in the test.
Seventy of the 103 isolates (68%) were from fecal specimens that were positive for C. difcile toxin
by tissue culture assay. Of these, 56 (80%) gave a positive toxin reaction when screened following
anaerobic growth on CCFA for 3 days at 37°C.
PRODUCT QUALITY GUARANTEE
Subject to legally stipulated consumer rights, this guarantee applies to the TECHLAB product, as long
as the product has not been violated or tampered with. For the product to perform at its best, it is
necessary that the consumer follow the Precautions, Limitations, and Test Procedure in the product
Instructions for Use. Before being released for sale, each batch of the product undergoes specic tests,
which are repeated periodically until the expiration date indicated on the label. Certicates of Analysis for
each batch can be requested from Customer Service. Technical issues can be addressed by Technical
Service. Any problems that prevent the product from performing well, which are proven to be due to
manufacturing defects, will be resolved at no cost to the customer, as provided by law.
EN
Page 10
TECHLAB® C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE
USO PREVISTO
El test TECHLAB® C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE® es un enzimoinmunoensayo rápido de membrana
para la detección simultánea del antígeno glutamato deshidrogenasa de Clostridium difcile y de toxinas
A y B en un mismo pocillo de reacción. El test detecta el antígeno de C. difcile, la glutamato deshidrogenasa, como criba para detectar la presencia de C. difcile y conrma la presencia de C. difcile toxigénica a través de la detección de las toxinas A y B en muestras fecales de personas sospechosas de
padecer una enfermedad causada por C. difcile. El test debe utilizarse como ayuda para el diagnóstico
de la enfermedad causada por C. difcile. Como ocurre con otros tests para C. difcile, los resultados
deben evaluarse siempre junto con los antecedentes del paciente.
FUNDAMENTO
Después del tratamiento con antibióticos, muchos pacientes sufren problemas gastrointestinales que
varían entre la diarrea leve y la colitis pseudomembranosa grave. Gran parte de los casos más leves de
enfermedad gastrointestinal y la mayoría de los casos de colitis pseudomembranosa están causados
por cepas toxigénicas de Clostridium difcile (1). Este microorganismo es una bacteria anaerobia
oportunista que crece en el intestino cuando la ora normal es alterada por un antibiótico. Las cepas
toxigénicas de C. difcile son portadoras de los genes que codican las toxinas mientras que las cepas
no toxigénicas no contienen estos genes de toxinas. La aparición de la enfermedad está asociada a las
toxinas producidas por el microorganismo toxigénico. Se cree que los síntomas clínicos asociados a
la enfermedad están causados principalmente por la toxina A, una enterotoxina que lesiona los tejidos
(2,3). C. difcile también produce una segunda toxina, denominada toxina B. La toxina B, mencionada
como la citotoxina del microorganismo, se detecta mediante los análisis de cultivos tisulares que se
utilizan actualmente en numerosos laboratorios. Las cepas toxigénicas de C. difcile producen ambas
toxinas o sólo la toxina B (4-7). La glutamato deshidrogenasa de C. difcile es un buen marcador
antigénico del microorganismo en las heces, porque lo producen en grandes cantidades tanto las cepas
toxigénicas como las no toxigénicas (8-10). El antígeno puede detectarse en las muestras fecales con el
test C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE®. Un resultado positivo del test para la glutamato deshidrogenasa
de C. difcile conrma la presencia de este microorganismo en una muestra fecal, mientras que un
resultado negativo indica la ausencia del microorganismo. A su vez, un resultado positivo en el ensayo
para las toxinas A y B conrma la presencia de C. difcile toxigénica.
PRINCIPIO DE LA PRUEBA
El test C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE® utiliza anticuerpos especícos frente a la glutamato deshidrogenasa y las toxinas A y B de C. difcile. El dispositivo contiene una ventana de reacción con tres
líneas verticales con anticuerpos inmovilizados. La línea de antígeno (“Ag”) del test contiene anticuerpos
frente a la glutamato deshidrogenasa de C. difcile. La línea de control (“C”) es una línea de puntos que
contiene anticuerpos anti-peroxidasa de rábano picante (HRP). La línea de toxinas A y B (“Tox”) del
test contiene anticuerpos frente a las toxinas A y B de C. difcile. El conjugado consiste en anticuerpos
frente a la glutamato deshidrogenasa y anticuerpos frente a las toxinas A y B unidos a la peroxidasa de
rábano. Para realizar el test, la muestra se añade a un tubo que contiene una mezcla de diluyente y con-
jugado. La mezcla muestra-conjugado diluida se añade al pocillo de muestra y el dispositivo se incuba
a temperatura ambiente durante 15 minutos. Durante la incubación, cualquier cantidad de glutamato
deshidrogenasa y de toxinas A y B presente en la muestra se une a los conjugados anticuerpo-peroxidasa. Los complejos antígeno-anticuerpo-conjugado migran a través de un ltro almohadillado a una
membrana donde los captan los anticuerpos especícos de la glutamato deshidrogenasa y las toxinas
A y B inmovilizados en las líneas. A continuación, se lava la ventana de reacción con tampón de lavado,
seguido por la adición de sustrato. Tras una incubación de 10 minutos, se comprueba visualmente en
la reacción “Ag” la aparición de una línea azul vertical en el lado “Ag” de la ventana de reacción. La presencia de una línea azul indica un resultado positivo. Si el “Ag” es positivo, entonces debe comprobarse
®
ES
visualmente en la reacción “Tox” si aparece una línea azul en el lado “Tox” de la ventana de reacción.
La presencia de una línea azul indica un resultado positivo. Una reacción positiva “C”, indicada por una
línea azul de puntos vertical bajo la parte “C” de la ventana de reacción conrma que el test funciona
adecuadamente y que los resultados son válidos.
MATERIALES SUMINISTRADOS
Dispositivos de membrana – cada bolsa contiene 1 dispositivo
DEV
Diluyente (22 ml por frasco) – Solución tamponada proteínica con
cuentagotas graduado (contiene ProClin® 300 al 0,05%)*
H412: Nocivo para los organismos acuáticos, con efectos nocivos duraderos
Tampón de lavado (12 ml por frasco) – Solución tamponada con
REAGWASH
cuentagotas graduado (contiene ProClin® 300 al 0,05%)*
H412: Nocivo para los organismos acuáticos, con efectos nocivos duraderos
Sustrato (3,5 ml por frasco) – Solución con tetrametilbenzidina
REAGSUBS
Conjugado (2,5 ml por frasco) – Anticuerpo especíco para la glutamato
ENZCONJ
deshidrogenasa unido a peroxidasa de rábano picante y anticuerpos especícos
para las toxinas A y B unidos a peroxidasa de rábano picante en una
solución tamponada proteínica (contiene ProClin® 300 al 0,05 %)*
Control positivo (2 ml) – Antígeno en una solución tamponada proteínica
Pipetas de plástico desechables – graduadas a 25 µl, 100 µl, 200 µl, 300 µl, 400 µl y 500 µl
IVD
*Palabra de advertencia: Advertencia
H317: Puede provocar una reacción alérgica en la piel.
P261, P272, P280, P302, P352, P333, P313, P321, P362, P364, P501
MATERIALES Y EQUIPAMIENTO NECESARIOS NO SUMINISTRADOS
Tubos de ensayo pequeños (p. ej., tubos de plástico de microcentrífuga o tubos de vidrio)
Varillas aplicadoras Cronómetro Mezclador de tipo vórtex
Guantes desechables para manipular las muestras fecales Pipeta y puntas de pipeta
PERÍODO DE VALIDEZ Y CONSERVACIÓN
La fecha de caducidad del kit se indica en la etiqueta y corresponde a 24 meses a partir de la fecha
de fabricación. Las fechas de caducidad de los componentes se indican en sus correspondientes
etiquetas. El kit debe conservarse a una temperatura entre 2°C y 8°C. El kit y todos los componentes
son estables una vez abiertos hasta las fechas de caducidad indicadas si se conservan entre 2°C y
8°C. Deje que todos los componentes alcancen la temperatura ambiente antes de su uso. El kit es
estable a temperatura ambiente durante turnos seguidos de 8 horas si se vuelve a conservar refrigerado
entre los turnos.
PRECAUCIONES
1. Para uso diagnóstico in vitro. Exclusivamente para uso profesional.
2. No deben mezclarse ni intercambiarse reactivos de kits diferentes. No utilice los kits después de
3. Cada componente del kit debe inspeccionarse por cualquier posible signo de fugas. A su recepción,
4. Los tapones, las puntas y los cuentagotas están codicados con colores y NO deben mezclarse.
Para uso diagnóstico in vitro
la fecha de caducidad.
se inspeccionará el kit para comprobar que los componentes no están congelados ni calientes al
tacto debido a condiciones de envío inadecuadas.
9
Page 11
5. No congele los reactivos. El kit debe conservarse a una temperatura entre 2 ºC y 8 ºC.
25 μL100 μL200 μL300 μL400 μL500 μL
6. La bolsa que contiene el dispositivo de membrana debe estar a temperatura ambiente antes de
abrirse. Mantenga secos los dispositivos de membrana antes de su uso.
7. Para obtener unos resultados óptimos las muestras fecales deben analizarse en un plazo no
superior a 72 horas desde su recogida. Las muestras congeladas pueden perder su actividad
como consecuencia de los procesos de congelación y descongelación. Si se utilizan muestras
congeladas, descongele a temperatura ambiente.
8. Cuando añada los reactivos, sujete los frascos de los reactivos en posición vertical con el n de
asegurar que el tamaño de las gotas sea consistente y que el volumen sea correcto.
9. Las muestras y los dispositivos de membrana deben manipularse y eliminarse después del uso
como materiales biológicos potencialmente peligrosos.
10. Los dispositivos de membrana no pueden volver a utilizarse.
11. La prueba se ha optimizado para mejorar la sensibilidad y la especicidad. Las alteraciones del
procedimiento especicado y/o de las condiciones de la prueba pueden afectar a su sensibilidad y
especicidad. No se desvíe del procedimiento especicado.
12. Preste atención al tiempo total del análisis cuando realice la prueba con más de una muestra
fecal. Añada primero el diluyente y a continuación añada el conjugado a cada tubo de diluyente.
Después añada la muestra al tubo de diluyente/conjugado. Mezcle bien todas las muestras diluidas
y, a continuación, transéralas al dispositivo de membrana. El paso de incubación de 15 minutos
comienza después de que se haya transferido la última mezcla de muestra-conjugado diluida al
Dispositivo de membrana nal.
13. Si el reactivo del sustrato adquiere un color azul oscuro/violeta, avise al Servicio técnico para su
sustitución.
14. Las muestras fecales pueden contener agentes potencialmente infecciosos y deben manejarse en
un “Nivel de Bioseguridad 2”, tal como se recomienda en el Manual de los CDC/NIH, “Bioseguridad
en Laboratorios Microbiológicos y Biomédicos”.
15. Utilice guantes desechables para realizar la prueba.
16. Los reactivos conjugado, diluyente y tampón de lavado contienen ProClin® 300 al 0,05% como
conservante. Aunque la concentración es baja, se sabe que ProClin® 300 es nocivo (puede
producirse sensibilización cutánea). En caso de irritación/sensibilización o erupción cutánea,
consulte a un médico. Quítese las prendas contaminadas y lávelas antes de volver a usarlas.
Manipule los reactivos de acuerdo con las normas existentes de seguridad de laboratorio y buenas
prácticas de laboratorio. Se dispone de chas de datos de seguridad de este producto bajo pedido;
consulte al servicio técnico.
17. Siga las normas nacionales, regionales y locales para consultar los reglamentos de eliminación
de residuos.
18. Comunique cualquier incidente grave a TECHLAB y a la autoridad competente del estado miembro
del EEE en el que el usuario y/o el paciente esté establecido.
RECOGIDA, MANIPULACIÓN Y ALMACENAMIENTO DE LAS MUESTRAS FECALES
Tipos de muestra aceptables No utilizar
Muestras fecales recientes
Muestras fecales congeladas
Muestras en medios de transporte (Cary Blair, C&S)
Muestras fecales con jación basada en formol
(p. ej., formol acetato sódico, formol al 10%,
formol mertiolato)
Muestras fecales en jación basada en alcohol
(p. ej., alcohol polivinílico)
Almacenamiento
de la muestra
Temperatura
Duración aceptable
del almacenamiento
Comentarios
2 °C – 8 °C 72 horas Las muestras perfectas tienen menos de 24 horas
Descongelar a temperatura ambiente. La realiza-
Congelado a ≤ -10°C Más de 72horas
1. Los procedimientos internos estándar de recogida y manipulación de las muestras fecales
son adecuados.
2. Las muestras fecales deben recogerse en recipientes limpios, a prueba de fugas.
3. NO se recomienda conservar las muestras fecales en el Diluyente.
4. No permita que las muestras fecales permanezcan en la mezcla de diluyente/conjugado
durante más de 24 horas.
PREPARACIÓN DE LAS MUESTRAS
1. Espere hasta que todos los reactivos y el número de dispositivos que sean necesarios se encuentren
a temperatura ambiente antes de su uso. Se recomienda retirar los reactivos de la tira de espuma para
reducir el tiempo necesario para calentarlos a temperatura ambiente.
2. Asigne e identique un tubo de ensayo pequeño para cada muestra así como controles externos
opcionales según sea necesario.
3. Añada 750 µl de diluyente (2ª graduación desde la punta) a cada tubo de muestras fecales utilizando
el cuentagotas graduado negro. En el caso de muestras en medios de transporte como Cary
Blair o C&S, añada 650 µl (1ª graduación desde la punta) de diluyente al tubo.
ción de múltiples ciclos de congelación y descongelación puede provocar la pérdida de actividad de
la muestra debida a la degradación de la toxina.
Tipo de muestra Volumen de diluyente
Muestras fecales recientes 750 µl (2ª graduación desde la punta)
Muestras fecales congeladas (congeladas sin diluir)
Muestras en medios de transporte
(Cary Blair, C&S)
Controles externos (positivos y
negativos)
4. Añada una gota de conjugado (frasco con tapón rojo) a cada tubo.
5. Utilice una pipeta de plástico desechable (suministrada con el kit) para cada muestra – las pipetas
tienen graduaciones a 25 µl, 100 µl, 200 µl, 300 µl, 400 µl y 500 µl.
750 µl (2ª graduación desde la punta)
650 µl (1ª graduación desde la punta)
750 µl (2ª graduación desde la punta)
750
650
µL
Pipeta graduada:
10
ES
Page 12
6. Mezcle bien todas las muestras independientemente de su consistencia ya que es muy
importante obtener una suspensión homogénea de las muestras antes de transferirlas.
Muestras líquidas/semisólidas – Pipetee 25 µl de muestra con una pipeta (aquí hemos borrado el
paréntesis) y añádala a la mezcla de diluyente/conjugado. Utilice la misma pipeta para mezclar la
muestra diluida.
Muestras formadas/sólidas – Es preciso tener cuidado para añadir el volumen correcto de heces
formadas a la mezcla de muestra. Mezcle bien la muestra con una varilla aplicadora de madera y
transera una parte pequeña (aproximadamente de 2 mm de diámetro, el equivalente de 25 µl) de
la muestra a la mezcla de diluyente/conjugado. Emulsione la muestra con la varilla aplicadora.
Muestras fecales en medios de transporte Cary Blair o C&S - Pipetee 100 µl (2ª graduación desde
la punta de la pipeta) de muestra a la mezcla de diluyente/conjugado.
7. Muestras opcionales de control externo:
Control positivo externo - Añada una gota de control positivo (frasco con tapón gris) a la mezcla
de diluyente/conjugado.
Control negativo externo - Añada 25 μL de diluyente a la mezcla de diluyente/conjugado.
NOTA: Si se transere una cantidad muy reducida de muestra o si no se mezcla y se suspende completamente la muestra en la mezcla de diluyente/conjugado puede obtenerse un resultado falso negativo en la
prueba. Si se añade una cantidad excesiva de heces, pueden obtenerse resultados no válidos debido al
reducido ujo de la muestra.
PROCEDIMIENTO DEL TEST
1. Obtenga un dispositivo de membrana por muestra y un dispositivo para el control positivo o
negativo externo opcional, según sea necesario. Las bolsas de papel de aluminio que contienen
los dispositivos deben estar a temperatura ambiente antes de proceder a su apertura. Utilice el
dispositivo inmediatamente después de abrir. Identique los dispositivos de forma apropiada y
oriéntelos en una supercie plana de forma que la inscripción “C. DIFF COMPLETE” del dispositivo
se encuentre en el fondo del mismo y el pocillo de muestra pequeño se encuentre en la esquina
superior derecha del dispositivo.
Dispositivo de membrana Pocillo de muestra
Ventana de reacción
2. Cierre cada tubo de muestra diluida y mézclelo bien. Mezcle adecuadamente con vórtex o
invirtiendo el tubo. Una vez diluida la muestra de paciente o el control positivo en la mezcla de
diluyente/conjugado, esta puede incubarse a temperatura ambiente durante cualquier período
de tiempo hasta 24 horas antes de la adición al dispositivo de membrana.
3. Utilice una nueva pipeta, transera 500 µl de la mezcla de muestra-conjugado diluida al pocillo de
muestra (oricio más pequeño en la esquina superior derecha del dispositivo) de un dispositivo de
membrana y asegúrese de que expulsa la muestra líquida en la almohadilla de absorción del interior
del dispositivo de membrana. Cuando cargue la muestra en el pocillo, compruebe que la punta de
la pipeta está angulada hacia la ventana de reacción (oricio mayor en el centro del dispositivo).
4. Incube el dispositivo a temperatura ambiente durante 15 minutos – la muestra se absorberá a
través del dispositivo y el área húmeda se extenderá en la ventana de reacción.
NOTA PARA LAS MUESTRAS QUE NO MIGRAN:
Ocasionalmente, una muestra diluida no migra adecuadamente y la ventana de reacción no se humedece completamente. Si la ventana de reacción no aparece completamente húmeda en el plazo de 5
minutos después de añadir la muestra al pocillo, añada 100 µl (4 gotas) de diluyente al pocillo y espere
otros 5 minutos (para un total de 20 minutos).
5. Después de la incubación, añada 300 µl de solución de tampón de lavado a la ventana de reacción
utilizando el cuentagotas blanco graduado. Deje que la solución de lavado penetre en la membrana
de la ventana de reacción y se absorba completamente.
6. Añada 2 gotas de sustrato (frasco con tapón blanco) a la ventana de reacción. Lea y anote los
resultados observados después de 10 minutos.
INTERPRETACIÓN DE LOS RESULTADOS
1. La interpretación del test es más able cuando se lee el dispositivo inmediatamente después del
periodo de reacción de 10 minutos. Lea el dispositivo a una distancia normal en una zona bien
iluminada. Dirija la mirada a la línea de visión situada directamente sobre el dispositivo.
2. Observe la aparición de puntos azules en el centro de la ventana de reacción que representa el
control positivo interno. La presencia de cualquier punto de control representa un control interno
válido. El fondo puede mostrarse de color blanco a azul claro. Observe la aparición en el dispositivo
de líneas azules en los lados “Ag” y Tox” de la ventana de reacción que representan las líneas de
test. El color de las líneas puede ser débil o intenso.
3. Resultado positivo de antígeno (“Ag”): Un resultado positivo de antígeno puede interpretarse
en cualquier momento entre la adición del sustrato y el tiempo de lectura de 10 minutos. Para que
un resultado de antígeno sea positivo deben ser visibles la línea azul “Ag” y la línea de control de
puntos azules debajo de “C” (Figura 1a). El color de las líneas puede ser débil o intenso. Una línea
parcialmente visible se interpreta como un resultado positivo. No interprete la decoloración de la
membrana como un resultado positivo. Un resultado positivo indica la presencia de C. difcile.
4. Resultado positivo de antígeno y toxina (“Tox”): Si el resultado de antígeno es positivo (es decir,
están visibles la línea azul “Ag” y la línea de control de puntos azules debajo de “C”), pase a
interpretar el resultado de la toxina. Un resultado positivo para la toxina puede interpretarse en
cualquier momento entre la adición del sustrato y el tiempo de lectura de 10 minutos. En caso de
resultado positivo de toxina resulta visible una línea azul “Tox” (Figura 1b). La línea puede tener una
intensidad débil o intensa. Una línea parcialmente visible se interpreta como un resultado positivo.
No interprete la decoloración de la membrana como un resultado positivo. Un resultado positivo
indica la presencia de las toxinas de C. difcile.
5. Resultado negativo: Un test no puede interpretarse como negativo o no válido hasta 10 minutos
después de la adición del sustrato. Se observa una única línea azul de puntos en el centro de la
ventana de reacción, debajo de “C” y no hay líneas de test visibles en el lado “Ag” o en el lado “Tox”
de la ventana de reacción (Figura 1d). Un resultado negativo en la parte de antígeno indica que el
antígeno de C. difcile está ausente en la muestra o está por debajo del límite de detección del test.
Un resultado negativo en la parte de toxina indica que la toxina de C. difcile está ausente en la
muestra o está por debajo del límite de detección del test.
6. Resultado no válido: No hay líneas visibles en la ventana de reacción (Figura 1d). El resultado
del test no es válido si no se encuentra presente una línea de de puntos azules debajo de “C” al
terminar el período de reacción (Figuras 1e, 1f, 1g).
7. Antígeno (“Ag”) negativo, toxina (“Tox”) positiva: Un reducido porcentaje de muestras pueden
dar resultado negativo para el antígeno pero positivo para la toxina. Estas muestras deberán ser
consideradas como indeterminadas y analizadas de nuevo utilizando una muestra fresca (Figura
1h). Si el nuevo análisis da negativo para antígeno pero positivo para toxina, clasifíquelo como un
resultado positivo para toxina.
ES
11
Page 13
FIGURA 1: INTERPRETACIÓN DE LOS RESULTADOS DE C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE
Figura 1a
Resultado positivo de
antígeno
Figura 1d
Resultado no válido
Figura 1g
Resultado no válido
CONTROL DE CALIDAD
Interno: Debe observarse una línea azul de puntos en el centro de la ventana de reacción, debajo de
“C” en cada dispositivo de membrana que se estudie. La aparición de los puntos azules de control
conrma que se han añadido correctamente la muestra y los reactivos, que los reactivos estaban
activos durante la realización del análisis y que la mezcla ha migrado adecuadamente a través del
dispositivo de membrana. Conrma también la reactividad de los otros reactivos asociados al ensayo. Un fondo uniforme en el área de resultados se considera como un control negativo interno. Si el
test se ha realizado adecuadamente y los reactivos funcionan correctamente, el fondo será blanco
para dar un resultado apreciable.
Externo: La reactividad del kit C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE® debe comprobarse al recibir el kit
usando el Control positivo y el control negativo (Diluyente). El control positivo se suministra con el kit
(frasco con tapón gris). El control positivo se utiliza para vericar la reactividad de los demás reactivos del ensayo y su objetivo no es asegurar la precisión del punto de corte del ensayo. El Diluyente
se utiliza para el control negativo. Pueden realizarse tests adicionales con los controles para cumplir
los requisitos administrativos locales, regionales o federales y los de los organismos de acreditación.
Figura 1b
Resultado positivo
de antígeno y toxina
Figura 1e
Resultado no válido
Figura 1h
Ver el punto 7 para la inter-
pretación
Figura 1c
Resultado negativo
Figura 1f
Resultado no válido
®
LIMITACIONES
1. El test C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE® se utiliza para detectar el antígeno y la(s) toxina(s) de
C. difcile en muestras fecales. El test conrma la presencia de toxinas en heces y esta información
deberá ser analizada por el médico junto con la anamnesis y la exploración física del paciente. El test
C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE® detecta niveles de la toxina A a ≥0,63 ng/ml, de la toxina B a ≥0,16
ng/ml y de la glutamato deshidrogenasa a ≥0,8 ng/ml.
2. Las muestras fecales son muy complejas. Los resultados óptimos en el test C. DIFF QUIK CHEK
COMPLETE® se obtienen con muestras recogidas en las 24 horas previas. La mayoría de las
muestras no diluidas pueden conservarse entre 2 y 8 °C durante 72 horas antes de que se produzca
una degradación signicativa de las toxinas. Si las muestras no se pueden analizar en este plazo de
tiempo, se pueden congelar y posteriormente descongelar. Sin embargo, si las muestras se congelan
y descongelan varias veces, puede perderse la inmunorreactividad del antígeno y de las toxinas A y B.
3. En algunas muestras pueden obtenerse reacciones débilmente positivas. Esto puede deberse a
diversos factores como la presencia de niveles bajos de antígeno y/o toxina o a la presencia de
sustancias jadoras o enzimas inactivadoras en las heces. El color de las líneas puede ser débil
o intenso. Estas muestras se deben clasicar como positivas si se ve una línea azul, incluso si es
parcialmente visible. Una línea azul parcialmente visible se interpreta como un resultado positivo
4. No pueden utilizarse muestras fecales conservadas en formol al 10%, formol-mertiolato, formol-
acetato sódico o alcohol polivinílico.
5. El test C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE® es un test cualitativo. La intensidad del color no debe
interpretarse cuantitativamente.
6. Algunos aislamientos de C. sordellii pueden reaccionar en el test C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE®
debido a la producción de toxinas inmunológicamente relacionadas (1).
7. En niños se han descrito índices de colonización de hasta el 50%. Se ha descrito también un elevado
índice de colonización en pacientes con brosis quística (1,3). En estos grupos, los resultados pueden
parecer positivos aunque deben evaluarse teniendo en cuenta la posibilidad de que sean portadores
colonizados.
8. El único microorganismo no de C. difcile que reaccionó en la parte de toxina del test C. DIFF QUIK
CHEK COMPLETE® fue Clostridium sordellii VPI 9048. Esta cepa produce las toxinas HT y LT que son
homólogas a la toxina A y la toxina B, respectivamente.
9. No existen datos sobre los efectos de los lavados de colon, enemas de bario, laxantes o preparados
para colonoscopia en el rendimiento del test C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE®. Todos estos
procedimientos pueden causar una amplia dilución o la presencia de aditivos que pueden afectar
al rendimiento del test.
VALORES ESPERADOS
La enfermedad por Clostridium difcile es sobre todo una enfermedad nosocomial que afecta a pacientes de
edad avanzada y su frecuencia depende de factores como el tipo de paciente, el tipo de institución y factores
epidemiológicos. La incidencia de la enfermedad por C.difcile en pacientes con diarrea asociada al uso de
antibióticos puede variar entre el 5 y 20% y algunos hospitales pueden presentar tasas superiores o inferiores
a este intervalo. Es importante interpretar cualquier resultado junto con los síntomas clínicos, porque en
algunos adultos sanos y un gran número de niños sanos (hasta el 50%) se obtienen resultados positivos para
la toxina de C. difcile. Además, en pacientes con brosis quística se han descrito índices de portadores de
C. difcile de entre el 22% y el 32% (1,3). En los estudios realizados para este dispositivo con pacientes sintomáticos la incidencia de toxinas A y B fue del 12% y la de GDH del 18%. Un resultado positivo en la parte
de antígeno con el test C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE® conrma la presencia de C. difcile en una muestra
fecal, mientras que un resultado negativo indica la ausencia del microorganismo. Un resultado positivo en la
parte de toxina del test C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE® conrma la presencia de la toxina de C. difcile en
una muestra fecal, mientras que un resultado negativo indica la ausencia de la toxina o unos niveles de toxina
insucientes para su detección.
12
ES
Page 14
CARACTERÍSTICAS DE RENDIMIENTO
Evaluación clínica de la parte de antígeno del test C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE
Se comparó la parte de antígeno del test C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE® con un cultivo bacteriano.
Las muestras incluidas en la valoración fueron enviadas a laboratorios clínicos para los análisis de rutina.
El test del cultivo bacteriano se realizó de acuerdo con los procedimientos internos. Los resultados se
muestran en la Tabla 1.
Tabla 1. Resumen del rendimiento clínico en la comparación del test C. DIFF QUIK CHEK
COMPLETE® con el cultivo bacteriano
n = 1126
C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE
Línea de antígeno positiva
C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE
Línea de antígeno negativa
Cultivo bacteriano
®
®
Positivo
201 62
21 842
®
Cultivo bacteriano
Negativo
Límites de conanza
del 95 %
Sensibilidad 90,5% 85,7 – 93,9
Especicidad 93,1% 91,2 – 94,7
Valor predictivo positivo 76,4% 70,7 – 81,3
Valor predictivo negativo 97,6% 96,2 – 98,4
Correlación 92,6% 91,8 – 93,4
Las muestras discrepantes fueron evaluadas utilizando ensayos ELISA actuales para la glutamato
deshidrogenasa de C. difcile.
Veintinueve de las 62 muestras falso positivas dieron positivas con otra prueba GDH y se
consideraron como verdaderas positivas.
Trece de las 21 muestras falso negativas dieron negativas con otra prueba GDH y se consideraron
como verdaderas negativas.
Se comparó la parte de antígeno del test C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE® con el ensayo de cultivo
tisular para detectar la toxina de C. difcile. Las muestras incluidas en la valoración fueron enviadas a
laboratorios clínicos para los análisis de rutina. Los resultados se presentan en la Tabla 2. La parte de
antígeno del test C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE® detectó el 98,7% de las muestras con resultado
positivo en el cultivo tisular.
Tabla 2. Resumen del rendimiento clínico en la comparación del test C. DIFF QUIK CHEK
COMPLETE® con el ensayo de cultivo tisular
n = 1126
C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE
Línea de antígeno positiva
C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE
Línea de antígeno negativa
®
®
Cultivo tisular
Positivo
154 109
2 861
Cultivo tisular
Negativo
Evaluación clínica de la parte de toxina del test C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE
Se comparó la parte de toxina del test C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE® con el ensayo de cultivo tisular
en dos laboratorios clínicos y en un laboratorio interno de TECHLAB, Inc. Las muestras incluidas en la
evaluación se remitieron a los laboratorios clínicos para realizar los análisis rutinarios. Los resultados se
muestran en la Tabla 3.
Tabla 3. Resumen del rendimiento clínico en la comparación del test C. DIFF QUIK CHEK
COMPLETE® con el ensayo de cultivo tisular
n = 1126
C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE
Línea de toxina positiva
C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE
Línea de toxina negativa
®
®
Cultivo tisular
Positivo
137 6
19 964
®
Cultivo tisular
Negativo
Límites de conanza
del 95 %
Sensibilidad 87,8% 81,4 - 92,3
Especicidad 99,4% 98,6 - 99,7
Valor predictivo positivo 95,8% 90,7 - 98,3
Valor predictivo negativo 98,1% 96,9 - 98,8
Correlación 97,8% 97,6 - 98,0
Las muestras discrepantes fueron evaluadas utilizando tests ELISA actuales para toxinas A y B.
Cinco de las 6 muestras falso positivas dieron positivas con ELISA y se consideraron como
verdaderas positivas.
Doce de las 19 muestras falso negativas dieron negativas con ELISA y se consideraron como
verdaderas negativas.
EFECTO DE LA CONSISTENCIA DE LA MUESTRA FECAL
Efecto de la consistencia de la muestra fecal en el test C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE
En las Tablas 4 y 5 se muestra la reacción de las muestras fecales de diferentes consistencias en la parte
de antígeno (n=978) y la parte de toxina (n=981) del test C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE®. El porcentaje
de reacciones positivas tanto en el ensayo de cultivo como en el test C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE®
fue similar en los tres tipos de muestras fecales (líquidas, semi-sólidas y sólidas). Todas las muestras se
remitieron para el análisis de C. difcile en las mismas. El motivo del envío de las muestras para la realización del test era la anamnesis del paciente y no la consistencia de las heces. En la parte de antígeno,
los resultados demuestran que el test C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE® funcionó de forma similar al
cultivo bacteriano cuando se analizaron muestras con consistencias diferentes. En la parte de toxina, los
resultados demuestran que el test C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE® funcionó de forma similar al ensayo
de cultivo tisular cuando se analizaron muestras con consistencias diferentes.
®
ES
13
Page 15
Tabla 4. Reacción de muestras fecales de diferentes consistencias en la parte de antígeno del
Tabla 5. Reacción de muestras fecales de diferentes consistencias en la parte de toxina del
SENSIBILIDAD ANALÍTICA
El corte para la valoración se estableció a concentraciones de 0,63 ng/ml para la toxina A, de 0,16ng/ml
para la toxina B y de 0,8 ng/ml para la glutamato deshidrogenasa.
REPRODUCIBILIDAD
La reproducibilidad del test C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE® se determinó utilizando 12 muestras fecales codicadas para evitar su identicación durante los análisis. El análisis se realizó en 3 laboratorios
independientes que analizaron las muestras durante 3 días. Las muestras produjeron los resultados
esperados en todos los casos.
test C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE
Número de muestras
(n = 978)
Positivas mediante
el ensayo de cultivo
bacteriano
C. DIFF QUIK CHEK
COMPLETE
Línea de antígeno positiva
Negativas mediante
el ensayo de cultivo
bacteriano
C. DIFF QUIK CHEK
COMPLETE
Línea de antígeno negativa
®
®
test C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE
Número de muestras
(n = 981)
Positivas mediante el
ensayo de cultivo tisular
C. DIFF QUIK CHEK
COMPLETE
Línea de toxina positiva
Negativas mediante el
ensayo de cultivo tisular
C. DIFF QUIK CHEK
COMPLETE
Línea de toxina negativa
®
®
Muestras líquidas
(n = 335)
59 (17,6%) 110 (21,1%) 19 (15,7%)
72 (21,5%) 128 (24,5%) 25 (20,7%)
276 (82,4%) 412 (78,9%) 102 (84,3%)
263 (78,5%) 394 (75,5%) 96 (79,3%)
Muestras líquidas
(n = 336)
43 (12,8%) 81 (15,5%) 8 (6,6%)
42 (12,5%) 72 (13,8%) 7 (5,7%)
293 (87,2%) 442 (84,5%) 114 (93,4%)
294 (87,5%) 451 (86,2%) 115 (94,3%)
®
Muestras
semisólidas (n = 522)
®
Muestras
semisólidas (n = 523)
Muestras sólidas
(n = 121)
Muestras sólidas
(n = 122)
REACTIVIDAD CRUZADA
Las muestras fecales inoculadas con los microorganismos que guran a continuación a una concentración
nal de aproximadamente 108 o superior de microorganismos/ml no reaccionaron en la parte de antígeno ni
en la parte de toxina del test C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE®:
Bacterias o patógenos: Aeromonas hydrophila, Bacillus cereus, Bacillus subtilis, Bacteroides fragilis,
Campylobacter coli, Campylobacter fetus, Campylobacter jejuni, Candida albicans, Clostridium butyricum, Clostridium clostridiforme, Clostridium haemolyticum, Clostridium histolyticum, Clostridium novyi,
Clostridium perfringens, Clostridium septicum, Clostridium sordellii (nontoxigénica), Clostridium sporogenes, Enterobacter aerogenes, Enterobacter cloacae, Enterococcus faecalis, Escherichia coli EIEC, Escherichia coli, Escherichia coli O157:H7, Escherichia coli ETEC, Klebsiella pneumoniae, Peptostreptococcus
anaerobius, Proteus vulgaris, Pseudomonas aeruginosa, Salmonella typhimurium, Serratia liquifaciens,
Shigella dysenteriae, Shigella exneri, Shigella sonnei, Staphylococcus aureus, Staphylococcus aureus
(Cowans), Staphylococcus epidermidis, Vibrio cholerae, Vibrio parahaemolyticus, Yersinia enterocolitica
El único microorganismo no de C. difcile que reaccionó en la parte de toxina del test C. DIFF QUIK
CHEK COMPLETE® fue Clostridium sordellii VPI 9048. Esta cepa produce las toxinas HT y LT que son
homólogas a la toxina A y la toxina B, respectivamente.
Los siguientes virus de 10
CHEK COMPLETE®:
Virus: tipos 1, 2, 3, 5, 40 y 41 del adenovirus, coronavirus humano, virus Coxsackie B2, B3, B4, B5, virus
Echo 9, 11, 18, 22, 33, tipos 68, 69, 70 y 71 del enterovirus, rotavirus.
SUSTANCIAS INTERFERENTES
Las siguientes sustancias (formulación de EE. UU.) no inuyeron en los resultados del test cuando se encontraban presentes en las heces en las concentraciones indicadas: mucina (3,5% p/v), sangre humana
(40% v/v), sulfato de bario (5% p/v), Imodium® (5% v/v), Kaopectate® (5% v/v), Pepto-Bismol® (5% v/v),
ácido estérico/ácido palmítico (40% p/v), metronidazol (0,25% p/v) y vancomicina (0,25% p/v).
3,3
8,25
a 10
unidades TCID por 0,2 ml no reaccionaron en el test C. DIFF QUIK
REACCIÓN DE AISLAMIENTOS CLÍNICOS OBTENIDOS EN AGAR DE
CICLOSERINA-CEFOXITINA-FRUCTOSA (CCFA)
En total se analizaron en el test C. DIFF QUIK CHEK COMPLET® 103 aislamientos clínicos de C. difcile
obtenidos mediante cultivo bacteriano anaerobio en CCFA durante 3 días a 37°C. Para el análisis se
recogieron colonias individuales que se suspendieron en diluyente según las recomendaciones para
muestras fecales. Los 103 aislamientos dieron una reacción positiva al antígeno en el test.
Setenta de los 103 aislamientos (68%) procedían de muestras fecales que habían dado positivo para la
toxina de C. difcile en el ensayo de cultivo tisular. De estos, 56 (80%) dieron una reacción positiva a la
toxina cuando se cribaron tras el crecimiento anaerobio en CCFA durante 3 días a 37 °C.
14
ES
Page 16
TECHLAB® C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE
DEV
REAGWASH
REAGSUBS
VERWENDUNGSZWECK
Der TECHLAB® C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE® Test ist ein Membranenzymimmunoassay-Schnelltest
für den gleichzeitigen Nachweis des Clostridium difcile-Antigens Glutamatdehydrogenase sowie Toxin
A und B in einer einzigen Reaktionsvertiefung. Der Test weist das C. Difcile-Antigen Glutamatdehydrogenase als Screening für das Vorhandensein von C. difcile nach und bestätigt das Vorhandensein von
toxigenem C. difcile mittels Nachweis von Toxin A und B in Stuhlproben von Personen mit Verdacht auf
eine C. difcile-assoziierte Erkrankung. Der Test dient als Hilfsmittel bei der Diagnose von C. difcile-assoziierten Erkrankungen. Wie auch bei anderen C. difcile-Tests sind die Ergebnisse gemeinsam mit der
Patientenanamnese zu betrachten.
ERKLÄRUNG
Nach einer Antibiotikabehandlung treten bei vielen Patienten Magen-Darm-Beschwerden auf, die von
leichtem Durchfall bis zu schwerer pseudomembranöser Kolitis reichen. Viele der leichteren Magen-Darm-Erkrankungen sowie die meisten Fälle von pseudomembranöser Kolitis werden von toxigenen Clostridium
difcile-Stämmen verursacht (1). Dieser Organismus ist ein opportunistisches anaerobes Bakterium, das
sich im Darm ansiedelt, sobald die normale Darmora durch das Antibiotikum verändert wird. ToxigeneC.
difcile-Stämme enthalten für die Toxine codierende Gene, während nicht-toxigene Stämme keine Toxingene
enthalten. Der Ausbruch der Krankheit ist mit den vom toxigenen Organismus produzierten Toxinen assoziiert. Man geht davon aus, dass die mit der Erkrankung assoziierten klinischen Symptome hauptsächlich von
Toxin A verursacht werden, einem gewebeschädigenden Enterotoxin (2, 3). C. difcile bildet noch ein zweites
Toxin, das sogenannte Toxin B. Toxin B, als Zytotoxin des Organismus bezeichnet, ist jenes Toxin, das durch
den in vielen Labors eingesetzten Gewebekulturtest nachgewiesen wird. ToxigeneC. difcile -Stämme bilden
entweder beide Toxine oder nur Toxin B (4-7). Die Glutamatdehydrogenase von C. difcile stellt einen guten
Antigenmarker für den Stuhlorganismus dar, weil sie von allen Stämmen, toxigen oder nicht-toxigen, in
großen Mengen produziert wird (8-10). Das Antigen lässt sich mithilfe des C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE®
Tests in Stuhlproben nachweisen. Ein positives Ergebnis beim Test auf C. difcile-Glutamatdehydrogenase
bestätigt, dass dieser Organismus in einer Stuhlprobe vorhanden ist. Ein negatives Testergebnis zeigt an,
dass der Organismus nicht vorhanden ist. Ein positives Ergebnis beim Test auf Toxin A und B bestätigt das
Vorhandensein toxigener C. difcile-Stämme.
TESTPRINZIP
Beim C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE® Test werden für Glutamatdehydrogenase (GLDH) und Toxin A
und B spezische C. difcile-Antikörper eingesetzt. Die Testkarte verfügt über ein Reaktionsfenster mit
drei vertikalen Linien aus immobilisierten Antikörpern. Die Antigentestlinie („Ag“) enthält Antikörper gegen
C. difcile-Glutamatdehydrogenase. Die Kontrolllinie („C“) ist eine gepunktete Linie, die Anti-Meerrettich-Peroxidase (MRP)-Antikörper enthält. Die Toxin A- und B-Testlinie („Tox“) enthält Antikörper gegen
C. difcile-Toxin A und B. Das Konjugat besteht aus Antikörpern gegen Glutamatdehydrogenase und
Antikörpern gegen Toxin A und B, die an Meerrettich-Peroxidase gebunden sind. Zur Durchführung des
Tests wird die Probe einem Reagenzglas mit einer Mischung aus Verdünnungspuffer und Konjugat hinzu-
gefügt. Die verdünnte Proben-Konjugat-Mischung wird in die Probenvertiefung gegeben und die Testkarte
bei Raumtemperatur 15 Minuten inkubiert. Während der Inkubation binden in der Probe vorhandene
Glutamatdehydrogenase sowie Toxin A und B an die Antikörper-Peroxidase-Konjugate. Die Antigen-Antikörper-Konjugat-Komplexe wandern durch ein Filterpad zu einer Membran, wo sie von den immobilisierten Glutamatdehydrogenase-spezischen sowie Toxin A- und B-spezischen Antikörpern der Linien
eingefangen werden. Anschließend wird das Reaktionsfenster mit Waschpuffer gewaschen und Substrat
zugegeben. Nach einer 10-minütigen Inkubationszeit wird die„Ag“-Reaktion mittels Sichtkontrolle auf das
Erscheinen einer vertikalen blauen Linie auf der „Ag“-Seite des Reaktionsfensters untersucht. Eine blaue
Linie weist auf einen positiven Test hin. Ist die „Ag“-Reaktion positiv, so muss die „Tox“-Reaktion mittels
®
DE
Sichtkontrolle auf das Erscheinen einer blauen Linie auf der „Tox“-Seite des Reaktionsfensters untersucht
werden. Eine blaue Linie weist auf einen positiven Test hin. Eine positive „C“-Reaktion, angezeigt durch
eine vertikale gepunktete blaue Linie unter dem „C“-Bereich des Reaktionsfensters, bestätigt, dass der Test
ordnungsgemäß funktioniert und die Ergebnisse gültig sind.
PACKUNGSINHALT
Testkarten – jeder Beutel enthält 1 Testkarte
Verdünnungspuffer (22 ml pro Flasche) – Gepufferte Proteinlösung mit
graduiertem Tropfer (enthält 0,05 % ProClin® 300)*
H412: Schädlich für Wasserorganismen, mit langfristiger Wirkung
Waschpuffer (12 ml pro Flasche) – Gepufferte Lösung mit graduiertem
Tropfer (enthält 0,05 % ProClin® 300)*
H412: Schädlich für Wasserorganismen, mit langfristiger Wirkung
Substrat (3,5 ml pro Flasche) – Lösung mit Tetramethylbenzidin
Konjugat (2,5 ml pro Flasche) – GLDH-spezischer Antikörper, gebunden an
ENZCONJ
Meerrettich-Peroxidase, und Toxin A- und -B-spezischer Antikörper, gebunden
an Meerrettich-Peroxidase, in einer gepufferten Proteinlösung (enthält 0,05 %
ProClin® 300)*
Positive Kontrolle (2 ml)– Antigen in einer gepufferten Proteinlösung
Einweg-Kunststofftransferpipetten – graduiert bei 25 µL, 100 µL, 200 µL, 300 µL, 400 µL und 500 µL
IVD
*Signalwort: Warnung
H317: Kann allergische Hautreaktionen verursachen
P261, P272, P280, P302, P352, P333, P313, P321, P362, P364, P501
ZUSÄTZLICH BENÖTIGTES MATERIAL (NICHT ENTHALTEN)
Kleine Reagenzgläser (z. B. Mikrozentrifugen-Reagenzgläser aus Kunststoff oder Glas)
Applikatorstäbchen Zeitmesser Vortex-Schüttler
Einweghandschuhe zur Handhabung der Stuhlproben Pipettierer und Pipettenspitzen
HALTBARKEIT UND LAGERUNG
Das Verfallsdatum des Testkits ist auf dem Packungsetikett angegeben und beträgt 24Monate ab dem
Herstellungsdatum. Das Verfallsdatum für die einzelnen Bestandteile ist auf den jeweiligen Etiketten
angegeben. Das Kit muss zwischen 2°C und 8°C gelagert werden. Nach Anbruch sind das Testkit und
alle Bestandteile bis zum jeweils angegebenen Verfallsdatum haltbar, wenn sie bei 2°C bis 8°C gelagert
werden. Alle Bestandteile vor Gebrauch Raumtemperatur annehmen lassen. Das Testkit ist für die nachfolgenden 8-Stunden-Arbeitsschichten bei Raumtemperatur stabil, wenn es zwischen den Schichten
wieder kühl gelagert wird.
VORSICHTSMASSNAHMEN
1. In-vitro-Diagnostikum. Nur für den professionellen Gebrauch.
2. Reagenzien aus verschiedenen Kits nicht mischen oder miteinander vertauschen. Verwenden Sie
3. Sämtliche Bestandteile des Kits müssen auf Anzeichen für Undichtigkeit untersucht werden. Bei
Für die in-vitro Diagnostik
das Testkit nicht nach dem Verfallsdatum.
Erhalt des Kits muss sichergestellt werden, dass die Bestandteile nicht wegen unsachgemäßer
Transportbedingungen gefroren oder zu warm sind.
15
Page 17
4. Verschlüsse, Spitzen und Tropfer sind farbkodiert; NICHT vertauschen!
25 μL100 μL200 μL300 μL400 μL500 μL
5. Reagenzien nicht einfrieren. Das Kit muss zwischen 2 °C und 8 °C gelagert werden.
6. Der Beutel mit der Testkarte muss vor dem Öffnen Raumtemperatur angenommen haben. Testkarten
vor Gebrauch trocken lagern.
7. Verwenden Sie Stuhlproben nach Entnahme innerhalb von 72 Stunden, um optimale Ergebnisse
zu erzielen. Gefrorene Proben können aufgrund des Einfrier- und Auftauvorgangs Aktivitätsverluste
aufweisen. Gefrorene Proben bei Raumtemperatur auftauen.
8. Halten Sie die Reagenzaschen bei der Reagenzienausgabe senkrecht, um eine einheitliche
Tropfengröße und korrekte Menge sicherzustellen.
9. Proben und Testkarten nach dem Gebrauch als potenzielle biologische Gefahrstoffe behandeln und
entsorgen.
10. Die Testkarten dürfen nicht wiederverwendet werden.
11. Der Test wurde auf Sensitivität und Spezität optimiert. Abweichungen vom angegebenen Verfahren
und/oder Änderungen der Testbedingungen können die Sensitivität und Spezität des Tests
beeinussen. Halten Sie sich genau an die Anweisungen.
12. Achten Sie beim Testen mehrerer Stuhlproben auf die Gesamttestzeit. Geben Sie zuerst den
Verdünnungspuffer und dann das Konjugat in jedes Reagenzglas mit Verdünnungspuffer hinzu. Geben
Sie hierauf die Probe in das Reagenzglas mit dem Verdünnungspuffer/Konjugat. Mischen Sie die
verdünnten Proben gründlich durch und übertragen Sie diese dann auf die Testkarte. Der 15-minütige
Inkubationsschritt beginnt nach Übertragung der letzten verdünnten Proben-Konjugat-Mischung auf
die letzte Testkarte.
13. Sollte das Substratreagens eine dunkelblaue/violette Färbung annehmen, so wenden Sie sich bitte
an den Kundendienst für einen Ersatz.
14. Stuhlproben können potenzielle Infektionserreger enthalten und sind wie im CDC/NIH-Handbuch
„Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories“ (Biosicherheit in mikrobiologischen und
biomedizinischen Labors) empfohlen nach „Biosicherheitsstufe 2“ zu handhaben.
15. Tragen Sie während der Durchführung des Tests Einweghandschuhe.
16. Das Konjugat, der Verdünnungspuffer und der Waschpuffer enthalten 0,05% ProClin® 300 als
Konservierungsstoff. Auch wenn die Konzentration gering ist, ist ProClin® 300 als schädlich bekannt
(Hautsensibilisierung kann auftreten). Bei Hautsensibilisierung/-reizung ärztlichen Rat einholen/
ärztliche Hilfe hinzuziehen. Kontaminierte Kleidung ausziehen und vor erneutem Tragen waschen.
Reagenzien gemäß vorhandenen Vorschriften für die Laborsicherheit und gute Laborpraxis
behandeln. Sicherheitsdatenblätter für dieses Produkt sind auf Anfrage erhältlich. Wenden Sie sich
an den Kundendienst.
17. Befolgen Sie Ihre nationalen, regionalen und lokalen Verordnungen in Bezug auf die Abfallentsorgung.
18. Schwerwiegende Vorkommnisse sind TECHLAB und der zuständigen Behörde des EWRMitgliedstaates zu melden, in dem der Benutzer und/oder Patienten ansässig sind.
ENTNAHME, HANDHABUNG UND LAGERUNG DER STUHLPROBEN
Akzeptable Probentypen Nicht verwenden
Frische Stuhlproben
Gefrorene Stuhlproben
Proben in Transportmedien (Cary Blair, C&S)
Stuhlproben in Fixiermittel auf Formalinbasis
(z.B. Natriumacetat-Formalin, Formalin 10%,
Merthiolat-Formalin)
Stuhlproben in Fixiermittel auf Alkoholbasis (z.B.
Polyvinylalkohol)
Probenlagerung
Temperatur
2° C – 8° C 72 Stunden
Gefroren bei ≤ -10°C Länger als 72Stunden
1. Für die Entnahme und Handhabung von Stuhlproben sind die üblichen Labormethoden geeignet.
2. Für die Entnahme der Stuhlproben sind saubere, dichte Behälter zu verwenden.
3. Stuhlproben sollten NICHT im Verdünnungspuffergelagert werden.
4. Lassen Sie die Stuhlproben nie länger als 24 Stunden in der Verdünnungspuffer/Konjugat-Mischung.
VORBEREITUNG DER PROBEN
1. Lassen Sie alle Reagenzien und die erforderliche Anzahl von Testkarten vor der Verwendung
Raumtemperatur annehmen. Es empehlt sich, die Reagenzien aus dem Schaumstoffeinsatz zu
nehmen, um die Aufwärmzeit zu verkürzen.
2. Benutzen Sie für jede Stuhlprobe und zusätzliche externe Kontrolle ein eigenes kleines Reagenzglas
und beschriften Sie es.
3. Geben Sie mithilfe des graduierten schwarzen Tropfers 750 µl (2. Markierung von der Spitze weg) Verdünnungspuffer
in jedes Stuhlproben-Reagenzglas. Bei Proben in Transportmedien wie Cary Blair oder C&S geben Sie 650 µl
Verdünnungspuffer (1. Markierung von der Spitze weg) in das Reagenzglas.
Akzeptable Lager-
dauer
Anmerkungen
Optimal sind Proben, die weniger als 24 Stunden
alt sind.
Bei Raumtemperatur auftauen. Mehrmaliges Einfrieren und Auftauen kann zu einem Aktivitätsverlust aufgrund von Toxinverfall führen.
Probentyp Menge Verdünnungspuffer
Frische Stuhlproben 750 µl (2. Markierung von der Spitze weg)
Gefrorene Stuhlproben (gefroren
unverdünnt)
Proben in Transportmedien (Cary
Blair, C&S)
Externe Kontrollen (positive und
negative)
4. Fügen Sie jedem Reagenzglas einen Tropfen Konjugat (Flasche mit rotem Verschluss) hinzu.
5. Verwenden Sie eine Einweg-Kunststoffpipette (im Lieferumfang enthalten) für jede Probe – die
Pipetten sind bei 25 µL, 100 µL, 200 µL, 300 µL, 400 µL und 500 µL gaduiert.
750 µl (2. Markierung von der Spitze weg)
650µl (1. Markierung von der Spitze weg)
750 µl (2. Markierung von der Spitze weg)
750
650
µL
Graduierte Transferpipette:
16
DE
Page 18
6. Mischen Sie alle Proben unabhängig von ihrer Konsistenz gründlich durch – eine
gleichmäßige Suspension der Proben vor dem Übertragen ist unbedingt erforderlich.
Flüssige/Halbfeste Proben – Pipettieren Sie 25 µl Probe mit einer Transferpipette und dispensieren
Sie die Probenmenge in die Verdünnungspuffer/Konjugat-Mischung. Verwenden Sie dieselbe
Transferpipette zum Mischen der verdünnten Probe.
Geformte/Feste Stuhlproben – Achten Sie genau darauf, dass Sie der Probenmischung die korrekte
Stuhlmenge beifügen. Mischen Sie die Probe gründlich mithilfe eines Holzstäbchens durch und
übertragen Sie eine kleine Probenmenge (ca. 2 mm Durchmesser, entspricht der Menge von 25 µl) in
die Verdünnungspuffer/Konjugat-Mischung. Emulgieren Sie die Probe mit dem Applikatorstäbchen.
Proben in Cary Blair oder C&S -Transportmedien - Pipettieren Sie 100 µl (2. Graduierung aus der
Spitze der Transferpipette) Probe in die Verdünnungspuffer/Konjugat-Mischung.
7. Optionale externe Kontrollproben:
Externe positive Kontrolle– Geben Sie einen Tropfen positive Kontrolle (Flasche mit grauem
Verschluss) in die Verdünnungspuffer/Konjugat-Mischung.
Externe negative Kontrolle– Geben Sie 25 µl Verdünnungspuffer in die Verdünnungspuffer/
Konjugat-Mischung.
BITTE BEACHTEN: Ist die übertragene Probenmenge zu gering oder wird die Probe in der Verdünnungspuffer/Konjugat-Mischung nicht ausreichend gemischt und vollständig suspendiert, kann dies zu einem
falsch-negativen Testergebnis führen. Eine zu große Probenmenge kann aufgrund des beeinträchtigten
Probenusses zu ungültigen Ergebnissen führen.
TESTVERFAHREN
1. Nehmen Sie eine Testkarte pro Probe und eine Testkarte für die zusätzliche externe positive oder
negative Kontrolle (optional) zur Hand. Die Folienbeutel mit den Testkarten müssen dem Öffnen
auf Raumtemperatur gebracht werden. Verwenden Sie die Testkarte sofort nach dem Öffnen.
Beschriften Sie jede Karte ordnungemäß und legen Sie diese so auf eine ache Oberäche, dass
sich der Aufdruck „C. DIFF COMPLETE“ unten auf der Karte und die kleine Probenvertiefung in der
rechten oberen Ecke der Karte benden.
Testkarte Probenvertiefung
Reaktionsfenster
2. Verschließen Sie alle Reagenzgläser mit den verdünnten Proben und mischen Sie gründlich. Gründliches
Mischen erzielen Sie mittels Vortexen oder Umdrehen des Reagenzglases. Nach der Verdünnung einer
Patientenprobe oder positiven Kontrolle in der Verdünnungspuffer/Konjugat-Mischung kann diese bei
Raumtemperatur für eine beliebig lange Zeitdauer bis max. 24 Stunden vor dem Übertragen auf die
Testkarte inkubiert werden.
3. Mithilfe einer neuen Transferpipette übertragen Sie 500 µl der verdünnten Proben-Konjugat-
Mischung in die Probenvertiefung (kleineres Loch in der oberen rechten Ecke der Karte) einer
Testkarte. Stellen Sie dabei sicher, dass die üssige Probe auf das Wicking-Pad im Inneren der
Testkarte gelangt. Stellen Sie beim Übertragen der Probe in die Probenvertiefung sicher, dass die
Spitze der Transferpipette auf das Reaktionsfester zeigt (größeres Loch in der Mitte der Testkarte).
DE
4. Inkubieren Sie die Testkarte 15 Minuten bei Raumtemperatur – die Probe sickert durch die Karte und
eine Feuchtstelle breitet sich im Reaktionsfenster aus.
HINWEIS FÜR PROBEN, DIE NICHT MIGRIEREN:
Gelegentlich migriert eine verdünnte Probe nicht richtig und das Reaktionsfenster wird nicht vollständig befeuchtet. Wenn das Reaktionsfenster nicht innerhalb von 5 Minuten nach dem Hinzufügen
der Probe in die Probenvertiefung vollständig feucht erscheint, geben Sie 100 µl (4 Tropfen) Verdünnungspuffer in die Probenvertiefung und warten weitere 5 Minuten (insgesamt 20 Minuten lang).
5. Nach der Inkubation geben Sie 300 µl Waschpuffer in das Reaktionsfenster. Verwenden Sie
dazu den graduierten weißen Tropfer. Warten Sie, bis der Waschpuffer durch die Membran des
Reaktionsfensters geossen und vollständig absorbiert ist.
6. Fügen Sie dem Reaktionsfenster 2 Tropfen Substrat (Flasche mit weißem Verschluss) bei.
Ergebnisse nach 10 Minuten visuell ablesen und aufzeichnen.
AUSWERTUNG DER ERGEBNISSE
1. Die Auswertung des Tests ist am verlässlichsten, wenn die Ergebnisse sofort nach Ende
der zehnminütigen Reaktionszeit abgelesen werden. Lesen Sie die Testkarte bei normalem
Arbeitsabstand und in einer gut beleuchteten Umgebung ab. Folgen Sie einer Sichtlinie direkt über
der Testkarte.
2. Prüfen Sie, ob in der Mitte des Reaktionsfensters blaue Punkte, die sogenannte interne positive
Kontrolle, sichtbar sind. Das Erscheinen einer gepunkteten Kontrolllinie gilt als gültige interne
Kontrolle. Der Hintergrund erscheint weiß bis hellblau. Prüfen Sie, ob blaue Linien auf den „Ag“- und
„Tox“-Seiten des Reaktionsfensters, die sogenannten Testlinien, sichtbar sind. Die Farbintensität
der Linien kann schwach bis stark sein.
3. Positives Ergebnis für Antigen („Ag“): Ein positives Antigen-Ergebnis kann innerhalb des
Zeitraums zwischen der Beigabe des Substrats und der 10-minütigen Ablesezeit ausgewertet
werden. Ein positives Antigen-Ergebnis weist eine sichtbare blaue „Ag“-Linie und eine sichtbare
gepunktete blaue Kontrolllinie unter dem „C“ auf (Abb. 1a). Die Farbintensität der Linien kann
schwach bis stark sein. Eine deutlich sichtbare Teillinie gilt als positives Ergebnis. Interpretieren
Sie eine Membranverfärbung nicht als positives Ergebnis. Ein positives Ergebnis zeigt an, dass C.
difcile vorhanden ist.
4. Positives Ergebnis für Antigen und Toxin („Tox“): Gehen Sie im Falle eines positiven Antigen-
Ergebnisses (d. h. eine blaue „Ag“-Linie und eine gepunktete blaue Kontrolllinie unter dem „C“
sind sichtbar) zur Auswertung des Toxin-Ergebnisses über. Ein positives Ergebnis kann innerhalb
des Zeitraums zwischen der Beigabe des Substrats und der 10-minütigen Ablesezeit interpretiert
werden. Ein positives Toxin-Ergebnis weist eine sichtbare blaue „Tox“-Linie auf (Abb. 1b). Die
Farbintensität der Linie kann schwach bis stark sein. Eine deutliche Teillinie gilt als positives
Ergebnis. Interpretieren Sie eine Membranverfärbung nicht als positives Ergebnis. Ein positives
Ergebnis zeigt an, dass C. difcile-Toxin vorhanden ist.
5. Negatives Ergebnis: Ein Test kann erst frühestens 10 Minuten nach der Beigabe des Substrats als
negativ oder ungültig interpretiert werden. Eine einzelne blaue gepunktete Linie ist in der Mitte des
Reaktionsfensters unter dem „C“ sichtbar und es sind keine Testlinien auf der „Ag“- bzw. „Tox“-Seite des
Reaktionsfensters sichtbar (Abb. 1c). Ein negatives Ergebnis im Antigenbereich zeigt an, dass entweder
kein C. difcile-Antigen in der Probe vorhanden ist oder der Wert unterhalb der Nachweisgrenze des
Tests liegt. Ein negatives Ergebnis im Toxinbereich zeigt an, dass entweder kein C. difcile-Toxin in der
Probe vorhanden ist oder der Wert unterhalb der Nachweisgrenze des Tests liegt.
6. Ungültiges Ergebnis: Es sind keine Linien im Reaktionsfester sichtbar (Abb. 1d). Das Testergebnis
ist ungültig, wenn nach abgeschlossener Reaktion keine blaue gepunktete Linie unter dem „C“
sichtbar ist (Abb. 1e, 1f, 1g).
7. Negatives Ergebnis für Antigen („Ag“), positives Ergebnis für Toxin („Tox“): Ein geringer
Probenanteil liefert möglicherweise ein negatives Ergebnis für Antigen und positives Ergebnis für
Toxin. Diese Proben gelten als unbestimmt und müssen mit einer neuen Stuhlprobe nochmals
getestet werden (Abb. 1h). Wenn die Probe wiederholt negativ für Antigen, jedoch positiv für Toxin
ist, so ist dies als positives Toxinergebnis zu verzeichnen.
17
Page 19
ABBILDUNG 1: C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE® AUSWERTUNG DER ERGEBNISSE
Abbildung 1a
Positives Antigen-Ergebnis
Abbildung 1d
Ungültiges Ergebnis
Abbildung 1g
Ungültiges Ergebnis
QUALITÄTSKONTROLLE
Intern: Auf jeder Testkarte muss nach dem Test eine gepunktete blaue Linie in der Mitte des Reakti-
onsfensters unter dem „C“ sichtbar sein. Die blaue gepunktete Kontrolllinie bestätigt, dass Probe und
Reagenzien korrekt zugegeben wurden, die Reagenzien während des Testverlaufs aktiv waren und eine
korrekte Probenmigration durch die Testkarte stattgefunden hat. Sie bestätigt zudem die Reaktivität der
anderen Reagenzien des Tests. Ein einheitlicher Hintergrund im Ergebnisbereich gilt als interne negative
Kontrolle. Bei korrekt durchgeführtem Test und ordnungsgemäßer Funktion der Reagenzien ist der
Hintergrund weiß, um ein erkennbares Ergebnis zu liefern.
Extern: Die Reaktivität des C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE® Kits muss bei Erhalt anhand der positiven
Kontrolle und der negativen Kontrolle (Verdünnungspuffer) überprüft werden. Die positive Kontrolle
ist im Kit enthalten (Flasche mit grauem Verschluss). Die positive Kontrolle dient zur Überprüfung
der Reaktivität der anderen Testreagenzien und ist nicht zur Bestätigung der Verlässlichkeit beim
analytischen Cut-off des Tests bestimmt. Als negative Kontrolle wird der Verdünnungspuffer verwendet.
Es können auch weitere Tests mit den Kontrollen durchgeführt werden, um die Anforderungen lokaler,
landes- und/oder bundesweiter Vorschriften und/oder von Zertizierungsbehörden zu erfüllen.
Abbildung 1b
Positives Antigen-
und Toxin-Ergebnis
Abbildung 1e
Ungültiges Ergebnis
Abbildung 1h
Siehe Nr. 7 für Auswertung
Abbildung 1c
Negatives Ergebnis
Abbildung 1f
Ungültiges Ergebnis
GRENZEN DES VERFAHRENS
1. Der C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE® Test dient zum Nachweis von C. difcile-Antigen und Toxin(en)
in Stuhlproben. Der Test bestätigt das Vorhandensein von Toxin im Stuhl. Diese Information muss vom
Arzt angesichts der Krankengeschichte und körperlichen Untersuchung des Patienten interpretiert
werden. Der C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE®Test weist Toxin A bei Konzentrationen von ≥0,63 ng/
ml, Toxin B bei Konzentrationen von ≥0,16ng/ml und Glutamatdehydrogenase bei Konzentrationen
von ≥0,8 ng/ml nach.
2. Stuhlproben sind überaus komplex. Optimale Ergebnisse werden beim C. DIFF QUIK CHEK
COMPLETE® Test mit Proben erzielt, die weniger als 24 Stunden alt sind. Die meisten unverdünnten
Proben können bei 2° C - 8° C für 72 Stunden gelagert werden, bevor ein deutlicher Toxinverfall
beobachtet wird. Wenn die Proben nicht innerhalb dieses Zeitraums getestet werden, können
sie eingefroren und später wieder aufgetaut werden. Wiederholtes Einfrieren und Auftauen kann
allerdings zu verminderter Immunreaktivität des Antigens und der Toxine A und B führen.
3. Einige Proben können schwach reagieren. Dies kann auf mehrere Faktoren zurückgeführt werden, wie
etwa geringe Antigen- und/oder Toxinkonzentration, das Vorhandensein bindender Substanzen oder
inaktivierender Enzyme im Stuhl. Die Farbintensität der Linien kann schwach bis stark sein. Diese
Proben sind als positiv aufzuzeichnen, wenn eine blaue Linie oder blaue Teillinie beobachtet wird. Eine
deutliche Teillinie gilt als positives Ergebnis.
4. Stuhlproben, die in 10 % Formalin, Merthiolat-Formalin, Natriumacetat-Formalin oder
Polyvinylalkohol konserviert wurden, dürfen nicht verwendet werden.
5. Der C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE® Test ist qualitativ. Die Farbintensität darf nicht quantitativ
interpretiert werden.
6. Einige Isolate von C. sordellii reagieren möglicherweise im C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE® Test,
da sie immunologisch verwandte Toxine produzieren (1).
7. Bei Kleinkindern wurden Kolonisationsraten von bis zu 50 % beobachtet. Auch bei Mukoviszidose-
Patienten wurde eine hohe Rate beobachtet (1,3). In diesen Gruppen können positive Ergebnisse
auftreten, es sollte jedoch die Möglichkeit in Betracht gezogen werden, dass es sich um einen
kolonisierten Träger handelt.
8. Der einzige nicht-C. difcile-Organismus, der im Toxinbereich des C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE®
Tests reagierte, war Clostridium sordellii VPI 9048. Dieser Stamm produziert HT- und LT-Toxine, die
Toxin A bzw. Toxin B entsprechen.
9. Es liegen keine Daten zur Wirkung von Darmspülungen, Bariumeinläufen, Laxativen oder
Darmpräparationen auf die Leistung des C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE® Tests vor. Alle diese
Verfahren können zu einer signikanten Verdünnung oder dem Vorhandensein von Zusatzstoffen
führen, die sich auf die Testleistung auswirken.
ERWARTUNGSWERTE
Clostridium difcile-Erkrankungen treten vor allem als nosokomiale Infektionen bei älteren Patienten
auf. Die Häugkeit hängt dabei von Faktoren wie der Patientenpopulation, Art der Anstalt und der
Epidemiologie ab. C. difcile-Erkrankungen bei Patienten mit antibiotikabedingter Diarrhoe wurden
mit einer Häugkeit von 5-20 % festgestellt, Krankenhäuser können aber auch geringere oder höhere
Raten aufweisen. Die Testergebnisse müssen stets gemeinsam mit klinischen Symptomen interpretiert
werden, denn einige gesunde Erwachsene sowie viele gesunde Kleinkinder (bis zu 50 %) liefern
ein positives Testergebnis für C. difcile-Toxin. Zudem wurde bei Mukoviszidose-Patienten eine C.
difcile-Trägerrate von 22 - 32 % festgestellt (1,3). In den zu diesem Test durchgeführten Studien mit
symptomatischen Patienten wurden Toxin A und B mit einer Häugkeit von 12% und GLDH mit einer
Häugkeit von 18% festgestellt. Ein positives Ergebnis im Antigenbereich des C. DIFF QUIK CHEK
COMPLETE® Tests bestätigt, dass C. difcile in einer Stuhlprobe vorhanden ist; ein negatives Ergebnis
zeigt an, dass der Organismus nicht vorhanden ist. Ein positives Ergebnis im Toxinbereich des C.
18
DE
Page 20
DIFF QUIK CHEK COMPLETE® bestätigt, dass C. difcile-Toxin in einer Stuhlprobe vorhanden ist;
ein negatives Ergebnis zeigt an, dass entweder kein Toxin vorhanden ist oder die Toxinkonzentration
unterhalb der Nachweisgrenze des Tests liegt.
LEISTUNGSDATEN
Klinische Beurteilung des Antigenbereichs des C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE® Tests
Der Antigenbereich des C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE® Tests wurde mit Bakterienkultur verglichen.
Die dabei untersuchten Proben wurden für Routinetests in die klinischen Labors eingesandt. Die Bakterienkultur wurde nach internen Verfahren durchgeführt. Die Ergebnisse sind in Tabelle 1 dargestellt.
Tabelle 1. Zusammenfassung der klinischen Leistung beim Vergleich des C. DIFF QUIK CHEK
C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE
Antigenlinie positiv
C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE
Antigenlinie negativ
COMPLETE® Tests mit Bakterienkultur
Az = 1126
®
®
Bakterienkultur
Positiv
Bakterienkultur
201 62
21 842
Negativ
95%-Kondenzgrenzen
Sensitivität 90,5% 85,7 – 93,9
Spezität 93,1% 91,2 – 94,7
Positiver Vorhersagewert 76,4% 70,7 – 81,3
Negativer Vorhersagewert 97,6% 96,2 – 98,4
Korrelation 92,6% 91,8 – 93,4
Abweichende Proben wurden unter Verwendung gängiger ELISA-Tests für den Nachweis von
C. difcile-Glutamatdehydrogenase beurteilt.
29 der 62 falsch-positiven Proben lieferten bei einem weiteren GLDH-Test ein positives Ergebnis
und wurden als echt positiv betrachtet.
13 der 21 falsch-negativen Proben lieferten bei einem weiteren GLDH-Test ein negatives Ergebnis
und wurden als echt negativ betrachtet.
Der Antigenbereich des C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE® Tests wurde mit Gewebekultur für den
Nachweis von C. difcile-Toxin verglichen. Die dabei untersuchten Proben wurden für Routinetests in
die klinischen Labors eingesandt. Die Ergebnisse sind in Tabelle 2 dargestellt. Der Antigenbereich des
C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE® Tests wies 98,7% der mit Gewebekultur positiven Proben nach.
Tabelle 2. Zusammenfassung der klinischen Leistung beim Vergleich des C. DIFF QUIK CHEK
C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE
Antigenlinie positiv
C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE
Antigenlinie negativ
Klinische Beurteilung des Toxinbereichs des C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE® Tests
Der Toxinbereich des C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE® Tests wurde mit Gewebekultur in zwei klinischen
Labors sowie intern bei TECHLAB, Inc verglichen. Die dabei untersuchten Proben wurden für Routinetests in die klinischen Labors eingesandt. Die Ergebnisse sind in Tabelle 3 dargestellt.
Tabelle 3. Zusammenfassung der klinischen Leistung beim Vergleich des C. DIFF QUIK CHEK
C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE
Toxinlinie positiv
C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE
Toxinlinie negativ
COMPLETE® Tests mit Gewebekultur
Az = 1126
®
®
COMPLETE® Tests mit Gewebekultur
Az = 1126
®
®
Gewebekultur
Positiv
154 109
2 861
Gewebekultur
Positiv
137 6
19 964
Gewebekultur
Negativ
Gewebekultur
Negativ
95%-Kondenzgrenzen
Sensitivität 87,8% 81,4 - 92,3
Spezität 99,4% 98,6 - 99,7
Positiver Vorhersagewert 95,8% 90,7 - 98,3
Negativer Vorhersagewert 98,1% 96,9 - 98,8
Korrelation 97,8% 97,6 - 98,0
Abweichende Proben wurden unter Verwendung gängiger ELISA-Tests für den Nachweis von
Toxin A und B beurteilt.
5 der 6 falsch-positiven Proben lieferten beim ELISA ein positives Ergebnis und wurden als echt
positiv betrachtet.
12 der 19 falsch-negativen Proben lieferten beim ELISA ein negatives Ergebnis und wurden als
echt negativ betrachtet.
DE
19
Page 21
AUSWIRKUNGEN DER STUHLKONSISTENZ
Auswirkungen der Stuhlkonsistenz auf den C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE® Test
Die Reaktionen der Stuhlproben unterschiedlicher Konsistenz im Antigenbereich (Az. =978) und Toxinbereich (Az. =981) des C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE® Tests sind in Tabelle 4 und 5 dargestellt. Der
Prozentsatz an positiven Reaktionen bei Gewebekultur bzw. dem C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE® Test
war bei allen drei Stuhlprobentypen (üssig, halbfest und fest) ähnlich. Alle Proben wurden zum Testen
auf C. difcile eingesandt. Ob eine Probe getestet wurde oder nicht, hing von der Krankengeschichte des
Patienten, nicht von der Probenkonsistenz ab. Die Ergebnisse des Antigenbereichs zeigen, dass der
C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE® Test und Bakterienkultur beim Testen von Proben mit unterschiedli-
cher Konsistenz eine ähnliche Leistung erbrachten. Die Ergebnisse des Toxinbereichs zeigen, dass der
C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE® Test und Gewebekultur beim Testen von Proben mit unterschiedlicher
Konsistenz eine ähnliche Leistung erbrachten.
Tabelle 4. Reaktion von Stuhlproben unterschiedlicher Konsistenz im Antigen
Anzahl der Proben
Positiv bei Bakterienkultur 59 (17,6%) 110 (21,1%) 19 (15,7%)
C. DIFF QUIK CHEK
COMPLETE
Antigenlinie positiv
Negativ bei Bakterienkultur 276 (82,4%) 412 (78,9%) 102 (84,3%)
C. DIFF QUIK CHEK
COMPLETE
Antigenlinie negativ
Tabelle 5. Reaktion von Stuhlproben unterschiedlicher Konsistenz im Toxinbereich des C. DIFF
Anzahl der Proben
Positiv bei Gewebekultur 43 (12,8%) 81 (15,5%) 8 (6,6%)
C. DIFF QUIK CHEK
COMPLETE
Toxinlinie positiv
Negativ bei Gewebekultur 293 (87,2%) 442 (84,5%) 114 (93,4%)
C. DIFF QUIK CHEK
COMPLETE
Toxinlinie negativ
bereich des C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE® Tests
(Az = 978)
®
®
QUIK CHEK COMPLETE® Tests
(Az = 981)
®
®
Flüssige Proben
(Az = 335)
72 (21,5%) 128 (24,5%) 25 (20,7%)
263 (78,5%) 394 (75,5%) 96 (79,3%)
Flüssige Proben
(Az = 336)
42 (12,5%) 72 (13,8%) 7 (5,7%)
294 (87,5%) 451 (86,2%) 115 (94,3%)
Halbfeste
Proben (Az = 522)
Halbfeste
Proben (Az = 523)
Feste Proben
(Az = 121)
Feste Proben
(Az = 122)
REPRODUZIERBARKEIT
Die Reproduzierbarkeit des C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE® Tests wurde anhand von 12 Stuhlproben
bestimmt, die zur Verhinderung ihrer Identizierung während des Tests kodiert wurden. Die Tests wurden
in 3 unabhängigen Labors an 3 Tagen durchgeführt. Die Proben lieferten zu 100 % die erwarteten
Ergebnisse.
KREUZREAKTIVITÄT
Mit folgenden Mikroorganismen (bis zu einer Endkonzentration von ca. 108 oder mehr Organismen/ml)
beimpfte Stuhlproben zeigten im Antigen- bzw. Toxinbereich des C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE®
Tests keine Reaktion:
Bakterium bzw. Erreger: Aeromonas hydrophila, Bacillus cereus, Bacillus subtilis, Bacteroides fragilis,
Campylobacter coli, Campylobacter fetus, Campylobacter jejuni, Candida albicans, Clostridium butyricum, Clostridium clostridiforme, Clostridium haemolyticum, Clostridium histolyticum, Clostridium novyi,
Clostridium perfringens, Clostridium septicum, Clostridium sordellii (nicht toxigen), Clostridium sporogenes, Enterobacter aerogenes, Enterobacter cloacae, Enterococcus faecalis, Escherichia coli EIEC, Escherichia coli, Escherichia coli O157:H7, Escherichia coli ETEC, Klebsiella pneumoniae, Peptostreptococcus
anaerobius, Proteus vulgaris, Pseudomonas aeruginosa, Salmonella typhimurium, Serratia liquifaciens,
Shigella dysenteriae, Shigella exneri, Shigella sonnei, Staphylococcus aureus, Staphylococcus aureus
(Cowans), Staphylococcus epidermidis, Vibrio cholerae, Vibrio parahaemolyticus, Yersinia enterocolitica
Der einzige nicht-C. difcile-Organismus, der im Toxinbereich des C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE® Test
reagierte, war Clostridium sordellii VPI 9048. Dieser Stamm produziert HT- und LT-Toxine, die Toxin A
bzw. Toxin B entsprechen.
Folgende Viren (10
keine Reaktion:
Viren: Adenoviren 1,2,3,5,40,41, humaner Coronavirus, Coxsackievirus B2,B3,B4,B5, Echovirus
9,11,18,22,33, Enteroviren 68,69,70,71, Rotavirus.
STÖRSUBSTANZEN
Folgende Substanzen (US-Formulierung) wirkten sich, wenn in den angegebenen Konzentrationen im
Stuhl vorhanden, nicht auf die Testergebnisse aus: Mucin (3,5% w/v), humanes Blut (40% v/v), Bariumsulfat (5% w/v), Imodium® (5% v/v), Kaopectate® (5% v/v), Pepto-Bismol® (5% v/v), Stearinsäure/Palmitinsäure (40% w/v), Metronidazol (0,25% w/v), Vancomycin (0,25% w/v).
3,3
8,25
- 10
TCID-Einheiten/0,2 ml) zeigten im C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE® Test
REAKTION KLINISCHER ISOLATE AUF CYCLOSERIN-CEFOXITIN-FRUKTOSEAGAR (CCFA)
Insgesamt wurden 103 aus anaerober Bakterienkultur auf CCFA nach 3 Tagen bei 37° C gewonnene klinische C. difcile-Isolate mit dem C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE® Test getestet. Für die Untersuchung
wurden einzelne Kolonien ausgewählt und in Verdünnungspuffer gemäß Empfehlungen für Stuhlproben
suspendiert. Alle 103 Isolate zeigten eine positive Antigenreaktion im Test.
70 der 103 Isolate (68%) stammten aus Stuhlproben, die mit Gewebekultur ein positives Ergebnis für
C. difcile-Toxin lieferten. 56 (80%) von diesen zeigten beim Screening nach anaerobem Wachstum auf
CCFA (3 Tage bei 37° C) eine positive Toxinreaktion.
ANALYTISCHE SENSITIVITÄT
Der Cut-off für den Test wurde bei einer Konzentration von 0,63 ng/ml für Toxin A, 0,16 ng/ml für Toxin B
und 0,8 ng/ml für Glutamatdehydrogenase bestimmt.
20
DE
Page 22
TECHLAB® C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE
REAGWASH
®
UTILISATION PRÉVUE
Le test TECHLAB® C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE® est un dosage immunoenzymatique membranaire
rapide pour la détection simultanée de l’antigène glutamate déshydrogénase Clostridium difcile et des
toxines A et B dans un puits à réaction simple. Ce test détecte l’antigène du C. difcile, le glutamate
déshydrogénase, comme marqueur de la présence de C. difcile et conrme la présence de souches
toxinogènes de C. difcile en dépistant la présence des toxines A et B dans les échantillons de selles
chez les personnes suspectées de la maladie C. difcile. Le test doit être utilisé comme aide dans le
diagnostic de la maladie C. difcile. Ses résultats doivent, comme pour tous les autres tests C. difcile,
être évalués en tenant compte des antécédents du patient.
EXPLICATION
Après un traitement antibiotique, de nombreux patients développent des problèmes gastro-intestinaux pouvant aller d’une légère diarrhée à des colites pseudomembraneuses. De nombreuses formes
légères de maladies gastro-intestinales et la plupart des cas de colites pseudomembraneuses sont
dues à des souches toxinogènes de Clostridium difcile (1). Cet organisme est une bactérie anaérobie à
germes opportunistes qui se développe dans l’intestin dès la modication de la ore normale par l’antibiotique. Les souches toxinogènes de C. difcile sont porteuses de gènes qui codent les toxines alors
que les souches non toxinogènes ne sont pas porteuses de gènes de toxines. La pathologie se développe à partir des toxines produites par l’organisme toxinogène. Les symptômes cliniques associés à la
maladie sont d’abord considérés comme étant dus à la toxine A, une entérotoxine qui endommage les
tissus (2,3). Le C. difcile produit également une deuxième toxine appelée toxine B. Cette dernière, qui
est considérée comme la cytotoxine de l’organisme, est détectée lors de l’essai par culture tissulaire
actuellement utilisé dans de nombreux laboratoires. Les souches toxinogènes du C. difcile produisent
les deux toxines ou uniquement la toxine B (4-7). Le glutamate déshydrogénase de C. difcile est un
bon marqueur antigénique pour l’organisme qui se trouve dans les selles car il est produit en grosses
quantités par toutes les souches, qu’elles soient toxinogènes ou non toxinogènes (8-10). L’antigène
peut être détecté dans les échantillons de selles via le test C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE®. Un résultat positif au test, spécique à la glutamate déshydrogénase de C. difcile, conrme la présence de cet
organisme dans les selles. Un résultat négatif indique l’absence de cet organisme. Le résultat positif au
test portant sur les toxines A et B conrme la présence de souches toxinogènes de C. difcile.
PRINCIPE DU TEST
Le test C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE® utilise des anticorps spéciques à la glutamate déshydrogénase
et aux toxines A et B de C. difcile. Le dispositif comporte une Fenêtre de réaction avec trois bandes verticales d’anticorps immobilisés. La bande d’antigène («Ag») comporte des anticorps contre la glutamate
déshydrogénase de C. difcile. La bande de contrôle («C») est une bande en pointillés qui contient des
anticorps anti-peroxydase de raifort (HRP). La bande de test pour les toxines A et B («Tox») contient des
anticorps dirigés contre les toxines A et B de C. difcile. LeConjugué est composé d’anticorps dirigés
contre la glutamate déshydrogénase et contre les toxines A et B conjugués à la peroxydase de raifort.
Pour réaliser le test, l’échantillon est ajouté à un tube contenant un mélange de Diluant et de Conjugué. Le
mélange conjugué-échantillon dilué est placé dans le Micropuits d’échantillon et le dispositif est soumis
à une période d’incubation de 15minutes à température ambiante. Pendant l’incubation, la glutamate
déshydrogénase et les toxines A et B éventuellement présentes dans l’échantillon se lient avec le conjugué
peroxydase-anticorps. Les complexes conjugué-anticorps-antigènes migrent à travers un ltre vers une
membrane où ils sont capturés par les anticorps immobilisés spéciques à la glutamate déshydrogénase
et aux toxines A et B sur la bandelette. La Fenêtre de réaction est ensuite lavée avec un Tampon de lavage.
Un Substrat est ensuite ajouté. Au bout de 10 minutes d’incubation, la réaction «Ag» et l’apparition d’une
ligne bleue verticale du côté «Ag» de la Fenêtre de réaction sont observées. Une ligne bleue indique un
FR
test positif. Si le test «Ag» est positif, la réaction «Tox» doit être observée pour constater si une ligne
bleue est apparue dans la partie «Tox» de la Fenêtre de réaction. Une ligne bleue indique un test positif.
Une réaction positive «C», indiquée par une ligne bleue verticale en pointillés, dans la zone de contrôle
«C» de la Fenêtre de réaction, conrme que le test fonctionne correctement et que les résultats sont
valides.
MATÉRIEL FOURNI
Dispositifs à membranes – un sachet contenant 1 dispositif
DEV
Diluant (22ml par acon) – Solution tamponnée et protéinée avec
compte-gouttes gradué (contient du ProClin® 300 0,05 %)*
H412: Nocif pour les organismes aquatiques, entraîne des effets néfastes à long terme
Tampon de lavage (12ml par acon) – Solution tamponnée avec
compte-gouttes gradué (contient du ProClin® 300 0,05 %)*
H412: Nocif pour les organismes aquatiques, entraîne des effets néfastes à long terme
Substrat (3,5ml par acon) – Solution contenant du tétraméthylbenzidine
REAGSUBS
Conjugué (2,5ml par acon) – Anticorps spécique à la glutamate
ENZCONJ
déshydrogénase conjugué à la peroxydase de raifort et anticorps spécique
aux toxines A et B conjugué à la peroxydase de raifort dans une solution
tamponnée de protéines (contient du ProClin® 300 0,05 %)*
Contrôle positif (2ml) – Antigène dans une solution tamponnée et protéinée
Pipettes de transfert jetables en plastique – graduées de 25 µL, 100 µL, 200 µL, 300 µL, 400 µL et 500 µL
IVD
*Mot indicateur : Avertissement
H317 : Risque de réactions cutanées allergiques
P261, P272, P280, P302, P352, P333, P313, P321, P362, P364, P501
MATÉRIEL ET ÉQUIPEMENTS NÉCESSAIRES MAIS NON FOURNIS
Petits tubes à essai (par exemple des microtubes à centrifugation en plastique ou en verre)
Écouvillons Minuterie Agitateur vortex
Gants jetables pour manipuler les échantillons de selles Pipeteur et embouts
DURÉE DE CONSERVATION ET STOCKAGE
La date de péremption du kit est indiquée sur l’étiquette, la validité du kit étant de 24mois à partir de la
date de fabrication. La date d’expiration de chaque composant est indiquée sur chaque étiquette. Le
kit doit être conservé à une température comprise entre 2 et 8°C. Après la première ouverture, le kit et
tous ses composants restent stables jusqu’à la date de péremption indiquée à condition d’être stockés
à une température comprise entre 2 et 8°C. Amener tous les composants à température ambiante
avant utilisation. Le kit reste stable à température ambiante pendant 8heures de service consécutives à
condition d’être stocké au réfrigérateur entre les vacations.
Pour une utilisation diagnostique in vitro
21
Page 23
PRÉCAUTIONS À PRENDRE
1. Pour une utilisation diagnostique in vitro. Uniquement à usage professionnel.
2. Les réactifs des différents kits ne doivent pas être mélangés ou échangés. Ne pas utiliser de kit dont
la date d’expiration est dépassée.
3. Contrôler tous les éléments du kit an de vérier qu’ils ne présentent aucune fuite. Examiner le kit
dès la réception an de vérier que les éléments ne sont ni congelés ni chauds au toucher en raison
de conditions de transports inadéquates.
4. Les capsules, les embouts et les compte-gouttes sont classés par couleur. Ne PAS les mélanger!
5. Ne pas congeler les réactifs. Le kit doit être conservé à une température comprise entre 2 et 8°C.
6. Le sachet contenant le Dispositif à membrane doit être à température ambiante avant ouverture.
Maintenir les dispositifs à membranes au sec avant de les utiliser.
7. Utiliser les échantillons de selles dans les 72heures suivant le prélèvement, et ce an d’obtenir
les meilleurs résultats possibles. Les échantillons congelés peuvent être moins actifs suite à la
congélation et à la décongélation. En cas d’utilisation d’échantillons congelés, les décongeler à
température ambiante.
8. Verser les réactifs en tenant les acons verticalement de façon à instiller une goutte de taille
adéquate et un volume qui convient.
9. Après leur utilisation, les échantillons et les dispositifs à membranes doivent être manipulés et jetés
de la même façon que des matières présentant un danger biologique.
10. Les dispositifs à membranes ne peuvent pas être réutilisés.
11. Le test a été optimisé dans le sens de la sensibilité et de la spécicité. Toute modication de la
procédure spéciée et/ou des conditions de test peut altérer la sensibilité et la spécicité du test.
Procéder conformément à la procédure spéciée.
12. Vérier la durée totale de l’analyse si plusieurs échantillons de selles sont testés. Ajouter d’abord
le Diluant puis le Conjugué dans chaque tube de Diluant. Introduire ensuite l’échantillon dans le
tube de Diluant/Conjugué. Mélanger soigneusement tous les échantillons dilués puis les transférer
dans le Dispositif à membrane. L’étape d’incubation de 15minutes commence dès que le dernier
mélange conjugué-échantillon dilué est transféré sur le dernier Dispositif à membrane.
13. Si le Substrat prend une couleur bleu foncé/violet, appeler les services techniques pour procéder
à un remplacement.
14. Les échantillons de selles peuvent contenir des agents potentiellement infectieux et doivent être
manipulés selon le «Niveau de biosécurité 2 », comme le recommande le manuel du CDC/NIH,
«Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories».
15. S’équiper de gants jetables pendant le test.
16. Les réactifs du Conjugué, Diluant et Tampon de lavage contiennent 0,05% de ProClin®300 comme
conservateur. Même si la concentration est faible, le ProClin®300 est connu pour sa nocivité (risque
de sensibilisation de la peau). En cas de sensibilisation/irritation de la peau ou d’éruption cutanée,
consulter un médecin. Les vêtements contaminés doivent être ôtés puis lavés avant d’être réutilisés.
Manipuler les réactifs selon les réglementations existantes relatives à la sécurité des laboratoires
et les bonnes pratiques de laboratoire. Les ches de sécurité de ce produit sont disponibles à la
demande. Contacter le support technique.
17. Respecter les arrêtés locaux, régionaux et nationaux relatifs aux réglementations sur l’élimination
des déchets.
18. Signaler tout incident grave à TECHLAB et à l’autorité compétente de l’état membre de l’EEE dans
lequel l’utilisateur et/ou le patient est établi.
22
PRÉLÈVEMENT, MANIPULATION ET STOCKAGE DES ÉCHANTILLONS DE SELLES
Types d’échantillons acceptables Ne pas utiliser
Échantillons de selles frais
Échantillons de selles congelés
Échantillons dans un milieu de transport
(Cary Blair, C&S)
Entreposage
d'échantillons
Température
Longueur de stockage
acceptable
2-8°C 72heures
Congelés à ≤ -10°C Plus de 72heures
1. Les procédures standard utilisées sur place pour le prélèvement et la manipulation des échantillons
de selles sont appropriées.
2. Les échantillons de selles doivent être prélevés dans des conteneurs propres et étanches.
3. Le stockage des échantillons de selles dans le Diluant est déconseillé.
4. Ne pas laisser les échantillons de selles dans le mélange Diluant/Conjugué pendant une période
supérieure à 24heures.
PRÉPARATION DES ÉCHANTILLONS
1. Placer tous les réactifs et le nombre de dispositifs nécessaires à température ambiante avant de
les utiliser. Il est recommandé d’éliminer les réactifs du coussin en mousse an de réduire le temps
nécessaire au réchauffement à température ambiante.
2. Préparer et étiqueter un petit tube à essai pour chaque échantillon et pour chaque contrôle
supplémentaire externe.
3. À l’aide du compte-gouttes gradué noir, ajouter 750µl (2
chaque tube d’échantillon de selles. Pour les échantillons provenant d’un milieu de transport tel qu’un
Cary Blair ou un C&S, ajouter 650µl (1
Type d’échantillon Volume de Diluant
Échantillons de selles frais 750µl (2
Échantillon de selles congelé (non dilué) 750µl (2
Échantillons dans un milieu de transport
(Cary Blair, C&S)
Contrôles externes (positifs et négatifs) 750µl (2
4. Ajouter une goutte de Conjugué (bouteille à capsule rouge) dans chaque tube.
5. Prendre une pipette de transfert jetable en plastique (fournie avec le kit) pour
chaque échantillon – les pipettes présentent des graduations en relief à 25 µL,
100µL, 200 µL, 300 µL, 400 µL et 500 µL.
Échantillons de selles xés au formol (par ex. formole à base d’acétate de sodium, formol à 10%,
formol thimérosal)
Échantillons de selles xés à l’alcool (par ex. alcool
de polyvinyle)
Commentaires
Dans l'idéal, les prélèvements doivent avoir moins
de 24heures
Décongélation à température ambiante. La multiplication des congélations et décongélations peut
entraîner une perte d'activité de l'échantillon suite à
une dégradation des toxines.
ème
graduation depuis l’extrémité) de Diluant dans
ère
graduation depuis l’extrémité) de Diluant dans le tube.
ème
graduation depuis l’extrémité)
ème
graduation depuis l’extrémité)
ère
650 µL (1
graduation depuis l’extrémité)
ème
graduation depuis l’extrémité)
750
650
µL
FR
Page 24
Pipette de transfert graduée:
25 μL100 μL200 μL300 μL400 μL500 μL
6. Mélanger complètement tous les échantillons indépendamment de leur consistance. Les
échantillons doivent tous être parfaitement suspendus avant le transfert.
Échantillons liquides ou semi-solides – Prélever 25µl d’échantillon avec une pipette de transfert
puis verser l’échantillon dans le mélange de Diluant/Conjugué. Utiliser la même pipette de
transfert pour mélanger l’échantillon dilué.
Échantillons moulés ou solides – Veiller à ajouter la quantité adéquate d’échantillons de selles au
mélange témoin. Mélanger complètement l’échantillon à l’aide d’un écouvillon en bois et transférer un
petit fragment (de 2mm de diamètre environ, équivalent à 25µl) de l’échantillon dans le mélange Diluant/
Conjugué. Émulsionner l’échantillon à l’aide de l’écouvillon.
Échantillons de selles provenant d’un milieu de transport tel qu’un Cary Blair ou un C&S – Prélever
ème
100µl (2
graduation depuis l’extrémité de la pipette de transfert) d’échantillon et les introduire
dans le mélange Diluant/Conjugué.
7. Échantillons témoins externes facultatifs:
Contrôle externe positif - Ajouter une goutte de Contrôle positif (bouteille à capsule grise) dans le
mélange Diluant/Conjugué.
Contrôle externe négatif - Ajouter 25 μL de Diluant dans le mélange Diluant/Conjugué.
REMARQUE: si le fragment transféré est trop petit, si le mélange est défectueux ou si l’échantillon n’est
pas complètement suspendu dans le mélange Diluant/Conjugué, les résultats obtenus peuvent se révéler
faussement négatifs. Une trop grande quantité de selles peut donner des résultats nuls à cause du débit
limité.
PROCÉDURE DE TEST
1. Prendre un Dispositif à membrane par échantillon et un dispositif par contrôle externe facultatif
positif ou négatif. Les sachets en aluminium contenant les dispositifs doivent être portés à
température ambiante avant ouverture. Utiliser le dispositif immédiatement après ouverture.
Étiqueter correctement chaque dispositif et l’orienter sur une surface plane de sorte que la mention
«C. DIFF COMPLETE» se trouve en bas et que le Micropuits d’échantillon se trouve dans l’angle
supérieur droit du dispositif.
Dispositif à membrane Micropuits d’échantillon
Fenêtre de réaction
FR
2. Fermer chaque tube d’échantillon dilué et mélanger complètement. Pour obtenir un mélange approprié,
procéder par mixage ou agitation du tube. Dès qu’un échantillon de patient ou un Contrôle positif a été
dilué dans le mélange Diluant/Conjugué, il peut être incubé à température ambiante jusqu’à 24heures
avant d’être ajouté au Dispositif à membrane.
3. À l’aide d’une pipette de transfert neuve, transférer 500µl du mélange échantillon-conjugué dilué
dans le Micropuits d’échantillon (petite cavité située dans l’angle supérieur droit du dispositif)
d’un Dispositif à membrane, en veillant à bien expulser l’échantillon liquide sur la garniture
perméable située à l’intérieur du Dispositif à membrane. Lors de l’introduction de l’échantillon dans
le micropuits, veiller à ce que l’extrémité de la pipette de transfert soit inclinée vers la Fenêtre de
réaction (grande cavité au centre du dispositif).
4. Laisser incuber le dispositif à température ambiante pendant 15minutes – l’échantillon sera absorbé
par le dispositif et une zone humide apparaîtra dans la Fenêtre de réaction.
NOTE CONCERNANT LES ÉCHANTILLONS NE MIGRANT PAS:
L’échantillon dilué ne parvient pas toujours à migrer correctement; la Fenêtre de réaction n’est
alors que partiellement humidiée. Si la Fenêtre de réaction ne semble pas complètement humidiée dans les 5minutes suivant l’ajout de l’échantillon dans le Micropuits d’échantillon, ajouter
100µl (4gouttes) de Diluant dans le Micropuits d’échantillon, puis attendre 5minutes supplémentaires (soit 20minutes au total).
5. Après incubation, ajouter 300µl de Tampon de lavage à l’aide du compte-gouttes blanc gradué
dans la Fenêtre de réaction. Laisser le Tampon de lavage pénétrer la Fenêtre de réaction et veiller
à ce qu’il soit complètement absorbé.
6. Verser 2gouttes de Substrat (bouteille à capsule blanche) dans la Fenêtre de réaction. Lire et
consigner les résultats visuels observés au bout de 10minutes.
INTERPRÉTATION DES RÉSULTATS
1. L’interprétation du test est plus able lorsque le dispositif est lu immédiatement à la n de la période
de réaction de 10minutes. Lire le dispositif à une distance normale dans une pièce bien éclairée en
regardant directement le dessus du dispositif à la verticale.
2. Observer si une ligne en pointillés bleue apparaît au centre de la Fenêtre de réaction: il s’agit du
contrôle positif interne. L’aspect des bandes de contrôle représente un contrôle interne valide. Le
fond peut apparaître blanc à bleu clair. Observer l’apparition de lignes bleues dans les zones «Ag»
et «Tox» de la Fenêtre de réaction: ce sont les bandes de test. Les bandes peuvent présenter une
couleur claire à foncée.
3. Résultat positif pour l’antigène («Ag»): un résultat positif pour l’antigène peut être interprété à
tout moment entre l’adjonction de Substrat et le temps de lecture (10minutes). Dans le cas d’un
résultat positif pour l’antigène, la bande «Ag » bleue et la bande de contrôle bleue en pointillés
sous le «C» doivent être visibles (Figure 1a). Les bandes peuvent présenter une couleur claire à
foncée. Une ligne partielle évidente est interprétée comme un résultat positif. La décoloration de
la membrane ne peut pas être interprétée comme un résultat positif. Un résultat positif indique la
présence de C. difcile.
4. Résultat positif pour l’antigène et la toxine («Tox»): si le résultat pour l’antigène est positif
(c’est-à-dire qu’une bande «Ag» bleue et une bande de contrôle bleue en pointillés sous «C» sont
visibles), procéder à l’interprétation du résultat pour la toxine. Un résultat positif pour la toxine peut
être interprété à tout moment entre l’adjonction de Substrate et le temps de lecture (10minutes).
Dans le cas d’un résultat positif pour la toxine, une bande «Tox» bleue est visible (Figure 1b).
La bande peut présenter une couleur très claire à très foncée. Une ligne partielle évidente est
interprétée comme résultat positif. La décoloration de la membrane ne peut pas être interprétée
comme un résultat positif. Un résultat positif indique la présence de toxine C. difcile.
5. Résultat négatif : les tests ne peuvent pas être interprétés comme négatifs ou invalides moins de
10minutes après l’adjonction du Substrat. Une seule ligne en pointillés bleue est visible au centre
de la Fenêtre de réaction, sous le «C» et aucune bande de test n’est visible sur la zone «Ag» ou
«Tox» de la Fenêtre de réaction (Figure 1c). Un résultat négatif dans la zone d’antigène indique
23
Page 25
soit l’absence d’antigène C. difcile dans l’échantillon, soit un taux inférieur à la limite de détection
du test. Un résultat négatif dans la zone de toxine indique soit l’absence de toxine C. difcile dans
l’échantillon, soit un taux inférieur à la limite de détection du test.
6. Résultat nul: aucune bande n’est visible dans la Fenêtre de réaction (Figure 1d). Le résultat de
test est nul si aucune bande en pointillés bleue n’est présente sous le «C» à la n de la période de
réaction (Figures 1e, 1f, 1g).
7. Résultat négatif pour l’antigène («Ag »), toxine positive (« Tox ») : un faible pourcentage
d’échantillons peut présenter des résultats négatifs pour l’antigène tout en étant positif pour la
toxine. Ces échantillons doivent être considérés comme indéterminés et à nouveau testés avec des
échantillons récents (Figure 1h). Si le nouveau test de l’échantillon est négatif pour l’antigène mais
positif pour la toxine, consigner un résultat de toxine positif.
FIGURE 1: INTERPRÉTATION DES RÉSULTATS DU TEST C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE
Figure 1a
Résultat positif pour
l'antigène
Figure 1d
Résultat nul
Figure 1g
Résultat nul
CONTRÔLE DE LA QUALITÉ
Interne: une bande de contrôle en pointillés bleue doit être visible au centre de la Fenêtre de réaction,
sous le «C», pour chaque Dispositif à membrane utilisé. L’apparition de la bande de contrôle en
pointillés bleue conrme que l’échantillon et les réactifs ont été correctement ajoutés, que les réactifs
étaient actifs au moment de la réalisation de l’essai et que l’échantillon a bien migré via le Dispositif à
24
Figure 1b
Résultat positif pour
l'antigène et la toxine
Figure 1e
Résultat nul
Figure 1h
Voir le point 7 pour
l'interprétation
Figure 1c
Résultat négatif
Figure 1f
Résultat nul
®
membrane. Il conrme la réactivité des autres réactifs associés au test. Un fond uniforme dans la zone
résultat est considéré comme un contrôle interne négatif. Si le test a été réalisé correctement et les
réactifs fonctionnent, le fond est blanc an de fournir un résultat discernable.
Externe: la réactivité du kit C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE® doit être contrôlée à la réception avec le
contrôle positif et le contrôle négatif (Diluant). Le Contrôle positif est fourni avec le kit (bouteille à capsule
grise). Le Contrôle positif permet de conrmer la réactivité des autres réactifs associés à l’essai mais il ne
permet pas de garantir la précision à la limite de détection de l’essai analytique. Le Diluant est utilisé pour le
contrôle négatif. Des tests supplémentaires peuvent être réalisés à l’aide des contrôles pour répondre aux
exigences des réglementations locales, nationales et/ou fédérales et/ou des organismes d’accréditation.
LIMITES
1. Le test C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE® est utilisé pour détecter l’antigène C. difcile et ses toxines
dans des échantillons de selles. Le test conrme la présence de toxines dans les selles et ces
informations doivent être examinées par le médecin avec le dossier médical du patient et l’examen
physique de ce dernier. Le test C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE®détecte les taux de toxine A ≥0,63 ng/
ml, de toxine B ≥0,16 ng/ml et de glutamate déshydrogénase ≥0,8 ng/ml.
2. Les échantillons de selles sont extrêmement complexes. Le test C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE®
permet d’obtenir des résultats optimaux si les échantillons de selles ont été prélevés moins de 24heures
à l’avance. La plupart des échantillons non dilués peuvent être stockés à une température comprise
entre 2 °C et 8 °C pendant 72 heures avant qu’une dégradation signicative de la toxine ne puisse
être observée. Si les échantillons ne sont pas testés pendant cette période, ils peuvent être congelés
puis décongelés. Toutefois, des congélations et décongélations répétées peuvent entraîner la perte de
réactivité immunologique de l’antigène et des toxines A et B.
3. Certains échantillons peuvent entraîner des réactions faibles. Ce phénomène peut découler d’un certain
nombre de facteurs tels que la présence de faibles niveaux d’antigènes ou de toxines, la présence de
substances anticorps ou la désactivation des enzymes dans les selles. Les bandes peuvent présenter
une couleur claire à foncée. Ces échantillons doivent être rapportés positifs si une ligne bleue ou une
ligne partielle est observée. Une ligne bleue partielle évidente est interprétée comme résultat positif.
4. Les échantillons de selles conservés dans 10 % de formol, de formol thimérosal, dans du formol
d’acétate de sodium ou de l’alcool polyvinylique ne peuvent pas être utilisés.
5. Le test C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE® est un test qualitatif. L’intensité de la couleur ne doit pas être
interprétée en termes quantitatifs.
6. Certains isolats du C. sordellii peuvent réagir lors du test C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE® suite à la
production de toxines immunologiquement associées (1).
7. Des taux d’infestation pouvant atteindre 50% ont été signalés chez des enfants. Un niveau élevé a
également été signalé chez des patients atteints de mucoviscidose (1,3). Les résultats peuvent se
révéler positifs dans ces groupes mais ils doivent être considérés en association avec une infestation
potentielle.
8. Le seul organisme autre que C. difcile ayant réagi à la bande de toxines du test C. DIFF QUIK CHEK
COMPLETE® correspond au Clostridium sordellii VPI 9048. Cette souche produit des toxines HT et LT
homologues aux toxines A et B, respectivement.
9. Aucune donnée n’est disponible sur les effets des lavages coliques, des lavements barytés, des laxatifs
ou des préparations de selles sur la performance du test C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE®. Toutes ces
procédures peuvent provoquer une dilution extensive ou la présence d’adjuvants susceptibles d’affecter
la performance du test.
VALEURS ATTENDUES
La maladie Clostridium difcile est principalement une maladie nosocomiale détectée chez les personnes
âgées et la fréquence de cette maladie dépend de facteurs tels que la population des patients, le type d’institution et l’épidémiologie. Les incidences de la maladie C.difcile signalées chez des patients présentant des
diarrhées associées aux antibiotiques sont comprises entre 5 et 20 %, les hôpitaux pouvant présenter des
taux supérieurs ou inférieurs à ces chiffres. Il est important de considérer les résultats des tests en association
FR
Page 26
avec les symptômes cliniques car certains adultes sains et un grand nombre d’enfants sains (jusqu’à 50%)
présentent des résultats positifs à la toxine du C. difcile. Par ailleurs, on a pu observer des taux compris
entre 22 et 32 % de C. difcile chez des patients atteints de mucoviscidose (1,3). Lors des études réalisées
pour ce dispositif, avec des patients symptomatiques, l’incidence des toxines A et B était de 12% et le test
GDH était de 18%. Un résultat positif dans la partie antigène du test C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE®
conrme la présence du C. difcile dans un échantillon de selles et un résultat négatif indique l’absence de
cet organisme. Un résultat positif dans la partie toxine du test C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE® conrme la
présence de toxines de C. difcile dans un échantillon de selles et un résultat négatif indique l’absence de
toxines ou des niveaux de toxines insufsants pour être détectés.
EFFICACITÉ DU TEST
Évaluation clinique de la partie antigène du test C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE
La partie antigène du test C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE® a été comparée à une culture bactérienne.
Les échantillons testés lors de cette évaluation ont été soumis aux laboratoires cliniques pour des tests
de routine. Le test de culture bactérienne a été réalisé selon les procédures internes de l’établissement.
Les résultats obtenus sont présentés dans le Tableau 1.
Tableau 1. Résumé des performances cliniques comparant le test C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE®
à la culture bactérienne
n = 1126
C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE
Bande antigène positive
C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE
Bande antigène négative
Culture bactérienne
Positif
®
®
201 62
21 842
®
Culture bactérienne
Négatif
Indice de conance
de95%
Sensibilité 90,5% 85,7 – 93,9
Spécicité 93,1% 91,2 – 94,7
Valeur prédictive positive 76,4% 70,7 – 81,3
Valeur prédictive négative 97,6% 96,2 – 98,4
Corrélation 92,6% 91,8 – 93,4
Les échantillons contradictoires ont été évalués en utilisant les tests ELISA actuels pour le
glutamate déshydrogénase C. difcile.
Vingt-neuf des 62échantillons faussement positifs se sont révélés positifs à un autre test GDH,
et ont été considérés comme effectivement positifs.
Treize des 21échantillons faussement négatifs se sont révélés négatifs à un autre test GDH, et
ont été considérés comme effectivement négatifs.
La partie antigène du test C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE® a été comparée à des cultures de tissus
pour la détection de la toxine C. difcile. Les échantillons testés lors de cette évaluation ont été soumis
aux laboratoires cliniques pour des tests de routine. Les résultats sont indiqués dans le Tableau 2. La
partie antigène du test C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE® a détecté 98,7% des échantillons positifs avec
les cultures de tissus.
FR
Tableau 2. Résumé des performances cliniques comparant le test C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE®
Évaluation clinique de la partie toxines du test C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE
La partie toxines du test C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE® a été comparée aux cultures de tissus dans
deux laboratoires cliniques et dans les locaux de TECHLAB, Inc. Les échantillons inclus dans l’évaluation
ont été soumis aux tests de routine des laboratoires cliniques. Les résultats obtenus sont présentés dans
le Tableau 3.
Tableau 3. Résumé des performances cliniques comparant le test C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE®
à la culture tissulaire
n = 1126
C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE
Bande antigène positive
C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE
Bande antigène négative
à la culture tissulaire
n = 1126
C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE
Bande toxine positive
C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE
Bande toxine négative
Culture tissulaire
Positif
®
®
®
®
154 109
2 861
Culture tissulaire
Positif
137 6
19 964
Culture tissulaire
Négatif
®
Culture tissulaire
Négatif
Indice de conance
de95%
Sensibilité 87,8% 81,4 - 92,3
Spécicité 99,4% 98,6 - 99,7
Valeur prédictive positive 95,8% 90,7 - 98,3
Valeur prédictive négative 98,1% 96,9 - 98,8
Corrélation 97,8% 97,6 - 98,0
Les échantillons contradictoires ont été évalués avec les tests ELISA actuels pour les toxines A et B.
Cinq échantillons faussement positifs sur les 6 étaient positifs d’après le test ELISA et ont été
considérés comme effectivement positifs.
Douze échantillons faussement négatifs sur les 19 étaient négatifs d’après le test ELISA et ont été
considérés comme effectivement négatifs.
25
Page 27
EFFET DE LA CONSISTANCE DE L’ÉCHANTILLON DE SELLES
Effet de la consistance de l’échantillon de selles sur le test C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE
La réaction des échantillons de selles de consistances différentes dans la partie antigène (n=978) et dans
la partie toxines (n=981) du test C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE® est présentée dans les Tableaux 4 et
5. Les pourcentages de réactions positives avec la culture bactérienne ou le test C. DIFF QUIK CHEK
COMPLETE® étaient similaires pour les trois types d’échantillons de selles (liquide, semi-solide et solide).
Tous les échantillons ont été soumis au test C. difcile. À l’origine de cette soumission, on trouve les
antécédents médicaux du patient et non la consistance des échantillons. Dans la partie antigène, les
résultats montrent que le test C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE® se comporte de manière similaire à la
culture bactérienne lors du test des échantillons de différentes consistances. Dans la partie toxine, les
résultats montrent que le test C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE® se comporte de manière similaire aux
cultures de tissus lors du test des échantillons de différentes consistances.
Tableau 4. Réaction dans la partie antigène du test C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE® pour des
Positif sur la culture
bactérienne
C. DIFF QUIK CHEK
COMPLETE
Bande antigène positive
Négatif sur culture
bactérienne
C. DIFF QUIK CHEK
COMPLETE
Bande antigène négative
Tableau 5. Réaction dans la partie toxines du test C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE® pour des
Positif sur culture de tissus 43 (12,8%) 81 (15,5%) 8 (6,6%)
C. DIFF QUIK CHEK
COMPLETE
Bande toxine positive
Négatif sur culture de tissus 293 (87,2%) 442 (84,5%) 114 (93,4%)
C. DIFF QUIK CHEK
COMPLETE
Bande toxine négative
échantillons de selles de consistances différentes
Nombre d’échantillons
(n = 978)
®
®
échantillons de selles de consistances différentes
Nombre d’échantillons
(n = 981)
®
®
Échantillons liquides
(n = 335)
59 (17,6%) 110 (21,1%) 19 (15,7%)
72 (21,5%) 128 (24,5%) 25 (20,7%)
276 (82,4%) 412 (78,9%) 102 (84,3%)
263 (78,5%) 394 (75,5%) 96 (79,3%)
Échantillons liquides
(n = 336)
42 (12,5%) 72 (13,8%) 7 (5,7%)
294 (87,5%) 451 (86,2%) 115 (94,3%)
Échantillons semi-
solides (n = 522)
Échantillons
semi-solides
(n = 523)
®
Échantillons solides
(n = 121)
Échantillons solides
(n = 122)
SENSIBILITÉ ANALYTIQUE
Le seuil de détection de l’essai a été établi à des concentrations de 0,63 ng/ml pour la toxine A, de 0,16
ng/ml pour la toxine B et de 0,8ng/ml pour le glutamate déshydrogénase.
REPRODUCTIBILITÉ
La reproductibilité du test C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE® a été déterminée à partir de 12échantillons
de selles codés pour éviter leur identication pendant le test. Les tests ont été réalisés par 3 laboratoires
indépendants qui ont analysé les échantillons sur 3 jours. Les échantillons ont donné les résultats prévus
sur toute la durée des essais.
RÉACTIVITÉ CROISÉE
Les échantillons de selles inoculés par les micro-organismes suivants, pour une concentration nale
d’environ 108 ou supérieure d’organismes par ml, n’ont pas réagi sur les bandes de test antigène ou
toxines du test C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE®:
Bactéries ou agents pathogènes: Aeromonas hydrophila, Bacillus cereus, Bacillus subtilis, Bacteroides
fragilis, Campylobacter coli, Campylobacter fetus, Campylobacter jejuni, Candida albicans, Clostridium
butyricum, Clostridium clostridiforme, Clostridium haemolyticum, Clostridium histolyticum, Clostridium
novyi, Clostridium perfringens, Clostridium septicum, Clostridium sordellii (nontoxigenic), Clostridium
sporogenes, Enterobacter aerogenes, Enterobacter cloacae, Enterococcus faecalis, Escherichia coli
EIEC, Escherichia coli, Escherichia coli O157:H7, Escherichia coli ETEC, Klebsiella pneumoniae, Peptostreptococcus anaerobius, Proteus vulgaris, Pseudomonas aeruginosa, Salmonella typhimurium, Serratia
liquifaciens, Shigella dysenteriae, Shigella exneri, Shigella sonnei, Staphylococcus aureus, Staphylococcus aureus (Cowans), Staphylococcus epidermidis, Vibrio cholerae, Vibrio parahaemolyticus, Yersinia
enterocolitica
Le seul organisme autre que C. difcile ayant réagi à la bande de toxines du test C. DIFF QUIK CHEK
COMPLETE® correspond au Clostridium sordellii VPI 9048. Cette souche produit des toxines HT et LT
homologues aux toxines A et B, respectivement.
Les virus suivants, à des TCID de 10
Virus: adénovirus de types 1, 2, 3, 5, 40, 41, coronavirus humains, Coxsackievirus B2, B3, B4, B5,
échovirus 9, 11, 18, 22, 33, entérovirus de types 68, 69, 70, 71, rotavirus.
INTERFÉRENCES ANALYTIQUES
Les substances suivantes (formulations américaines) n’ont pas modié le résultat des tests lorsqu’elles
étaient présentes dans les selles aux concentrations indiquées ci-après: mucine (3,5% p/v), sang humain
(40% v/v), sulfate de baryum (5% p/v), Imodium® (5% v/v), Kaopectate® (5% v/v), Pepto-Bismol® (5% v/v),
acide stérique/palmitique (40% p/v), Métronidazole (0,25% p/v), Vancomycine (0,25% p/v).
3.3
8.25
à 10
n’ont pas réagi au test C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE®:
RÉACTION DES ISOLATS CLINIQUES OBTENUS SUR CCFA (GÉLOSE AVEC
CYCLOSÉRINE, CEFOXITINE, AMPHOTÉRICINE B)
Au total, 103 isolats cliniques de C. difcile, obtenus par culture bactérienne anaérobie sur CCFA au
bout de 3jours à 37 °C, ont été testés avec le test C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE®. Pour l’analyse,
des colonies individuelles ont été collectées et suspendues dans le Diluantselon les recommandations
concernant les échantillons de selles. Les 103isolats ont donné une réaction d’antigène positive lors du
test.
Soixante-dix de ces 103isolats (68%) étaient issus d’échantillons de selles positifs pour la toxine de
C. difcile d’après la culture de tissus. Parmi eux, 56 (80%) ont donné une réaction positive pour les
toxines lors du dépistage après croissance anaérobie sur CCFA pendant 3jours à 37 °C.
26
FR
Page 28
TECHLAB
REAGWASH
REAGSUBS
IVD
ÚČEL POUŽITÍ
Test TECHLAB® C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE® je rychlá membránová enzymová imunoanalýza pro
současnou detekci antigenů glutamát dehydrogenázy a toxinů A a B Clostridium difcile v jediné reakční
jamce. Test detekuje antigen C. difcile, glutamát dehydrogenázu, jako vyšetření na přítomnost C. difcile
a potvrzuje přítomnost toxické C. difcile detekcí toxinů A a B ve vzorcích stolice osob s podezřením na
onemocnění C. difcile. Test je určen k použití jako pomůcka při diagnóze onemocněním C. difcile. Stejně
jako u ostatních testů C. difcile je výsledky třeba zvažovat ve spojení s anamnézou pacienta.
VYSVĚTLENÍ
Po léčbě antibiotiky se u mnoha pacientů rozvinou gastrointestinální problémy v rozsahu od mírného průjmu
po vážnou pseudomembránovou kolitidu. Mnoho případů mírnějších forem gastrointestinálního onemocnění
a většina případů pseudomembránové kolitidy je způsobena toxigenními kmeny Clostridium difcile (1). Tento
organismus je oportunistická anaerobní bakterie, která roste ve střevech, když je normální ora pozměněna
účinky antibiotik. Toxigenní kmeny C. difcile přenášejí geny kódující toxiny, zatímco netoxigenní kmeny
nikoli. Nástup nemoci je spojen s toxiny, které jsou produkovány toxigenními organizmy. Klinické příznaky
spojené s touto nemocí jsou přičítány především toxinu A, který patří do skupiny enterotoxinů poškozujících
tkáň (2,3). C. difcile rovněž produkuje druhý toxin, označovaný jako toxin B. Toxin B, který byl označován
jako cytotoxin je toxin detekovaný analýzou tkáňové kultury používanou v mnoha laboratořích. Toxigenní
kmeny C. difcile produkují oba toxiny nebo pouze toxin B (4-7). Glutamátdehydrogenáza C. difcile je dobrým
antigenovým markerem organizmu ve stolici, protože je produkována ve vysokých množstvích všemi kmeny,
toxigenními i netoxigenními (8-10). Antigen je možné detekovat ve vzorcích stolice testem C. DIFF QUIK CHEK
COMPLETE®. Pozitivní výsledek testu na glutamát dehydrogenázu C. difcile potvrzuje přítomnost tohoto
organismu ve vzorku stolice; negativní výsledek indikuje jeho nepřítomnost. Pozitivní výsledek testu na toxiny
A a B potvrzuje přítomnost toxigenního kmene C. difcile.
PRINCIP TESTU
Test C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE® využívá protilátky specické pro glutamát dehydrogenázu a toxiny
A a B bakterieC. difcile. Prostředek obsahuje reakční štěrbinu se třemi svislými linkami imobilizovaných
protilátek. Testovací linka antigenu („Ag“) obsahuje protilátky proti glutamát dehydrogenáze C. difcile.
Kontrolní linka („C“) je tečkována čára, která obsahuje protilátky proti peroxidáze z křenu (HRP). Testovací
linka A a B („Tox“) obsahuje protilátky proti toxinům A a B bakterie C. difcile. Konjugát tvoří protilátky ke
glutamát dehydrogenáze a protilátky k toxinům A a B spojené s peroxidázou z křenu. K provedení testu
se vzorek přidá do zkumavky obsahující směs ředicího roztoku a konjugátu. Směs zředěného vzorku a
konjugátu se přidá do vzorkovací jamky a prostředek se nechá inkubovat 15 minut při pokojové teplotě.
Během inkubace se přítomný glutamát dehydrogenáza a toxiny A a B ve vzorku vážou na konjugát
protilátky a peroxidázou. Komplexy antigen-protilátka-konjugát migrují ltrační podložkou k membráně,
kde jsou zachyceny imobilizovanými protilátkami proti glutamát dehydrogenáze a toxinům A a B v linkách.
Reakční štěrbina je následně propláchnuta promývacím tlumivým roztokem a poté se přidá substrát. Po
10minutovém inkubačním období se vizuálně zkontroluje „Ag“ reakce, zda se objeví svislá modrá linka
na straně „Ag“ reakční štěrbiny. Modrá linka indikuje pozitivní test. Pokud je „Ag“ pozitivní, vizuálně se
zkontroluje „Tox“ reakce, zda se objeví modrá linka na straně „Tox“ reakční štěrbiny. Modrá linka indikuje
pozitivní test. Pozitivní reakce „C“, indikovaná svislou tečkovanou čárou pod částí „C“ reakční štěrbiny,
potvrzuje, že test fungoval správně a výsledky jsou validní.
®
C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE
®
CS
DODÁVANÝ MATERIÁL
Membránové prostředky – každé balení obsahuje 1 prostředek
DEV
Ředicí roztok (22 ml na lahvičku) – tlumený roztok bílkovin s kapátkem
se stupnicí (obsahuje 0,05% ProClin® 300)*
H412: Škodlivý pro vodní organismy, s dlouhodobými účinky
Promývací tlumivý roztok (12 ml na lahvičku) – tlumicí roztok
s kapátkem se stupnicí (obsahuje 0,05% ProClin® 300)*
H412: Škodlivý pro vodní organismy, s dlouhodobými účinky
Substrát (3,5 ml na lahvičku)– roztok obsahuje tetramethylbenzidin
Konjugát (2,5 ml na lahvičku) – protilátka specická na glutamát dehydrogenázu
ENZCONJ
spojená s peroxidázou z křenu a protilátkami specickými na toxiny A a B spojenými
s peroxidázou z křenu v tlumeném roztoku bílkovin (obsahuje 0,05% ProClin® 300)*
Pozitivní kontrola (2 ml) – antigen v tlumeném roztoku bílkovin
Jednorázové plastové přenosové pipety – s rysem 25 µL, 100 µL, 200 µL, 300 µL, 400 µL a 500 µL.
Pro diagnostické použití in vitro
*Signální slovo: Varování
H317: Může vyvolat alergickou kožní reakci.
P261, P272, P280, P302, P352, P333, P313, P321, P362, P364, P501
POŽADOVANÝ MATERIÁL A VYBAVENÍ, KTERÉ NENÍ DODÁVANÉ
Malé vyšetřovací zkumavky (např. plastové zkumavky mikroodstředivky nebo skleněné zkumavky)
Proužky aplikátoru Časovač Vortex
Jednorázové rukavice pro manipulaci se vzorky stolice Pipetovací automat a špičky
SKLADOVATELNOST A SKLADOVÁNÍ
Datum exspirace soupravy je uvedeno na štítku a činí 24 měsíců od data výroby. Datum exspirace
každé součásti je uvedeno na jednotlivých štítcích. Soupravu skladujte v rozmezí 2 až 8 °C. Souprava
a všechny její součásti zůstávají stabilní po uvedená data exspirace po prvním otevření, jsou-li
uchovávány při teplotě 2 °C až 8 °C. Před použitím nechejte všechny součásti temperovat na pokojovou
teplotu. Souprava zůstává stabilní při pokojové teplotě pro další 8hodinovou pracovní směny, bude-li mezi
směnami uložena zpět do vychlazeného prostředí.
BEZPEČNOSTNÍ OPATŘENÍ
1. Pro diagnostické použití in vitro. Pouze pro odborné použití.
2. Reagencie z různých souprav se nesmějí směšovat nebo zaměňovat. Nepoužívejte soupravu po
datu expirace.
3. Každý součást soupravy by měla být zkontrolována, zda je těsná. Po přijetí zkontrolujte soupravu,
abyste ověřili, že jednotlivé součásti nejsou zmrzlé nebo teple na dotek v důsledku nevhodných
přepravních podmínek.
4. Víčka, špičky a kapátko jsou barevně označeny; nesměšujte je ani nezaměňujte!
5. Nepoužívejte zmražené reagencie. Soupravu skladujte v rozmezí 2 až 8 °C.
6. Balení obsahující membránový prostředek by mělo mít před otevřením pokojovou teplotu. Před
27
Page 29
použitím udržujte membránový prostředek suchý.
7. Vzorky stolice použijte během 72 hodin od odběru, abyste získali optimální výsledky. Vzorky,
které jsou zmrazené mohou ztratit aktivitu v důsledku zmrazení a rozmrazení. Zmrazené vzorky
rozmrazujte při pokojové teplotě.
8. Podržte lahvičky reagencií svisle pro dávkování reagencií a zajištění konzistentní velikosti kapky a
správného objemu.
9. Se vzorky a membránovým prostředkem je třeba nakládat a likvidovat jako možné biologické
nebezpečí.
10. Membránový prostředek nelze používat opakovaně.
11. Test byl optimalizován na citlivost: a specicitu. Změny ve specikovaném postupu nebo podmínkách
testu mohou ovlivnit citlivost a specicitu testu. Neodchylujte se od specikovaného postupu.
12. Buďte pozorní k celkové době analýzy při testování více než jednoho vzorku stolice. Nejprve přidejte
ředicí roztok a potom přidejte konjugát do každé zkumavky s ředicím roztokem. Potom přidejte
vzorek do zkumavky s ředicím roztokem/konjugátem. Důkladně promíchejte zředěné vzorky a
přeneste je do membránových prostředků. Krok 15minutové inkubace začíná po přenesení poslední
směsi zředěného vzorku a konjugátu do posledního membránového prostředku.
13. Pokud se substrát změní na tmavě modrou /alovou barvu, zavolejte technické služby a požádejte
o výměnu.
14. Vzorky stolice mohou obsahovat možné infekční složky a je s nimi třeba zacházet v souladu s
úrovní Biosafety Level 2, která se doporučuje pro jakékoliv potenciálně infekční vzorky lidského séra
nebo krve v manuálu CDC/NIH (Centra pro kontrolu nemocí/Národního zdravotnického institutu)
„Biologická bezpečnost v mikrobiologických a biomedicínských laboratořích“.
15. Při provádění testu noste jednorázové rukavice.
16. Reagencie Conjugate, Diluent, (konjugované ředidlo) a Wash Buffer (promývací pufr) obsazují
0,05% ProClin® 300 jako konzervační prostředek.I když je koncentrace nízká, je známo, že ProClin®
300 je škodlivý (může dojít k senzibilizaci pokožky).Pokud dojde k senzibilizaci / podráždění pokožky
nebo vyrážce, vyhledejte lékařskou pomoc / ošetření.Kontaminovaný oděv svlékněte a před
dalším použitím vyperte.S reagenciemi zacházejte v souladu s platnými předpisy pro bezpečnost
a správnou laboratorní praxi.Bezpečnostní listy tohoto produktu jsou k dispozici na vyžádání,
kontaktujte technickou podporu.
17. Řiďte se vašimi národními, regionálními a místními předpisy pro likvidaci odpadu.
18. Jakýkoli závažný incident nahlaste společnosti TECHLAB a příslušnému orgánu členského státu
EHP, ve kterém má uživatel a/nebo pacient bydliště.
ODBĚR VZORKŮ STOLICE, MANIPULACE SE VZORKY A JEJICH SKLADOVÁNÍ
Přijatelné typy vzorků Nepoužívat
Čerstvé vzorky stolice
Zmrazené vzorky stolice
Vzorky v transportních médiích (Cary Blair,
C&S)
Vzorky stolice ve formalinovém xačním přípravku
(např. formalin acetát sodný, 10% formalin,
merthiolát formalin)
Vzorky stolice v alkoholovém xačním přípravku
(např. polyvinylalkohol)
Skladování vzorků
Teplota
Přijatelná doba
skladování
Poznámky
2–8 °C 72 hodin Ideální vzorky jsou mně než 24 hodin staré
Zmrazený ≤ -10 °C Déle než 72 hodin
1. Standardní odběr a manipulace používané interně pro vzorky stolice jsou vhodné.
2. Vzorky stolice je třeba odebírat v čistých, nepropustných nádobách.
3. Skladování vzorků stolice v ředicím roztoku se nedoporučuje.
4. Nenechávejte vzorky stolice ve směsi ředicí roztok/konjugát > 24 hodin.
PŘÍPRAVA VZORKU
1. Před použitím nechte všechny reagencie a požadovaný počet prostředků ohřát na pokojovou
teplotu. Doporučuje se odstranit reagencie z pěnové vložky, aby se snížila doba potřebná k zahřátí
na pokojovou teplotu.
2. Připravte a označte jednu malou testovací zkumavku pro každý vzorek a volitelné externí kontroly
podle potřeby.
3. Pomocí černého kapátka se stupnicí přidejte 750 µl (2. ryska od špičky) ředicího roztoku do každé
zkumavky na vzorky stolice. Pro vzorky v transportním médiu, například Cary Blair nebo C&S,
přidejte do zkumavky 650 µl (1. ryska od špičky) ředicího roztoku.
Rozmrazujte při pokojové teplotě. Opakované
zmrazení a rozmrazení vzorků může vést ke ztrátě
aktivity vzorku v důsledku degradace toxinů.
Typ vzorku Objem ředicího roztoku
Čerstvé vzorky stolice 750 µl (2. značka od špičky)
Zmrazené vzorky stolice (zmražené
neředěné)
Vzorky v transportních médiích (Cary
Blair, C&S)
750 µl (2. značka od špičky)
650 µl (1. ryska od špičky)
750
650
µL
Externí kontroly (pozitivní a negativní) 750 µl (2. značka od špičky)
4. Přidejte jednu kapku konjugátu (lahvička s červeným víčkem) do každé zkumavky.
5. Použijte jednu jednorázovou pipetu (obsažené v sadě) na každý vzorek – pipety mají rysky 25 µL,
100 µL, 200 µL, 300 µL, 400 µL a 500 µL.
Transferová pipeta se stupnicí:
25 μL100 μL200 μL300 μL400 μL500 μL
28
CS
Page 30
6. Důkladně promíchejte všechny vzorky bez ohledu na konzistenci - je nezbytné, aby byly
vzorky před přenosem rovnoměrně suspendovány.
Tekuté/polotuhé vzorky – pipetujte 25 µl vzorku přenosovou pipetou a nadávkujte do směsi ředicí
roztok/konjugát. Stejnou přenosovou pipetou zamíchejte zředěný vzorek.
Formované/tuhé vzorky – je třeba dávat pozor, aby bylo do směsi vzorku přidáno správné množství
fekálií. Zamíchejte důkladně vzorek dřevěnou tyčkou aplikátoru a přeneste malou část (přibližně
2 mm v průměru, ekvivalent 25 µl) vzorku do směsi ředicí roztok/konjugát. Vzorek převeďte na
emulzi aplikační tyčinkou.
Vzorky stolice v transportních médiích Cary Blair nebo C&S - pipetujte 100 µl (2. stupeň od hrotu
přenosové pipety) vzorku do směsi ředicí roztok/konjugát.
7. Volitelné externí kontrolní vzorky:
Externí pozitivní kontrola - přidejte jednu kapku pozitivní kontroly (lahvička s šedým víčkem) do
směsi ředicí roztok/konjugát.
Externí negativní kontrola - přidejte 25 μl ředicího vzorku do směsi ředicí roztok/konjugát.
POZNÁMKA: Přenesení příliš malého množství vzorku nebo nedostatečné smíšení či suspendování
vzorku ve směsi ředicí roztok/konjugát může vést k falešně negativním výsledkům testu. Přidání
přílišného množství vzorku stolice může způsobit neplatné výsledky z důvodu omezeného toku vzorku.
ZKUŠEBNÍ POSTUP
1. Použijte jeden membránový prostředek na vzorek a jeden prostředek na volitelnou externí pozitivní
nebo negativní kontrolu podle potřeby. Foliové balení obsahující prostředky by mělo mít před
otevřením pokojovou teplotu. Použijte zařízení ihned po otevření. Vhodně označte každý prostředek
a orientujte jej na rovném povrchu tak, aby text „C. DIFF COMPLETE“ byl na spodní straně zařízení
a malá vzorkovací jamka byla v horním pravím rohu prostředku.
Membránový prostředek Jamka na vzorek
Reakční okno
2. Zavřete každou zkumavku zředěného vzorku a důkladně zamíchejte. Správné promíchání lze
dosáhnout na vortexu nebo převrácením zkumavky. Jakmile dojde ke zředění pozitivní kontroly ve
směsi ředicí roztok/konjugát, může se inkubovat při pokojové teplotě jakoukoli dobu až 24 hodin
před jeho nanesením do membránového prostředku.
3. Novou přenosovou pipetou přeneste 500 µl směsi zředěného vzorku a konjugátu do vzorkovací
jamky (malý otvor v horním pravém rohu) membránového zařízení a ujistěte se, že došlo k
vytlačení tekutého vzorku na kapilární podložku uvnitř membránového zařízení. Při vložení vzorku
do vzorkovací jamky se ujistěte, že špička přenosové pipety je skloněna v úhlu směrem k reakční
štěrbině (větší otvor uprostřed prostředku).
4. Inkubujte prostředek při pokojové teplotě 15 minut – vzorek prosákne prostředkem a vlhká oblast
se rozšíří napříč reakční štěrbiny.
POZNÁMKA KE VZORKŮM, U NICHŽ NEDOJDE K MIGRACI:
Příležitostně nemusí dojít ke správné migraci zředěného vzorku a reakční štěrbina není plně
vlhká. Pokud nedojde během 5 minut k úplnému navlhčení reakční štěrbiny od přidání vzorku
do vzorkovací jamky, přidejte 100 µl (4 kapky) ředicího roztoku do vzorkovací jamky a počkejte
dalších 5 minut (celkem 20 minut).
5. Po inkubaci přidejte 300 μl promývacího tlumivého roztoku do reakční štěrbiny pomocí bílého
kapátka se stupnicí. Nechte promývací tlumivý roztok protéci membránou reakční štěrbiny a
počkejte na úplnou absorpci.
6. Přidejte 2 kapky substrátu (lahvička s bílým víčkem) do reakční štěrbiny. Odečtěte a zaznamenejte
výsledky vizuálně po 10 minutách
INTERPRETACE VÝSLEDKŮ
1. Interpretace testu je nejspolehlivější, když je prostředek odečten ihned na konci 10minutové reakční
doby. Odečítejte prostředek z normální pracovní vzdálenosti na dobře osvětleném místě. Pozorujte
přímo kolmo nad prostředkem.
2. Pozorujte prostředek, zda se objeví modré tečky uprostřed reakční štěrbiny, což představuje interní
pozitivní kontrolu. Výskyt jakékoli kontrolní tečky (teček) představuje validní interní kontrolu. Pozadí
se může jevit bílé až světle modré. Pozorujte prostředek, zda se objeví modré linky na stranách „Ag“
a „Tox“ reakční štěrbiny, což představuje linky testu. Linky mohou být slabé až tmavé intenzity.
3. Pozitivní antigenový („Ag“) výsledek: Pozitivní výsledek antigenu může být interpretován kdykoli
mezi přidáním substrátu a uplynutím 10 minut na odečet. Pro pozitivní výsledek antigenu jsou
viditelné modrá „Ag“ linka a tečkovaná modrá kontrolní linka pod „C“ (obrázek 1a). Linky mohou být
slabé až tmavé intenzity. Zjevně částečná linka je interpretována jako pozitivní výsledek. Odbarvení
membrány nelze interpretovat jako pozitivní výsledek. Pozitivní výsledek výsledek indikuje
přítomnost C. difcile.
4. Positivní antigenový a toxinový („Tox“) výsledek Pokud je výsledek antigenu pozitivní (tj. jsou
vidět modrá linka „Ag“ a modrá tečkovaná linka pod „C“), pokračujte v interpretaci výsledku toxinu.
Pozitivní výsledek toxinu může být interpretován kdykoli mezi přidáním substrátu a uplynutím 10
minut na odečet. V případě pozitivního výsledku toxinu je vidět modrá linka „Tox“ (obrázek 1b). Linka
může být slabé až tmavé intenzity. Zjevně částečná linka je interpretována jako pozitivní výsledek.
Odbarvení membrány nelze interpretovat jako pozitivní výsledek. Pozitivní výsledek výsledek
indikuje přítomnost toxinu C. difcile.
5. Negativní výsledek: Test nemůže být interpretován jako negativní nebo neplatný, dokud neuplyne
10 minut po přidání substrátu. Jedna modrá tečkovaná linka je viditelná uprostřed reakční štěrbiny
pod „C“ a žádné linky testu nejsou na straně „Ag“ ani „Tox“ reakční štěrbiny (obrázek 1c). Negativní
výsledek v části antigenu indikuje, že antigen C. difcile není ve vzorku přítomný nebo je pod mezí
detekce testu. Negativní výsledek v části toxinu indikuje, že toxin C. difcile není ve vzorku přítomný
nebo je pod mezí detekce testu.
6. Neplatný výsledek: V reakční štěrbině nejsou vidět žádné linky (obrázek 1d). Výsledek testu je
neplatný, pokud pod „C“ není přítomná modrá tečkovaná linka po uplynutí reakční doby (obrázky 1e,
1f, 1g).
7. Negativní na antigen („Ag“), pozitivní na toxin („Tox“): Nízké procento vzorků může být
testováno negativní na antigen, ale pozitivní na toxin. Tyto vzorky je třeba považovat za neurčité
a opakovaně otestovat s novým vzorkem (obrázek 1h). Pokud při opakovaném testu je vzorek
negativní na antigen, ale pozitivní na toxin, vykažte pozitivní výsledek toxinu.
CS
29
Page 31
OBRÁZEK 1: INTERPRETACE VÝSLEDKŮ C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE
Obrázek 1a
Pozitivní antigenový výsledek
Obrázek 1d
Neplatný výsledek
Obrázek 1g
Neplatný výsledek
KONTROLA KVALITY
Interní:Ve střední části reakční štěrbiny musí být viditelná tečkovaná modrá linka pod „C“ na každém
membránovém prostředku použitím k testu. Objevení modrých kontrolních teček potvrzuje, že byly
vzorek a reagencie přidány správně, že jsou reagencie aktivní v době provedení testu a že vzorek
správně migroval přes membránový prostředek. Rovněž potvrzuje reaktivitu dalších reagencií spojených
s analýzou. Rovnoměrné pozadí v oblasti výsledku et považováno za interní negativní kontrolu. Pokud
je test proveden správně a reagencie fungují správně, pozadí bude bílé, což umožní získat jednoznačný
výsledek.
Externí: Reaktivitu sady C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE® je třeba ověřit po přijetí pomocí pozitivní
kontroly a negativní kontroly (ředicí roztok). Pozitivní kontrola se dodává se soupravou (lahvička s šedým
víčkem). Pozitivní kontrola potvrzuje reaktivitu dalších reagencií spojených s analýzou a není určena
pro zajištění přesnosti analytické meze stanovení. Ředicí roztok se používá jako negativní kontrola.
Další testy se mohou provádět s kontrolami ke splnění požadavků místních nebo národních předpisů a
požadavků akreditačních organizací.
Obrázek 1b
Positivní antigenový
a toxinový výsledek
Obrázek 1e
Neplatný výsledek
Obrázek 1h
Viz 7 pro interpretaci
®
Obrázek 1c
Negativní výsledek
Obrázek 1f
Neplatný výsledek
OMEZENÍ
1. Test C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE® se používá pro detekci antigenu a toxinů C. difcile ve
vzorcích stolice. Test potvrzuje přítomnost toxinu ve stolici a tato informace by měla být zvážena
lékařem ve světle klinické anamnézy a fyzického vyšetření pacienta. Test C. DIFF QUIK CHEK
COMPLETE® zjišťuje úrovně toxinu A při ≥ 0,63 ng/ml, toxin B při ≥ 0,16 ng/ml a glutamát
dehydrogenázu při ≥ 0,8 ng/ml.
2. Vzorky stolice jsou extrémně složité. Optimální výsledky testu C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE®
se získají se vzorky, které jsou méně než 24 hodin staré. Většinu neředěných vzorků je možné
skladovat mezi 2 °C a 8 °C po dobu 72 hodin bez významné degradace toxinů. Pokud nejsou vzorky
analyzovány během tohoto období, mohou být zmrazeny a rozmrazeny. Opakované zmrazování a
rozmrazování však může vést ke ztrátě imunoreaktivity antigenu a toxinů A a B.
3. Některé vzorky mohou poskytnout slabou reakci. Příčinou může být řada různých faktorů, například
přítomnost nízkých koncentrací antigenu nebo toxinu, přítomnost vázajících látek nebo inaktivující
enzymy ve stolici. Linky mohou být slabé až tmavé intenzity. Tyto vzorky by měly být vykázány jako
pozitivní, pokud je pozorovány jakákoli modrá linka, dokonce i jen částečná. Zjevně částečná modrá
linka je interpretována jako pozitivní výsledek.
4. Vzorky stolice konzervované v 10% formalinu, merthiolát formalinu, formalin acetát sodném nebo
polyvinylalkoholu nelze používat.
5. Test C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE® je kvalitativní. Intenzitu barvy nelze posuzovat kvantitativně.
6. Některé izoláty C. sordellii mohou reagovat v testu C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE® z důvodu
produkce imunologicky příbuzných toxinů (1).
7. U malých dětí byly hlášeny rychlosti kolonizace až do 50 %. Vysoká rychlost byla také hlášena u
pacientů s cystickou brózou (1,3). U těchto skupin se mohou vyskytnout pozitivní výsledky, ale musí
se na ně nahlížet ve spojení s možností být kolonizovaný přenašeč.
8. Jediný organismus jiný než C. difcile, který reagoval v toxinové části testu C. DIFF QUIK CHEK
COMPLETE® byl Clostridium sordellii VPI 9048. Tento kmen produkuje toxiny HT a LT, které jsou
homology toxinů A a B.
9. Nejsou k dispozici žádná data o účincích střevních proplachů, bariových klystýrů, projímadel nebo
střevních přípravků na funkci testu C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE®. Všechny tyto postupy mohou
vést ke značnému zředění nebo přítomnosti přídavných látek, která mohou ovlivnit výkon testu.
OČEKÁVANÉ HODNOTY
Onemocnění způsobené Clostridium difcile je hlavně nozokomiální onemocnění starších pacientů a
četnost onemocnění závisí na faktorech jako je populace pacientů, typ instituce a epidemiologie. Hlášený
výskyt onemocnění způsobených C. difcile u pacientů s průjmem spojeným s léčbou antibiotiky může
být v rozmezí 5 až 20 % a nemocnice mohou mít zkušenosti s nižším nebo vyšším rozsahem. Je důležité
zvážit výsledky testu ve spojení s klinickými symptomy, protože zdraví dospělí a velký počet zdravých
malých dětí (až 50 %) bude pozitivní na toxin C. difcile. Kromě toho byla také u pacientů s cystickou
brózou hlášena míra přenosu C. difcile 22 % až 32 % (1,3). Ve studiích prováděných na tomto zařízení
pomocí symptomatických pacientů byla incidence toxinů A a B12 % a GDH 18 %. Pozitivní výsledek
antigenové části testu C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE® potvrzuje přítomnost C. difcile ve vzorku stolice;
negativní výsledek indikuje nepřítomnost organismu. Pozitivní výsledek toxinové části testu C. DIFF QUIK
CHEK COMPLETE® potvrzuje přítomnost toxinu C. difcile ve vzorku stolice; negativní výsledek indikuje
nepřítomnost toxinu nebo nedostatečné množství toxinu pro detekci.
30
CS
Page 32
FUNKČNÍ CHARAKTERISTIKY
Klinické hodnocení antigenové části testu C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE
Antigenová část testu C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE® byla srovnána s bakteriální kultivací. Vzorky
zahrnuté v hodnocení byly odeslány do klinické laboratoře k běžnému testování. Test bakteriální kultury
byl prováděn podle interních postupů. Výsledky jsou uvedeny v tabulce 1.
Tabulka 1. Souhrn klinického výkonu srovnávající test C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE®
s bakteriální kultivací
n = 1126
C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE
Linka antigenu, pozitivní
C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE
Linka antigenu, negativní
Bakteriální kultura
Pozitivní
®
®
201 62
21 842
®
Bakteriální kultura
Negativní
95% interval
spolehlivosti
Citlivost 90,5 % 85,7–93,9
Specicita 93,1 % 91,2–94,7
Pozitivní predikční hodnota 76,4 % 70,7–81,3
Negativní predikční hodnota 97,6 % 96,2–98,4
Korelace 92,6 % 91,8–93,4
Diskrepantní vzorky byly hodnoceny stávajícími testy ELISA na glutamátdehydrogenázu C. difcile.
Dvacet devět z 62 falešně pozitivních vzorků bylo pozitivních v dalším GDH testu a byly
posouzeny jako skutečně pozitivní.
Třináct z 21 falešně negativních vzorků bylo negativních v dalším GDH testu a byly posouzeny
jako skutečně negativní.
Antigenová část testu C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE® byla srovnána analýzou tkáňové kultury k
detekci toxinu C. difcile. Vzorky zahrnuté v hodnocení byly odeslány do klinické laboratoře k běžnému
testování. Výsledky jsou uvedeny v tabulce 2. Antigenová část testu C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE®
detekovala 98,7 % vzorků pozitivně určených tkáňovou kulturou.
Tabulka 2. Souhrn klinického výkonu srovnávající test C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE®
Klinické hodnocení toxinové části testu C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE
Toxinová část textu C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE® byla srovnána a analýzou tkáňové kultury ve
dvou klinických laboratořích a interně ve společnosti TECHLAB, Inc. Vzorky zahrnuté v hodnocení byly
odeslány do klinické laboratoře k běžnému testování. Výsledky jsou uvedeny v tabulce 3.
Tabulka 3. Souhrn klinického výkonu srovnávající test C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE® s
s analýzou tkáňové kultury.
n = 1126
C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE
Linka antigenu, pozitivní
C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE
Linka antigenu, negativní
analýzou tkáňové kultury.
n = 1126
C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE
Pozitivní linka toxinu
C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE
Negativní linka toxinu
Tkáňová kultura
Pozitivní
®
®
®
®
154 109
2 861
Tkáňová kultura
Pozitivní
137 6
19 964
Tkáňová kultura
®
Tkáňová kultura
95% interval
spolehlivosti
Negativní
Negativní
Citlivost 87,8 % 81,4–92,3
Specicita 99,4 % 98,6–99,7
Pozitivní predikční hodnota 95,8 % 90,7–98,3
Negativní predikční hodnota 98,1 % 96,9–98,8
Korelace 97,8 % 97,6–98,0
Diskrepantní vzorky byly hodnoceny stávajícími testy ELISA na toxiny A a B.
Pět ze 6 falešně pozitivních vzorků bylo pozitivních v ELISA testu a byly posouzeny jako
skutečně pozitivní.
Dvanáct z 19 falešně negativních vzorků bylo negativních ELISA testem a byly posouzeny jako
skutečně negativní.
CS
31
Page 33
VLIV KONZISTENCE VZORKU STOLICE
Účinky konzistence vzorků stolice na test C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE
Reakce vzorků stolice různých konzistencí v části antigenu (n = 978) a části toxinů (n = 981) v testu C. DIFF
QUIK CHEK COMPLETE® je znázorněna v tabulce 4 a 5. Procenta pozitivních reakcí za využití buď analýzy
kultury, nebo testu C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE® byla podobná ve všech třech vzorcích stolice (kapalné,
polotuhé a tuhé). Všechny vzorky byly odeslány na test na C. difcile. Základem odeslání byla klinická
anamnéza pacienta a nikoli konzistence vzorku. V antigenové části výsledky ukázaly, že test C. DIFF QUIK
CHEK COMPLETE® má podobné výsledky s bakteriální kulturou, pokud mají testované vzorky různou
konzistenci. V toxinové části výsledky ukázaly, že test C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE® má podobné
výsledky s analýzou tkáňové kultury, pokud mají testované vzorky různou konzistenci.
Tabulka 4. Reakce vzorků stolice různé konzistence v antigenové
Pozitivní bakteriální
kultivací
C. DIFF QUIK CHEK
COMPLETE
Linka antigenu, pozitivní
Negativní bakteriální
kultivací
C. DIFF QUIK CHEK
COMPLETE
Linka antigenu, negativní
Tabulka 5. Reakce vzorků stolice různé konzistence v toxinové části testu C. DIFF QUIK CHEK
části testu C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE
Počet vzorků
(n = 978)
Kapalné vzorky
(n = 335)
59 (17,6 %) 110 (21,1 %) 19 (15,7 %)
®
72 (21,5 %) 128 (24,5 %) 25 (20,7 %)
276 (82,4 %) 412 (78,9 %) 102 (84,3 %)
®
COMPLETE
Počet vzorků
(n = 981)
263 (78,5 %) 394 (75,5 %) 96 (79,3 %)
®
Kapalné vzorky
(n = 336)
®
Polotuhý
Vzorky (n = 522)
Polotuhý
Vzorky (n = 523)
®
Pevné vzorky
(n = 121)
Pevné vzorky
(n = 122)
Pozitivní tkáňovou kultivací 43 (12,8 %) 81 (15,5 %) 8 (6,6 %)
C. DIFF QUIK CHEK
COMPLETE
Pozitivní linka toxinu
®
42 (12,5 %) 72 (13,8 %) 7 (5,7 %)
Negativní tkáňovou kultivací 293 (87,2 %) 442 (84,5 %) 114 (93,4 %)
C. DIFF QUIK CHEK
COMPLETE
Negativní linka toxinu
ANALYTICKÁ CITLIVOST
Mezní hodnota testu byla stanovena při koncentracích 0,63 ng/ml pro toxin A, 0,16 ng/ml pro toxin B a
0,8 ng/ml pro glutamátdehydrogenázu.
32
®
294 (87,5 %) 451 (86,2 %) 115 (94,3 %)
REPRODUKOVATELNOST
Reprodukovatelnost testu C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE® byla určena pomocí 12 vzorků stolice,
které byly zakódovány, aby se zabránila jejich identikace během testování. Analýzy byly prováděny
3 nezávislými laboratořemi, každý vzorek byl kultivován 3 dny. Vzorky dosáhly případů očekávaných
výsledků ve 100 %.
KŘÍŽOVÁ REAKTIVITA
Vzorky stolice inokulované následujícími mikroorganismy na konečnou koncentraci přibližně 108
nebo více organismů na ml nereagovaly v antigenové ani toxinové části testu C. DIFF QUIK CHEK
COMPLETE
Bakterie nebo patogen: Aeromonas hydrophila, Bacillus cereus, Bacillus subtilis, Bacteroides fragilis,
Campylobacter coli, Campylobacter fetus, Campylobacter jejuni, Candida albicans, Clostridium
butyricum, Clostridium clostridiforme, Clostridium haemolyticum, Clostridium histolyticum, Clostridium
novyi, Clostridium perfringens, Clostridium septicum, Clostridium sordellii (netoxikogenní), Clostridium
sporogenes, Enterobacter aerogenes, Enterobacter cloacae, Enterococcus faecalis, Escherichia coli
EIEC, Escherichia coli, Escherichia coli O157:H7, Escherichia coli ETEC, Klebsiella pneumoniae,
Peptostreptococcus anaerobius, Proteus vulgaris, Pseudomonas aeruginosa, Salmonella typhimurium,
Serratia liquifaciens, Shigella dysenteriae, Shigella exneri, Shigella sonnei, Staphylococcus aureus,
Staphylococcus aureus (Cowans), Staphylococcus epidermidis, Vibrio cholerae, Vibrio parahaemolyticus,
Yersinia enterocolitica
Jediný organismus jiný než C. difcile, který reagoval v toxinové části testu C. DIFF QUIK CHEK
COMPLETE® byl Clostridium sordellii VPI 9048. Tento kmen produkuje toxiny HT a LT, které jsou
homology toxinů A a B.
Následující viry o velikosti 10
CHEK COMPLETE®:
Viry: Adenovirus typy 1, 2, 3, 5, 40, 41, lidský koronavirus, coxsackievirus B2, B3, B4, B5, echovirus 9,
11, 18, 22, 33, enterovirus typ 68, 69, 70, 71, rotavirus.
INTERFERUJÍCÍ LÁTKY
Následující látky (složení USA) neměly žádný vliv na výsledky testu, pokud byly ve stolici obsaženy v
uvedených koncentracích: mucin (3,5 % hm.), lidská krev (40 % obj.), síran barnatý (5 % hm.), Imodium®
(5 % obj.), Kaopectate ® (5 % obj.), Pepto-Bismol ® (5 % obj.), stearová/palmitová kyselina (40 % hm.),
metronidazol (0,25 % hm.), vankomycin (0,25 %.hm.).
®
3,3
8,25
až 10
jednotek TCID na 0,2 ml, nereagovaly v testu C. DIFF QUIK
REAKCE NA KLINICKÉ IZOLÁTY ZÍSKANÉ NA CYKLOSERIN-CEFOITINFRUKTOZOVÉM AGARU (CCFA)
Celkem 103 klinických izolátů C. difcile, získaných z anaerobní bakteriální kultury na CCFA po 3 dnech
při 37 °C, bylo testováno testem C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE®. Pro tuto analýzu byly odebrány
jednotlivé kolonie a rozmíchány v ředicím roztoku, jak je doporučeno pro vzorky stolice. Všech 103 izolátů
vedlo k pozitivní reakci v testu.
Sedmdesát ze 103 izolátů (68 %) bylo z vzorků stolice, které byly pozitivní na toxin C. difcile analýzou
tkáňové kultury. Z nich dalo 56 (80 %) pozitivní reakci na toxin při vyšetřování následného anaerobního
růstu na CCFA po 3 dny při 37 °C.
CS
Page 34
TECHLAB® C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE
TILSIGTET ANVENDELSE
Testen TECHLAB® C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE® er en hurtig membran-enzym-immunoassay til
påvisning af Clostridium difcile-antigenet glutamatdehydrogenase samt toksin A og B i en
enkelt reaktionsbrønd. Testen påviser C. difcile-antigenet glutamatdehydrogenase som en screening for
forekomst af C. difcile og bekræfter forekomst af toksigen C. difcile ved at påvise toksin A og B
i fæcesprøver fra personer, der mistænkes for at have C. difcile-sygdom. Testen skal anvendes som en
hjælp ved diagnosticering af C. difcile-sygdom. Som ved andre C. difcile-test skal resultaterne
betragtes i sammenhæng med patientens sygehistorie.
FORKLARING
Efter behandling med antibiotika udvikler mange patienter gastrointestinal problemer, der strækker sig fra
mild diarré til alvorlig pseudomembranøs colitis. Mange tilfælde af de mildere former for gastrointestinal
sygdom og de este tilfælde af pseudomembranøs kolit skyldes toksigene stammer af Clostridium difcile
(1). Denne organisme er en opportunistisk anaerob bakterie, som vokser i tarmen, når den normale
ora er blevet ændret af antibiotika. Toksigene stammer af C. difcile bærer generne, der koder for
toksinerne, mens ikke-toksigene stammer ikke bærer toksingenerne. Sygdomsdebut er associeret med
toksinerne, som produceres af den toksigene organisme. De kliniske symptomer, der er forbundet med
sygdommen, menes primært at skyldes toksin A, som er et vævsbeskadigende enterotoksin (2,3).
C. difcile producerer også et toksin, der benævnes toksin B. Toksin B, der er blevet omtalt som
organismens cytotoksin, er det toksin, der påvises ved hjælp af den vævsdyrkningsassay, der anvendes
af mange laboratorier. Toksigene C. difcile-stammer producerer begge toksiner eller kun toksin B
(4-7). Glutamatdehydrogenasen fra C. difcile er en god antigenmarkør for organismen i fæces, fordi den
produceres i store mængder af alle stammer, toksigene såvel som ikke-toksigene (8-10). Antigenet kan
påvises i fæcesprøver ved at bruge C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE®. Et positivt resultat ved testen for
glutamatdehydrogenase fra C. difcile bekræfter forekomst af denne organisme i fæcesprøver; et negativt resultat indikerer fravær af organismen. Et positivt resultat ved testen for toksin A og B bekræfter
forekomst af toksigen C. difcile.
TESTPRINCIP
Testen C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE® bruger antistoffer, der er specikke for glutamatdehydrogenase
og toksin A og B fra C. difcile. Enheden indeholder et reaktionsvindue med tre lodrette linjer af immobiliserede antistoffer. Antigentestlinjen (”Ag”) indeholder antistoffer mod C. difcile-glutamatdehydrogenase.
Kontrollinjen (”C”) er en punkteret linje, som indeholder peberrodsperoxidase-antistoffer (HRP-antistoffer).
Testlinjen for toksinerne A og B (”Tox”) indeholder antistoffer mod C. difcile-toksinerne A og B. Konjugatet
består af antistoffer over for glutamatdehydrogenase og antistoffer over for toksin A og B koblet til
peberrodsperoxidase. For at udføre testen tilsættes prøven til et glas indeholdende en blanding af diluent
og konjugat. Den fortyndede blanding af prøve og konjugat tilsættes prøvebrønden, og enheden får lov til
at inkubere ved rumtemperatur i 15 minutter. Under inkubationen binder eventuel glutamatdehydrogenase
og toksin A og B i prøven sig til antistof-peroxidase-konjugaterne. Antigen-antistof-konjugatkomplekserne
migrerer igennem en lterpude til en membran, hvor de opfanges af de immobiliserede glutamatdehydrogenase-specikke og toksin A- og B-specikke antistoffer i linjerne. Reaktionsvinduet vaskes efterfølgende
med vaskebuffer efterfulgt af tilsætning af substrat. Efter en inkubationsperiode på 10 minutter undersøges
”Ag”-reaktionen visuelt for fremkomst af en lodret blå linje på ”Ag”-siden af reaktionsvinduet. En blå linje
indikerer en positiv test. Hvis ”Ag” er positiv, skal ”Tox”-reaktionen undersøges visuelt for fremkomst af en
®
DA
lodret blå linje på ”Tox”-siden af reaktionsvinduet. En blå linje indikerer en positiv test. En positiv ”C”-reaktion indikeret af en lodret, punkteret blå linje under ”C”-delen af reaktionsvinduet bekræfter, at testen
fungerer korrekt, og at resultaterne er valide.
LEVEREDE MATERIALER
Membranenheder – hver pose indeholder 1 enhed
DEV
Diluent (22 ml pr. aske) – Protein buffer med en pipettemontur med volume indicator
monteret (indeholder 0,05 % ProClin® 300)*
H412: Skadelig for vandlevende organismer, med langvarige virkninger
Vaskebuffer (12 ml pr. aske) – Buffer med en pipettemontur med volume indicator
REAGWASH
monteret (indeholder 0,05 % ProClin® 300)*
H412: Skadelig for vandlevende organismer, med langvarige virkninger
Substrat (3,5 ml pr. aske) – Opløsning indeholdende tetramethylbenzidin
REAGSUBS
Konjugat (2,5 ml pr. aske) – Antistof specikt for glutamatdehydrogenase
ENZCONJ
koblet til peberrodsperoxidase og antistoffer specikke for toksin A og B
koblet til peberrodsperoxidase i en proteinopløsning med buffer (indeholder
0,05 % ProClin® 300)*
Positiv kontrol (2 ml) – Antigen i en proteinopløsning med buffer
Transferpipetter af plast til engangsbrug – skalainddeling ved 25 µL, 100 µL, 200 µL, 300 µL, 400 µL
og 500 µL
IVD
*Signalord: Advarsel
H317: Kan forårsage allergisk hudreaktion
P261, P272, P280, P302, P352, P333, P313, P321, P362, P364, P501
NØDVENDIGE MATERIALER OG UDSTYR SOM IKKE MEDFØLGER
Små prøveglas (f.eks. mikrocentrifugerør af plast eller glasrør)
Applikatorpinde Timer Vortex-mikser
Engangshandsker til håndtering af fæcesprøver Pipetter og spidser
HOLDBARHED OG OPBEVARING
Kittets udløbsdato er angivet på etiketten og er 24 måneder fra fremstillingsdatoen. De enkelte
komponenters udløbsdatoer er anført på komponentens etiket. Kittet skal opbevares mellem 2°C og 8°C.
Kittet og alle komponenter forbliver stabile efter åbning indtil de angivne udløbsdatoer, hvis de opbevares
mellem 2 °C og8 °C. Lad alle komponenter opnå stuetemperatur før brug. Kittet forbliver stabilt ved
stuetemperatur i efterfølgende 8 timers arbejdsskift, hvis det sættes tilbage på køl mellem hvert skift.
SIKKERHEDSFORANSTALTNINGER
1. Til in vitro-diagnostisk brug. Kun til professionel brug.
2. Reagenser fra forskellige kit må ikke blandes eller ombyttes. Et kit må ikke anvendes efter udløbsdatoen.
3. Enhver komponent i kittet skal efterses for eventuelle tegn på lækage. Ved ankomsten skal kittet
Til in vitro-diagnostisk brug
efterses for at sikre, at komponenterne ikke er frosne eller varme ved berøring som følge af ukorrekte
forsendelsesforhold.
33
Page 35
4. Hætter, spidser og pipetteenheder er farvemærkede og må IKKE blandes eller ombyttes!
25 μL100 μL200 μL300 μL400 μL500 μL
5. Reagenserne må ikke fryses. Kittet skal opbevares ved 2° C til 8° C.
6. Posen, der indeholder membranenheden, skal have rumtemperatur før åbning. Hold membranenheden
tør før brug.
7. Brug fæcesprøver inden for 72 timer efter indhentningen for at opnå optimale resultater. Prøver, som
fryses, kan miste aktivitet som følge af nedfrysning og optøning. Hvis der anvendes frosne prøver, skal
de optøs ved rumtemperatur.
8. Hold reagensasker lodret ved dispensering af reagenser for at sikre ensartet dråbestørrelse og korrekt
volumen.
9. Prøver og membranenheder skal håndteres og bortskaffes som potentielt biologisk skadelige efter brug.
10. Membranenheder kan ikke genbruges.
11. Testen er optimeret med hensyn til følsomhed og specicitet. Ændringer af den angivne procedure og/
eller af testforhold kan påvirke testens følsomhed og specicitet. Afvig ikke fra den angivne procedure.
12. Vær opmærksom på den totale analysetid, når der testes mere end en fæcesprøve. Tilsæt diluent først,
og tilsæt derefter konjugatet til hvert glas med diluent. Tilsæt så prøve til glasset med diluent/konjugat.
Bland alle de fortyndede prøver grundigt, og overfør dem til membranenheden. Inkubationstrinnet på
15 minutter begynder, når den sidste fortyndede blanding af prøve og konjugat er blevet overført til den
sidste membranenhed.
13. Hvis substrat-reagenset ændrer sig til en mørkeblå/violet farve, tilkaldes teknisk service med henblik
på udskiftning.
14. Fæcesprøver kan indeholde potentielt infektiøse stoffer og skal håndteres på ”Biosikkerhedsniveau 2”
som anbefalet i CDC/NIH-brugerhåndbogen ”Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories.”
15. Brug engangshandsker, når testen udføres.
16. Konjugat-, diluent- og vaskebuffer-reagenser indeholder 0,05 % ProClin® 300 som konserveringsmiddel.
Selvom koncentrationen er lav, er det kendt, at ProClin® 300 er skadeligt (hudsensibilisering kan
forekomme). I tilfælde af hudsensibilisering/hudirritation eller udslæt, skal der søges læge. Tag
forurenet tøj af, og vask det, før det bruges igen. Reagenserne skal håndteres i henhold til de gældende
bestemmelser for laboratoriesikkerhed og god laboratoriepraksis. Sikkerhedsdatablade for dette
produkt fås ved forespørgsel, kontakt teknisk support.
17. Følg henholdsvis de nationale, regionale og lokale forordninger vedrørende bestemmelserne for
bortskaffelse af affald.
18. Indberet alle alvorlige hændelser til TECHLAB og den kompetente myndighed i den EØS-medlemsstat,
hvor brugeren og/eller patienten har hjemsted.
INDHENTNING, HÅNDTERING OG OPBEVARING AF FÆCESPRØVER
Acceptable prøvetyper Brug ikke
Friske fæcesprøver
Frosne fæcesprøver
Prøver i transportmedier (Cary Blair, C&S)
Prøveopbevaring
Temperatur
2° C–8° C 72 timer Ideelle prøver er mindre end 24 timer gamle
Acceptabel
opbevaringstid
Frosset ≤ -10° C Mere end 72timer
34
Fæcesprøver i formalinbaseret ksativ (f.eks. natriumacetatformalin, 10 % formalin, merthiolatformalin)
Fæcesprøver i alkoholbaseret ksativ (f.eks. polyvinylalkohol)
Kommentarer
Optøs ved rumtemperatur. Nedfrysning og
optøning ere gange kan resultere i tab af
prøveaktivitet som følge af toksinnedbrydning.
1. Standardindsamlings- og håndteringsprocedurer, der anvendes internt til fæcesprøver, er egnede.
2. Fæcesprøver skal indsamles i rene, tætte beholdere.
3. Opbevaring af fæcesprøver i diluenten anbefales IKKE.
4. Lad ikke fæcesprøverne blive i diluent/konjugat-blandingen i >24 timer.
PRØVEKLARGØRING
1. Lad alle reagenser og det nødvendige antal enheder få rumtemperatur før brug. Det anbefales at
fjerne reagenserne fra skumindsatsen for at reducere den tid, der er nødvendig for at opvarme dem
til rumtemperatur.
2. Klargør og mærk ét lille prøveglas for hver prøve og valgfrie eksterne kontroller som nødvendigt
3. Med brug af den sorte monterede målepipette tilsættes 750 µl (2 skalainddeling fra spidsen) diluent
til hvert glas til fæcesprøver. For prøver i transportmedier så som Cary Blair eller C&S tilsættes
650 µl (første målemærke fra spidsen) diluent til glasset.
Prøvetype Diluentvolumen
Friske fæcesprøver 750 µl (2 skalainddeling fra spidsen)
Frosne fæcesprøver (frosne
ufortyndede)
Prøver i transportmedier (Cary
Blair, C&S)
Eksterne kontroller (positive og
negative)
4. Tilsæt én dråbe konjugat (aske med rød hætte) til hvert glas.
5. Tag én transferpipette af plast (leveret med kittet) til hver prøve – pipetterne har ophøjede
skalainddelinger ved 25 µL, 100 µL, 200 µL, 300 µL, 400 µL og 500 µL.
750 µl (2 skalainddeling fra spidsen)
650 µl (første målemærke fra spidsen)
750 µl (2 skalainddeling fra spidsen)
750
650
µL
Skalainddelt transferpipette
6. Bland alle prøver grundigt uanset konsistens - det er afgørende, at prøverne er opslæmmet
ensartet før overførsel.
Flydende/halvfaste prøver – pipetter 25 µl prøve med en transferpipette, og dispenser til diluent/
konjugat-blandingen. Brug den samme transferpipette til at blande den fortyndede prøve.
Formede/faste prøver – Vær omhyggelig med at tilsætte den korrekte mængde formet fæces til
prøveblandingen. Bland prøven grundigt ved hjælp f en applikatorpind af træ, og overfør en lille
del (ca. 2 mm i diameter, svarende til 25 µl) af prøven til diluent/konjugat-blandingen. Emulger
prøven ved hjælp af applikatorpinden.
Fæcesprøver i transportmediet Cary Blair eller C&S - pipetter 100 µl (2. skalainddeling fra
transferpipettens spids) af prøven til diluent/konjugat-blandingen.
DA
Page 36
7. Valgfrie eksterne kontrolprøver:
Ekstern positiv kontrol - tilsæt én dråbe positiv kontrol (aske med grå hætte) til diluent/konjugatblandingen.
Ekstern negativ kontrol - tilsæt 25 μl diluent til diluent/konjugat-blandingen.
BEMÆRK Hvis der overføres for lidt prøve, eller hvis blanding og fuldstændig opslemning af prøven i
diluent/konjugat-blandingen mislykkes, kan det resultere i et falsk negativt testresultat. Tilsætning af for
meget fæcesprøve kan medføre ugyldige resultater som følge af begrænset prøveow.
TESTPROCEDURE
1. Tag én membranenhed pr. prøve og én enhed pr. valgfri ekstern positiv eller negativ kontrol som
nødvendigt. Folieposerne indeholdende enhederne skal varmes op til rumtemperatur før åbning.
Brug enheden straks efter åbningen. Mærk hver enhed behørigt, og anbring den på en plan ade,
så det trykte ”C. DIFF COMPLETE” er nederst på enheden, og så den lille prøvebrønd bender sig
i øverste højre hjørne af enheden.
Membranenhed Prøvebrønd
Reaktionsvindue
2. Luk hvert glas med fortyndet prøve, og bland grundigt. Korrekt blanding kan opnås ved at svinge
glasset rundt eller vende det på hovedet. Når en patientprøve eller positiv kontrol er blevet fortyndet
i diluent/konjugat-blandingen, kan den inkuberes ved rumtemperatur i et hvilket som helst tidsrum
op til 24 timer før tilsætning til membranenheden.
3. Brug en ny transferpipette, og overfør 500 µl af den fortyndede blanding af prøve og konjugat til
membranenhedens prøvebrønd (det mindste hul i det øverste højre hjørne af enheden), idet man
sikrer sig, at den ydende prøve udtømmes på puden med vægevirkning inden i membranenheden.
Når prøven fyldes i prøvebrønden skal man sikre sig, at spidsen af transferpipetten har en skrå
retning mod reaktionsvinduet (største hul i midten af enheden).
4. Enheden inkuberes ved rumtemperatur i 15 minutter – prøven vil trække væske igennem enheden,
og et vådt område vil sprede sig hen over reaktionsvinduet.
BEMÆRK ANGÅENDE PRØVER, HVOR VANDRING MISLYKKES:
Nu og da vandrer en fortyndet prøve ikke rigtigt, og reaktionsvinduet bliver ikke helt vådt. Hvis
reaktionsvinduet ikke ser ud til at blive helt vådt inden for 5 minutter efter tilsætning af prøven til
prøvebrønden, tilsættes 100 µl (4 dråber) diluent til prøvebrønden. Vent yderligere 5 minutter (i i alt
20 minutter).
5. Efter inkuberingen tilsættes 300 μl vaskebuffer til reaktionsvinduet ved hjælp af den monterede
hvide målepipette. Lad vaskebufferen løbe igennem reaktionsvinduets membran og blive
absorberet fuldstændigt.
6. Tilsæt 2 dråber substrat (aske med hvid hætte) til reaktionsvinduet. Aæs og registrer resultaterne
visuelt efter 10 minutter.
TOLKNING AF RESULTATER
1. Tolkning af testen er mest pålidelig, når enheden aæses straks ved slutningen af reaktionsperioden
på 10 minutter. Aæs enheden i normal arbejdsafstand i et godt oplyst område. Se på den med en
sigtelinje lige over enheden.
2. Iagttag enheden med henblik på fremkomst af blå prikker midt i reaktionsvinduet, som repræsenterer
den interne positive kontrol. Fremkomsten af eventuel(le) kontrolprik(ker) repræsenterer en valid
intern kontrol. Baggrundens farve kan vise sig som hvid til lys blå. Iagttag enheden for fremkomst
af blå linjer på ”Ag”- og ”Tox”-siderne af reaktionsvinduet, som repræsenterer testlinjerne. Linjernes
intensitet kan fremstå som svag til mørk.
3. Positivt antigenresultat (”Ag”). Et positivt antigenresultat kan tolkes på et hvilket som helst
tidspunkt mellem tilsætningen af substrat og den 10-minutters aæsningstid. Ved et positivt
antigenresultat er den blå ”Ag”-linje og den punkterede blå kontrollinje under ”C” synlige (Figur
1a). Linjernes intensitet kan fremstå som svag til mørk. En tydeligt partiel linje tolkes som et positivt
resultat. Membranmisfarvning må ikke tolkes som et positivt resultat. Et positivt resultat indikerer
forekomst af C. difcile.
4. Positivt antigen- og toksinresultat (”Tox”): Hvis antigenresultatet er positivt (dvs. hvis der ses en
blå ”Ag”-linje og en punkteret blå kontrol under ”C”), fortsætter man til tolkningen af toksinresultatet.
Et positivt toksinresultat kan tolkes på et hvilket som helst tidspunkt mellem tilsætningen af substrat
og den 10-minutters aæsningstid. Ved et positivt toksinresultat ses en blå ”Tox”-linje (Figur 1b).
Linjens intensitet kan fremstå som svag til mørk. En tydeligt partiel linje tolkes som et positivt resultat.
Membranmisfarvning må ikke tolkes som et positivt resultat. Et positivt resultat indikerer forekomst af
C. difcile-toksin.
5. Negativt resultat: En test kan ikke tolkes som negativ eller ugyldig før 10 minutter efter tilsætningen
af substrat. Der ses en enkelt blå punkteret linje midt i reaktionsvinduet, under ”C”, og der ses
ingen testlinjer på ”Ag”-siden eller ”Tox”-siden af reaktionsvinduet (Figur 1c). Et negativt resultat
i antigendelen indikerer, at der ikke er C. difcile-antigen i prøven, eller at det er under testens
detektionsgrænse. Et negativt resultat i toksindelen indikerer, at der ikke er C. difcile-antigen i
prøven, eller at det er under testens detektionsgrænse.
6. Ugyldigt resultat: Der ses ingen linjer i reaktionsvinduet (Figur 1d). Testresultatet er ugyldigt, hvis
der ikke ndes en blå punkteret linje under ”C” ved afslutningen af reaktionsperioden (Figurerne 1e,
1f og 1g).
7. Negativt antigen (”Ag”), positivt toksin (”Tox”): En lille procentdel af prøverne kan teste negative for
antigen, men positive for toksin. Disse prøver skal betragtes som ubestemmelige og testes igen med
brug af en frisk prøve (Figur 1h). Hvis prøven igen tester negativt for antigen, men positivt for toksin,
skal det rapporteres som positivt toksinresultat.
DA
35
Page 37
FIGUR 1: TOLKNING AF C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE® RESULTATER
Figur 1a
Positivt antigenresultat
Figur 1d
Ugyldigt resultat
Figur 1g
Ugyldigt resultat
KVALITETSKONTROL
Intern: Der skal ses en punkteret blå linje midt i reaktionsvinduet under ”C” på hver membranenhed, som
testes. Fremkomsten af de blå kontrolprikker bekræfter, at prøven og reagenserne er blevet tilsat korrekt,
at reagenserne var aktive på tidspunktet, hvor analysen blev udført, og at prøven vandrede korrekt gennem
membranenheden. Det bekræfter desuden reaktiviteten af de andre reagenser, der er associeret med
analysen. En ensfarvet baggrund i resultatområdet betragtes om en intern negativ kontrol. Hvis testen er
blevet udført korrekt, og hvis reagenserne fungerer rigtigt, vil baggrunden være hvid for at give et skelneligt
resultat.
Ekstern: Reaktiviteten af C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE® kittet skal vericeres ved modtagelsen ved
hjælp af den positive kontrol og den negative kontrol (diluent). Den positive kontrol leveres sammen med
kittet (aske med grå hætte). Den positive kontrol bekræfter reaktiviteten af de andre reagenser, der er
associeret med analysen, og er ikke beregnet til at sikre præcision ved analyse-cut-off. Diluent anvendes
til den negative kontrol. Der kan udføres yderligere test med kontrollerne for at opfylde kravene i lokale,
statslige og/eller forbundsstatslige bestemmelser og/eller krav fra akkrediteringsorganisationer.
Figur 1b
Positivt antigen-
og toksinresultat
Figur 1e
Ugyldigt resultat
Figur 1h
Se nr. 7 angående tolkning
Figur 1c
Negativt resultat
Figur 1f
Ugyldigt resultat
BEGRÆNSNINGER
1. Testen C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE® anvendes til at påvise C. difcile-antigen og -toksin(er) i
fæcesprøver. Testen bekræfter forekomst af toksin i fæces, og denne information skal tages op til
behandling af lægen i lyset af patientens sygehistorie og lægeundersøgelse. Testen C. DIFF QUIK
CHEK COMPLETE® vil påvise niveauer af toksin A på ≥0,63 ng/ml, toksin B på ≥0,16 ng/ml og
glutamatdehydrogenase på ≥0,8 ng/ml.
2. Fæcesprøver er ekstremt komplekse. Optimale resultater med testen C. DIFF QUIK CHEK
COMPLETE® opnås med prøver, som er under 24 timer gamle. De este ufortyndede prøver
kan opbevares ved mellem 2° C og 8° C i 72 timer, før der bemærkes væsentlig nedbrydning af
toksinet Hvis prøverne ikke analyseres inden for denne tid, kan de nedfryses og optøs. Gentagen
nedfrysning og optøning kan dog resultere i tab i immunreaktivitet hos antigen og toksinerne A og B.
3. Visse prøver kan give svage reaktioner. Det kan skyldes en række faktorer så som forekomst af
lave niveauer af antigen og/eller toksin, forekomst af bindende stoffer eller inaktiverende enzymer
i fæces. Linjernes intensitet kan fremstå som svag til mørk. Disse prøver skal rapporteres som
positive, hvis der ses en blå linje, selv en partiel linje. En tydeligt partiel blå linje tolkes som et
positivt resultat.
4. Fæcesprøver, der er konserveret i 10 % formalin, merthiolatformalin, natriumacetatformalin eller
polyvinylalkohol kan ikke bruges.
5. Testen C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE® er kvalitativ. Farveintensiteten må ikke tolkes kvantitativt.
6. Visse isolater af C. sordellii kan reagere ved C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE® testen som følge af
produktionen af immunologisk relaterede toksiner (1).
7. Koloniseringsrater på op til 50 % er blevet rapporteret hos spædbørn. Der er også rapporteret en
høj rate hos patienter med cystisk brose (1,3). Resultaterne kan se positive ud i disse grupper, men
de skal ses i sammenhæng med muligheden for, at det er en koloniseret bærer.
8. Den eneste ikke-C. difcile-organisme, der reagerede i toksindelen af C. DIFF QUIK CHEK
COMPLETE® testen, var Clostridium sordellii VPI 9048. Denne stamme producerer toksinerne HT
og LT, som er homologe med henholdsvis toksin A og toksin B.
9. Der ndes ingen data vedrørende virkningerne af colonskylninger, bariumlavementer, laksativer eller
tarmudrensninger på funktionen af C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE® testen. Alle disse procedurer
kan resultere i kraftig fortynding eller forekomst af additiver, som kan påvirke testens funktion.
FORVENTEDE VÆRDIER
Clostridium difcile-sygdom er først og fremmest en nosokomiel sygdom hos ældre patienter, og
sygdomsfrekvensen er afhængig af faktorer som patientpopulation, institutionstype og epidemiologi. Den
rapporterede incidens af C. difcile-sygdom hos patienter med antibiotika-associeret diare kan variere
fra 5 til 20 %, og hospitaler kan opleve rater, der er lavere eller højere end dette interval. Det er vigtigt at
betragte alle testresultater i sammenhæng med kliniske symptomer, da nogle raske voksne og et stort
antal raske spædbørn (op til 50 %) vil være positive over for C. difcile-toksin. Desuden er der rapporteret rater for C. difcile-bærere på 22 % til 32 % hos patienter med cystisk brose (1,3). I de forsøg, der
ved hjælp af patienter med symptomer er blevet udført for denne enhed, var incidensen for toksin A og
B 12 % og for GDH 18 %. Et positivt resultat i antigendelen af testen C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE®
bekræfter forekomsten af C. difcile i en fæcesprøve. Et negativt resultat indikerer, at organismen ikke
ndes. Et positivt resultat i toksindelen af C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE® bekræfter forekomsten af
C. difcile-toksin i en fæcesprøve. Et negativt resultat indikerer, at der ikke ndes toksin, eller at der er
utilstrækkelige niveauer af toksin til påvisning.
36
DA
Page 38
FINKTIONSKARAKTERISTIKA
Klinisk evaluering af antigendelen af C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE® testen
Antigendelen af C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE® testen blev sammenlignet med bakteriedyrkning.
Prøver, der var inkluderet i evalueringen, blev indsendt til de kliniske laboratorier til rutinetestning. Den
bakterielle dyrkningstest blev udført i overensstemmelse med interne procedurer. Resultaterne er vist i
Tabel 1.
Tabel 1 Opsummering af klinisk funktion ved sammenligning af C. DIFF QUIK CHEK
COMPLETE® testen og bakteriedyrkning.
n = 1126
C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE
Antigenlinje positiv
C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE
Antigenlinje negativ
Bakteriedyrkning
Positiv
®
®
201 62
21 842
Bakteriedyrkning
Negativ
95 %
kondensgrænser
Følsomhed 90,5 % 85,7–93,9
Specicitet 93,1 % 91,2–94,7
Prædiktiv positiv værdi 76,4 % 70,7–81,3
Prædiktiv negativ værdi 97,6 % 96,2–98,4
Korrelation 92,6 % 91,8–93,4
Uoverensstemmende prøver blev evalueret ved brug af gyldige ELISA-test for C. difcile-glutamatdehydrogenase.
29 af de 62 falsk positive prøver var positive med en anden GDH-test og blev betragtet som
sande positive.
13 af de 21 falsk negative prøver var negative med en anden GDH-test og blev betragtet som
sande negative.
Antigendelen af C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE® testen blev sammenlignet med vævsdyrkningsassay
med hensyn til påvisning af C. difcile-toksin. Prøver, der var inkluderet i evalueringen, blev indsendt
til de kliniske laboratorier til rutinetestning. Resultaterne er vist i Tabel 2. Antigendelen af C. DIFF QUIK
CHEK COMPLETE® testen påviste 98,7 % af de prøver, der var positive ved vævsdyrkning.
Tabel 2 Opsummering af klinisk funktion ved sammenligning af C. DIFF QUIK CHEK
Klinisk evaluering af toksindelen af C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE® testen
Toksindelen af C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE® testen blev sammenlignet med vævsdyrkningsassay
på to kliniske laboratorier og internt ved TECHLAB, Inc. Prøverne, der var inkluderet i evalueringen, blev
sendt til de kliniske laboratorier til rutinetestning. Resultaterne er vist i Tabel 3.
Tabel 3 Opsummering af klinisk funktion ved sammenligning af C. DIFF QUIK CHEK
COMPLETE® testen og vævsdyrkningsassay.
n = 1126
C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE
Antigenlinje positiv
C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE
Antigenlinje negativ
®
®
COMPLETE® testen og vævsdyrkningsassay.
n = 1126
C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE
Toksinlinje positiv
C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE
Toksinlinje negativ
®
®
Vævsdyrkning
Positiv
154 109
2 861
Vævsdyrkning
Positiv
137 6
19 964
Vævsdyrkning
Negativ
Vævsdyrkning
Negativ
95 %
kondensgrænser
Følsomhed 87,8 % 81,4-92,3
Specicitet 99,4 % 98,6-99,7
Prædiktiv positiv værdi 95,8 % 90,7-98,3
Prædiktiv negativ værdi 98,1 % 96,9-98,8
Korrelation 97,8 % 97,6-98,0
Uoverensstemmende prøver blev evalueret ved brug af gyldige ELISA-test for toksin A og B.
5 af de 6 falsk positive prøver var positive med ELISA og blev betragtet som sande positive.
12 af de 19 falsk negative prøver var negative med ELISA og blev betragtet som sande negative.
DA
37
Page 39
EFFEKT AF FÆCESPRØVEKONSISTENS
Effekt af fæcesprøvekonsistens på C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE® testen
Reaktionen af fæcesprøver af varierende konsistens i antigendelen (n=978) og toksindelen (n=981) på C.
DIFF QUIK CHEK COMPLETE® testen er vist i Tabel 4 og 5. Procentdelen af positive reaktioner ved brug
af enten dyrkningsassay eller C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE® testen var næsten ens ved alle tre typer
fæcesprøver (ydende, halvfast og fast). Alle prøverne blev sendt til C. difcile-testning. Baggrunden for
fremsendelsen var patientens sygehistorie og ikke konsistensen af prøven. I antigendelen viser resultaterne,
at C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE® testen fungerede lig bakteriedyrkning ved test af prøver af forskellig
konsistens. I toksindelen viser resultaterne, at C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE® testen fungerede lig
vævsdyrkningsassay ved test af prøver af forskellig konsistens.
Tabel 4 Reaktion af fæcesprøver af varierende konsistens i antigendelen af C. DIFF QUIK
Tabel 5 Reaktion af fæcesprøver af varierende konsistens i toksindelen af C. DIFF QUIK CHEK
CHEK COMPLETE® testen
Antal prøver
(n = 978)
Positive ved
bakteriedyrkningsassay
C. DIFF QUIK CHEK
COMPLETE
Antigenlinje positiv
Negative ved
bakteriedyrkningsassay
C. DIFF QUIK CHEK
COMPLETE
Antigenlinje negativ
Positive ved
vævsdyrkningsassay
C. DIFF QUIK CHEK
COMPLETE
Toksinlinje positiv
Negative ved
vævsdyrkningsassay
C. DIFF QUIK CHEK
COMPLETE
Toksinlinje negativ
®
®
COMPLETE® testen
Antal prøver
(n = 981)
®
®
Flydende prøver
(n = 335)
59 (17,6 %) 110 (21,1 %) 19 (15,7 %)
72 (21,5 %) 128 (24,5 %) 25 (20,7 %)
276 (82,4 %) 412 (78,9 %) 102 (84,3 %)
263 (78,5 %) 394 (75,5 %) 96 (79,3 %)
Flydende prøver
(n = 336)
43 (12,8 %) 81 (15,5 %) 8 (6,6 %)
42 (12,5 %) 72 (13,8 %) 7 (5,7 %)
293 (87,2 %) 442 (84,5 %) 114 (93,4 %)
294 (87,5 %) 451 (86,2 %) 115 (94,3 %)
Halvfaste
prøver (n = 522)
Halvfaste
prøver (n = 523)
Faste prøver
(n = 121)
Faste prøver
(n = 122)
ANALYSEFØLSOMHED
Cut-off for analysen blev fastsat til koncentrationer på 0,63 ng/ml for toksin A, 0,16 ng/ml for toksin B og
0,8 ng/ml for glutamatdehydrogenase.
REPRODUCERBARHED
Reproducerbarheden af C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE® testen blev bestemt ved brug af 12 fæcesprøver, som blev kodet for at forhindre identikation af dem under testning. Testningen blev udført ved 3
uafhængige laboratorier, som testede prøverne i 3 dage. Prøverne frembragte de forventede resultater
100 % af tiden.
KRYDSREAKTION
Fæcesprøver inokuleret med de følgende mikroorganismer til en slutkoncentration på omkring 108
organimser pr. mL eller højere, viste ingen reaktion i antigen- eller toksindelen af C. DIFF QUIK CHEK
COMPLETE® testen:
Bakterie eller patogen: Aeromonas hydrophila, Bacillus cereus, Bacillus subtilis, Bacteroides fragilis,
Campylobacter coli, Campylobacter fetus, Campylobacter jejuni, Candida albicans, Clostridium
butyricum, Clostridium clostridiforme, Clostridium haemolyticum, Clostridium histolyticum, Clostridium
novyi, Clostridium perfringens, Clostridium septicum, Clostridium sordellii (ikke-toksigen), Clostridium sporogenes, Enterobacter aerogenes, Enterobacter cloacae, Enterococcus faecalis, Escherichia
coli EIEC, Escherichia coli, Escherichia coli O157:H7, Escherichia coli ETEC, Klebsiella pneumoniae,
Peptostreptococcus anaerobius, Proteus vulgaris, Pseudomonas aeruginosa, Salmonella typhimurium,
Serratia liquifaciens, Shigella dysenteriae, Shigella exneri, Shigella sonnei, Staphylococcus aureus,
Staphylococcus aureus (Cowans), Staphylococcus epidermidis, Vibrio cholerae, Vibrio parahaemolyticus,
Yersinia enterocolitica
Den eneste ikke-C. difcile-organisme, der reagerede i toksindelen af C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE®
testen, var Clostridium sordellii VPI 9048. Denne stamme producerer toksinerne HT og LT, som er homologe med henholdsvis toksin A og toksin B.
De følgende vira på 10
COMPLETE® testen:
Vira: Adenovirus type 1, 2, 3, 5, 40, 41, Humant coronavirus, Coxsackievirus B2, B3, B4, B5, Echovirus
9, 11, 18, 22, 33, Enterovirus type 68, 69, 70, 71, Rotavirus.
FORSTYRRENDE STOFFER
De følgende stoffer (USA-formulering) havde ingen virkning på testresultaterne, når de fandtes i fæces
i de angivne koncentrationer: Mucin (3,5 % w/v), humant blod (40 % v/v), bariumsulfat (5 % w/v),
Imodium® (5 % v/v), Kaopectate® (5 % v/v), Pepto-Bismol® (5 % v/v), stearin-/palmitinsyre (40 % w/v),
Metronidazol (0,25 % w/v), Vancomycin (0,25 % w/v).
3,3
8,25
til 10
TCID-enheder pr. 0,2 ml reagerede ikke ved C. DIFF QUIK CHEK
REAKTION AF KLINISKE ISOLATER OPNÅET PÅ CYCLOSERIN-CEFOXITINFRUKTOSE-AGAR (CCFA)
I alt 103 kliniske isolater af C. difcile opnået ved anaerob bakteriedyrkning på CCFA efter 3 dage ved
37° C blev testet med C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE® testen. Til analysen blev der udvalgt individuelle
kolonier, som blev opslæmmet i diluent som anbefalet for fæcesprøver. Alle 103 isolater gav en positiv
antigenrekation ved testen.
70 af 103 isolater (68 %) var fra fæcesprøver, som var positive med hensyn til C. difcile -toksin ved
vævsdyrkningsassay. Af disse gav 56 (80 %) en positiv toksinreaktion ved screening efter anaerob vækst
på CCFA i 3 dage ved 37° C.
38
DA
Page 40
TECHLAB® C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE
ΕΝΔΕΔΕΙΓΜΕΝΗ ΧΡΗΣΗ
Η εξέταση TECHLAB® C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE® είναι μια ταχεία ανάλυση ενζυμικού ανοσοπροσδιορισμού σε μεμβράνη για την ταυτόχρονη ανίχνευση του αντιγόνου «γλουταμικής δεσυδρογονάσης» του
Clostridium difcile και των τοξινών A και B σε μία κυψελίδα αντίδρασης. Η εξέταση ανιχνεύει το αντιγόνο
του C. difcile, γλουταμική δεσυδρογονάση, ως απόδειξη για την παρουσία του C. difcile και επιβεβαιώνει
την παρουσία τοξικογόνου C. difcile ανιχνεύοντας τις τοξίνες A και B σε δείγματα κοπράνων ατόμων για
τα οποία υπάρχει υποψία ότι πάσχουν από νόσο που σχετίζεται με το C. difcile. Η εξέταση προορίζεται
για χρήση ως βοήθημα στη διάγνωση νόσου που σχετίζεται με το C. difcile. Όπως συμβαίνει με άλλες
εξετάσεις για το C. difcile, τα αποτελέσματα θα πρέπει να μελετώνται σε συνδυασμό με το ιστορικό του
ασθενούς.
ΕΞΗΓΗΣΗ ΕΞΕΤΑΣΗΣ
Μετά από την αγωγή με αντιβιοτικά, πολλοί ασθενείς αναπτύσσουν προβλήματα του γαστρεντερικού τα
οποία κυμαίνονται από ήπια διάρροια μέχρι ψευδομεμβρανώδη κολίτιδα. Πολλές περιπτώσεις ηπιότερων
μορφών των γαστρεντερικών νοσημάτων και οι περισσότερες περιπτώσεις της ψευδομεμβρανώδους
κολίτιδας προκαλούνται από τοξικογόνα στελέχη του Clostridium difcile (1). Αυτός ο οργανισμός είναι ένα
ευκαιριακό αναερόβιο βακτήριο το οποίο αναπτύσσεται στο έντερο μόλις η φυσιολογική χλωρίδα αλλοιωθεί
από το αντιβιοτικό. Τα τοξικογόνα στελέχη του C. difcile φέρουν τα γονίδια που κωδικοποιούν τις τοξίνες,
ενώ τα μη τοξικογόνα στελέχη δεν φέρουν γονίδια τοξινών. Η εκδήλωση της νόσου σχετίζεται με τις τοξίνες
που παράγονται από τον τοξικογόνο οργανισμό. Τα κλινικά συμπτώματα που σχετίζονται με τη νόσο θεωρείται ότι οφείλονται κυρίως στην τοξίνη A, η οποία είναι μια εντεροτοξίνη που καταστρέφει τον ιστό (2,3).
Το C. difcile παράγει επίσης μια δεύτερη τοξίνη, την προσδιορισμένη τοξίνη B. Η τοξίνη B, η οποία έχει
αναφερθεί ως η κυτταροτοξίνη του οργανισμού, είναι η τοξίνη που ανιχνεύεται από την ανάλυση της ιστοκαλλιέργειας η οποία χρησιμοποιείται επί του παρόντος από πολλά εργαστήρια. Τα τοξικογόνα στελέχη του
C. difcile παράγουν και τις δύο τοξίνες ή μόνο την τοξίνη B (4-7). Η γλουταμική δεσυδρογονάση του C.
difcile αποτελεί έναν καλό δείκτη αντιγόνου για αυτόν τον οργανισμό στα κόπρανα, επειδή παράγεται σε
υψηλά ποσοστά από όλα τα στελέχη, τοξικογόνα ή μη τοξικογόνα (8-10). Το αντιγόνο μπορεί να ανιχνευτεί
σε δείγματα κοπράνων με χρήση της εξέτασης C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE®. Το θετικό αποτέλεσμα
της εξέτασης για τη γλουταμική δεσυδρογονάση του C. difcile επιβεβαιώνει τη παρουσία αυτού του οργανισμού σε δείγμα κοπράνων, ενώ το αρνητικό αποτέλεσμα υποδεικνύει την απουσία του οργανισμού. Το
θετικό αποτέλεσμα της εξέτασης για τις τοξίνες A και B επιβεβαιώνει την παρουσία τοξικογόνου C. difcile.
ΑΡΧΕΣ ΤΗΣ ΕΞΕΤΑΣΗΣ
Η εξέταση C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE® χρησιμοποιεί ειδικά αντισώματα για τη γλουταμική δεσυδρογονάση και τις τοξίνες A και B του C. difcile. Η συσκευή περιέχει ένα παράθυρο αντίδρασης με τρεις κατακόρυφες
γραμμές ακινητοποιημένων αντισωμάτων. Η γραμμή εξέτασης αντιγόνου («Ag») περιέχει αντισώματα έναντι
της γλουταμικής δεσυδρογονάσης του C. difcile. Η γραμμή ελέγχου («C») είναι μια διάστικτη γραμμή που πε-
ριέχει αντισώματα υπεροξειδάσης από ραφανίδα (HRP). Η γραμμή εξέτασης τοξινών A και B («Tox») περιέχει
αντισώματα έναντι των τοξινών A και B του C. difcile. Το σύζευγμα περιέχει αντισώματα έναντι της γλουταμικής
δεσυδρογονάσης και αντισώματα έναντι των τοξινών A και B συζευγμένα με υπεροξειδάση από ραφανίδα.
Για την εκτέλεση της εξέτασης, το δείγμα προστίθεται σε έναν σωλήνα που περιέχει ένα μείγμα αραιωτικού
και συζεύγματος. Το μείγμα αραιωμένου δείγματος-συζεύγματος προστίθεται στην κυψελίδα δείγματος και η
συσκευή επωάζεται σε θερμοκρασία δωματίου για 15 λεπτά. Κατά τη διάρκεια της επώασης, τυχόν γλουταμική
δεσυδρογονάση και τοξίνες A και B που υπάρχουν στο δείγμα δεσμεύονται στα συζεύγματα αντισωμάτων-υπεροξειδάσης. Τα συμπλέγματα συζεύγματος αντιγόνου-αντισωμάτων μετακινούνται μέσω ενός φιλτρόπανου σε
μια μεμβράνη όπου δεσμεύονται από τα ακινητοποιημένα ειδικά αντισώματα για τη γλουταμική δεσυδρογονάση
και τις τοξίνες A και B στις γραμμές. Κατόπιν, το παράθυρο αντίδρασης πλένεται με ρυθμιστικό διάλυμα πλύσης
και, στη συνέχεια, προστίθεται το υπόστρωμα. Μετά από επώαση 10 λεπτών, η αντίδραση «Ag» εξετάζεται
οπτικά για την εμφάνιση μια κατακόρυφης μπλε γραμμής στην πλευρά «Ag» του παραθύρου αντίδρασης.
®
EL
Η μπλε γραμμή υποδεικνύει θετικό αποτέλεσμα της εξέτασης. Αν η αντίδραση «Ag» είναι θετική, τότε πρέπει να
εξεταστεί οπτικά η αντίδραση «Tox» για την εμφάνιση μια μπλε γραμμής στην πλευρά «Tox» του παραθύρου
αντίδρασης. Η μπλε γραμμή υποδεικνύει θετικό αποτέλεσμα της εξέτασης. Η θετική αντίδραση «C», η οποία
υποδεικνύεται από μια κατακόρυφη διάστικτη μπλε γραμμή κάτω από το τμήμα «C» του παραθύρου αντίδρα-
σης, επιβεβαιώνει ότι η εξέταση λειτουργεί σωστά και τα αποτελέσματα είναι έγκυρα.
ΥΛΙΚΑ ΠΟΥ ΠΑΡΕΧΟΝΤΑΙ
Μεμβρανικές συσκευές – κάθε θύλακας περιέχει 1 συσκευή
DEV
Αραιωτικό (22 mL ανά φιάλη) – Ρυθμιστικό διάλυμα πρωτεΐνης με
διαβαθμισμένο σταγονόμετρο (περιέχει 0,05% ProClin® 300)*
H412: Επιβλαβές για τους υδρόβιους οργανισμούς, με μακροχρόνιες επιπτώσεις
Ρυθμιστικό διάλυμα πλύσης (12 mL ανά φιάλη) – Ρυθμιστικό διάλυμα με
REAGWASH
διαβαθμισμένο σταγονόμετρο (περιέχει 0,05% ProClin® 300)*
H412: Επιβλαβές για τους υδρόβιους οργανισμούς, με μακροχρόνιες επιπτώσεις
Υπόστρωμα (3,5 mL ανά φιάλη) – Διάλυμα που περιέχει τετραμεθυλοβενζιδίνη
REAGSUBS
Σύζευγμα (2,5 mL ανά φιάλη) – Ειδικό αντίσωμα για τη γλουταμική
ENZCONJ
δεσυδρογονάση συζευγμένο με υπεροξειδάση από ραφανίδα και ειδικά
αντισώματα για τις τοξίνες A και B συζευγμένα με υπεροξειδάση από ραφανίδα
σε ρυθμιστικό διάλυμα πρωτεΐνης (περιέχει 0,05% ProClin® 300)*
Θετικός ορός ελέγχου (2 mL) – Αντιγόνο σε ρυθμιστικό διάλυμα πρωτεΐνης
Πλαστικές πιπέτες μεταφοράς μίας χρήσης – διαβαθμισμένες στα 25 µL, 100 µL, 200 µL, 300 µL, 400 µL
και 500 µL
IVD
*Προειδοποιητική λέξη: Προειδοποίηση
H317: Μπορεί να προκαλέσει αλλεργική δερματική αντίδραση
P261, P272, P280, P302, P352, P333, P313, P321, P362, P364, P501
ΑΠΑΙΤΟΥΜΕΝΑ ΥΛΙΚΑ ΚΑΙ ΕΞΟΠΛΙΣΜΟΣ ΠΟΥ ΔΕΝ ΠΑΡΕΧΟΝΤΑΙ
Μικροί δοκιμαστικοί σωλήνες (π.χ. πλαστικοί σωλήνες μικροφυγοκέντρησης ή γυάλινοι σωλήνες)
Ραβδία εφαρμογής Χρονόμετρο Αναμείκτης vortex
Γάντια μίας χρήσης για χειρισμό των δειγμάτων κοπράνων Σύστημα πιπετών και ρύγχη
ΔΙΑΡΚΕΙΑ ΖΩΗΣ ΚΑΙ ΑΠΟΘΗΚΕΥΣΗ
Η ημερομηνία λήξης του κιτ αναγράφεται στην ετικέτα και είναι 24 μήνες από την ημερομηνία κατασκευής. Η
ημερομηνία λήξης για κάθε συστατικό αναγράφεται στην ξεχωριστή ετικέτα του συστατικού. Το κιτ πρέπει να
φυλάσσεται σε θερμοκρασία μεταξύ 2°C και 8°C. Το κιτ και όλα τα συστατικά του παραμένουν σταθερά μέχρι
την αναφερόμενη ημερομηνία λήξης όταν φυλάσσονται σε θερμοκρασία μεταξύ 2°C και 8°C μετά το πρώτο
άνοιγμα. Όλα τα συστατικά θα πρέπει να βρίσκονται σε θερμοκρασία δωματίου πριν από τη χρήση. Το κιτ
παραμένει σταθερό σε θερμοκρασία δωματίου κατά τις διαδοχικές βάρδιες 8 ωρών εάν αποθηκεύεται στο
ψυγείο μεταξύ των βαρδιών.
ΠΡΟΦΥΛΑΞΕΙΣ
1. Για in vitro διαγνωστική χρήση. Μόνο για επαγγελματική χρήση.
2. Μην αναμειγνύετε αντιδραστήρια από διαφορετικά κιτ και μην τα εναλλάσσετε μεταξύ τους. Μην
Για in vitro διαγνωστική χρήση
χρησιμοποιείτε ένα κιτ μετά το πέρας της ημερομηνίας λήξης.
39
Page 41
3. Κάθε συστατικό του κιτ πρέπει να ελέγχεται για τυχόν ενδείξεις διαρροής. Κατά την άφιξη του κιτ, ελέγξτε
25 μL100 μL200 μL300 μL400 μL500 μL
το για να βεβαιωθείτε ότι τα συστατικά δεν είναι παγωμένα ή θερμά στην αφή λόγω ακατάλληλων
συνθηκών αποστολής.
4. Τα πώματα, τα ρύγχη και τα σταγονόμετρα φέρουν χρωματική κωδικοποίηση. ΜΗΝ τα αναμειγνύετε και
ΜΗΝ τα εναλλάσσετε μεταξύ τους!
5. Μην ψύχετε τα αντιδραστήρια. Το κιτ πρέπει να φυλάσσεται σε θερμοκρασία μεταξύ 2°C και 8°C.
6. Ο θύλακας που περιέχει τη μεμβρανική συσκευή πρέπει να βρίσκεται σε θερμοκρασία δωματίου πριν
από το άνοιγμα. Διατηρείτε τις μεμβρανικές συσκευές στεγνές πριν από τη χρήση.
7. Χρησιμοποιείτε τα δείγματα κοπράνων εντός 72 ωρών από τη συλλογή τους για να επιτύχετε τα
βέλτιστα αποτελέσματα. Τα δείγματα που έχουν ψυχθεί ενδέχεται να χάσουν τη δραστικότητά τους
λόγω της ψύξης και της απόψυξης. Σε περίπτωση χρήσης κατεψυγμένων δειγμάτων, αποψύξτε τα σε
θερμοκρασία δωματίου.
8. Διατηρείτε τις φιάλες αντιδραστηρίων σε κατακόρυφη θέση κατά τη διανομή, προκειμένου να εξασφαλίσετε
ότι η παροχή πραγματοποιείται με συνέπεια στο μέγεθος των σταγόνων και σε σωστό όγκο.
9. Πρέπει να χειρίζεστε και να απορρίπτετε τα δείγματα και τις μεμβρανικές συσκευές ως δυνητικώς βιοεπικίνδυνα
υλικά μετά από τη χρήση τους.
10. Δεν είναι δυνατή η εκ νέου χρήση των μεμβρανικών συσκευών.
11. Η εξέταση έχει βελτιστοποιηθεί για τη επίτευξη ευαισθησίας και ειδικότητας. Τυχόν τροποποιήσεις
της καθορισμένης διαδικασίας ή/και των προϋποθέσεων της εξέτασης ενδέχεται να επηρεάσουν την
ευαισθησία και την ειδικότητα της εξέτασης. Μην αποκλίνετε από την καθορισμένη διαδικασία.
12. Δώστε προσοχή στο συνολικό χρόνο της ανάλυσης κατά την εξέταση περισσότερων του ενός
δειγμάτων κοπράνων. Προσθέστε πρώτα το αραιωτικό και, στη συνέχεια, προσθέστε το σύζευγμα σε
κάθε σωλήνα αραιωτικού. Κατόπιν, προσθέστε το δείγμα στο σωλήνα του αραιωτικού/συζεύγματος.
Αναμείξτε διεξοδικά όλα τα αραιωμένα δείγματα και μεταφέρετέ τα στη μεμβρανική συσκευή. Το βήμα
της 15λεπτης επώασης πρέπει να ξεκινήσει αφού έχετε μεταφέρει και το τελευταίο αραιωμένο μείγμα
δείγματος-συζεύγματος στην τελευταία μεμβρανική συσκευή.
13. Αν το αντιδραστήριο υποστρώματος γίνει σκούρο μπλε/μωβ, επικοινωνήστε με την τεχνική υποστήριξη
για αντικατάσταση.
14. Τα δείγματα κοπράνων ενδέχεται να περιέχουν δυνητικώς λοιμογόνους παράγοντες και δεν πρέπει να
υποβάλλονται σε χειρισμό στο «Επίπεδο βιοασφάλειας 2», όπως συνιστάται στο εγχειρίδιο «Biosafety in
Microbiological and Biomedical Laboratories» (Βιοασφάλεια σε μικροβιολογικά και βιοϊατρικά εργαστήρια) του
Κέντρου ελέγχου και πρόληψης νοσημάτων (CDC) /Εθνικού Ινστιτούτου Υγείας (NIH) των Η.Π.Α.
15. Φοράτε γάντια μιας χρήσης κατά την εκτέλεση της εξέτασης.
16. Τα αντιδραστήρια σύζευγμα, αραιωτικό και Ρυθμιστικό διάλυμα πλύσης περιέχουν 0,05% ProClin®
300 ως συντηρητικό. Αν και η συγκέντρωση είναι χαμηλή, το ProClin® 300 είναι γνωστό ότι είναι
επιβλαβές (ενδέχεται να παρατηρηθεί ευαισθητοποίηση του δέρματος). Εάν παρατηρηθεί
ευαισθητοποίηση/ερεθισμός του δέρματος ή εμφανιστεί εξάνθημα: Συμβουλευθείτε / Επισκεφθείτε
γιατρό. Βγάλτε τα μολυσμένα ρούχα και πλύνετέ τα πριν τα ξαναχρησιμοποιήσετε. Να χειρίζεστε τα
αντιδραστήρια σύμφωνα με τους ισχύοντες κανονισμούς για την ασφάλεια του εργαστηρίου και τις
ορθές εργαστηριακές πρακτικές. Τα Δελτία δεδομένων ασφαλείας για αυτό το προϊόν είναι διαθέσιμα
κατόπιν αιτήματος. Επικοινωνήστε με την τεχνική υποστήριξη.
17. Τηρείτε τις εθνικές, περιφερειακές και τοπικές διατάξεις αντιστοίχως για την απόρριψη των αποβλήτων.
18. Αναφέρετε κάθε σοβαρό περιστατικό στην TECHLAB και στην αρμόδια αρχή του κράτους μέλους του
ΕΟΧ όπου είναι εγκατεστημένος ο χρήστης ή/και ο ασθενής.
ΣΥΛΛΟΓΗ, ΧΕΙΡΙΣΜΟΣ ΚΑΙ ΑΠΟΘΗΚΕΥΣΗ ΤΩΝ ΔΕΙΓΜΑΤΩΝ ΚΟΠΡΑΝΩΝ
Αποδεκτοί τύποι δειγμάτων Μην χρησιμοποιείτε
Νωπά δείγματα κοπράνων
Κατεψυγμένα δείγματα κοπράνων
Δείγματα σε υλικά μεταφοράς (Cary Blair, C&S)
40
Δείγματα κοπράνων σε μονιμοποιητικό διάλυμα με
βάση τη φορμαλίνη (π.χ. φορμαλίνη με οξικό νάτριο,
10% φορμαλίνης, φορμαλίνη merthiolate)
Δείγματα κοπράνων σε μονιμοποιητικό διάλυμα με βάση
το οινόπνευμα (π.χ. πολυβινυλο-αλκοόλη)
Θερμοκρασία φύλα-
ξης δείγματος
2°C – 8°C 72 ώρες
Κατεψυγμένα ≤ -10°C
1. Ενδείκνυνται οι τυπικές διαδικασίες συλλογής και χειρισμού που εφαρμόζονται εντός των εργαστηρίων
για τα δείγματα κοπράνων.
2. Τα δείγματα κοπράνων πρέπει να συλλέγονται σε καθαρά, στεγανά δοχεία.
3. ΔΕΝ συνιστάται η φύλαξη των δειγμάτων κοπράνων στο αραιωτικό.
4. Μην αφήνετε τα δείγματα κοπράνων στο μείγμα αραιωτικού/συζεύγματος για χρονικό διάστημα >24
ωρών.
ΠΡΟΕΤΟΙΜΑΣΙΑ ΔΕΙΓΜΑΤΩΝ
1. Αφήστε όλα τα αντιδραστήρια και τον απαιτούμενο αριθμό συσκευών να έρθουν σε θερμοκρασία
δωματίου πριν από τη χρήση. Συνιστάται να αφαιρείτε τα αντιδραστήρια από το αφρώδες περίβλημα
για να μειώσετε το χρονικό διάστημα που απαιτείται για τη θέρμανσή τους, προκειμένου να φτάσουν
στη θερμοκρασία δωματίου.
2. Τοποθετήστε σε όρθια θέση και επισημάνετε με ετικέτα έναν μικρό δοκιμαστικό σωλήνα για κάθε
δείγμα και προαιρετικούς εξωτερικούς ορούς ελέγχου, εφόσον χρειάζονται.
3. Χρησιμοποιώντας το μαύρο διαβαθμισμένο σταγονόμετρο, προσθέστε 750 µL (2η διαβάθμιση από το ρύγχος)
αραιωτικού σε κάθε σωληνάριο για τα δείγματα κοπράνων. Για δείγματα σε υλικά μεταφοράς, όπως τα Cary
Blair ή τα C&S, προσθέστε 650 µL (1η διαβάθμιση από το ρύγχος) αραιωτικού στο σωλήνα.
Αποδεκτή διάρκεια
φύλαξης
Μεγαλύτερη από
72 ώρες
Παρατηρήσεις
Τα ιδανικά δείγματα είναι εκείνα που έχουν συλλεχθεί πριν από χρονικό διάστημα μικρότερο των
24 ωρών
Αποψύξτε σε θερμοκρασία δωματίου. Η επανειλημμένη ψύξη και απόψυξη ενδέχεται να οδηγήσει σε
απώλεια της δραστικότητας των δειγμάτων λόγω
αλλοίωσης των τοξινών.
Τύπος δείγματος Όγκος αραιωτικού
Νωπά δείγματα κοπράνων 750 µL (2η διαβάθμιση από το ρύγχος)
Κατεψυγμένα δείγματα κοπράνων
(κατεψυγμένα μη αραιωμένα)
Δείγματα σε υλικά μεταφοράς (Cary
Blair, C&S)
Εξωτερικοί οροί ελέγχου (θετικός και
αρνητικός)
4. Προσθέστε μία σταγόνα συζεύγματος (φιάλη με κόκκινο πώμα) σε κάθε σωλήνα.
5. Χρησιμοποιήστε μία πλαστική πιπέτα μεταφοράς μίας χρήσης (παρέχεται με το κιτ) για κάθε δείγμα –
οι πιπέτες φέρουν αυξανόμενες διαβαθμίσεις στα 25 µL, 100 µL, 200 µL, 300 µL, 400 µL και 500 µL.
750 µL (2η διαβάθμιση από το ρύγχος)
650 µL (1η διαβάθμιση από το ρύγχος)
750 µL (2η διαβάθμιση από το ρύγχος)
750
650
µL
Διαβαθμισμένη πιπέτα μεταφοράς:
EL
Page 42
6. Αναμείξτε διεξοδικά όλα τα δείγματα ανεξάρτητα από τη σύστασή τους - η ομαλή εναιώρηση
των δειγμάτων είναι απαραίτητη πριν από τη μεταφορά.
Υδαρή/Ημιστερεά δείγματα – μεταφέρετε 25 µL δείγματος με μια πιπέτα μεταφοράς και χορηγήστε το
στο μείγμα αραιωτικού/συζεύγματος. Χρησιμοποιήστε την ίδια πιπέτα μεταφοράς για να αναμείξετε το
αραιωμένο δείγμα.
Σχηματισμένα/Στερεά δείγματα – Πρέπει να δοθεί προσοχή στην προσθήκη της σωστής ποσότητας
σχηματισμένων κοπράνων στο μείγμα δείγματος. Αναμείξτε διεξοδικά το μείγμα χρησιμοποιώντας
ένα ξύλινο ραβδίο εφαρμογής και μεταφέρετε μια μικρή ποσότητα (διαμέτρου 2 mm περίπου που
αντιστοιχεί σε 25 µL) του δείγματος στο μείγμα αραιωτικού/συζεύγματος. Γαλακτωματοποιήστε το
δείγμα χρησιμοποιώντας το ραβδίο εφαρμογής.
Δείγματα κοπράνων σε υλικό μεταφοράς Cary Blair ή C&S - μεταφέρετε 100 µL (2η διαβάθμιση από
το ρύγχος της πιπέτας μεταφοράς) του δείγματος στο μείγμα αραιωτικού/συζεύγματος.
7. Προαιρετικά δείγματα εξωτερικών ορών ελέγχου:
Εξωτερικός θετικός ορός ελέγχου - προσθέστε μία σταγόνα θετικού ορού ελέγχου (φιάλη με γκρι
πώμα) στο μείγμα αραιωτικού/συζεύγματος.
Εξωτερικός αρνητικός ορός ελέγχου - προσθέστε 25 μL αραιωτικού στο μείγμα αραιωτικού/
συζεύγματος.
ΣΗΜΕΙΩΣΗ: Η μεταφορά πολύ μικρής ποσότητας δείγματος ή η παράλειψη ανάμειξης και πλήρους
εναιώρησης του δείγματος στο μείγμα αραιωτικού/συζεύγματος ενδέχεται να οδηγήσει σε ψευδές αρνητικό
αποτέλεσμα της εξέτασης. Η προσθήκη υπερβολικής ποσότητας δείγματος κοπράνων ενδέχεται να οδηγήσει
σε μη έγκυρα αποτελέσματα λόγω περιορισμένης ροής του δείγματος.
ΔΙΑΔΙΚΑΣΙΑ ΕΞΕΤΑΣΗΣ
1. Χρησιμοποιήστε μία μεμβρανική συσκευή ανά δείγμα και μία συσκευή ανά προαιρετικό εξωτερικό θετικό ή
αρνητικό ορό ελέγχου, εφόσον χρειάζεται. Πρέπει να αφήνετε τους θύλακες αλουμινίου που περιέχουν τις
συσκευές να έρθουν σε θερμοκρασία δωματίου προτού τους ανοίξετε. Χρησιμοποιήστε τη συσκευή άμεσα
μετά το άνοιγμα. Επισημάνετε κάθε συσκευή με τη κατάλληλη ετικέτα και τοποθετήστε την σε επίπεδη
επιφάνεια έτσι ώστε η επιγραφή «C. DIFF COMPLETE» να βρίσκεται στην κάτω πλευρά της συσκευής και η
μικρή κυψελίδα δείγματος να βρίσκεται στην επάνω δεξιά γωνία της συσκευής.
Μεμβρανική συσκευή Κυψελίδα δείγματος
Παράθυρο αντίδρασης
2. Κλείστε κάθε σωλήνα αραιωμένου δείγματος και αναμείξτε διεξοδικά. Μπορείτε να επιτύχετε σωστή ανάμειξη
πραγματοποιώντας περιδίνηση ή αναστρέφοντας το σωλήνα. Αφού ένα δείγμα ασθενούς ή ένας θετικός
ορός ελέγχου αραιωθεί στο μείγμα αραιωτικού/συζεύγματος, μπορεί να επωαστεί σε θερμοκρασία δωματίου
για χρονικό διάστημα έως και 24 ωρών πριν από την προσθήκη του στη μεμβρανική συσκευή.
3. Χρησιμοποιώντας μια νέα πιπέτα μεταφοράς μεταφέρετε 500 µL αραιωμένου μείγματος δείγματοςσυζεύγματος στην κυψελίδα δείγματος (τη μικρότερη οπή στην επάνω δεξιά γωνία της συσκευής) μιας
μεμβρανικής συσκευής εξασφαλίζοντας ότι το υγρό δείγμα αποστραγγίζεται στο τμήμα απορρόφησης
που βρίσκεται στο εσωτερικό της μεμβρανικής συσκευής. Κατά τη φόρτωση του δείγματος στην κυψελίδα
δείγματος, εξασφαλίστε ότι το ρύγχος της πιπέτας μεταφοράς κλίνει προς το παράθυρο αντίδρασης (τη
μεγαλύτερη οπή στο μέσο της συσκευής).
EL
4. Επωάστε τη συσκευή σε θερμοκρασία δωματίου για 15 λεπτά – το δείγμα θα απορροφηθεί από τη συσκευή
και θα εμφανιστεί μια υγρή περιοχή κατά πλάτος του παραθύρου αντίδρασης.
ΣΗΜΕΙΩΣΗ ΓΙΑ ΤΑ ΔΕΙΓΜΑΤΑ ΠΟΥ ΔΕΝ ΜΕΤΑΚΙΝΟΥΝΤΑΙ:
Σε μερικές περιπτώσεις, ένα αραιωμένο δείγμα δεν μετακινείται σωστά και το παράθυρο αντίδρασης δεν είναι
υγρό σε όλη την έκτασή του. Αν το παράθυρο αντίδρασης δεν φαίνεται εντελώς υγρό σε διάστημα 5 λεπτών
από την προσθήκη του δείγματος στην κυψελίδα δείγματος, τότε προσθέστε 100 µL (4 σταγόνες) αραιωτικού
στην κυψελίδα δείγματος και περιμένετε ακόμα 5 λεπτά (συνολικά 20 λεπτά).
5. Μετά από την επώαση προσθέστε 300 μL ρυθμιστικού διαλύματος πλύσης στο παράθυρο αντίδρασης
χρησιμοποιώντας το λευκό διαβαθμισμένο σταγονόμετρο. Αφήστε το ρυθμιστικό διάλυμα πλύσης να διέλθει
μέσα από τη μεμβράνη του παραθύρου αντίδρασης και να απορροφηθεί πλήρως.
6. Προσθέστε 2 σταγόνες υποστρώματος (φιάλη με λευκό πώμα) στο παράθυρο αντίδρασης. Μετά από 10
λεπτά ελέγξτε και καταγράψτε τα αποτελέσματα οπτικά.
ΕΡΜΗΝΕΙΑ ΑΠΟΤΕΛΕΣΜΑΤΩΝ
1. Η ερμηνεία της εξέτασης είναι πιο αξιόπιστη όταν ελέγχετε τη συσκευή αμέσως μετά το πέρας της
περιόδου αντίδρασης 10 λεπτών. Ελέγξτε τα αποτελέσματα στη συσκευή από κανονική απόσταση
εργασίας σε επαρκώς φωτισμένο χώρο. Κοιτάξτε σε ευθεία γραμμή ακριβώς πάνω από τη συσκευή.
2. Ελέγξτε τη συσκευή για την παρουσία των μπλε κουκίδων στο μέσο του παραθύρου αντίδρασης που
αντιπροσωπεύουν το εσωτερικό θετικό ορό ελέγχου. Η εμφάνιση κουκκίδων ελέγχου υποδεικνύει ότι ο
εσωτερικός έλεγχος είναι έγκυρος. Το φόντο ενδέχεται να εμφανίζεται από λευκό έως γαλάζιο. Ελέγξτε
τη συσκευή για την παρουσία των μπλε γραμμών στις πλευρές «Ag» και «Tox» του παραθύρου
αντίδρασης που αντιπροσωπεύουν τις γραμμές εξέτασης. Οι γραμμές ενδέχεται να εμφανίζονται αχνές
έως έντονες ως προς την ένταση.
3. Θετικό αποτέλεσμα για αντιγόνο («Ag»): Ένα θετικό αποτέλεσμα για αντιγόνο μπορεί να ερμηνευθεί
οποιαδήποτε στιγμή μεταξύ της προσθήκης υποστρώματος και του 10λεπτου χρονικού διαστήματος
ανάγνωσης. Για να είναι ένα αποτέλεσμα για αντιγόνο θετικό, η μπλε γραμμή «Ag» και η διάστικτη
μπλε γραμμή ελέγχου κάτω από την ένδειξη «C» πρέπει να είναι ορατές (Εικόνα 1α). Οι γραμμές
ενδέχεται να εμφανίζονται αχνές έως έντονες ως προς την ένταση. Μια εμφανής μερική γραμμή
ερμηνεύεται ως θετικό αποτέλεσμα. Μην ερμηνεύετε τον αποχρωματισμό της μεμβράνης ως θετικό
αποτέλεσμα. Το θετικό αποτέλεσμα υποδεικνύει την παρουσία του C. difcile.
4. Θετικό αποτέλεσμα για αντιγόνο και τοξίνες («Tox»): Αν το αποτέλεσμα για αντιγόνο είναι θετικό
(δηλαδή εμφανίζεται μια μπλε γραμμή «Ag» και μια διάστικτη μπλε γραμμή ελέγχου κάτω από την
ένδειξη «C»), προχωρήστε στην ερμηνεία του αποτελέσματος για τις τοξίνες. Ένα θετικό αποτέλεσμα
για τις τοξίνες μπορεί να ερμηνευθεί οποιαδήποτε στιγμή μεταξύ της προσθήκης υποστρώματος και
του 10λεπτου χρονικού διαστήματος ανάγνωσης. Για να είναι ένα αποτέλεσμα για τοξίνες θετικό, η
μπλε γραμμή «Tox» πρέπει να είναι ορατή (Εικόνα 1β). Η γραμμή ενδέχεται να εμφανίζεται αχνή
έως έντονη ως προς την ένταση. Μια εμφανής μερική γραμμή ερμηνεύεται ως θετικό αποτέλεσμα.
Μην ερμηνεύετε τον αποχρωματισμό της μεμβράνης ως θετικό αποτέλεσμα. Το θετικό αποτέλεσμα
υποδεικνύει την παρουσία της τοξίνης C. difcile.
5. Αρνητικό αποτέλεσμα: Μια εξέταση δεν μπορεί να ερμηνεύεται ως αρνητική ή άκυρη προτού
παρέλθουν 10 λεπτά από την προσθήκη του υποστρώματος. Μία μπλε διάστικτη γραμμή εμφανίζεται
στο μέσο του παραθύρου αντίδρασης, κάτω από την ένδειξη «C» και δεν εμφανίζεται καμία γραμμή
εξέτασης στην πλευρά «Ag» ή στην πλευρά «Tox» του παραθύρου αντίδρασης, (Εικόνα 1γ). Το
αρνητικό αποτέλεσμα στο τμήμα εξέτασης αντιγόνου υποδεικνύει ότι το αντιγόνο του C. difcile είτε
απουσιάζει από το δείγμα είτε βρίσκεται κάτω από το όριο ανίχνευσης της εξέτασης. Το αρνητικό
αποτέλεσμα στο τμήμα εξέτασης τοξινών υποδεικνύει ότι η τοξίνη C. difcile είτε απουσιάζει από το
δείγμα είτε βρίσκεται κάτω από το όριο ανίχνευσης της εξέτασης.
6. Μη έγκυρο αποτέλεσμα: Καμία γραμμή δεν εμφανίζεται στο παράθυρο αντίδρασης (Εικόνα 1δ). Το
αποτέλεσμα της εξέτασης δεν είναι έγκυρο αν δεν εμφανίζεται μια μπλε διάστικτη γραμμή κάτω από
την ένδειξη «C» αφού παρέλθει η περίοδος αντίδρασης (Εικόνες 1ε, 1στ, 1ζ).
7. Αρνητικό αποτέλεσμα για αντιγόνο («Ag»), θετικό αποτέλεσμα για τοξίνες («Tox»): Ένα μικρό
ποσοστό δειγμάτων ενδέχεται να βρεθούν αρνητικά στο αντιγόνο αλλά θετικά στις τοξίνες. Αυτά τα
δείγματα πρέπει να θεωρηθούν ασαφή και οι ασθενείς πρέπει να εξεταστούν ξανά με χρήση νέου
δείγματος (Εικόνα 1η). Αν η επανεξέταση του δείγματος αποφέρει αρνητικό αποτέλεσμα για το
αντιγόνο αλλά θετικό για τις τοξίνες, καταγράψτε το ως θετικό αποτέλεσμα για τις τοξίνες.
41
Page 43
ΕΙΚΟΝΑ 1: ΕΡΜΗΝΕΙΑ ΑΠΟΤΕΛΕΣΜΑΤΩΝ ΤΟΥ C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE
Εικόνα 1α
Θετικό αποτέλεσμα για
αντιγόνο
Εικόνα 1δ
Μη έγκυρο αποτέλεσμα
Εικόνα 1ζ
Μη έγκυρο αποτέλεσμα
ΠΟΙΟΤΙΚΟΣ ΕΛΕΓΧΟΣ
Εσωτερικός: Μία μπλε διάστικτη γραμμή πρέπει να είναι ορατή στο μέσο του παραθύρου αντίδρασης,
κάτω από την ένδειξη «C» σε κάθε μεμβρανική συσκευή που εξετάζεται. Η εμφάνιση των μπλε κουκίδων
ελέγχου επιβεβαιώνει ότι το δείγμα και τα αντιδραστήρια προστέθηκαν σωστά, ότι τα αντιδραστήρια ήταν
δραστικά κατά το χρόνο εκτέλεσης της ανάλυσης και ότι το δείγμα μετακινήθηκε σωστά μέσω της μεμβρα-
νικής συσκευής. Επίσης, επιβεβαιώνει την αντιδραστικότητα των άλλων αντιδραστηρίων που σχετίζονται
με την ανάλυση. Το ενιαίο φόντο στην περιοχή αποτελεσμάτων θεωρείται ως εσωτερικός αρνητικός
έλεγχος. Αν η εξέταση έχει εκτελεστεί σωστά και τα αντιδραστήρια λειτουργούν σωστά, το φόντο θα είναι
λευκό για να αποδώσει ένα διακριτό αποτέλεσμα.
Εξωτερικός: Η αντιδραστικότητα του κιτ C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE® πρέπει να επαληθεύεται
κατά την παραλαβή με χρήση του θετικού ορού ελέγχου και του αρνητικού ορού ελέγχου (αραιωτικό). Ο
θετικός ορός ελέγχου παρέχεται με το κιτ (φιάλη με γκρι πώμα). Ο θετικός ορός ελέγχου επιβεβαιώνει την
αντιδραστικότητα των άλλων αντιδραστηρίων που σχετίζονται με την ανάλυση και δεν προορίζεται για τη
διασφάλιση της ακρίβειας των οριακών τιμών της ανάλυσης. Το αραιωτικό χρησιμοποιείται για τον αρνητικό
έλεγχο. Μπορούν να εκτελεστούν πρόσθετες εξετάσεις με τους ορούς ελέγχους, προκειμένου να επιτευχθεί
συμμόρφωση με τις απαιτήσεις των τοπικών, περιφερειακών ή/και κρατικών κανονισμών ή/και των οργανισμών πιστοποίησης.
42
Εικόνα 1β
Θετικό αποτέλεσμα για αντιγό-
νο και τοξίνες
Εικόνα 1ε
Μη έγκυρο αποτέλεσμα
Εικόνα 1η
Ανατρέξτε στην παράγραφο 7
για ερμηνεία
Αρνητικό αποτέλεσμα
Μη έγκυρο αποτέλεσμα
®
Εικόνα 1γ
Εικόνα 1στ
ΠΕΡΙΟΡΙΣΜΟΙ
1. Η εξέταση C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE® χρησιμοποιείται για την ανίχνευση του αντιγόνου και
των τοξινών του C. difcile σε δείγματα κοπράνων. Η εξέταση επιβεβαιώνει την παρουσία τοξινών στα
κόπρανα και αυτές οι πληροφορίες πρέπει να λαμβάνονται υπόψη από τον ιατρό σε συνδυασμό με το
ιατρικό ιστορικό και τη φυσική εξέταση του ασθενούς. Η εξέταση C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE®
ανιχνεύει τα επίπεδα της τοξίνης A σε συγκέντρωση ≥0,63 ng/mL, της τοξίνης B σε συγκέντρωση ≥0,16
ng/mL και της γλουταμικής δεσυδρογονάσης σε συγκέντρωση ≥0,8 ng/mL.
2. Τα δείγματα κοπράνων είναι εξαιρετικά πολύπλοκα. Τα βέλτιστα αποτελέσματα με την εξέταση C.
DIFF QUIK CHEK COMPLETE® λαμβάνονται με δείγματα που έχουν συλλεχθεί πριν από χρονικό
διάστημα μικρότερο των 24 ωρών. Τα περισσότερα μη αραιωμένα δείγματα μπορούν να φυλαχθούν
σε θερμοκρασία μεταξύ 2°C και 8°C για 72 ώρες, χρονικό διάστημα μετά το οποίο ενδέχεται να
παρατηρηθεί σημαντική αλλοίωση των τοξινών. Αν τα δείγματα δεν αναλυθούν εντός αυτού του
χρονικού διαστήματος, μπορούν να καταψυχθούν και να αποψυχθούν. Ωστόσο, η επανειλημμένη
ψύξη και απόψυξη ενδέχεται να οδηγήσει σε απώλεια της ανοσοαντιδραστικότητας του αντιγόνου και
των τοξινών A και B.
3. Ορισμένα δείγματα ενδέχεται να έχουν μικρές αντιδράσεις. Αυτό μπορεί να οφείλεται σε διάφορους
παράγοντες, όπως την παρουσία χαμηλών επιπέδων αντιγόνου ή/και τοξίνης, την παρουσία
δεσμευτικών ουσιών ή ενζύμων αδρανοποίησης στα κόπρανα. Οι γραμμές ενδέχεται να εμφανίζονται
αχνές έως έντονες ως προς την ένταση. Αυτά τα δείγματα πρέπει να αναφέρονται ως θετικά
αν παρατηρείται μια μπλε γραμμή, ακόμα κι αν είναι μερική. Μια εμφανής μερική μπλε γραμμή
ερμηνεύεται ως θετικό αποτέλεσμα
4. Δείγματα κοπράνων διατηρημένα σε συγκέντρωση 10% φορμαλίνης, φορμαλίνη merthiolate,
φορμαλίνη με οξικό νάτριο ή πολυβινυλο-αλκοόλη δεν μπορούν να χρησιμοποιηθούν.
5. Η εξέταση C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE® είναι ποιοτική. Η ένταση του χρώματος δεν θα πρέπει
να ερμηνεύεται ποσοτικά.
6. Ορισμένα μεμονωμένα στελέχη C. sordellii ενδέχεται να αντιδράσουν στην εξέταση C. DIFF QUIK
CHEK COMPLETE®, εξαιτίας της παραγωγής τοξινών που σχετίζονται με το ανοσοποιητικό (1).
7. Ποσοστά αποικισμού έως και 50% έχουν αναφερθεί σε βρέφη. Επίσης, έχει αναφερθεί υψηλό
ποσοστό σε ασθενείς με κυστική ίνωση (1,3). Τα αποτελέσματα ενδέχεται να εμφανίζονται ως θετικά
σε αυτές τις ομάδες, αλλά θα πρέπει να εξετάζονται σε συνδυασμό με την πιθανότητα να πρόκειται
για αποικισμένους φορείς.
8. Ο μόνος μη C. difcile οργανισμός που αντέδρασε στο τμήμα των τοξινών της εξέτασης C. DIFF QUIK
CHEK COMPLETE® ήταν ο Clostridium sordellii VPI 9048. Αυτό το στέλεχος παράγει τοξίνες HT και
LT, οι οποίες είναι ομόλογες των τοξινών A και B, αντίστοιχα.
9. Δεν υπάρχουν δεδομένα για την επίδραση που έχουν οι πλύσεις του κόλου, ο βαριούχος υποκλυσμός,
τα καθαρτικά ή η προετοιμασία του παχέος εντέρου στην απόδοση της εξέτασης C. DIFF QUIK CHEK
COMPLETE®. Όλες αυτές οι διαδικασίες μπορούν να οδηγήσουν στην εκτεταμένη αραίωση ή την
παρουσία πρόσθετων ουσιών που ενδέχεται να επηρεάσουν την απόδοση της εξέτασης.
ΑΝΑΜΕΝΟΜΕΝΕΣ ΤΙΜΕΣ
Η νόσος Clostridium difcile είναι κατ’ αρχάς μια νοσοκομειακή νόσος που προσβάλλει ηλικιωμένους
ασθενείς και η συχνότητα της νόσου εξαρτάται από παράγοντες, όπως τον πληθυσμό των ασθενών,
τον τύπο του ιδρύματος και την επιδημιολογία. Η αναφερθείσα συχνότητα της νόσου C. difcile σε
ασθενείς με διάρροια που σχετίζεται με αντιβιοτικά ενδέχεται να κυμαίνεται μεταξύ του 5 και του 20% και
τα νοσοκομεία μπορεί να αντιμετωπίσουν περιστατικά σε ποσοστά μεγαλύτερα ή μικρότερα αυτού του
εύρους. Είναι σημαντικό τα αποτελέσματα των εξετάσεων να ληφθούν υπόψη σε συνδυασμό με τα κλινικά
συμπτώματα, επειδή ορισμένοι υγιείς ενήλικες και ένας μεγάλος αριθμός υγειών βρεφών (έως 50%) θα
είναι θετικοί στην τοξίνη C. difcile. Επιπλέον, έχει αναφερθεί ένα ποσοστό 22% έως 32% φορέων της
τοξίνης C. difcile σε ασθενείς με κυστική ίνωση (1,3). Στις μελέτες που διεξήχθησαν για την παρούσα
συσκευή, με χρήση συμπτωματικών ασθενών, η συχνότητα των τοξινών A και B ήταν 12% και της τοξίνης
GDH ήταν 18%. Ένα θετικό αποτέλεσμα στο τμήμα του αντιγόνου της εξέτασης C. DIFF QUIK CHEK
COMPLETE® επιβεβαιώνει την παρουσία του οργανισμού C. difcile στο δείγμα των κοπράνων, ενώ ένα
EL
Page 44
αρνητικό αποτέλεσμα είναι ενδεικτικό της απουσίας του οργανισμού. Ένα θετικό αποτέλεσμα στο τμήμα
των τοξινών της εξέτασης C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE® επιβεβαιώνει την παρουσία της τοξίνης
C. difcile στο δείγμα των κοπράνων, ενώ ένα αρνητικό αποτέλεσμα είναι ενδεικτικό της απουσίας της
τοξίνης ή υποδεικνύει ανεπαρκή επίπεδα τοξίνης για την ανίχνευση.
ΧΑΡΑΚΤΗΡΙΣΤΙΚΑ ΑΠΟΔΟΣΗΣ
Κλινική αξιολόγηση του τμήματος του αντιγόνου της εξέτασης C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE
Έγινε σύγκριση του τμήματος του αντιγόνου της εξέτασης C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE® με την
καλλιέργεια βακτηρίων. Τα δείγματα που συμπεριλήφθηκαν στην αξιολόγηση υποβλήθηκαν στα κλινικά
εργαστήρια για εξέταση ρουτίνας. Η εξέταση καλλιέργειας βακτηρίων διεξήχθη σύμφωνα με τις διαδικασίες
των εργαστηρίων. Τα αποτελέσματα παρατίθενται στον Πίνακα 1.
Πίνακας 1. Σύνοψη κλινικής απόδοσης στη σύγκριση της εξέτασης C. DIFF QUIK CHEK
C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE
Θετική γραμμή αντιγόνου
C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE
Αρνητική γραμμή αντιγόνου
COMPLETE® με την καλλιέργεια βακτηρίων
n = 1126
®
®
Καλλιέργεια βακτηρίων
Θετική
Καλλιέργεια βακτηρίων
201 62
21 842
®
Αρνητική
95% όρια
εμπιστοσύνης
Ευαισθησία 90,5% 85,7 – 93,9
Ειδικότητα 93,1% 91,2 – 94,7
Θετική τιμή πρόβλεψης 76,4% 70,7 – 81,3
Αρνητική τιμή πρόβλεψης 97,6% 96,2 – 98,4
Συσχετισμός 92,6% 91,8 – 93,4
Τα ασύμφωνα δείγματα αξιολογήθηκαν με χρήση τρεχουσών εξετάσεων ELISA για γλουταμική
δεσυδρογονάση C. difcile.
Είκοσι εννέα από τα 62 ψευδή θετικά δείγματα ήταν θετικά με άλλη εξέταση GDH και θεωρήθηκαν
αληθή θετικά.
Δεκατρία από τα 21 ψευδή αρνητικά δείγματα ήταν αρνητικά με άλλη εξέταση GDH και θεωρήθηκαν
αληθή αρνητικά.
Έγινε σύγκριση του τμήματος του αντιγόνου της εξέτασης C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE® με την ιστοκαλλιέργεια για την ανίχνευση της τοξίνης C. difcile. Τα δείγματα που συμπεριλήφθηκαν στην αξιολόγηση
υποβλήθηκαν στα κλινικά εργαστήρια για εξέταση ρουτίνας. Τα αποτελέσματα παρατίθενται στον Πίνακα 2.
Το τμήμα του αντιγόνου της εξέτασης C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE® ανίχνευσε το 98,7% των δειγμάτων που ήταν θετικά στην ιστοκαλλιέργεια.
Πίνακας 2. Σύνοψη κλινικής απόδοσης στη σύγκριση της εξέτασης C. DIFF QUIK CHEK
C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE
Θετική γραμμή αντιγόνου
C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE
Αρνητική γραμμή αντιγόνου
Κλινική αξιολόγηση του τμήματος των τοξινών της εξέτασης C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE
Έγινε σύγκριση του τμήματος των τοξινών της εξέτασης C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE® με την ιστοκαλλιέργεια σε δύο κλινικά εργαστήρια και εσωτερικά στην TECHLAB, Inc. Τα δείγματα που συμπεριλήφθηκαν
στην αξιολόγηση υποβλήθηκαν στα κλινικά εργαστήρια για εξέταση ρουτίνας. Τα αποτελέσματα παρατίθενται στον Πίνακα 3.
Πίνακας 3. Σύνοψη κλινικής απόδοσης στη σύγκριση της εξέτασης C. DIFF QUIK CHEK
C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE
Θετική γραμμή τοξινών
C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE
Αρνητική γραμμή τοξινών
COMPLETE® με την ιστοκαλλιέργεια
n = 1126
®
®
COMPLETE® με την ιστοκαλλιέργεια
n = 1126
®
®
Ιστοκαλλιέργεια
Θετική
154 109
2 861
Ιστοκαλλιέργεια
Θετική
137 6
19 964
Ιστοκαλλιέργεια
Αρνητική
®
Ιστοκαλλιέργεια
Αρνητική
95% όρια
εμπιστοσύνης
Ευαισθησία 87,8% 81,4 - 92,3
Ειδικότητα 99,4% 98,6 - 99,7
Θετική τιμή πρόβλεψης 95,8% 90,7 - 98,3
Αρνητική τιμή πρόβλεψης 98,1% 96,9 - 98,8
Συσχετισμός 97,8% 97,6 - 98,0
Τα ασύμφωνα δείγματα αξιολογήθηκαν με χρήση τρεχουσών εξετάσεων ELISA για τις τοξίνες Α και Β.
Πέντε από τα 6 ψευδή θετικά δείγματα ήταν θετικά με εξέταση ELISA και θεωρήθηκαν
αληθή θετικά.
Δώδεκα από τα 19 ψευδή αρνητικά δείγματα ήταν αρνητικά με εξέταση ELISA και θεωρήθηκαν
αληθή αρνητικά.
EL
43
Page 45
ΕΠΙΔΡΑΣΗ ΣΥΣΤΑΣΗΣ ΔΕΙΓΜΑΤΟΣ ΚΟΠΡΑΝΩΝ
Επίδραση σύστασης δείγματος κοπράνων στην εξέταση C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE
Η αντίδραση των δειγμάτων κοπράνων διαφόρων συστάσεων στο τμήμα του αντιγόνου (n=978) και το
τμήμα των τοξινών (n=981) της εξέτασης C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE® παρατίθεται στους Πίνακες 4
και 5. Τα ποσοστά των θετικών αντιδράσεων είτε μέσω ανάλυσης καλλιέργειας είτε μέσω της εξέτασης C.
DIFF QUIK CHEK COMPLETE® ήταν παρόμοια και στους τρεις τύπους των δειγμάτων κοπράνων (υδαρή,
ημιστερεά και στερεά). Όλα τα δείγματα υποβλήθηκαν σε εξέταση για C. difcile. Η βάση της υποβολής
προς εξέταση ήταν το ιατρικό ιστορικό του ασθενούς και όχι η σύσταση του δείγματος. Στο τμήμα του
αντιγόνου, τα αποτελέσματα δείχνουν ότι η εξέταση C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE® διεξήχθη παρόμοια
με την καλλιέργεια βακτηρίων κατά την εξέταση δειγμάτων διαφορετικής σύστασης. Στο τμήμα των τοξινών,
τα αποτελέσματα δείχνουν ότι η εξέταση C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE® διεξήχθη παρόμοια με την
ιστοκαλλιέργεια κατά την εξέταση δειγμάτων διαφορετικής σύστασης.
Πίνακας 4. Αντίδραση δειγμάτων κοπράνων διαφορετικής σύστασης στο τμήμα του
Αριθμός δειγμάτων
Θετική με καλλιέργεια
βακτηρίων
C. DIFF QUIK CHEK
COMPLETE
Θετική γραμμή αντιγόνου
Αρνητική με καλλιέργεια
βακτηρίων
C. DIFF QUIK CHEK
COMPLETE
Αρνητική γραμμή αντιγόνου
Πίνακας 5. Αντίδραση δειγμάτων κοπράνων διαφορετικής σύστασης στο τμήμα των τοξινών της
Αριθμός δειγμάτων
αντιγόνου της εξέτασης C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE
(n = 978)
Υδαρή δείγματα
(n = 335)
δείγματα (n = 522)
59 (17,6%) 110 (21,1%) 19 (15,7%)
®
72 (21,5%) 128 (24,5%) 25 (20,7%)
276 (82,4%) 412 (78,9%) 102 (84,3%)
®
263 (78,5%) 394 (75,5%) 96 (79,3%)
εξέτασης C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE
(n = 981)
Υδαρή δείγματα
(n = 336)
δείγματα (n = 523)
Ημιστερεά
®
Ημιστερεά
®
®
Στερεά δείγματα
(n = 121)
Στερεά δείγματα
(n = 122)
Θετική με ιστοκαλλιέργεια 43 (12,8%) 81 (15,5%) 8 (6,6%)
C. DIFF QUIK CHEK
COMPLETE
Θετική γραμμή τοξινών
®
42 (12,5%) 72 (13,8%) 7 (5,7%)
Αρνητική με ιστοκαλλιέργεια 293 (87,2%) 442 (84,5%) 114 (93,4%)
C. DIFF QUIK CHEK
COMPLETE
Αρνητική γραμμή τοξινών
®
294 (87,5%) 451 (86,2%) 115 (94,3%)
ΕΥΑΙΣΘΗΣΙΑ ΑΝΑΛΥΣΗΣ
Η οριακή τιμή για την ανάλυση καθορίστηκε σε συγκεντρώσεις 0,63 ng/mL για την τοξίνη A, 0,16 ng/mL για
την τοξίνη B και 0,8 ng/mL για τη γλουταμική δεσυδρογονάση.
ΑΝΑΠΑΡΑΓΩΓΙΜΟΤΗΤΑ
Η αναπαραγωγιμότητα της εξέτασης C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE® προσδιορίστηκε με χρήση 12
δειγμάτων κοπράνων, τα οποία κωδικοποιήθηκαν ώστε να μην είναι δυνατή η αναγνώρισή τους κατά την
εξέταση. Η εξέταση διεξήχθη από 3 ανεξάρτητα εργαστήρια, τα οποία εξέτασαν τα δείγματα για 3 ημέρες. Τα
δείγματα απέδωσαν τα αναμενόμενα αποτελέσματα στο 100% των εξετάσεων.
ΔΙΑΣΤΑΥΡΟΥΜΕΝΗ ΑΝΤΙΔΡΑΣΗ
Δείγματα κοπράνων ενοφθαλισμένα με τους ακόλουθους μικροοργανισμούς σε τελική συγκέντρωση περίπου 108 ή περισσότερων οργανισμών ανά mL δεν αντέδρασαν στο τμήμα του αντιγόνου ή των τοξινών της
εξέτασης C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE®:
Βακτήριο ή Παθογόνο: Aeromonas hydrophila, Bacillus cereus, Bacillus subtilis, Bacteroides fragilis,
Campylobacter coli, Campylobacter fetus, Campylobacter jejuni, Candida albicans, Clostridium butyricum,
Clostridium clostridiforme, Clostridium haemolyticum, Clostridium histolyticum, Clostridium novyi,
Clostridium perfringens, Clostridium septicum, Clostridium sordellii (nontoxigenic), Clostridium sporogenes,
Enterobacter aerogenes, Enterobacter cloacae, Enterococcus faecalis, Escherichia coli EIEC, Escherichia
coli, Escherichia coli O157:H7, Escherichia coli ETEC, Klebsiella pneumoniae, Peptostreptococcus
anaerobius, Proteus vulgaris, Pseudomonas aeruginosa, Salmonella typhimurium, Serratia liquifaciens,
Shigella dysenteriae, Shigella exneri, Shigella sonnei, Staphylococcus aureus, Staphylococcus aureus
(Cowans), Staphylococcus epidermidis, Vibrio cholerae, Vibrio parahaemolyticus, Yersinia enterocolitica
Ο μόνος μη C. difcile οργανισμός που αντέδρασε στο τμήμα των τοξινών της εξέτασης C. DIFF QUIK
CHEK COMPLETE® ήταν ο Clostridium sordellii VPI 9048. Αυτό το στέλεχος παράγει τοξίνες HT και LT, οι
οποίες είναι ομόλογες των τοξινών A και B, αντίστοιχα.
Οι ακόλουθοι ιοί 10
CHEK COMPLETE®:
Ιοί: Αδενοϊός τύπου 1, 2, 3, 5, 40, 41, Ανθρώπινος κορονοϊός, Ιός Κοξάκι B2, B3, B4, B5, Ιός Echo 9, 11, 18,
22, 33, Εντεροϊός τύπου 68, 69, 70, 71, Ροταϊός.
ΠΑΡΕΜΒΑΛΛΟΜΕΝΕΣ ΟΥΣΙΕΣ
Η παρουσία των παρακάτω ουσιών (τυποποίηση Η.Π.Α.) στα κόπρανα στην αναφερόμενη συγκέντρωση
δεν είχε καμία επίδραση στα αποτελέσματα της εξέτασης: βλεννίνη (3,5% w/v), ανθρώπινο αίμα (40% v/v),
θειικό βάριο (5% w/v), Imodium® (5% v/v), Kaopectate® (5% v/v), Pepto-Bismol® (5% v/v), στερικό/παλμιτικό
οξύ (40% w/v), μετροδιναζόλη (0,25% w/v), βανκομυκίνη (0,25% w/v).
3,3
έως 10
8,25
μονάδων TCID ανά 0,2 mL δεν αντέδρασαν στην εξέταση C. DIFF QUIK
ΑΝΤΙΔΡΑΣΗ ΚΛΙΝΙΚΩΝ ΑΠΟΜΟΝΩΜΕΝΩΝ ΣΤΕΛΕΧΩΝ ΠΟΥ ΛΗΦΘΗΚΑΝ
ΑΠΟ ΑΓΑΡ ΚΥΚΛΟΣΕΡΙΝΗΣ-ΚΕΦΟΞΙΤΙΝΗΣ-ΦΡΟΥΚΤΟΖΗΣ (CCFA)
Συνολικά 103 κλινικά απομονωμένα στελέχη C. difcile, τα οποία λήφθηκαν μέσω αναερόβιας καλλιέργειας
βακτηρίων από CCFA μετά από 3 ημέρες στους 37°C, υποβλήθηκαν σε δοκιμασία στην εξέταση C. DIFF
QUIK CHEK COMPLETE®. Για την ανάλυση, μεμονωμένες αποικίες συλλέχθηκαν και εναιωρήθηκαν σε
αραιωτικό, όπως συνιστάται για δείγματα κοπράνων. Και τα 103 μεμονωμένα στελέχη είχαν θετική αντίδραση στο αντιγόνο στην εξέταση.
Εβδομήντα από τα 103 μεμονωμένα στελέχη (68%) προήλθαν από δείγματα κοπράνων που αντέδρασαν
θετικά στην τοξίνη C. difcile με ιστοκαλλιέργεια. Από αυτά, 56 (80%) είχαν θετική αντίδραση στην τοξίνη
κατά τον έλεγχο μετά από αναερόβια ανάπτυξη σε CCFA για 3 ημέρες στους 37°C.
44
EL
Page 46
TECHLAB® C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE
RENDELTETÉSSZERŰ HASZNÁLAT
A TECHLAB® C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE® teszt gyors membrán enzim immunoassay a Clostridium
difcile glutamát-dehidrogenáz antigén, valamint az A és B toxinok egyidejű kimutatására egyetlen
reakciówellben. A teszt érzékeli a C. difcile antigént, és a glutamát-dehidrogenázt, amely szűrőként
használatos a C. difcile jelenlétére vonatkozóan és megerősíti a toxigén C. difcile jelenlétét azáltal,
hogy észleli az A és B toxinokat olyan személyek székletmintájában, akiknél a C. difcile betegség
gyanúja fennáll. A teszt arra használandó, hogy segítse a C. difcile betegség diagnózisát. Mint az egyéb
C. difcile tesztek esetén, az eredményeket a páciens kórtörténetével együtt kell gyelembe venni.
MAGYARÁZAT
Antibiotikumos kezelés után számos páciensnél gyomor-bélrendszeri problémák lépnek fel, amelyek
enyhe hasmenéstől pszeudomembranózus kolitiszig terjednek. A gyomor-bélrendszeri betegség enyhébb
formáinak számos eseteit és a pszeudomembranózus colitis legtöbb esetét a Clostridium difcile toxigén
törzsei okozzák (1). Ez az organizmus opportunista anaerob baktériuma, amely a bélben nő, amint a normál
órát az antibiotikum megváltoztatta. A C. difcile toxigén törzsei hordozzák a toxinokat kódoló géneket, míg
a nem toxigén törzsek nem hordozzák a toxin géneket. A betegség kialakulása olyan toxinokkal kapcsolatos,
amelyeket a toxigén organizmus termel. A betegséggel kapcsolatos klinikai tünetek vélhetően elsősorban
az A toxin következtében alakulnak ki, amely egy szövet-károsító enterotoxin (2,3). A C. difcile egy másik
toxint is termel, amelynek a neve B toxin. A B toxin, amelyre korábban, mint az organizmus citotoxinjára
hivatkoztak, számos laboratórium által jelenleg használt szövetkultúra assay által érzékelt toxin. A toxigén
C. difcile törzsek mindkét toxint vagy csak a B toxint termelik (4-7). A C. difcile jó antigén marker a
székletben lévő organizmusra vonatkozóan, mivel nagy mennyiségben termeli minden törzs, a toxigén és
nem toxigén egyaránt (8-10). Az antigén kimutatható székletmintákban a C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE®
teszt használatával. A C. difcile glutamát-dehidrogenázára vonatkozó teszt pozitív eredménye megerősíti a
szóban forgó organizmus jelenlétét a székletmintában, a negatív eredmény az organizmus hiányát jelzi. Az A
és B toxinokra vonatkozó teszt pozitív eredménye megerősíti a toxigén C. difcile jelenlétét.
A TESZT ELVE
A C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE® olyan antitesteket használ, amelyek specikusak a glutamátdehidrogenázra és a C. difcile A és B toxinjaira vonatkozóan. Az eszköz az immobilizált antitestek három
függőleges vonalával rendelkező reakcióablakot tartalmaz. Az antigén tesztvonal (“Ag”) a C. difcile
glutamát-dehidrogenáz elleni antitesteket tartalmaz. A kontrollvonal ("C") szaggatott vonal, amely anti-tormaperoxidáz (HRP) antitesteket tartalmaz. Az A és B toxinok tesztvonala ("Tox") a C. difcile A és B toxinok
elleni antitesteket tartalmaz. A Konjugátum a glutamát-dehidrogenázra és az A és B toxinokra vonatkozó
antitesteket tartalmazza, amelyek a torma peroxidázhoz kapcsolódnak. A teszt elvégzéséhez a mintát egy
olyan csőhöz adják, amely a Hígító és a Konjugátum keverékét tartalmazza. A hígított minta-konjugátum
keveréket hozzáadják a Minta Wellhez és az eszközt hagyják inkubálni 15 percig szobahőmérsékleten.
Az inkubálás alatt a mintában jelenlévő bármely glutamát-dehidrogenáz, valamint az A és B toxinok az
antitest-peroxidáz konjugátumokhoz kötődnek. Az antigén-antitest konjugátum komplexek szűrőbetéten
keresztül vándorolnak egy membránhoz, ahol a vonalakban lévő immobilizált glutamát-dehidrogenázspecikus, valamint az A- és B-toxin-specikus antitestek megkötik őket. A Reakcióablakot ezután kimossák
a Mosópufferrel, amelyet a Szubsztrát hozzáadása követ. 10 perces inkubációs idő után az "Ag" reakciót
szemrevételezéssel megvizsgálják, hogy megjelenik-e egy függőleges kék vonal a Reakcióablak "Ag"
oldalán. A kék vonal pozitív tesztet jelent. Ha az "Ag" pozitív, a "Tox" reakciót szemrevételezéssel ellenőrizni
kell, hogy nincs-e jelen kék vonal a Reakcióablak "Tox" oldalán. A kék vonal pozitív tesztet jelent. A pozitív
"C" reakciók, amelyet a Reakcióablak "C" része alatti függőleges szaggatott kék vonal jelez, megerősíti,
hogy a teszt megfelelően működik és az eredmények érvényesek.
®
HU
BIZTOSÍTOTT ANYAGOK
Membráneszközök – mindegyik tasak 1 eszközt tartalmaz
DEV
Hígító (22 ml üvegenként) – Pufferelt fehérjeoldat fokbeosztásos cseppentő
szerelvénnyel (0,05% ProClin® 300-at tartalmaz)*
H412: Ártalmas a vízi élővilágra, hosszan tartó károsodást okoz
Mosópuffer (12 ml üvegenként) – Pufferelt oldat fokbeosztásos cseppentő
REAGWASH
szerelvénnyel (0,05% ProClin® 300-at tartalmaz)*
H412: Ártalmas a vízi élővilágra, hosszan tartó károsodást okoz
Subsztrát (3,5 ml üvegenként) – Tetrametilbenzidint tartalmazó oldat
REAGSUBS
Konjugátum (2,5 ml üvegenként) – Antitest, amely specikus a glutamát-
ENZCONJ
dehidrogenázra vonatkozóan tormaperoxidázhoz kapcsolva, és antitestek,
amelyek specikusak az A és B toxinokra vonatkozóan, tormaperoxidázhoz
kapcsolva, pufferelt fehérjeoldatban (0,05% ProClin® 300-at tartalmaz)*
Pozitív kontroll (2 ml) – Antigén pufferelt fehérjeoldatban
Eldobható műanyag transzferpipetták – 25 µl, 100 µl, 200 µl, 300 µl, 400 µl és 500 μl fokbeosztással ellátva.
IVD
*Figyelmeztetés: Figyelem
H317: Allergiás bőrreakciót okozhat
P261, P272, P280, P302, P352, P333, P313, P321, P362, P364, P501
SZÜKSÉGES, DE NEM MELLÉKELT ESZKÖZÖK
Kis tesztcsövek (pl., műanyag mikrocentrifuga csövek vagy üvegcsövek)
Applikátor pálcák Időzítő Vortex keverő
Eldobható kesztyűk székletminták kezelésére Pipetta és hegyek
POLCÉLETTARTAM ÉS TÁROLÁS
A készlet lejárati ideje a címkén szerepel, és a gyártástól számított 24 hónap. A komponensek lejárati idejét
az egyes címkék tartalmazzák. A készletet tárolja 2 °C és 8 °C között. A készlet és valamennyi komponense
az első felbontást követően 2 °C és 8 °C között tárolva a megadott lejárati időn belül stabil marad. Használat
előtt minden komponenst hozzon szobahőmérsékletűre. A készlet szobahőmérsékleten stabil marad az
egymást követő 8 órás műszakok alatt, ha a műszakok között visszatesszük a hűtött tárolóba.
In vitro diagnosztikai használatra
ÓVINTÉZKEDÉSEK
1. In vitro diagnosztikai használatra. Kizárólag szakmai felhasználásra.
2. A különböző készletekből származó reagenseket nem szabad összekeverni vagy felcserélni. Ne
használja a készletet a lejárati dátumon túl.
3. A készlet minden összetevőjét meg kell vizsgálni, hogy nem láthatók-e rajta szivárgás jelei.
Megérkezéskor vizsgálja meg a készletet annak biztosítása érdekében, hogy a komponensek ne
legyenek fagyottak vagy meleg tapintásúak a nem megfelelő szállítási körülmények miatt.
4. A kupakok, hegyek és csepegtető szerelvények színkódoltak; NE keverje, és ne cserélje ki őket!
5. Ne fagyassza le a reagenseket. A készlet 2°C és 8°C között tárolandó.
6. A Membráneszközt tartalmazó tasaknak szobahőmérsékletűnek kell lennie felnyitás előtt. A
membráneszközöket tartsa szárazon használat előtt.
45
Page 47
7. A székletmintákat mintavétel után 72 órán belül használja fel az optimális eredmények érdekében.
25 μL100 μL200 μL300 μL400 μL500 μL
A fagyasztott minták elveszthetik az aktivitásukat a fagyasztás és felolvasztás miatt. Fagyasztott
minták használatakor olvassza fel őket szobahőmérsékleten.
8. Tartsa a reagensüvegeket függőlegesen a reagensek adagolására, hogy biztosítsa az egységes
cseppméretet és a megfelelő térfogatot.
9. A mintákat és a membráneszközöket potenciális biológiai veszélyforrásként kell kezelni és
ártalmatlanítani használat után.
10. A membráneszközök nem használhatók újra.
11. A tesztet optimalizálták érzékenységre és specicitásra vonatkozóan. A megadott eljárás és/vagy
tesztfeltételek módosításai befolyásolhatják a teszt érzékenységét és specicitását. Ne térjen el a
megadott eljárástól.
12. Figyeljen az assay teljes idejére egynél több székletminta tesztelésekor. Először adja hozzá a
Hígítót, majd adja a Konjugátumot minden, Hígítót tartalmazó csőhöz. Majd adja a mintát a Hígítót/
Konjugátumot tartalmazó csőhöz. Alaposan keverje össze az összes hígított mintát és vigye át a
Membráneszközbe. A 15 perces inkubációs lépés azután kezdődik, hogy az utolsó hígított mintakonjugátum keveréket átvitték a végső Membráneszközbe.
13. Ha a Szubsztrát reagens sötétkék/lila színre változik, a cseréhez hívja a műszaki szolgálatot.
14. A székletminták potenciálisan fertőző ágenseket tartalmazhatnak és a 2. biológiai biztonsági
szintnek ("Biosafety Level 2") megfelelően kezelendők a CDC/NIH "Biosafety in Microbiological and
Biomedical Laboratories (Biológiai biztonság a mikrobiológiai és biomedikai laboratóriumokban)"
című kézikönyvében szereplő ajánlás szerint.
15. A teszt végzésekor viseljen eldobható kesztyűt.
16. A konjugátum, hígító és mosópuffer reagensek 0,05% ProClin® 300-at tartalmaznak tartósítószerként.
Habár a koncentráció alacsony, a ProClin® 300 káros hatású (bőr szenzibilizációt okozhat). Amennyiben
bőr szenzibilizációt/bőrirritációt vagy kiütést okoz, forduljon orvoshoz. Vegye le a szennyezett
ruhadarabot és mossa ki, mielőtt újra használná. A reagenst kezelje az érvényben lévő szabályoknak,
a laboratóriumi biztonságnak és a helyes laboratóriumi gyakorlatnak megfelelően. Kérésre elérhető a
termékhez tartozó biztonsági adatlap. Ehhez lépjen kapcsolatba a technikai ügyfélszolgálattal.
17. Tartsa be a hulladékártalmatlanítási szabályokra vonatkozó nemzeti, regionális és helyi előírásokat.
18. Jelentsen minden súlyos váratlan eseményt a TECHLAB-nak és a felhasználó és/vagy beteg
letelepedése szerinti EGT-tagállam illetékes hatóságának.
SZÉKLETMINTÁK LEVÉTELE, KEZELÉSE ÉS TÁROLÁSA
Elfogadható mintatípusok Ne használjon
Friss székletmintákat
Fagyasztott székletmintákat
Mintákat transzportközegben (Cary Blair, C&S)
Mintatárolás
Hőmérséklet
A tárolás elfogadható
hosszúsága
2°C – 8°C 72 óra Az ideális minták 24 órásnál újabbak.
Fagyasztott ≤ -10°C 72 óránál hosszabb
46
Székletmintákat formalin-alapú xálóban (pl. nátriumacetát formalin, 10%-os formalin, mertiolát formalin).
Székletmintákat alkoholalapú xálóban (pl. polivinilalkohol).
Megjegyzések
Olvassza fel szobahőmérsékleten. A többszörös
fagyasztás és felolvasztás a minta aktivitásának
elvesztését eredményezheti a toxin degradációja
miatt.
1. A székletmintákkal kapcsolatban alkalmazott szabványos, házon belüli mintavételi és kezelési
eljárások megfelelők.
2. A székletmintákat tiszta, szivárgásmentes tartályokban kell gyűjteni.
3. A székletmintáknak a Hígítóban való tárolása NEM ajánlott.
4. Ne engedje, hogy a székletminták 24 óránál tovább maradjanak a Hígító/Konjugátum keverékben.
A MINTA ELŐKÉSZÍTÉSE
1. Hozza az összes reagenst és a szükséges számú eszközt szobahőmérsékletre használat előtt.
Ajánlatos eltávolítani a reagenseket a habbetétből, hogy csökkentsék a szobahőmérsékletre való
melegedéshez szükséges időt.
2. Állítson be és jelöljön meg címkével egy kis tesztcsövet minden mintára és opcionális külső
kontrollokra vonatkozóan, amint szükséges.
3. A fekete fokbeosztásos csepegtető szerelvény alkalmazásával adjon hozzá 750 µl (2. fokbeosztás a hegytől
mérve) hígítót mindegyik csőhöz a széklet minták esetében. A transzportközegben (mint például Cary
Blair vagy C&S) lévő minták esetében adjon 650 µl (a csúcstól az 1. beosztás) Hígítót a csőhöz.
Minta típusa Hígító térfogata
Friss székletminták 750 µl (2. fokbeosztás a hegytől)
Fagyasztott székletminták
(fagyasztott hígítatlan)
Minták transzportközegben (Cary
Blair, C&S)
750 µl (2. fokbeosztás a hegytől)
650 µl (a csúcstól az 1. beosztás)
750
650
µL
Külső kontrollok (pozitív és negatív) 750 µl (2. fokbeosztás a hegytől)
4. Adjon egy csepp Konjugátumot (piros kupakos üveg) mindegyik csőhöz.
5. Szerezzen be egy eldobható műanyag transzferpipettát (a készlethez mellékelve) minden mintához
– a pipetták kiemelt fokbeosztásokkal rendelkeznek 25 µl, 100 µl, 200 µl, 300 µl, 400 µl és 500 µl
értéknél.
Fokbeosztásos transzferpipetta:
6. Keverje össze az összes mintát alaposan a konzisztenciától függetlenül - lényeges, hogy az
átvitel előtt a minták egyenletesen legyenek szuszpendálva.
Folyékony/félig szilárd minták – pipettázzon 25 µl mintát transzferpipettával és adagolja a Hígító/
Konjugátum keverékbe. Használja ugyanazt a transzferpipettát a hígított minta keverésére.
Formázott/Szilárd minták – Ügyelni kell, hogy megfelelő mennyiségű formázott székletet adjanak
hozzá a mintakeverékhez. Keverje össze a mintát alaposan fa applikátor pálca használatával és
vigye át a minta kis mennyiségét (körülbelül 2 mm átmérőjű, amely 25 µl-rel egyenértékű) a Hígító/
Konjugátum keverékbe. Emulgeálja a mintát az applikátor pálca használatával.
Székletminták Cary Blair vagy C&S transzportközegben - pipettázzon 100 µl (a transzferpipetta
hegyétől a 2. fokbeosztás) mintát a Hígító/Konjugátum keverékbe.
HU
Page 48
7. Opcionális Külső Kontroll Minták:
Külső Pozitív Kontroll - adjon hozzá egy csepp Pozitív Kontrollt (szürke kupakos üveg) a Hígító/
Konjugátum keverékbe.
Külső Negatív Kontroll - adjon hozzá 25 μl Hígítót a Hígító/Konjugátum keverékbe.
MEGJEGYZÉS: Ha túl kevés mintát visz át, vagy nem keveri össze és nem szuszpendálja teljesen a
mintát a Hígító/Konjugátum keverékben, ez hamis negatív teszteredményt okozhat. A túl sok székletminta
hozzáadása érvénytelen eredményeket okozhat a korlátozott mintaáramlás miatt.
TESZTELJÁRÁS
1. Szerezzen be egy Membráneszközt mintánként és egy eszközt opcionális külső pozitív vagy negatív
kontrollonként, ha szükséges. Az eszközöket tartalmazó fóliazsákokat szobahőmérsékletre kell hozni
felnyitás előtt. Az eszközt közvetlenül a nyitás után használja fel. Címkézzen fel minden eszközt
megfelelően és irányítsa őket úgy egy sima felületen, hogy a nyomtatott “C. DIFF COMPLETE”
felirat az eszköz alján legyen és a kis Minta Well az eszköz jobb felső sarkában legyen.
Membráneszköz Minta Well
Reakcióablak
2. Zárjon le minden, hígított mintát tartalmazó csövet és alaposan keverje fel őket. A megfelelő keverés
vortexeléssel vagy a cső megfordításával érhető el. Amint a páciens mintája vagy a Pozitív Kontroll
hígításra került a Hígító/Konjugátum keverékben, szobahőmérsékleten inkubálható bármely ideig
maximum 24 órával a Membráneszköz hozzáadása előtt.
3. Új transzferpipetta alkalmazásával vigyen át 500 µl-t a hígított minta-konjugátum keverékből a
Membrán Eszköz Minta Well-jébe (kisebb lyuk az eszköz jobb felső sarkában), gondoskodva arról,
hogy a folyékony mintát a Membráneszköz belsejében lévő felszívó párnára juttassa. Amikor a mintát
betölti a minta wellbe, gondoskodjon arról, hogy a transzferpipetta hegye a Reakcióablak (nagyobb
lyuk az eszköz közepén) felé dőljön.
4. Inkubálja az eszközt szobahőmérsékleten 15 percig – a minta felszívódik az eszközön keresztül és
a nedves terület szétterjed a Reakcióablakon.
MEGJEGYZÉS AZON MINTÁKRA VONATKOZÓAN, AMELYEK MIGRÁCIÓJA SIKERTELEN:
Bizonyos esetekben a hígított minta nem migrál megfelelően, és a Reakcióablak nem lesz teljesen
nedves. Ha a Reakcióablak nem tűnik teljesen nedvesnek 5 perccel azután, hogy a mintát a Minta
Well-hez hozzáadták, adjon 100 µl (4 csepp) Hígítót a Minta Well-hez és várjon további 5 percet
(összesen 20 percet).
5. Inkubáció után adjon 300 μl Mosópuffert a Reakcióablakhoz a fokbeosztásos fehér cseppentő
szerelvény alkalmazásával. Hagyja, hogy a Mosópuffer átfolyjon a Reakcióablak membránján, és
teljesen felszívódjon.
6. Adjon 2 csepp Szubsztrátot (fehér kupakos üveg) a Reakcióablakhoz. Olvassa le és jegyezze fel az
eredményeket szemrevételezés után 10 perc múlva.
AZ EREDMÉNYEK ÉRTELMEZÉSE
1. A teszt értelmezése akkor a legmegbízhatóbb, ha az eszközt azonnal leolvassák a 10 perces
reakcióidő végén. A készüléket normál működési távolságban, jól megvilágított területen olvassa le.
Közvetlenül az eszköz feletti látóvonal mentén tekintse meg.
2. Figyelje meg az eszközt, hogy nem jelennek-e meg kék pontok a Reakcióablak közepén, amely a
belső pozitív kontrollt képviseli. Bármilyen kontroll pont(ok) megjelenése érvényes belső kontrollt
képvisel. A háttér színe fehértől világoskékig terjedhet. Figyelje meg az eszközt, hogy nem
jelennek-e meg kék vonalak a Reakcióablak "Ag" vagy "Tox" oldalain, amelyek a tesztvonalakat
képviselik A vonalak intenzitása halványtól sötétig terjedhet.
3. Pozitív Antigén (“Ag”) Eredmény: A pozitív antigén eredmény értelmezhető bármikor a Szubsztrát
hozzáadása és a 10 perces leolvasási időpont között. Pozitív antigén eredmény esetén a zöld "Ag"
vonal és a "C" alatti szaggatott kék kontrollvonal látható (1a ábra). A vonalak intenzitása halványtól
sötétig terjedhet. A feltűnő részleges vonal pozitív eredményként értelmezendő. Ne értelmezze a
membrán elszíneződését pozitív eredményként. A pozitív eredmény a C. difcile jelenlétét mutatja.
4. Pozitív Antigén és Toxin (“Tox”) Eredmény: Ha az antigén eredmény pozitív (azaz kék "Ag" vonal
és szaggatott kék kontrollvonal látható a "C" alatt), folytassa a toxin eredmény értelmezésével. A
pozitív toxin eredmény értelmezhető bármikor a Szubsztrát hozzáadása és a 10 perces leolvasási
időpont között. Pozitív toxin eredmény esetében kék “Tox” vonal látható (1b ábra). A vonal intenzitása
halványtól sötétig terjedhet. A feltűnő részleges vonal pozitív eredményként értelmezendő. Ne
értelmezze a membrán elszíneződését pozitív eredményként. A pozitív eredmény a C. difcile toxin
jelenlétét mutatja.
5. Negatív Eredmény: A teszt nem értelmezhető negatívként vagy érvénytelenként a Szubsztrát
hozzáadását követő 10 percig. Egyetlen kék szaggatott vonal látható a Reakcióablak, közepén a
"C" alatt és nem látható tesztvonal a Reakcióablak "Ag" vagy "Tox" oldalán (1c ábra). Az antigén
részben lévő negatív eredmény azt jelzi, hogy a C. difcile vagy nincs jelen a mintában vagy a teszt
kimutatási határa alatt van. A toxin részben lévő negatív eredmény azt jelzi, hogy a C. difcile toxin
vagy nincs jelen a mintában vagy a teszt kimutatási határa alatt van.
6. Érvénytelen Eredmény: Nem látható vonal a Reakcióablakban (1d ábra). A teszteredmény
érvénytelen, ha a kék szaggatott vonal nincs jelen a "C" alatt a reakcióidő befejeződésekor (1e, 1f,
1g ábra).
7. Negatív Antigén (“Ag”), Pozitív Toxin ("Tox"). A minták alacsony százalékos hányada negatív
teszteredményt mutathat az antigénre de pozitívat a toxinra vonatkozóan. E mintákat bizonytalannak
kell tekinteni, majd friss mintával újra kell tesztelni (1h ábra). Ha a minta újrateszteléskor negatívnak
bizonyul az antigénre, de pozitívnak a toxinra vonatkozóan, pozitív toxin eredményként kell
jegyzőkönyvezni.
1. ÁBRA: C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE® AZ EREDMÉNYEK ÉRTELMEZÉSE
1a ábra
Pozitív Antigén Eredmény
1b ábra
Pozitív Antigén
és Toxin Eredmény
1c ábra
Negatív Eredmény
HU
47
Page 49
1d ábra
Érvénytelen Eredmény
1g ábra
Érvénytelen Eredmény
MINŐSÉGELLENŐRZÉS
Belső: Szaggatott kék vonalnak kell látszódnia a Reakcióablak közepén a "C" alatt, minden tesztelt
Membráneszköz alatt. A kék kontrollpontok megjelenése igazolja, hogy a mintát és a reagenseket
megfelelően adták hozzá, és hogy a reagensek aktívak voltak az assay elvégzése idején, valamint,
hogy a minta megfelelően átmigrált a Membráneszközön. Továbbá megerősíti az assay-vel kapcsolatos
többi reagens reaktivitását. Az eredmények területén lévő egynemű háttér belső negatív kontrollként
tekintendő. Ha a tesztet helyesen végezték és a reagensek megfelelően működnek, a háttér fehér lesz,
hogy észrevehető eredményt adjon.
Külső: A C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE® készlet reaktivitását ellenőrizni kell átvételkor a Pozitív
Kontroll és a negatív kontroll (Hígító) használatakor. A Pozitív Kontroll a készlethez van mellékelve
(szürke kupakos üveg). A Pozitív Kontroll igazolja az assay-vel kapcsolatos többi reagens reaktivitását,
és nem rendeltetése, hogy biztosítsa a precizitást az analitikai assay cut-off értékénél. A Hígító negatív
kontroll céljára használatos. További tesztek végezhetők a kontrollokkal, hogy eleget tegyenek a helyi,
állami és/vagy szövetségi szabályozásoknak és/vagy az akkreditáló szervezeteknek.
KORLÁTOZÁSOK
1. A C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE® teszt a C. difcile antigén és toxin(ok) detektálására
használatos székletmintákban. A teszt igazolja a toxin jelenlétét a székletben, és ezt az információt
gyelembe kell vennie az orvosnak a páciens klinikai kórtörténete és zikális vizsgálata fényében.
A C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE®az A toxint ≥0,63 ng/ml, a B toxint ≥0,16 ng/ml,és a glutamátdehidrogenázt ≥0,8 ng/ml szinteken mutatja ki.
2. A székletminták rendkívül komplexek. A C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE® teszttel optimális
eredmények olyan mintákkal érhetők el, amelyek 24 órásnál újabbak. A legtöbb hígítatlan minta
tárolható 2°C és 8°C között 72 órán át, mielőtt a toxin jelentős bomlása gyelhető meg. Ha a mintákat
nem vizsgálják meg ezen időszakon belül, ezek lefagyaszthatók, majd felolvaszthatók. Azonban, az
ismételt lefagyasztás és felolvasztás az antigén, valamint az A és B toxinok immunreaktivitásának
elvesztését eredményezi.
1e ábra
Érvénytelen Eredmény
1h ábra
Az értelmezést lásd a 7.
pontban
1f ábra
Érvénytelen Eredmény
3. Bizonyos minták gyenge reakciókat adnak. Ezt számos tényező okozhatja, mint például alacsony
szintű antigén és/vagy toxin jelenléte, a kötőanyagok vagy inaktiváló enzimek jelenléte a székletben.
A vonalak intenzitása halványtól sötétig terjedhet. Ezeket a mintákat pozitívként kell jegyzőkönyvezni,
ha bármilyen kék vonal jelenik meg (még, ha részleges is). A feltűnő részleges kék vonal pozitív
eredményként értelmezendő.
4. A 10%-os formalinban, mertiolát-formalinban, nátrium-acetát formalinban vagy polivinil-alkoholban
tartósított székletminták nem használhatók.
5. A C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE® teszt kvalitatív. A szín intenzitása nem értelmezhető kvantitatív
módon.
6. A C. sordellii néhány izolátuma reagálhat a C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE® teszt során az
immunológiailag kapcsolódó toxinok termelődése miatt (1).
7. Csecsemőkben akár 50%-os kolonizációs arányokról számoltak be. Magas arányról számoltak be
a cisztás brózisban szenvedő betegekben (1,3). Az eredmények pozitívként jelentkezhetnek e
csoportokban, de ezeket úgy kell tekinteni, mint potenciális kolonizált hordozókat.
8. Az egyetlen nem-C. difcile organizmus, amely reagál a C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE® teszt
toxin részében a Clostridium sordellii VPI 9048 volt. Ez a törzs a HT és az LT toxinokat termeli,
amelyek az A ill. B toxinokra vonatkozóan homológok.
9. Semmilyen adat nem létezi a vastagbélmosásoknak, báriumbeöntéseknek, hashajtóknak vagy
vastagbélkészítményeknek a C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE® teszt teljesítményére gyakorolt
hatására vonatkozóan. Ezen eljárások mindegyike nagymértékű hígulást okozhat vagy olyan
adalékanyagok jelenlétét eredményezheti, amely befolyásolhatja a teszt teljesítményét.
VÁRHATÓ ÉRTÉKEK
A Clostridium difcile elsősorban nozokomiális betegség idős páciensekben, és a betegség gyakorisága
olyan tényezőktől függ, mint a betegpopuláció, az intézmény típusa és az epidemiológia. A C. difcile
betegség bejelentett előfordulási gyakorisága antibiotikumokkal kapcsolatos hasmenésben szenvedő
páciensekben 5-től 20%-ig terjedhet, és a kórházakban e tartománynál alacsonyabb vagy magasabb
értékek is jelentkezhetnek. Fontos gyelembe venni bármilyen teszteredményt a klinikai tünetekkel
kapcsolatban, mivel néhány egészséges felnőtt és nagy számú egészséges csecsemő (akár 50%-os
arányban is) pozitív eredményt mutat a C. difcile toxinra vonatkozóan. Továbbá, 22%-tól 32%-ig terjedő
C. difcile hordozási arányokról számoltak be a cisztás brózisban szenvedő betegekben (1,3). A jelen
eszközre vonatkozóan tüneteket mutató betegekkel végzett vizsgálatok során az A és B toxin előfordulása
12%, a GDH előfordulása 18% volt. A C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE® teszt antigén részének pozitív
eredménye megerősíti a C. difcile jelenlétét a székletmintában; a negatív eredmény az organizmus
hiányát jelzi. A C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE® teszt antigén részének pozitív eredménye megerősíti a
C. difcile toxin jelenlétét a székletmintában; a negatív eredmény a toxin hiányát jelzi, vagy azt, hogy nem
áll rendelkezésre a kimutatáshoz elegendő koncentrációban.
TELJESÍTMÉNYJELLEMZŐK
A C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE® teszt antigén részének klinikai értékelése
A C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE® teszt antigén részét baktériumkultúrához hasonlították. A
kiértékelésben szereplő mintákat klinikai laboratóriumokba küldték be rutin tesztelés céljára. A bakteriális
kultúra tesztjét házon belüli eljárásokkal végezték. Az eredményeket az 1. táblázat mutatja
48
HU
Page 50
1. táblázat A C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE® teszt és a bakteriális kultúra összehasonlításának
C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE
Antigén Vonal Pozitív
C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE
Antigén Vonal Negatív
klinikai teljesítménye
n = 1126
®
®
Bakteriális Kultúra
Pozitív
201 62
21 842
Bakteriális Kultúra
Negatív
95%
Kondenciahatárok
Érzékenység 90,5% 85,7 – 93,9
Specicitás 93,1% 91,2 – 94,7
Prediktív Pozitív Érték 76,4% 70,7 – 81,3
Prediktív Negatív Érték 97,6% 96,2 – 98,4
Korreláció 92,6% 91,8 – 93,4
Az eltérő mintákat a C. difcile glutamát-dehidrogenázra vonatkozó aktuális ELISA tesztek
alkalmazásával értékelték.
A 62 álpozitív mintából huszonkilenc pozitív volt egy másik GDH teszt során, és ezeket valódi
pozitívnak tekintették.
A 21 álnegatív mintából tizenhárom negatív volt egy másik GDH teszt során, és ezeket valódi
negatívnak tekintették.
A C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE® tesztet a szövetkultúra assay-hez hasonlították a C. difcile toxin
kimutatására vonatkozóan. A kiértékelésben szereplő mintákat klinikai laboratóriumokba küldték be
rutin tesztelés céljára. Az eredményeket a 2. táblázat mutatja. A C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE® a
szövetkultúra pozitív mintáinak 98,7%-át kimutatta.
2. táblázat A C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE® teszt és a szöveti kultúra assay
C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE
Antigén Vonal Pozitív
C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE
Antigén Vonal Negatív
összehasonlításának klinikai teljesítménye
n = 1126
®
®
Szöveti Kultúra
Pozitív
Szöveti Kultúra
Negatív
154 109
2 861
A C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE® teszt toxin részének klinikai értékelése
A C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE® teszt toxin részét összehasonlították a szövetkultúra assay-vel két
klinikai laboratóriumban és házon belül a TECHLAB, Inc vállalatnál. A kiértékelésben szereplő mintákat
klinikai laboratóriumokhoz juttatták el rutin tesztelés céljára. Az eredményeket az 3. táblázat mutatja
3. táblázat A C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE® teszt és a szöveti kultúra assay
C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE
Toxin Vonal Pozitív
C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE
Toxin Vonal Negatív
összehasonlításának klinikai teljesítménye
n = 1126
®
®
Szöveti Kultúra
Pozitív
Szöveti Kultúra
Negatív
137 6
19 964
Kondenciahatárok
95%
Érzékenység 87,8% 81,4 - 92,3
Specicitás 99,4% 98,6 - 99,7
Prediktív Pozitív Érték 95,8% 90,7 - 98,3
Prediktív Negatív Érték 98,1% 96,9 - 98,8
Korreláció 97,8% 97,6 - 98,0
Az eltérő mintákat az A és B toxinokra vonatkozó aktuális ELISA tesztek alkalmazásával értékelték.
A 6 álpozitív mintából öt pozitív volt az ELISA során, és ezeket valódi pozitívnak tekintették.
A 19 álnegatív mintából tizenkettő negatív volt egy ELISA teszt során, és ezeket valódi negatívnak
tekintették.
A SZÉKLETMINTA KONZISZTENCIÁJÁNAK HATÁSA
A székletminta konzisztenciájának hatása a C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE® tesztre
A különböző konzisztenciájú székletminták reakcióját a C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE® teszt antigén
részében (n=978) és toxin részében (n=981) a 4. és az 5. táblázat mutatja. A kultúra assay vagy a C.
DIFF QUIK CHEK COMPLETE® alkalmazásával kapott pozitív reakciók százalékértékei hasonlóak
voltak mindhárom típusú székletminta esetén (folyékony, félig szilárd és szilárd). Az összes mintát
beküldték C. difcile tesztelés céljára. A beküldés alapja a beteg klinikai kórtörténete volt, és nem a
minta konzisztenciája. Az antigén részben az eredmények azt mutatják, hogy a C. DIFF QUIK CHEK
COMPLETE® teszt hasonló teljesítményt nyújtott, mint a baktériumkultúra a különböző konzisztenciájú
minták tesztelésekor. A toxin részben az eredmények azt mutatják, hogy a C. DIFF QUIK CHEK
COMPLETE® teszt hasonló teljesítményt nyújtott, mint a szövetkultúra assay a különböző konzisztenciájú
minták tesztelésekor.
HU
49
Page 51
4. táblázat Különböző konzisztenciájú székletminták reakciója az antigén
Pozitív a bakteriális kultúra
assay szerint
C. DIFF QUIK CHEK
COMPLETE
Antigén Vonal Pozitív
Negatív a bakteriális kultúra
assay szerint
C. DIFF QUIK CHEK
COMPLETE
Antigén Vonal Negatív
5. táblázat Különböző konzisztenciájú székletminták reakciója a C. DIFF QUIK CHEK
Pozitív a szöveti kultúra
assay szerint
C. DIFF QUIK CHEK
COMPLETE
Toxin Vonal Pozitív
Negatív a szöveti kultúra
assay szerint
C. DIFF QUIK CHEK
COMPLETE
Toxin Vonal Negatív
ANALITIKAI ÉRZÉKENYSÉG
Az assay cutoff értékét 0,63 ng/ml koncentrációban határozták meg az A toxinra, 0,16 ng/ml koncentrációban a
B toxinra és 0,8 ng/ml koncentrációban a glutamát-dehidrogenázra vonatkozóan.
REPRODUKÁLHATÓSÁG
A C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE® teszt reprodukálhatóságát 12 olyan székletminta alkalmazásával
határozták meg, amelyeket kódoltak, hogy megakadályozzák az azonosításukat a tesztelés során. A
tesztelést 3 független laboratóriumban végezték el, amelyek a mintákat 3 napon át vizsgálták. A minták az
esetek 100%-ában a várt eredményeket produkálták.
részben a C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE® teszt során.
Minták száma
(n = 978)
®
®
COMPLETE® teszt toxin részében.
Minták száma
(n = 981)
®
®
Folyékony Minták
(n = 335)
59 (17,6%) 110 (21,1%) 19 (15,7%)
72 (21,5%) 128 (24,5%) 25 (20,7%)
276 (82,4%) 412 (78,9%) 102 (84,3%)
263 (78,5%) 394 (75,5%) 96 (79,3%)
Folyékony Minták
(n = 336)
43 (12,8%) 81 (15,5%) 8 (6,6%)
42 (12,5%) 72 (13,8%) 7 (5,7%)
293 (87,2%) 442 (84,5%) 114 (93,4%)
294 (87,5%) 451 (86,2%) 115 (94,3%)
Félig szilárd
Minták (n = 522)
Félig szilárd
Minták (n = 523)
Szilárd Minták
(n = 121)
Szilárd Minták
(n = 122)
KERESZTREAKTIVITÁS
A következő mikroorganizmusokkal beoltott székletminták a ml-enként 108 vagy annál nagyobb számú
végső organizmus-koncentráció esetén nem reagáltak a C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE® teszt
antigén- vagy toxin részével:
Baktérium vagy Patogén: Aeromonas hydrophila, Bacillus cereus, Bacillus subtilis, Bacteroides
fragilis, Campylobacter coli, Campylobacter fetus, Campylobacter jejuni, Candida albicans, Clostridium
butyricum, Clostridium clostridiforme, Clostridium haemolyticum, Clostridium histolyticum, Clostridium
novyi, Clostridium perfringens, Clostridium septicum, Clostridium sordellii (nem toxigén), Clostridium
sporogenes, Enterobacter aerogenes, Enterobacter cloacae, Enterococcus faecalis, Escherichia coli
EIEC, Escherichia coli, Escherichia coli O157:H7, Escherichia coli ETEC, Klebsiella pneumoniae,
Peptostreptococcus anaerobius, Proteus vulgaris, Pseudomonas aeruginosa, Salmonella typhimurium,
Serratia liquifaciens, Shigella dysenteriae, Shigella exneri, Shigella sonnei, Staphylococcus aureus,
Staphylococcus aureus (Cowans), Staphylococcus epidermidis, Vibrio cholerae, Vibrio parahaemolyticus,
Yersinia enterocolitica
Az egyetlen nem-C. difcile organizmus, amely reagál a C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE® teszt toxin
részében, a Clostridium sordellii VPI 9048 volt. Ez a törzs a HT és az LT toxinokat termeli, amelyek az A
ill. B toxinokra vonatkozóan homológok.
A következő vírusok 0,2 ml-enként 10
CHEK COMPLETE® tesztben:
Vírusok: Adenovirus típusok: 1, 2, 3, 5, 40, 41, Human koronavírus, Coxsackievírus B2, B3, B4, B5,
Echovirus 9, 11, 18, 22, 33, Enterovirus típus: 68, 69, 70, 71, Rotavírus.
ZAVARÓ ANYAGOK
A következő anyagok (USA-készítmény) nem gyakoroltak hatást a teszteredményekre, ha a jelzett
koncentrációkban voltak jelen a székletben: mucin (3,5% w/v), emberi vér (40% v/v), bárium-szulfát (5%
w/v), Imodium® (5% v/v), Kaopectate® (5% v/v), Pepto-Bismol® (5% v/v), sztearinsav/palmitinsav (40%
w/v), Metronidazole (0,25% w/v), Vancomycin (0,25% w/v).
3,3
8,25
- 10
TCID egység értékekkel nem reagáltak a C. DIFF QUIK
KLINIKAI IZOLÁTUMOK CIKLOSZERIN-CEFOXITIN-FRUKTÓZ AGARON
(CCFA) TÖRTÉNŐ REAKCIÓJA
Összesen 103 C. difcile klinikai izolátumot, amelyeket anaerob bakteriális kultúra révén nyertek CCFA-n
3 nap után 37°C-on, vizsgáltak a C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE® teszttel. Az analízis céljára egyedi
kolóniákat választottak ki és szuszpendálták őket Hígítóban a székletmintákra vonatkozóan ajánlott
módon. Mind a 103 izolátum pozitív antigénreakciót adott a teszt során.
A 103 izolátumból hetven (68%) olyan székletmintából származott, amely pozitív volt a C. difcile toxinra
vonatkozóan a szövetkultúra assay során. Ezek közül 56 (80%) pozitív toxinreakciót adott, amikor
anaerob növekedés után vizsgálták CCFA-n 3 napon át 37°C-on.
50
HU
Page 52
TECHLAB® C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE
G
FINALITA’ DEL DOSAGGIO
Il test TECHLAB® C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE® è un dosaggio immunoenzimatico rapido a
membrana per il rilevamento simultaneo dell’antigene glutammato deidrogenasi e dalle tossine A e B di
Clostridium difcile in un singolo pozzetto di reazione. Il test rileva l’antigene glutammato deidrogenasi di
C. difcile quale screening per la presenza di C. difcile e conferma la presenza di C. difcile tossigeno
rilevando le tossine A e B nei campioni fecali delle persone in cui si sospetti malattia da C. difcile. Il test
deve essere usato come ausilio nella diagnosi di malattia da C. difcile. Come per gli altri test per il C.
difcile, i risultati devono essere considerati insieme alla storia del paziente.
SPIEGAZIONE
In seguito al trattamento con antibiotici, molti pazienti sviluppano problemi gastrointestinali che vanno dalla
diarrea lieve alla colite pseudomembranosa grave. Molti casi delle forme più lievi di malattia gastrointestinale e la maggior parte dei casi di colite pseudomembranosa sono causati da ceppi tossigeni di Clostridium
difcile (1). Questo organismo è un batterio anaerobico opportunista che cresce nell’intestino una volta
che la normale ora è stata alterata dall’antibiotico. I ceppi tossigeni di C. difcile trasportano i geni che
codicano le tossine, mentre i ceppi non tossigeni non trasportano i geni delle tossine. L’esordio della malattia è associato alle tossine che vengono prodotte dagli organismi tossigeni. Si ritiene che i sintomi clinici
associati alla malattia siano prevalentemente dovuti alla tossina A, che è un’enterotossina che danneggia i
tessuti (2,3). Il C. difcile produce anche una seconda tossina, chiamata tossina B. La tossina B, che è stata indicata come la citotossina dell’organismo, è la tossina rilevata dal test di coltura tissutale attualmente
usato da molti laboratori. I ceppi di C. difcile tossigeno producono entrambe le tossine o solo la tossina
B (4-7). La glutammato deidrogenasi del C. difcile è un buon marker antigenico dell’organismo nelle feci
in quanto è prodotta in elevate quantità da tutti i ceppi, sia quelli tossigeni sia quelli non tossigeni (8-10).
L’antigene può essere rilevato nei campioni fecali utilizzando il test C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE®.
Un risultato positivo al test della glutammato deidrogenasi del C. difcile conferma la presenza di questo
organismo nei campioni fecali; un risultato negativo indica l’assenza dell’organismo. Un risultato positivo al
test per le tossine A e B conferma la presenza di C. difcile tossigeno.
PRINCIPIO DEL DOSAGGIO
Il test C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE® utilizza anticorpi specici per la glutammato deidrogenasi e le
tossine A e B del C. difcile. Il dispositivo contiene una nestra di reazione con tre linee verticali di anticorpi
immobilizzati. La linea di test dell’antigene (“Ag”) contiene anticorpi contro la glutammato deidrogenasi C.
difcile. La linea di controllo (“C”) è una linea punteggiata che contiene anticorpi anti-perossidasi di rafano
(HRP). La linea delle tossine A e B (“Tox”) contiene anticorpi contro le tossine A e B di C. difcile. Il coniugato
comprende anticorpi alla glutammato deidrogenasi e anticorpi alle tossine A e B accoppiate a perossidasi di
rafano. Per eseguire il test, il campione viene dispensato in una provetta contenente una miscela di diluente
e coniugato. La miscela di campione diluito e coniugato viene dispensata nel pozzetto del campione e il
dispositivo viene lasciato ad incubare a temperatura ambiente per 15 minuti. Durante l’incubazione, qualsiasi
glutammato deidrogenasi e tutte le tossine A e B presenti nel campione si legano ai coniugati anticorpo-perossidasi. I complessi antigene-anticorpo-coniugato migrano attraverso un tampone ltrante su una
membrana dove vengono catturati dagli anticorpi immobilizzati specici per la deidrogenasi e specici per
le tossine A e B nelle linee. La nestra di reazione viene quindi risciacquata con tampone di lavaggio a cui
segue l’aggiunta di substrato. Dopo un periodo di incubazione di 10 minuti, la regione “Ag” viene esaminata
visivamente e viene vericata la comparsa di una linea verticale blu sul lato “Ag” della nestra di reazione.
Una linea blu indica un test positivo. Se l’“Ag” è positivo, è necessario esaminare la reazione “Tox” per controllare se compare una linea blu sul lato “Tox” della nestra di reazione. Una linea blu indica un test positivo.
Una reazione “C” positiva, indicata da una linea blu verticale punteggiata sotto la parte “C” della nestra di
reazione, conferma che il test sta funzionando correttamente e che i risultati sono validi.
®
MATERIALI FORNITI
Dispositivi a membrana – Ogni busta contiene 1 dispositivo
DEV
Diluente (22 mL per acone) – Soluzione proteica tamponata con
contagocce graduato (contiene lo 0,05% di ProClin® 300)*
H412: Nocivo per gli organismi acquatici con effetti di lunga durata
Tampone di lavaggio (12 mL per acone) – Soluzione tamponata con
REA
WASH
Pipette di trasferimento in plastica monouso – graduate a 25 μL, 100 µL, 200 µL, 300 µL, 400 μL e 500 μL
IVD
*Parola d’avviso: Avvertenza
H317: Può causare una reazione allergica sulla pelle
P261, P272, P280, P302, P352, P333, P313, P321, P362, P364, P501
MATERIALI E APPARECCHIATURE RICHIESTI MA NON FORNITI
Provette piccole (p.es., provette per microcentrifuga in plastica o provette in vetro)
Stick applicatori Timer Vorticatore
Guanti monouso per la manipolazione dei campioni fecali Pipettatore e puntali
VITA UTILE E CONSERVAZIONE A MAGAZZINO
La data di scadenza del kit è stampata sull’etichetta e corrisponde a 24 mesi dalla data di produzione.
Le date di scadenza di ciascun componente sono indicate sulle rispettive etichette. Il kit deve essere
conservato a una temperatura compresa tra 2°C e 8°C. Dopo la prima apertura, il kit e i componenti
rimangono stabili no alle date di scadenza indicate se conservati tra 2°C e 8°C. Portare tutti i componenti
a temperatura ambiente prima dell’uso. Il kit rimane stabile a temperatura ambiente per i successivi turni di
lavoro di 8 ore se conservato in frigorifero fra un turno e l’altro.
contagocce graduato (contiene lo 0,05% di ProClin® 300)*
H412: Nocivo per gli organismi acquatici con effetti di lunga durata
Substrato (3,5 mL per acone) – Soluzione contenente tetrametilbenzidina
REAGSUBS
Coniugato (2,5 mL per acone) – Anticorpo specico per la glutammato
ENZCONJ
deidrogenasi accoppiato a perossidasi di rafano e anticorpi specici per le
tossine A e B accoppiati a perossidasi di rafano in una soluzione proteica
tamponata (contiene lo 0,05% di ProClin® 300)*
Controllo positivo (2 mL) – Antigene in una soluzione proteica tamponata
Per uso diagnostico in vitro
PRECAUZIONI
1. Per uso diagnostico in vitro. Solo per uso professionale.
2. Non miscelare e scambiare reagenti di kit diversi. Non utilizzare un kit dopo la data di scadenza.
3. Ogni componente del kit deve essere controllato per rilevare eventuali segni di perdita. All’arrivo, controllare
il kit per assicurarsi che i componenti non siano né congelati né caldi al tatto a causa di condizioni di
spedizione inadeguate.
4. I cappucci, i puntali e i contagocce seguono un codice colore; NON mischiarli o scambiarli!
5. Non congelare i reagenti. Il kit deve essere conservato a una temperatura compresa tra 2°C e 8°C.
IT
51
Page 53
6. Prima dell’apertura, la busta contenente il dispositivo a membrana deve essere a temperatura ambiente.
25 μL100 μL200 μL300 μL400 μL500 μL
Prima dell’uso conservare i dispositivi a membrana all’asciutto.
7. Per ottenere i risultati ottimali, utilizzare i campioni fecali entro 72 ore dalla raccolta. I campioni congelati
possono perdere attività in seguito al congelamento e allo scongelamento. Se si utilizzano campioni
scongelati, lasciarli scongelare a temperatura ambiente.
8. Dispensare i reagenti tenendo i aconi in posizione verticale in modo da garantire una dimensione costante
delle gocce e un volume corretto.
9. I campioni e i dispositivi a membrana devono essere manipolati e smaltiti come materiale biologico
potenzialmente infetto dopo l’uso.
10. I dispositivi a membrana non possono essere riutilizzati.
11. Il test è stato ottimizzato per quanto concerne la sensibilità e la specicità. Eventuali alterazioni della
procedura specicata e/o delle condizioni di test possono inuenzare la sensibilità e la specicità del test.
Non deviare dalla procedura specicata.
12. Prestare attenzione al tempo totale di dosaggio quando si analizza più di un campione fecale. Dispensare
dapprima il diluente, quindi aggiungere il coniugato a ogni provetta di diluente. Quindi dispensare il
campione nella provetta di diluente/coniugato. Miscelare accuratamente tutti i campioni diluiti e trasferirli
nel dispositivo a membrana. La fase di incubazione di 15 minuti comincia dopo che l’ultima miscela di
campione diluito-coniugato è stata trasferita nel dispositivo a membrana nale.
13. Se il reagente substrato assume un colore blu scuro/viola, contattare il servizio tecnico e chiedere la
sostituzione.
14. I campioni fecali possono contenere agenti potenzialmente infettivi e devono essere maneggiati al “Livello
di biosicurezza 2” come raccomandato nel manuale del CDC/NIH “Biosafety in Microbiological and
Biomedical Laboratories.”
15. Durante il test, indossare guanti monouso.
16. I reagenti coniugato, diluente e tampone di lavaggio contengono ProClin® 300 allo 0,05% come
conservante. Benché la concentrazione sia bassa, è noto che ProClin® 300 è dannoso (può vericarsi
sensibilizzazione cutanea). In caso di sensibilizzazione/irritazione o rash cutaneo, rivolgersi a un medico.
Togliere gli indumenti contaminati e lavarli prima di riutilizzarli. Manipolare i reagenti attenendosi alle
disposizioni vigenti in materia di sicurezza e buone pratiche di laboratorio. Le schede tecniche di sicurezza
per questo prodotto sono disponibili su richiesta; rivolgersi all’assistenza tecnica.
17. Attenersi alle disposizioni nazionali, regionali e locali per quanto riguarda lo smaltimento dei riuti.
18. Segnalare qualsiasi incidente grave a TECHLAB e alle autorità competenti dello Stato membro del SEE di
residenza dell’utilizzatore e/o del paziente.
RACCOLTA, CONSERVAZIONE E MANIPOLAZIONE DEI CAMPIONI FECALI
Tipi di campioni accettabili Non usare
Campioni fecali freschi
Campioni fecali congelati
Campioni in mezzi di trasporto (Cary Blair, C&S)
Campioni fecali in un ssativo a base di formalina
(p.es. formalina di sodio acetato, formalina al 10%,
mertiolato e formalina)
Campioni fecali in un ssativo a base di alcol (p.es.
alcol polivinilico)
Conservazione dei
campioni
Temperatura
Durata di conserva-
zione accettabile
Commenti
2° – 8° 72 ore I campioni ideali hanno meno di 24 ore
Scongelare a temperatura ambiente. Il conge-
Congelato ≤ -10°C Più di 72 ore
1. Le procedure di raccolta e manipolazione standard utilizzate internamente per i campioni fecali
sono appropriate.
2. I campioni di feci devono essere raccolti in contenitori di puliti, ermetici.
3. La conservazione dei campioni di feci nel diluente NON è consigliata.
4. Non lasciare i campioni nella miscela di diluente/coniugato per >24 ore.
PREPARAZIONE DEL CAMPIONE
1. Portare tutti i reagenti e il numero di dispositivi richiesto a temperatura ambiente prima dell’uso.
Si raccomanda di rimuovere i reagenti dall’inserto in espanso per ridurre il tempo necessario per il
riscaldamento a temperatura ambiente.
2. Preparare ed etichettare una provetta piccola per ogni campione e i controlli esterni opzionali in
base alla necessità.
3. Utilizzando un contagocce graduato nero, dispensare 750 µL (2° graduazione sul puntale) di diluente
in ogni provetta per campioni fecali. Per i campioni nei mezzi di trasporto come Cary Blair o
C&S, dispensare 650 µL (1° graduazione dalla punta) di diluente nella provetta.
lamento e lo scongelamento ripetuti possono
comportare una perdita dell'attività dei campioni in
seguito a degradazione delle tossine.
Tipo di campione Volume di diluente
Campioni fecali freschi 750 µL (2° graduazione sul puntale)
Campioni fecali congelati (congelati
non diluiti)
Campioni in mezzi di trasporto (Cary
Blair, C&S)
750 µL (2° graduazione sul puntale)
650 µL (1° graduazione dalla punta)
750
650
µL
Controlli esterni (positivo e negativo) 750 µL (2° graduazione sul puntale)
4. Dispensare una goccia di coniugato (acone con tappo rosso) in ogni provetta.
5. Preparare una pipetta di trasferimento in plastica monouso (fornita con il kit) per ogni campione – le
pipette hanno graduazioni in rilievo in corrispondenza di 25 µL, 100 µL, 200 µL, 300 µL, 400 µL e
500 µL.
Pipetta di trasferimento graduata:
52
6. Miscelare accuratamente tutti i campioni, indipendentemente dalla consistenza - è
fondamentale che i campioni siano uniformemente sospesi prima del trasferimento.
Campioni liquidi/semi-solidi – pipettare 25 µL di campione con una pipetta di trasferimento e
IT
dispensare nella miscela di diluente/coniugato. Utilizzare la stessa pipetta di trasferimento per
miscelare i campioni diluiti.
Page 54
Campioni formati/solidi – Occorre prestare attenzione e dispensare la quantità corretta di feci formate
nella miscela del campione. Miscelare accuratamente il campione utilizzando uno stick in legno e
trasferire una piccola porzione (circa 2 mm di diametro, l’equivalente di 25 µL) del campione nella miscela
di diluente/coniugato. Emulsionare i campioni utilizzando lo stick.
Campioni fecali nei mezzi di trasporto Cary Blair o C&S - pipettare 100 µL (2a graduazione dal puntale
della pipetta di trasferimento) di campione nella miscela di diluente/coniugato.
7. Campioni di controllo esterni opzionali:
Controllo positivo esterno - dispensare una goccia di controllo positivo (acone con il cappuccio grigio)
nella miscela di diluente/coniugato.
Controllo negativo esterno - dispensare 25 μL di diluente
NOTA: il trasferimento di una quantità insufciente di campione o la mancata miscelazione e sospensione
completa del campione nella miscela di diluente/coniugato possono dare un risultato falsamente negativo. La dispensazione di una quantità eccessiva di campione può causare risultati non validi a causa del
usso di campione limitato.
nella miscela di diluente/coniugato
.
PROCEDURA DEL TEST
1. Prendere un dispositivo a membrana per campione e un dispositivo per controllo positivo o negativo
esterno opzionale, in base alla necessità. Le buste in alluminio contenenti i dispositivi devono
essere portate a temperatura ambiente prima dell’apertura. Utilizzare il dispositivo immediatamente
dopo l’apertura. Etichettare ogni dispositivo in modo appropriato e orientarlo su una supercie
piana in modo che la scritta “C. DIFF COMPLETE” si trovi sul fondo del dispositivo e il piccolo
pozzetto per il campione si trovi nell’angolo in alto a destra del dispositivo.
Dispositivo a membrana Pozzetto del campione
Finestra di reazione
2. Chiudere ogni provetta di campione diluito e miscelare accuratamente. L’accurata miscelazione
può essere ottenuta mediante vorticazione o capovolgendo la provetta. Dopo che il campione o il
controllo positivo è stato diluito nella miscela di diluente/coniugato, lo stesso può essere incubato
a temperatura ambiente per un periodo di tempo no a 24 ore prima di dispensarlo nel dispositivo
a membrana.
3. Utilizzando la pipetta di trasferimento, trasferire 500 µL della miscela diluita di campioneconiugato nel pozzetto del campione (foro piccolo nell’angolo in alto a destra del dispositivo)
di un dispositivo a membrana, assicurandosi di espellere il campione di liquido su un tampone di
drenaggio all’interno del dispositivo a membrana. Durante il caricamento del campione nel pozzetto
per campioni, assicurarsi che la punta della pipetta di trasferimento sia rivolta verso la nestra di
reazione (foro più grande al centro del dispositivo).
4. Incubare il dispositivo a temperatura ambiente per 15 minuti – il campione drenerà attraverso il
dispositivo e un’area umida si diffonderà attraverso la nestra di reazione.
NOTA PER I CAMPIONI CHE NON MIGRANO:
può accadere che un campione diluito non migri correttamente e che la nestra di reazione non
si inumidisca completamente. Se la nestra di reazione non sembra essere completamente umida
entro 5 minuti dalla dispensazione del campione nel pozzetto del campione, dispensare 100 µL (4
gocce) di diluente nel pozzetto del campione e attendere altri 5 minuti (per un totale di 20 minuti).
5. Dopo l’incubazione, aggiungere 300 μL di tampone di lavaggio alla nestra di reazione utilizzando
il contagocce bianco graduato. Lasciare che il tampone di lavaggio uisca attraverso la membrana
della nestra di reazione e venga completamente assorbito.
6. Dispensare 2 gocce di substrato (acone con cappuccio bianco) alla nestra di reazione. Leggere
e registrare visivamente i risultati dopo 10 minuti.
INTERPRETAZIONE DEI RISULTATI
1. L’interpretazione del test è più afdabile quando il dispositivo viene letto immediatamente dopo lo
scadere del periodo di reazione di 10 minuti. Leggere il dispositivo a una distanza di lavoro normale
in un’area ben illuminata. Osservare con una linea d’osservazione direttamente sul dispositivo.
2. Osservare se nel dispositivo al centro della nestra di reazione compaiono punti blu che
rappresentano il controllo positivo interno. La comparsa di punti di controllo indica un controllo
interno valido. Lo sfondo può avere un colore da bianco ad azzurro. Osservare se sui lati “Ag”
e “Tox” della nestra di reazione compaiono linee blu che rappresentano le linee di test. Le linee
possono avere un’intensità da debole a scura.
3. Risultato con antigene positivo (“Ag”): un risultato con antigene positivo può essere interpretato
in qualunque momento tra la dispensazione del substrato e il tempo di lettura di 10 minuti. In un
risultato con antigene positivo, la linea “Ag” blu e la linea di controllo blu punteggiata sotto “C”
sono visibili (Figura 1a). Le linee possono avere un’intensità da debole a scura. Una linea parziale
evidente viene interpretata come un risultato positivo. Non interpretare un’alterazione di colore della
membrana come un risultato positivo. Un risultato positivo indica la presenza di C. difcile.
4. Risultato con antigene e tossina (“Tox”) positivi: se il risultato dell’antigene è positivo (ovvore sotto
la “C” sono visibili una linea “Ag” blu e un controllo blu punteggiato), procedere all’interpretazione
del risultato delle tossine. Un risultato positivo per le tossine può essere interpretato in qualunque
momento tra la dispensazione del substrato e il tempo di lettura di 10 minuti. In un risultato positivo
per le tossine, è visibile una linea blu “Tox” (Figura 1b). La linea può avere un’intensità da debole
a scura. Una linea parziale evidente viene interpretata come un risultato positivo. Non interpretare
un’alterazione di colore della membrana come un risultato positivo. Un risultato positivo indica la
presenza di tossina C. difcile.
5. Risultato negativo: un test non può essere interpretato come negativo o non valido no a 10 minuti
dopo la dispensazione del substrato. Sotto la “C” al centro della nestra di reazione è visibile una
singola linea punteggiata blu e sul lato “Ag” o “Tox” della nestra di reazione non sono visibili linee
di test (Figura 1c). Un risultato negativo nella porzione dell’antigene indica che l’antigene C. difcile
è assente nel campione oppure è al di sotto del limite di rilevazione del test. Un risultato negativo
nella porzione della tossina indica che la tossina C. difcile è assente nel campione oppure è al di
sotto del limite di rilevazione del test.
6. Risultato non valido: non sono visibili linee nella nestra di reazione (Figura 1d). Il risultato del test
non è valido se al termine del periodo di reazione non è presente una linea punteggiata blu sotto la
“C” (Figure 1e, 1f, 1g).
7. Antigene negativo (“Ag”), tossina positiva (“Tox”): una percentuale ridotta di campioni può
risultare negativa all’antigene ma positiva alla tossina. Questi campioni devono essere considerati
come indeterminati e sottoposti nuovamente a test con un campione fresco (Figura 1h). Se il
campione risulta nuovamente negativo per l’antigene ma positivo per la tossina, segnalare il
risultato come positivo per la tossina.
IT
53
Page 55
FIGURA 1: INTERPRETAZIONE DEI RISULTATI DEL TEST C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE
Figura 1a
Risultato con antigene
positivo
Figura 1d
Risultato non valido
Figura 1g
Risultato non valido
CONTROLLO DELLA QUALITÀ
Interno: deve essere visibile una linea punteggiata blu al centro della nestra di reazione, sotto la “C”
su ogni dispositivo a membranasottoposto a test. La comparsa dei punti di controllo blu conferma che il
campione e i reagenti sono stati dispensati correttamente, che i reagenti erano attivi al momento dell’esecuzione del dosaggio e che il campione è migrato correttamente attraverso il dispositivo membrana.
Inoltre conferma la reattività degli altri reagenti associati al dosaggio. Uno sfondo uniforme nell’area dei
risultati viene considerato come un controllo negativo interno. Se il test è stato eseguito correttamente e
i reagenti funzionano a dovere, lo sfondo sarà bianco per consentire un risultato discernibile.
Esterno: la reattività del kit C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE® deve essere vericata al ricevimento
mediante il controllo positivo e il controllo negativo (diluente). Il controllo positivo viene fornito insieme al
kit (acone con il cappuccio grigio). Il controllo positivo conferma la reattività degli altri reagenti associati
al dosaggio e non è concepito per garantire la precisione sul valore di cut-off del dosaggio analitico. Il
diluente viene usato per il controllo negativo. È possibile eseguire altri test con controlli per soddisfare i
requisiti delle disposizioni locali, statali e/o federali e/o delle organizzazioni accreditanti.
Figura 1b
Risultato con antigene e
tossina positivi
Figura 1e
Risultato non valido
Figura 1h
Per l'interpretazione vedere
il n,7
Figura 1c
Risultato negativoi
Figura 1f
Risultato non valido
®
LIMITI
1. Il test C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE® viene usato per individuare l’antigene e le tossine C. difcile
nei campioni fecali. Il test conferma la presenza di tossine nelle feci e queste informazioni devono
essere tenute in debito conto dal medico alla luce dell’anamnesi clinica e dell’esame obiettivo del
paziente. Il test C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE®rileva livelli di tossina A a ≥0,63 ng/mL, di tossina
B a ≥0,16 ng/mL e di glutammato deidrogenasi a ≥0,8 ng/mL.
2. I campioni fecali sono estremamente complessi. I risultati ottimali con il test C. DIFF QUIK CHEK
COMPLETE® si ottengono con campioni non più vecchi di 24 ore. La maggior parte dei campioni
non diluiti possono essere conservati a una temperatura compresa tra 2°C e 8°C per 72 ore prima
che si noti una degradazione signicativa della tossina. Se i campioni non vengono testati entro
questo periodo di tempo, possono essere congelati e scongelati. Tuttavia il ripetuto congelamento
e scongelamento può comportare la perdita di immunoreattività dell’antigene e delle tossine A e B.
3. Alcuni campioni possono produrre reazioni deboli. Questa evenienza può essere dovuta a una serie
di fattori come la presenza di bassi livelli di antigene e/o tossina, la presenza di sostanze leganti o
enzimi inattivanti nelle feci. Le linee possono avere un’intensità da debole a scura. Questi campioni
devono essere segnalati come positivi se si osserva qualsiasi linea blu, anche parziale. Una linea blu
parziale evidente viene interpretata come un risultato positivo.
4. I campioni fecali conservati in formalina al 10%, mertiolato e formalina, formalina di sodio acetato o
alcol polivinilico non possono essere utilizzati.
5. Il test C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE® è un test qualitativo. L’intensità del colore non deve essere
interpretata in modo quantitativo.
6. Alcuni ceppi isolati di C. sordellii possono reagire nel test C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE® a causa
della produzione di tossine immunologicamente correlate (1).
7. Tassi di colonizzazione no al 50% sono stati riferiti nei lattanti. Un tasso elevato è stato riferito
anche nei pazienti con brosi cistica (1,3). In questi gruppi i risultati possono sembrare positivi, ma
devono considerati insieme alla possibilità di essere un vettore colonizzato.
8. L’unico organismo non-C. difcile a reagire nella porzione della tossina del test C. DIFF QUIK CHEK
COMPLETE® è stato il Clostridium sordellii VPI 9048. Questo ceppo produce tossine HT e LT, che
sono rispettivamente omologhe alle tossine A e B.
9. Non esistono dati sull’effetto dei lavaggi del colon, degli enemi al bario, dei lassativi o delle
preparazioni intestinali sulle prestazioni del test C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE®. Tutte queste
procedure possono causare un’estesa diluizione o la presenza di additivi che possono inuenzare
le prestazioni del test.
VALORI ATTESI
La malattia da Clostridium difcile è prevalentemente una malattia di tipo nosocomiale dei pazienti
anziani e la frequenza dipende da fattori come la popolazione di pazienti, il tipo di istituto e l’epidemiologia. L’incidenza riferita di malattia da C. difcile nei pazienti con diarrea associata agli antibiotici può
variare dal 5 % al 20% e gli ospedali possono sperimentare tassi inferiori o superiori a questo intervallo.
È importante considerare tutti i risultati dei test tenendo conto dei sintomi clinici in quanto alcuni adulti
sani e un numero elevato di lattanti sani (no al 50%) risulteranno positivi alla tossina C. difcile. Inoltre,
sono stati riferiti tassi di portatori di C. difcile tra il 22% e il 32% nei pazienti con brosi cistica (1,3).
Negli studi condotti per questo dispositivo utilizzando pazienti sintomatici l’incidenza di tossine A e B è
risultata pari al 12% e di GDH al 18%. Un risultato positivo nella porzione dell’antigene del test C. DIFF
QUIK CHEK COMPLETE® conferma la presenza di C. difcile in un campione fecale; un risultato negativo
indica l’assenza dell’organismo. Un risultato positivo nella porzione della tossina del test C. DIFF QUIK
CHEK COMPLETE® conferma la presenza di tossina di C. difcile in un campione fecale; un risultato
negativo indica l’assenza dell’organismo o livelli di tossina insufcienti per essere rilevati.
54
IT
Page 56
PRESTAZIONI METODOLOGICHE
Valutazione clinica della porzione dell’antigene del test C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE
La porzione dell’antigene del test C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE® è stata confrontata con la coltura
batterica. I campioni inclusi nella valutazione sono stati inviati ai laboratori clinici per l’analisi di routine. La
coltura batterica è stata eseguita in base alle procedure interne. I risultati sono presentati nella Tabella 1.
Tabella 1. Riepilogo delle prestazioni cliniche con confronto tra il test C. DIFF QUIK CHEK
C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE
Linea dell'antigene positiva
C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE
Linea dell'antigene negativa
COMPLETE® e la coltura batterica
n = 1126
®
®
Coltura batterica
Positivo
201 62
21 842
®
Coltura batterica
Negativo
Limiti di condenza
95%
Sensibilità 90,5% 85,7 – 93,9
Specicità 93,1% 91,2 – 94,7
Valore positivo predittivo 76,4% 70,7 – 81,3
Valore negativo predittivo 97,6% 96,2 – 98,4
Correlazione 92,6% 91,8 – 93,4
I campioni discrepanti sono stati valutati utilizzando gli attuali test ELISA per la glutammato
deidrogenasi di C. difcile.
Ventinove dei 62 campioni falsamente positivi sono risultati positivi con un altro test GDH e sono
stati considerati veri positivi.
Tredici dei 21 campioni falsamente negativi erano negativi con un altro test GDH e sono stati
considerati veri negativi.
La porzione di antigene del test C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE® è stata confrontata con il test di coltura tissutale per il rilevamento della tossina di C. difcile. I campioni inclusi nella valutazione sono stati
inviati ai laboratori clinici per l’analisi di routine. I risultati sono presentati nella Tabella 2. La porzione di
antigene del test C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE® ha rilevato il 98,7% dei campioni positivi alla coltura
tissutale.
Tabella 2. Riepilogo delle prestazioni cliniche con confronto tra il test C. DIFF QUIK CHEK
C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE
Linea dell'antigene positiva
C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE
Linea dell'antigene negativa
Valutazione clinica della porzione della tossina del test C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE
La porzione della tossina del test C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE® è stata confrontata con il test di
coltura tissutale presso due laboratori clinici e internamente presso TECHLAB, Inc. I campioni inclusi
nella valutazione sono stati inviati ai laboratori clinici per l’analisi di routine. I risultati sono presentati nella
Tabella 3.
Tabella 3. Riepilogo delle prestazioni cliniche con confronto tra il test C. DIFF QUIK CHEK
C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE
Linea delle tossine positiva
C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE
Linea delle tossine negativa
COMPLETE® e il test di coltura tissutale
n = 1126
®
®
Coltura tissutale
COMPLETE® e il test di coltura tissutale
n = 1126
®
®
Coltura tissutale
Positivo
Coltura tissutale
154 109
2 861
Positivo
Coltura tissutale
137 6
19 964
Limiti di condenza
Negativo
®
Negativo
95%
Sensibilità 87,8% 81,4 - 92,3
Specicità 99,4% 98,6 - 99,7
Valore positivo predittivo 95,8% 90,7 - 98,3
Valore negativo predittivo 98,1% 96,9 - 98,8
Correlazione 97,8% 97,6 - 98,0
I campioni discrepanti sono stati valutati utilizzando test ELISA per le tossine A e B.
Cinque dei 6 campioni falsamente positivi sono risultati positivi al test ELISA e sono stati considerati veri positivi.
Dodici dei 19 campioni falsamente negativi erano negativi al test ELISA e sono stati considerati
veri negativi.
IT
55
Page 57
EFFETTO DELLA CONSISTENZA DEI CAMPIONI DI FECI
Effetto della consistenza dei campioni di feci sul test C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE
La reazione dei campioni di feci di diversa consistenza nella porzione dell’antigene (n=978) e nella
porzione della tossina (n=981) del test C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE® è presentata nelle Tabelle 4 e 5.
Le percentuali di reazioni positive utilizzando la coltura o il test C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE® sono
risultate simili in tutti e tre i tipi di campioni fecali (liquidi, semi-solidi e solidi). Tutti i campioni sono stati
sottoposti ad analisi del C. difcile. Alla base dell’analisi vi era l’anamnesi clinica del paziente e non la
consistenza del campione. Nella porzione dell’antigene, i risultati mostrano che il test C. DIFF QUIK CHEK
COMPLETE® dava risultati analoghi alla coltura batterica quando veniva eseguita l’analisi di consistenze
diverse. Nella porzione della tossina, i risultati mostrano che il test C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE® dava
risultati analoghi alla coltura tissutale quando veniva eseguita l’analisi di consistenze diverse.
Tabella 4. Reazione dei campioni di feci di diversa consistenza nella porzione dell’antigene
Numero di campioni
Positivi alla coltura
batterica
C. DIFF QUIK CHEK
COMPLETE
Linea dell'antigene positiva
Negativi alla coltura
batterica
C. DIFF QUIK CHEK
COMPLETE
Linea dell'antigene negativa
Tabella 5. Reazione dei campioni di feci di diversa consistenza nella porzione della tossina
Numero di campioni
del test C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE®
(n = 978)
Campioni liquidi
(n = 335)
59 (17,6%) 110 (21,1%) 19 (15,7%)
®
72 (21,5%) 128 (24,5%) 25 (20,7%)
276 (82,4%) 412 (78,9%) 102 (84,3%)
®
263 (78,5%) 394 (75,5%) 96 (79,3%)
del test C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE®
(n = 981)
Campioni liquidi
(n = 336)
Semi-solidi
Campioni (n = 522)
Semi-solidi
Campioni (n = 523)
®
Campioni solidi
(n = 121)
Campioni solidi
(n = 122)
Positivi alla coltura tissutale 43 (12,8%) 81 (15,5%) 8 (6,6%)
C. DIFF QUIK CHEK
COMPLETE
Linea delle tossine positiva
®
42 (12,5%) 72 (13,8%) 7 (5,7%)
Negativi alla coltura tissutale 293 (87,2%) 442 (84,5%) 114 (93,4%)
C. DIFF QUIK CHEK
COMPLETE
Linea delle tossine negativa
®
294 (87,5%) 451 (86,2%) 115 (94,3%)
RIPRODUCIBILITÀ
La riproducibilità del test C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE® è stata determinata utilizzando 12 campioni
fecali codicati in modo da prevenirne l’identicazione durante il test. Il test è stato eseguito presso 3
laboratori indipendenti che hanno analizzato i campioni per 3 giorni. I campioni hanno prodotto i risultati
attesi il 100% delle volte.
CROSS-REATTIVITA’
I campioni fecali inoculati con i seguenti microorganismi no a una concentrazione nale di circa 10
o più organismi per mL non hanno reagito nella porzione dell’antigene o della tossina del test C. DIFF
QUIK CHEK COMPLETE®:
Batterio o patogeno: Aeromonas hydrophila, Bacillus cereus, Bacillus subtilis, Bacteroides fragilis,
Campylobacter coli, Campylobacter fetus, Campylobacter jejuni, Candida albicans, Clostridium
butyricum, Clostridium clostridiforme, Clostridium haemolyticum, Clostridium histolyticum, Clostridium
novyi, Clostridium perfringens, Clostridium septicum, Clostridium sordellii (non tossigeno), Clostridium
sporogenes, Enterobacter aerogenes, Enterobacter cloacae, Enterococcus faecalis, Escherichia coli
EIEC, Escherichia coli, Escherichia coli O157:H7, Escherichia coli ETEC, Klebsiella pneumoniae,
Peptostreptococcus anaerobius, Proteus vulgaris, Pseudomonas aeruginosa, Salmonella typhimurium,
Serratia liquifaciens, Shigella dysenteriae, Shigella exneri, Shigella sonnei, Staphylococcus aureus,
Staphylococcus aureus (Cowans), Staphylococcus epidermidis, Vibrio cholerae, Vibrio parahaemolyticus,
Yersinia enterocolitica
L’unico organismo non-C. difcile a reagire nella porzione della tossina del test C. DIFF QUIK CHEK
COMPLETE® è stato il Clostridium sordellii VPI 9048. Questo ceppo produce tossine HT e LT, che sono
rispettivamente omologhe alle tossine A e B.
I seguenti virus da 10
COMPLETE®:
Virus: Tipi di adenovirus 1, 2, 3, 5, 40, 41, coronavirus umano, coxsackievirus B2, B3, B4, B5, echovirus
9, 11, 18, 22, 33, tipo di enterovirus 68, 69, 70, 71, rotavirus.
SOSTANZE INTERFERENTI
Le seguenti sostanze (formulazione USA) non hanno avuto effetti sui risultati del test quanto presenti
nelle feci alle concentrazioni indicate: mucina (3,5% p/v), sangue umano (40% v/v), solfato di bario
(5% p/v), Imodium® (5% v/v), Kaopectate® (5% v/v), Pepto-Bismol® (5% v/v), acido stearico/palmitico
(40% p/v), metronidazolo (0,25% p/v), vancomicina (0,25% p/v).
3,3
8,25
a 10
unità TCID per 0,2 mL non hanno reagito nel test C. DIFF QUIK CHEK
8
REAZIONE DEGLI ISOLATI CLINICI OTTENUTI ALL’AGAR CICLOSERINACEFOXITINA-FRUTTOSIO (CCFA)
Un totale di 103 isolati clinici di C. difcile, ottenuti mediante coltura batterica anaerobica su CCFA
dopo 3 giorni a 37°C sono stati sottoposti ad analisi con test C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE®. Ai ni
dell’analisi, singole colonie sono state selezionate e sospese nel diluente come raccomandato per i
campioni fecali. Tutti e 103 gli isolati hanno prodotto una reazione positiva all’antigene nel test.
Settanta dei 103 isolati (68%) provenivano da campioni fecali positivi per la tossina di C. difcile mediante
coltura tissutale. Di questi, 56 (80%) hanno prodotto una reazione positiva alla tossina quando sottoposti a
screening dopo crescita anaerobica su CCFA per 3 giorni a 37°C.
SENSIBILITA’ ANALITICA
Il valore di cut-off del test è stato stabilito a concentrazioni di 0,63 ng/mL per la tossina A, 0,16ng/mL
per la tossina B e 0,8 ng/mL per la glutammato deidrogenasi.
56
IT
Page 58
TECHLAB® C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE
REAGWASH
REAGSUBS
ENZCONJ
BEOOGD GEBRUIK
De TECHLAB® C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE®-test is een snel membraan-enzymimmuno-assay voor de
gelijktijdige detectie van Clostridium difcile-glutamaatdehydrogenase-antigen en de toxinen A en B in een enkel
reactieputje. De test detecteert C. difcile-antigen, glutamaatdehydrogenase, als een screening voor de aanwezigheid van C. difcile en bevestigt de aanwezigheid van toxigeen C. difcile door detectie van de toxinen A en
B in fecale monsters van personen die vermoedelijk lijden aan een C. difcile-aandoening. De test moet worden
worden gebruikt als hulp bij de diagnose van een C. difcile-aandoening. Net als bij andere C. difcile-testen,
moeten de resultaten worden beschouwd in combinatie met de voorgeschiedenis van de patiënt.
UITLEG
Na behandeling met antibiotica ontwikkelen veel patiënten gastro-intestinale problemen die gaan van milde
diarree tot ernstige pseudomembraneuze colitis. Veel gevallen van de mildere vormen van een maagdarmstelselaandoening en de meeste gevallen van pseudomembraneuze colitis worden veroorzaakt door toxigene
stammen van Clostridium difcile (1). Dit organisme is een opportunistische anaerobe bacterie die in de darm
groeit zodra de normale ora door het antibioticum is veranderd. Toxigene stammen van C. difcile dragen
de genen die coderen voor de toxinen terwijl niet-toxigene stammen deze toxinegenen niet dragen. Het begin
van de aandoening wordt geassocieerd met de toxinen die door het toxigene organisme zijn geproduceerd.
De klinische klachten geassocieerd met de aandoening worden geacht primair te wijten te zijn aan toxine
A, dat een weefselbeschadigend enterotoxine is (2,3). C. difcile produceert ook een tweede toxine, het
zogenaamde toxine B. Toxine B, dat ook het cytotoxine van het organisme wordt genoemd, is het toxine dat
gedetecteerd wordt door het weefselkweekassay dat momenteel door veel laboratoria wordt gebruikt.
Toxigene C. difcile-stammen produceren beide toxinen, of alleen toxine B (4-7). De glutamaatdehydroge-
nase van C. difcile is een goede antigenmerker voor het organisme in feces omdat dit door alle stammen,
toxigeen of niet-toxigeen in grote hoeveelheden geproduceerd wordt (8-10). Het antigen kan in fecale
monsters worden gedetecteerd door gebruik te maken van de C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE®-test. Een
positief resultaat van de test voor het glutamaatdehydrogenase van C. difcile bevestigt de aanwezigheid van
dit organisme in een fecaal monster; een negatief resultaat duidt op de afwezigheid van het organisme. Een
positief resultaat op de test voor de toxinen A en B bevestigt de aanwezigheid van het toxigene C. difcile.
PRINCIPE VAN DE TEST
De C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE®-test gebruikt antilichamen speciek voor glutamaatdehydrogenase en de
toxinen A en B van C. difcile. Het instrument bevat een reactievenster met drie verticale lijnen geïmmobiliseerde
antilichamen. De antigentestlijn (“Ag”) bevat antilichamen tegen C. difcile-glutamaatdehydrogenase. De controlelijn (“C”) is een stippellijn die anti-mierikswortelperoxidase (HRP)-antilichamen bevat. De testlijn voor de toxinen
A en B (“Tox”) bevat antilichamen tegen de C. difcile-toxinen A en B. Het conjugaat bestaat uit antilichamen
van glutamaatdehydrogenase en antilichamen van de toxinen A en B gekoppeld aan mierikswortelperoxidase.
Om de test uit te voeren, wordt het monster toegevoegd aan een buis die een mengsel van verdunner en conju-
gaat bevat. Het verdunde monster-conjugaatmengsel wordt aangebracht in het monsterputje en het instrument
wordt 15 minuten op kamertemperatuur geïncubeerd. Tijdens de incubatie binden eventuele glutamaatdehydrogenase en toxinen A en B in het monster aan de antilichaam-peroxidaseconjugaten. De antigen-antilichaam-conjugaatcomplexen migreren door een lterkussentje naar een membraan waar zij worden ingevangen
door de geïmmobiliseerde glutamaatdehydrogenasespecieke en toxine-A- en -B-specieke antilichamen in de
lijnen. Het reactievenster wordt vervolgens gewassen met wasbuffer, gevolgd door toevoeging vansubstraat.
Na een 10 minuten durende incubatieperiode, wordt de “Ag”-reactie visueel onderzocht op de verschijning van
een verticale blauwe lijn aan de “Ag”-zijde van het reactievenster. Een blauwe lijn geeft een positieve test aan.
Als de “Ag” positief is, moet de “Tox”-reactie visueel worden onderzocht op de verschijning van een blauwe lijn
aan de “Tox”-zijde van het reactievenster. Een blauwe lijn geeft een positieve test aan. Een positieve “C”-reactie,
aangegeven door een verticale gestippelde blauwe lijn onder het “C”-gedeelte van het reactievenster, bevestigt
dat de test goed werkt en de resultaten geldig zijn.
®
VERSTREKTE MATERIALEN
Membraaninstrumenten – elk zakje bevat 1 instrument
DEV
Verdunner (22 mL per es) – Gebufferde eiwitoplossing met gegradueerde
druppelaarconstructie (bevat 0,05% ProClin® 300)*
H412: Schadelijk voor in het water levende organismen, met langdurige gevolgen
Wasbuffer (12 mL per es) – Gebufferde oplossing met gegradueerde
druppelaar constructie (bevat 0,05% ProClin® 300)*
H412: Schadelijk voor in het water levende organismen, met langdurige gevolgen
Substraat (3,5 mL per es) – Oplossing die tetramethylbenzidine bevat
Conjugaat (2,5 mL per es) –Antilichaam speciek voor glutamaatdehydrogenase
gekoppeld aan mierikswortelperoxidase en antilichamen speciek voor de toxinen
A en B gekoppeld aan mierikswortelperoxidase in een gebufferde eiwitoplossing
(bevat 0,05% ProClin® 300)*
Positieve controle (2 mL) – Antigen in een gebufferde eiwitoplossing
Plastic wegwerpoverbrengpipettes – gegradueerd op 25 µL, 100 µL, 200 µL, 300 µL, 400 µL en 500 μL
IVD
*Signaalwoord: Waarschuwing
H317: Kan een allergische huidreactie veroorzaken
P261, P272, P280, P302, P352, P333, P313, P321, P362, P364, P501
MATERIALEN EN VEREISTE, MAAR NIET MEEGELEVERDE UITRUSTING
Kleine testbuizen (bijv. plastic microcentrifugebuizen of glazen buizen)
Applicatorsticks Timer Vortexmixer
Wegwerphandschoenen voor hantering van fecale monsters Pipetten en punten
HOUDBAARHEIDSPERIODE EN OPSLAG
De vervaldatum van de kit staat vermeld op het label en is 24 maanden vanaf de productiedatum.
Vervaldatums voor elke component staan op de individuele labels. De kit moet bewaard worden tussen 2°C
en 8°C. De kit en alle componenten blijven na opening stabiel gedurende de vermelde vervaldata bij opslag
tussen 2°C en 8°C. Breng alle componenten op kamertemperatuur voor gebruik. De kit blijft stabiel op
kamertemperatuur tijdens ploegendiensten van 8 opeenvolgende uren, indien ze opnieuw gekoeld worden
bewaard tussen ploegendiensten.
VOORZORGSMAATREGELEN
1. Voor in vitro diagnostisch gebruik. Enkel voor professioneel gebruik.
2. Reagentia uit verschillende sets mogen niet worden gemengd of onderling uitgewisseld. Gebruik geen set
3. Elke component in de set moet worden geïnspecteerd op mogelijke tekenen van lekkage. Inspecteer de
4. Doppen, punten en druppelaarconstructies zijn kleurgecodeerd; NIET mengen of onderling uitwisselen!
5. Bevries de reagentia niet. De set moet worden opgeslagen tussen 2 °C en 8 °C.
6. Het zakje dat het membraaninstrument bevat, moet op kamertemperatuur zijn voordat het wordt geopend.
Voor in vitro diagnostisch gebruik
na de vervaldatum.
set bij aankomst, om te verzekeren dat de componenten niet zijn bevroren of warm zijn bij aanraking door
onjuiste verzendomstandigheden.
NL
57
Page 59
Houd de membraaninstrumenten droog voor het gebruik.
25 μL100 μL200 μL300 μL400 μL500 μL
7. Gebruik fecale monsters binnen 72 uur na verzameling om optimale resultaten te verkrijgen. Monsters die
zijn bevroren, kunnen door bevriezen en dooien hun activiteit verliezen. Als er bevroren monsters worden
gebruikt, moeten deze op kamertemperatuur worden ontdooid.
8. Houd de reagensessen verticaal om reagentia toe te dienen, om een consistente druppelgrootte en
correct volume te verzekeren.
9. Monsters en membraaninstrumenten moeten na het gebruik worden gehanteerd en afgevoerd als
potentiële biologische gevaren.
10. Membraaninstrumenten kunnen niet worden hergebruikt.
11. De test is geoptimaliseerd op gevoeligheid en speciciteit. Veranderingen van de gespeciceerde
procedure en/of testcondities kunnen de gevoeligheid en speciciteit van de test beïnvloeden. Wijk niet af
van de gespeciceerde procedure.
12. Let op de totale assayperiode wanneer u meer dan een fecaal monster test. Doe er eerst verdunner
in en voeg dan het conjugaat toe aan elke buis verdunner. Vervolgens voegt u het monster toe
aan de buis verdunner/conjugaat. Meng alle verdunde monsters grondig en breng ze over op het
membraaninstrument. De incubatiestap van 15 minuten begint nadat het laatste verdunde monsterconjugaatmengsel werd overgebracht op het laatste membraaninstrument.
13. Als het substraatreagens verandert in een donkerblauwe/violette kleur, belt u de technische diensten om
vervanging.
14. Fecale monsters kunnen potentieel infectieuze agentia bevatten en moeten worden gehanteerd op
“bioveiligheidsniveau 2” zoals aanbevolen in de CDC/NIH-handleiding “Biologische veiligheid in
microbiologische en biomedische laboratoria”.
15. Draag wegwerphandschoenen wanneer u de test doet.
16. De Conjugaat, Verdunner en Wasbuffer reagentia bevatten 0,05% ProClin® 300 als een
conserveringsmiddel. De concentratie is weliswaar laag, maar ProClin® 300 staat bekend als schadelijk
(huidsensibilisatie kan optreden). Als er huidsensibilisatie, -irritatie of -uitslag optreedt, vraag dan medisch
advies/medische hulp. Doe vervuilde kleding uit en was deze, voordat u ze opnieuw gebruikt. Hanteer
de reagentia in overeenstemming met de bestaande regelgeving voor laboratoriumveiligheid en goede
laboratoriumpraktijken. Op aanvraag zijn veiligheidsinformatiebladen voor dit product verkrijgbaar, neem
contact op met de technische ondersteuning.
17. Volg daarom uw nationale, regionale en lokale verordeningen voor afvalverwijderingsregelgeving.
18. Ernstige incidenten moeten worden gemeld aan TECHLAB en aan de bevoegde instantie van de
EER-lidstaat waarin de gebruiker en/of patiënt is gevestigd.
VERZAMELING, HANTERING EN OPSLAG VAN FECALE MONSTERS
Aanvaardbare monstertypen Niet gebruiken
Verse fecale monsters
Bevroren fecale monsters
Monsters in transportmedia (Cary Blair, C&S)
Opslag monsters
Temperatuur
Aanvaardbare
opslagduur
2 °C – 8 °C 72 uur Ideale monsters zijn minder dan 24 uur oud
Bevroren ≤ -10 °C Langer dan 72 uur
58
Fecale monsters in op formaline gebaseerde xatief (bijv. natriumacetaatformaline, 10% formaline,
merthiolaatformaline)
Fecale monsters in op alcohol gebaseerde xatief
(bijv. polyvinylalcohol)
Opmerkingen
Ontdooien op kamertemperatuur. Verscheidene
keren bevriezen en ontdooien kan leiden tot verlies
van monsteractiviteit door toxine-afbraak.
NL
1. De ter plaatse gebruikte standaard verzamelings- en hanteringsprocedures voor fecale monsters
zijn toepasselijk.
2. Fecale monsters moeten worden verzameld in schone, lekvrije containers.
3. Opslag van fecale monsters in de verdunner wordt NIET aanbevolen.
4. Laat de fecale monsters niet >24 uur in het verdunner/conjugaat-mengsel zitten.
BEREIDING MONSTER
1. Breng alle reagentia en het vereiste aantal apparaten voor het gebruik op kamertemperatuur.
Aanbevolen wordt de reagentia uit het schuimverpakkingsstuk te verwijderen om de tijd die nodig
is om ze tot kamertemperatuur op te warmen te verkorten.
2. Stel voor elk monster een kleine testbuis op en label deze, en doe hetzelfde voor optionele externe
controles, voor zover noodzakelijk.
3. Gebruik de zwart gegradueerde druppelaarconstructie, voeg 750 µL (2e graduatie vanaf de punt)
verdunner toe aan elke buis voor fecale monsters. Voor monsters in transportmedia zoals Cary
Blair of C&S, voegt u 650 µL (1e maatstreep vanaf de punt) verdunner toe aan de buis.
Monstertype Volume verdunner
Verse fecale monsters 750 µL (2e graduatie vanaf de punt)
Bevroren fecale monsters (bevroren
onverdund)
Monsters in transportmedia (Cary
Blair, C&S)
Externe controles (positief en
negatief)
4. Voeg een druppel conjugaat (es met de rode dop) toe aan elke buis.
5. Zorg voor een plastic wegwerpoverbrengpipet (meegeleverd met de set) voor elk monster – de
pipetten hebben oplopende graduaties van 25 µL, 100 µL, 200 µL, 300 µL, 400 µL en 500 µL.
750 µL (2e graduatie vanaf de punt)
650 µL (1e maatstreep vanaf de punt)
750 µL (2e graduatie vanaf de punt)
750
650
µL
Gegradueerde overbrengpipet:
6. Meng alle monsters grondig ongeacht de consistentie – het is van essentieel belang dat de
monsters gelijkmatig zijn gesuspendeerd voordat ze worden overgebracht.
Vloeibare/halfvaste monsters – Pipetteer 25 µL van monster met een overbrengpipet en
dispenseer in het verdunner/conjugaat-mengsel. Gebruik dezelfde overbrengpipet om het
verdunde monster te mengen.
Gevormde/vaste monsters – Zorg ervoor dat de correcte hoeveelheid gevormde feces aan het
monstermengsel wordt toegevoegd. Meng het monster grondig met behulp van een houten
applicatorstick en breng een klein gedeelte (ongeveer 2 mm diameter, het equivalent van 25 µL)
van het monster over in het verdunner/conjugaat-mengsel. Emulsifeer het monster met behulp van
de applicatorstick.
Page 60
Fecale monsters in Cary Blair- of C&S-transportmedia - Pipetteer 100 µL (2e graduatie vanaf de
punt van de overbrengpipet) van het monster in het verdunner/conjugaat-mengsel.
7. Optionele externe controlemonsters:
Externe positieve controle - Voeg een druppel positieve controle (es met grijze dop) in het
verdunner/conjugaat-mengsel.
Externe negatieve controle - Voeg 25 μL verdunner in het verdunner/conjugaat-mengsel.
OPMERKING: Overbrenging van te weinig monster, of als het niet volkomen gemixt is en het monster
niet compleet gesuspendeerd is in het verdunner/conjugaat-mengsel, kan leiden tot een fout-negatief
testresultaat. De toevoeging van te veel fecaal monster kan leiden tot ongeldige resultaten vanwege
een beperkte monsterstroom.
TESTPROCEDURE
1. Zorg voor één membraaninstrument per monster en één instrument per optionele externe positieve of
negatieve controle, voor zover noodzakelijk. De foliezakken die de instrumenten bevatten moeten op
kamertemperatuur worden gebracht, voordat ze worden geopend. Gebruik het instrument onmiddellijk
na openen. Etiketteer elk instrument op de juiste wijze en zet dit op een vlak oppervlak zodat de
opdruk “C. DIFF COMPLETE” aan de onderkant van het instrument zit en het monsterputje zich in de
rechterbovenhoek van het instrument bevindt.
Membraaninstrument
Reactievenster
2. Sluit elke buis verdund monster en meng grondig. De juiste menging kan worden bereikt door
de inhoud te laten wervelen of de buis om te keren. Als een patiëntmonster of positieve controle
is verdund in het verdunner/conjugaat-mengsel, kan het gedurende een periode van maximaal
24 uur op kamertemperatuur worden geïncubeerd voordat het op het membraaninstrument wordt
aangebracht.
3. Gebruik een nieuwe overbrengpipet, breng 500 µL van het verdunde monsterconjugaatmengsel
in het monsterputje (kleinere opening in de rechterbovenhoek van het instrument) van een
membraaninstrument, zorg ervoor dat u het vloeistofmonster eruit perst op het gaasje in het
membraaninstrument. Wanneer u het monster in het monsterputje aanbrengt, dient u zich ervan
te vergewissen dat de punt van de overbrengpipet naar het reactievenster is gebogen (grotere
opening in het midden van het instrument).
4. Incubeer het instrument gedurende 15 minuten op kamertemperatuur – het monster zal door het
instrument kruipen waarbij zich een nat gedeelte over het reactievenster verspreidt.
OPMERKING OVER MONSTERS DIE NIET MIGREREN:
Zo nu en dan zal een verdund monster niet goed migreren en wordt het reactievenster niet volledig nat.
Als het reactievenster niet binnen 5 minuten nadat het monster op het monsterputje is aangebracht
volkomen nat lijkt, voeg dan 100 µL (4 druppels) verdunner toe op het monsterputje en wacht nog eens
5 minuten (in totaal 20 minuten).
5. Na de incubatie, voegt u 300 μL wasbuffer toe aan het reactievenster, gebruik daarbij de
gegradueerde witte druppelaarconstructie. Laat de wasbuffer door het reactievenstermembraan
lopen en volkomen absorberen.
6. Voeg 2 druppels substraat toe (es met witte dop) aan het reactievenster. Lees de resultaten
visueel af na 10 minuten en registreer ze.
Monsterputje
INTERPRETATIE VAN DE RESULTATEN
1. De interpretatie van de test is het betrouwbaarst wanneer het instrument onmiddellijk aan het eind
van de 10 minuten durende reactieperiode wordt afgelezen. Lees het instrument op een normale
werkafstand af in een goed verlichte ruimte. Kijk met de gezichtslijn direct over het instrument.
2. Observeer het instrument op de verschijning van blauwe stippen in het midden van het reactievenster
die de interne positieve controle voorstellen. De verschijning van eventuele controlestip(pen)
stelt een geldige interne controle voor. De achtergrond kan wit tot lichtblauw gekleurd lijken.
Observeer het instrument op de verschijning van blauwe lijnen aan de “Ag”- en “Tox”- zijden van
het reactievenster die testlijnen voorstellen. De lijnen kunnen een zwakke tot donkere intensiteit
hebben.
3. Positief antigen (“Ag”)-resultaat: Een positief antigenresultaat kan op elk tijdstip tussen de
toevoeging van substraat en de leestijd van 10 minuten worden geïnterpreteerd. Voor een positief
antigenresultaat zijn de blauwe “Ag”-lijn en de gestippelde blauwe controlelijn onder “C” zichtbaar
(afbeelding 1a). De lijnen kunnen een zwakke tot donkere intensiteit hebben. Een duidelijke
gedeeltelijke lijn wordt geïnterpreteerd als een positief resultaat. Interpreteer de membraanverkleuring
niet als een positief resultaat. Een positief resultaat duidt op de aanwezigheid van C. difcile.
4. Positief antigen- en toxine (“Tox”)-resultaat: Als het antigenresultaat positief is (d.w.z. er zijn
een blauwe “Ag”-lijn en een gestippelde blauwe controle onder “C” zichtbaar), gaat u verder met
de interpretatie van het toxineresultaat. Een positief toxineresultaat kan op elk tijdstip tussen de
toevoeging van substraat en de leestijd van 10 minuten worden geïnterpreteerd. Voor een positief
toxineresultaat is er blauwe “Tox”-lijn zichtbaar (afbeelding 1b). De lijn kan een zwakke tot donkere
intensiteit hebben. Een duidelijke gedeeltelijke lijn wordt geïnterpreteerd als een positief resultaat.
Interpreteer de membraanverkleuring niet als een positief resultaat. Een positief resultaat duidt op
de aanwezigheid van het C. difcile-toxine.
5. Negatief resultaat: Een test kan voor aoop van de 10 minuten volgend op de toevoeging van het
substraat niet worden geïnterpreteerd als negatief of ongeldig. Er is een enkele blauwe stippellijn
zichtbaar in het midden van het reactievenster onder de “C” en er zijn geen testlijnen zichtbaar
aan de “Ag”-kant of de “Tox”-kant van het reactievenster (afbeelding 1c). Een negatief resultaat in
het antigengedeelte geeft aan dat het C. difcile-antigen ofwel afwezig is in het monster of onder
de detectiegrens van de test ligt. Een negatief resultaat in het toxinegedeelte geeft aan dat het C.
difcile-toxine ofwel afwezig is in het monster of onder de detectiegrens van de test ligt.
6. Ongeldig resultaat: Er zijn geen lijnen zichtbaar in het reactievenster (afbeelding 1d). Het
testresultaat is ongeldig als er bij afronding van de reactieperiode geen blauwe stippellijn aanwezig
is onder de “C” (afbeeldingen 1e, 1f, 1g).
7. Negatief antigen (“Ag”), positief toxine (“Tox”): Een laag percentage van de monsters kan
negatief testen voor antigen maar positief voor toxine. Deze monsters moeten als onduidelijk
worden beschouwd en opnieuw worden getest met behulp van een vers monster (afbeelding 1h).
Als het monster bij de volgende test negatief is voor antigen maar positief voor toxine, meldt u een
positief toxineresultaat.
NL
59
Page 61
AFBEELDING 1: C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE® INTERPRETATIE VAN DE RESULTATEN
Afbeelding 1a
Positief antigenresultaat
Afbeelding 1d
Ongeldig resultaat
Afbeelding 1g
Ongeldig resultaat
KWALITEITSCONTROLE
Intern: Er moet een gestippelde blauwe lijn zichtbaar zijn in het midden van het reactievenster, onder de
“C” op elk membraaninstrument dat is getest. De verschijning van de blauwe controlestippen bevestigt
dat het monster en de reagentia correct werden toegevoegd, dat de reagentia actief waren op het tijdstip
waarop het assay werd uitgevoerd en dat het monster goed door het membraaninstrument migreerde.
Deze bevestigt ook de reactiviteit van de andere reagentia in verband met het assay. Een uniforme
achtergrond in het resultaatgedeelte wordt beschouwd als een interne negatieve controle. Als de test
correct werd uitgevoerd en de reagentia goed werken, zal de achtergrond wit zijn om een waarneembaar
resultaat te geven.
Extern: De reactiviteit van de C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE®-set moet na ontvangst met behulp
van de positieve controle en negatieve controle (verdunner) worden geverieerd. De positieve controle
wordt met de set meegeleverd (es met grijze dop). De positieve controle bevestigt de reactiviteit van
de andere reagentia in verband met het assay, en is niet bedoeld om de precisie op de scheidslijn van
het analytische assay te verzekeren. De verdunner wordt gebruikt voor de negatieve controle. Er kunnen
extra testen worden uitgevoerd met de controles om tegemoet te komen aan de eisen van plaatselijke,
nationale en/of federale regelgevingen en/of accrediterende organisaties.
Afbeelding 1b
Positief antigen
- en toxineresultaat
Afbeelding 1e
Ongeldig resultaat
Afbeelding 1h
Zie nr. 7 voor de interpretatie
Afbeelding 1c
Negatief resultaat
Afbeelding 1f
Ongeldig resultaat
BEPERKINGEN
1. De C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE®-test wordt gebruikt om C. difcile-antigen en toxine(n) te detecteren
in fecale monsters. De test bevestigt de aanwezigheid van toxine in feces en deze informatie moet door
de arts in overweging worden genomen in het licht van de klinische geschiedenis en het lichamelijke
onderzoek van de patiënt. De C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE®-test detecteert toxine A-niveaus ≥0,63
ng/mL, toxine B-niveaus ≥0,16 ng/mL en glutamaatdehydrogenase-niveaus ≥0,8 ng/mL.
2. Fecale monsters zijn buitengewoon complex. Optimale resultaten met de C. DIFF QUIK CHEK
COMPLETE®-test worden verkregen met monsters die minder dan 24 uur oud zijn. De meeste
onverdunde monsters kunnen 72 uur worden bewaard tussen 2 °C en 8 °C voordat er een
signicante afbraak van het toxine wordt bemerkt. Als monsters niet binnen deze periode worden
geanalyseerd, kunnen zij bevroren en ontdooid worden. Herhaaldelijk bevriezen en ontdooien kan
echter leiden tot verlies in de immunoreactiviteit van het antigen en toxine A en B.
3. Sommige monsters kunnen zwakke reacties geven. Dit kan te wijten zijn aan een aantal factoren
zoals de aanwezigheid van lage niveaus antigen en/of toxine, de aanwezigheid van bindende
stoffen, of inactiverende enzymen in de feces. De lijnen kunnen een zwakke tot donkere intensiteit
hebben. Deze monsters kunnen worden gerapporteerd als positief als er een blauwe lijn, zelfs een
gedeeltelijke lijn, wordt waargenomen. Een duidelijke gedeeltelijke blauwe lijn wordt als een positief
resultaat geïnterpreteerd.
4. Fecale monsters bewaard in 10% formaline, merthiolaatformaline, natriumacetaatformaline, of
polyvinylalcohol kunnen niet worden gebruikt.
5. De C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE®-test is kwalitatief. De intensiteit van de kleur mag niet
kwantitatief worden geïnterpreteerd.
6. Sommige isolaten van C. sordellii kunnen in de C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE®-test reageren
door de productie van immunologisch verwante toxinen (1).
7. Kolonisatiepercentages tot 50% zijn gemeld voor zuigelingen. Een hoog percentage werd ook
gemeld bij cystische-brosepatiënten (1,3). De resultaten kunnen in deze groepen positief lijken,
maar moeten worden gezien in combinatie met de mogelijkheid een gekolonialiseerde drager te zijn.
8. Het enige niet-C. difcile-organisme dat reageert op het toxinegedeelte van de C. DIFF QUIK CHEK
COMPLETE®-test was Clostridium sordellii VPI 9048. Deze stam produceert de toxinen HT en LT,
die homoloog zijn aan de toxinen A, respectievelijk B.
9. Er bestaan geen gegevens over de effecten van wassingen van de dikke darm, bariumklysma’s,
laxeermiddelen of darmpreparaten op de prestatie van de C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE®-test.
Al deze procedures kunnen leiden tot uitgebreide verdunning of aanwezigheid van additieven die de
testprestatie kunnen beïnvloeden.
VERWACHTE WAARDEN
Een Clostridium difcile-aandoening is primair een nosocomiale aandoening van oudere patiënten en de fre-
quentie van de aandoening is afhankelijk van factoren zoals patiëntenpopulatie, type instelling en epidemiologie.
De gerapporteerde incidentie van de C. difcile-aandoening bij patiënten met antibioticumgerelateerde diarree
kunnen lopen van 5 tot 20%, en ziekenhuizen kunnen percentages ervaren die lager of hoger zijn dan dit bereik.
Het is belangrijk eventuele testresultaten te beschouwen in combinatie met klinische verschijnselen, omdat
sommige gezonde volwassenen en grote aantallen gezonde zuigelingen (tot 50%) positief zijn voor het C. dif-
cile-toxine. Bovendien zijn voor C. difcile dragerpercentages van 22% tot 32% gerapporteerd bij cystische--
brosepatiënten (1,3). In de onderzoeken die voor dit instrument zijn uitgevoerd met symptomatische patiënten,
was de incidentie van de toxinen A en B 12% en GDH 18%. Een positief resultaat in het antigengedeelte van
de C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE®-test bevestigt de aanwezigheid van C. difcile in een fecaal monster; een
negatief resultaat duidt op de afwezigheid van het organisme. Een positief resultaat in het toxinegedeelte van de
C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE® bevestigt de aanwezigheid van het C. difcile-toxine in een fecaal monster;
een negatief resultaat duidt op de afwezigheid van toxine of te lage toxineniveaus voor detectie.
60
NL
Page 62
PRESTATIEKARAKTERISTIEKEN
Klinische evaluatie van het antigengedeelte van de C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE®-test
Het antigengedeelte van de C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE®-test werd vergeleken met bacteriekweek.
Monsters die zijn opgenomen in de evaluatie werden voor routinematig testen voorgelegd aan klinische
laboratoria. De bacteriekweektest werd uitgevoerd overeenkomstig de eigen laboratoriumprocedures. De
resultaten zijn weergegeven in Tabel 1.
Tabel 1. Samenvatting van de klinische prestatie van de C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE®-test
vergeleken met bacteriekweek
n = 1126
C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE
Antigenlijn positief
C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE
Antigenlijn negatief
Bacteriekweek
Positief
®
®
201 62
21 842
Bacteriekweek
Negatief
95% betrouwbaar-
heidsinterval
Gevoeligheid 90,5% 85,7 – 93,9
Speciciteit 93,1% 91,2 – 94,7
Voorspellende positieve waarde 76,4% 70,7 – 81,3
Voorspellende negatieve waarde 97,6% 96,2 – 98,4
Correlatie 92,6% 91,8 – 93,4
Tegenstrijdige monsters werden geëvalueerd met behulp van actuele ELISA-testen voor C.
difcile-glutamaatdehydrogenase.
Negenentwintig van de 62 fout-positieve monsters waren positief bij een andere GDH-test en
werden als echt-positief beschouwd.
Dertien van de 21 fout-negatieve monsters waren negatief bij een andere GDH-test en werden als
echt-negatief beschouwd.
Het antigengedeelte van de C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE®-test werd vergeleken met het weefselkweek-assay voor de detectie van C. difcile-toxine. Monsters die zijn opgenomen in de evaluatie werden
voor routinematig testen voorgelegd aan klinische laboratoria. De resultaten zijn weergegeven in Tabel 2.
Het antigengedeelte van de C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE®-test detecteerde 98,7% van de weefselkweek-positieve monsters.
Tabel 2. Samenvatting van klinische prestatie, vergelijking van de C. DIFF QUIK CHEK COM-
Klinische evaluatie van het toxinegedeelte van de C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE®-test
Het toxinegedeelte van de C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE®-test werd vergeleken met het weefselkweek-assay in twee klinische laboratoria en binnen het bedrijf TECHLAB, Inc. Monsters die zijn
opgenomen in de evaluatie werden voor routinematig testen voorgelegd aan de klinische laboratoria. De
resultaten zijn weergegeven in Tabel 3.
Tabel 3. Samenvatting van de klinische prestatie, vergelijking van de C. DIFF QUIK CHEK
PLETE®-test met het weefselkweek-assay
n = 1126
C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE
Antigenlijn positief
C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE
Antigenlijn negatief
COMPLETE®-test met weefselkweek-assay
n = 1126
C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE
Toxinelijn positief
C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE
Toxinelijn negatief
Weefselkweek
Positief
®
®
®
®
154 109
2 861
Weefselkweek
Positief
137 6
19 964
Weefselkweek
Negatief
Weefselkweek
Negatief
95% betrouwbaar-
heidsinterval
Gevoeligheid 87,8% 81,4 - 92,3
Speciciteit 99,4% 98,6 - 99,7
Voorspellende positieve waarde 95,8% 90,7 - 98,3
Voorspellende negatieve waarde 98,1% 96,9 - 98,8
Correlatie 97,8% 97,6 - 98,0
Tegenstrijdige monsters werden geëvalueerd met behulp van actuele ELISA-testen voor toxine
A en B.
Vijf van de 6 fout-positieve monsters waren positief bij ELISA en werden als
echt positief beschouwd.
Twaalf van de 19 fout-negatieve monsters waren negatief bij ELISA en werden als echt-negatief
beschouwd.
NL
61
Page 63
EFFECT VAN FECALE MONSTERCONSISTENTIE
Effect van de fecale monsterconsistentie op de C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE®-test
De reactie van fecale monsters van variërende consistentie in het antigengedeelte (n=978) en toxinegedeelte (n=981) van de C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE®-test wordt weergegeven in de tabellen 4 en 5.
De percentages positieve reacties met behulp van ofwel een kweek-assay of de C. DIFF QUIK CHEK
COMPLETE®-test waren gelijksoortig bij alle drie typen fecale monsters (vloeibaar, halfvast en vast).
Alle monsters werden voorgelegd voor C. difcile-testen. De basis van de voorlegging was de klinische
geschiedenis van de patiënt en niet de consistentie van het monster. In het antigengedeelte laten de resultaten zien dat de C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE®-test gelijksoortig presteerde als de bacteriekweek
toen er monsters van verschillende consistentie werden getest. In het toxinegedeelte laten de resultaten
zien dat de C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE®-test gelijksoortig presteerde als het weefselkweek-assay
toen er monsters van verschillende consistentie werden getest.
Tabel 4. Reactie van fecale monsters van variërende consistentie in het antigen-
Tabel 5. Reactie van fecale monsters van variërende consistentie in het toxinegedeelte van de
gedeelte van de C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE®-test
Aantal monsters
(n = 978)
Positief bij bacteriekweekassay
C. DIFF QUIK CHEK
COMPLETE
Antigenlijn positief
Negatief bij bacteriekweek-
assay
C. DIFF QUIK CHEK
COMPLETE
Antigenlijn negatief
Positief bij weefselkweekassay
C. DIFF QUIK CHEK
COMPLETE
Toxinelijn positief
Negatief bij weefselkweek-
assay
C. DIFF QUIK CHEK
COMPLETE
Toxinelijn negatief
®
®
C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE®-test
Aantal monsters
(n = 981)
®
®
Vloeibare monsters
(n = 335)
59 (17,6%) 110 (21,1%) 19 (15,7%)
72 (21,5%) 128 (24,5%) 25 (20,7%)
276 (82,4%) 412 (78,9%) 102 (84,3%)
263 (78,5%) 394 (75,5%) 96 (79,3%)
Vloeibare monsters
(n = 336)
43 (12,8%) 81 (15,5%) 8 (6,6%)
42 (12,5%) 72 (13,8%) 7 (5,7%)
293 (87,2%) 442 (84,5%) 114 (93,4%)
294 (87,5%) 451 (86,2%) 115 (94,3%)
Halfvaste
monsters (n = 522)
Halfvaste
monsters (n = 523)
Vaste monsters
(n = 121)
Vaste monsters
(n = 122)
ANALYTISCHE GEVOELIGHEID
De scheidslijn voor het assay werd vastgesteld op concentraties van 0,63 ng/mL voor toxine A, 0,
16 ng/mL voor toxine B en 0,8 ng/mL voor glutamaatdehydrogenase.
REPRODUCEERBAARHEID
De reproduceerbaarheid van de C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE®-test werd bepaald met behulp van
12 fecale monsters die werden gecodeerd om hun identicatie tijdens het testen te voorkomen. De
testen werden uitgevoerd in 3 onafhankelijk laboratoria, die de monsters 3 dagen testten. De monsters
produceerden 100% van de tijd de verwachte resultaten.
KRUISREACTIVITEIT
Fecale monsters geïnoculeerd met de volgende micro-organismen tot een uiteindelijke concentratie van
ongeveer 108 of meer organismen per mL reageerden niet in het antigen- of toxinegedeelte van de C.
DIFF QUIK CHEK COMPLETE®-test:
Bacterie of ziektekiem: Aeromonas hydrophila, Bacillus cereus, Bacillus subtilis, Bacteroides fragilis,
Campylobacter coli, Campylobacter fetus, Campylobacter jejuni, Candida albicans, Clostridium butyricum, Clostridium clostridiforme, Clostridium haemolyticum, Clostridium histolyticum, Clostridium novyi,
Clostridium perfringens, Clostridium septicum, Clostridium sordellii (niet-toxigeen), Clostridium sporogenes, Enterobacter aerogenes, Enterobacter cloacae, Enterococcus faecalis, Escherichia coli EIEC, Escherichia coli, Escherichia coli O157:H7, Escherichia coli ETEC, Klebsiella pneumoniae, Peptostreptococcus
anaerobius, Proteus vulgaris, Pseudomonas aeruginosa, Salmonella typhimurium, Serratia liquifaciens,
Shigella dysenteriae, Shigella exneri, Shigella sonnei, Staphylococcus aureus, Staphylococcus aureus
(Cowans), Staphylococcus epidermidis, Vibrio cholerae, Vibrio parahaemolyticus, Yersinia enterocolitica
Het enige niet-C. difcile-organisme dat in het toxinegedeelte van de C. DIFF QUIK CHEK COMPLE-
TE®-test reageerde, was Clostridium sordellii VPI 9048. Deze stam produceert de toxinen HT en LT, die
homoloog zijn aan toxine A, respectievelijk B.
De volgende virussen van 10
CHEK COMPLETE®-test:
Virussen: Adenovirus types 1, 2, 3, 5, 40, 41, Human coronavirus, Coxsackievirus B2, B3, B4, B5, Echovirus 9, 11, 18, 22, 33, Enterovirus type 68, 69, 70, 71, Rotavirus.
INTERFERERENDE STOFFEN
De volgende stoffen (VS-formulering) hadden geen effect op de testresultaten wanneer ze in de aangegeven concentraties in feces aanwezig waren: mucine (3,5% g/v), menselijk bloed (40% v/v), bariumsulfaat
(5% g/v), Imodium® (5% v/v), Kaopectaat® (5% v/v), Peptobismol® (5% v/v), stearine-/palmitinezuur (40%
g/v), metronidazol (0,25% g/v), vancomycine (0,25%g/v).
3,3
8,25
tot 10
TCID- eenheden per 0,2 mL reageerden niet in de C. DIFF QUIK
REACTIE VAN KLINISCHE ISOLATEN VERKREGEN OP CYCLOSERINECEFOXITIN-FRUCTOSE AGAR (CCFA)
In totaal 103 klinische isolaten van C. difcile, verkregen uit anaerobe bacteriekweek op CCFA na 3 dagen
bij 37 °C, werden getest in de C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE®-test. Voor de analyse werden individuele
kolonies opgepikt en gesuspendeerd in verdunner, zoals aanbevolen voor fecale monsters. Alle 103 isolaten gaven in de test een positieve antigenreactie.
Zeventig van de 103 isolaten (68%) kwamen uit fecale monsters die positief waren voor C. difcile-toxine
bij weefselkweek-assay. Daarvan gaven er 56 (80%) een positieve toxinereactie bij screening na anaerobe groei op CCFA gedurende 3 dagen bij 37 °C.
62
NL
Page 64
TECHLAB® C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE
G
BRUKSOMRǺDE
TECHLAB® C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE® test er en hurtig membranenzymimmunanalyse for
samtidig påvisning av Clostridium difcile glutamatdehydrogenase-antigen og toksin A og B i en enkelt
reaksjonsbrønn. Testen påviser C. difcile-antigen, glutamatdehydrogenase, som en screening for tilstedeværelsen av C. difcile og bekrefter tilstedeværelsen av toksigent C. difcile gjennom å påise toksin
A og B i avføringsprøver fra personer som mistenkes å ha C. difcile-sykdom. Testen indiseres for bruk
som et hjelpemiddel til diagnostiseringen av C. difcile-sykdom. Som med andre C. difcile-tester, skal
resultatene vurderes i sammenheng med pasientens historikk.
FORKLARING
Etter behandling med antibiotika utvikler mange pasienter gastrointestinale problemer som strekker seg
fra mild diaré til alvorlig pseudomembranøs kolitt. Mange tilfeller av de mildere formene for gastrointestinal
sykdom og de este tilfeller av pseudomembranøs kolitt forårsakes av toksigene stammer av Clostridium
difcile (1). Denne organismen er en opportunistisk anerob bakterie som vokser i tarmen når den normale
oraen har blitt endret av antibiotika. Toksigene stammer av C. difcile bærer genene som koder toksinene,
mens de ikke-toksigene stammene ikke bærer toksingenene. Sykdomsbegynnelsen er assosiert med toksinene som produseres av den toksigene organismen. De kliniske symptomene som er tilknyttet sykdommen
menes å være primære på grunn av toksin A, som er et vevskadende enterotoksin (2,3). C. difcile
produserer også et andre toksin, beskrevet som toksin B. Toksin B, som har blitt henvist til som cytotoksin
i organismen, er det toksinet som påvises av vevkulturanalysen som aktuelt brukes av mange laboratorier.
Toksigene C. difcile-stammer produserer begge toksiner, eller kun toksin B (4-7). Glutamatdehydrogena-
sen til C. difcile er en bra antigenmarkør for organismen i avføring, da den produseres i store mengder av
alle stammer, toksigene eller ikke-toksigene (8-10). Antigenet kan påvises i avføringsprøver ved bruk av C.
DIFF QUIK CHEK COMPLETE®-testen. Et positivt resultat i testen for glutamatdehydrogenase for C. difcile
bekrefter tilstedeværelsen av denne organismen i avføringsprøver; et negativt resultat indikerer fraværet av
organismen. Et positivt resultat i testen for toksin A og B bekrefter tilstedeværelsen av toksigen C. difcile.
PRINSIPPET FOR TESTEN
C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE®-testen bruker antistoffer som er spesikke for glutamatdehydrogena-
se og toksin A og B for C. difcile. Enheten inneholder et reaksjonsvindu med tre vertikale linjer med
immobiliserte antistoffer. Antigentestlinjen (”Ag”) inneholder antistoffer mot C. difcile glutamatdehydrogenase. Kontrollinjen (”C”) er en prikket linje som inneholder anti-pepperrotperoksidase-antistoffer
(HRP). Toksin A- og B-testlinjen (”Tox”) inneholder antistoffer mot C. difcile-toksin A og B. Konjugatet
består av antistoffer for glutamatdehydrogenase og antistoffer for toksin A og B koblet til pepperrotperoksidase. For å utføre testen legges prøven til et rør som inneholder en blanding av diluent og
konjugat. Den fortynnede prøve-konjugat-blandingen tilsettes prøvebrønnen, og enheten inkuberes ved
romtemperatur i 15 minutter. I løpet av inkuberingen bindes eventuell glutamatdehydrogenase og toksin
A og B i prøven til antistoff-peroksidasekonjugatene. Antigen-antistoff-konjugat-kompleksene migrerer
gjennom en lterpute til en membran der de tas opp av immobiliserte glutamatdehydrogenasespesikke
og toksin A- og B-spesikke antistoffer i linjene. Reaksjonsvinduet vaskes deretter med vaskebuffer, etterfulgt av tilsetningen av substrat. Etter en 10 minutters inkuberingsperiode undersøkes ”Ag”-reaksjonen visuelt for forekomst av en vertikal blå linje på ”Ag”-siden av reaksjonsvinduet. En blå linje indikerer
en positiv test. Hvis ”Ag” er positiv, skal ”Tox”-reaksjonen undersøkes visuelt for forekomsten av en blå
linje på ”Tox”-siden av reaksjonsvinduet. En blå linje indikerer en positiv test. En positiv ”C”-reaksjon
som indikeres av en vertikal stiplet blå linje under ”C”-delen av reaksjonsvinduet, bekrefter at testen
fungerer riktig og at resultatene er gyldige.
®
MEDFØLGENDE MATERIALER
Membranenheter – hver lomme inneholder 1 enhet
DEV
Diluent (22 ml pr. aske) – Bufret proteinløsning med gradert
dråpetellerenhet (Inneholder 0,05 % ProClin® 300)*
H412: Skadelig, med langtidsvirkning, for liv i vann
Vaskebuffer (12 ml pr. aske) – Bufret løsning med gradert
REA
WASH
Engangsoverføringspipetter i plast – gradert ved 25 µL, 100 µL, 200 µL, 300 µL, 400 µL og 500 µL
IVD
*Signalord: Advarsel
H317: Kan fremkalle en allergisk reaksjon.
P261, P272, P280, P302, P352, P333, P313, P321, P362, P364, P501
NØDVENDIGE MATERIALER OG UTSTYR SOM IKKE MEDFØLGER
Små testrør (f.eks. mikrosentrifugerør i plast eller glassrør)”
Applikatorpinner Timer Vorteksblander
Engangshansker for håndtering av avføringsprøver Pipette og spisser
LEVETID OG OPPBEVARING
Utløpsdatoen for settet er angitt på etiketten og er tildelt 24 måneder fra produksjonsdatoen. Utløpsdatoer
for hver komponent er angitt på de enkelte etikettene. Settet bør oppbevares mellom 2 °C og 8 °C. Settet
og alle komponentene forblir stabile i de angitte utløpsdatoene etter første åpning når de oppbevares
mellom 2 °C og 8 °C. La alle komponentene oppnå romtemperatur før bruk. Settet vil forbli stabilt ved
romtemperatur i påfølgende 8 timers arbeidsskift dersom det returneres til kjølelager mellom skift.
FORSIKTIGHETSREGLER
1. Til in vitro-diagnostisk bruk. Kun til profesjonell bruk.
2. Reagenser fra ulike kit skal ikke blandes eller veksles med hverandre. Kitet må ikke brukes etter
3. Hver komponent i kitet skal inspiseres for tegn på lekkasje. Ved ankomst, inspiser kitet for å garantere
4. Hetter, spisser og dråpetellerenheter er fargekodet; de må IKKE blandes eller veksles med hverandre!
5. Reagensene skal ikke fryses. Kitet skal oppbevares mellom 2 °C og 8 °C.
6. Posen som inneholder membranenheten skal være ved romtemperatur før åpning. Hold
dråpetellerenhet (Inneholder 0,05 % ProClin® 300)*
H412: Skadelig, med langtidsvirkning, for liv i vann
Substrat (3,5 ml pr. aske) – Løsning som inneholder tetrametylbenzidin
REAGSUBS
Konjugat (2,5 ml pr. aske) – Antistoff som er spesikt for glutamatdehydrogenase
ENZCONJ
som er bundet til pepperrotperoksidase og antistoffer som er spesikke for
toksin A og B som er bundet til pepperrotperoksidase i en bufret proteinløsning
(inneholder 0,05 % ProClin® 300)*
Positiv kontroll (2 ml) – Antigen i en bufret proteinløsning
Til in vitro-diagnostisk bruk
utløpsdatoen.
at komponentene ikke er frosne eller varme å berøre på grunn av feil forsendelsesbetingelser.
membranenhetene tørre før bruk.
NO
63
Page 65
7. Bruk avføringsprøver innen 72 timer etter taking for å oppnå optimale resultater. Prøver som er
25 μL100 μL200 μL300 μL400 μL500 μL
frosne kan miste aktivitet på grunn av frysing og opptining. Ved bruk av frosne prøver, tin opp ved
romtemperatur.
8. Hold reagensaskene vertikalt for å dispensere reagensene for å sikre konsekvent dråpestørresle
og riktig volum.
9. Prøver og membranenheter skal håndteres og bortskaffes som potensielt biologisk farlige elementer
etter bruk.
10. Membranenheten kan ikke brukes på nytt.
11. Testen har blitt optimalisert for sensitivitet og spesisitet. Endringer av den spesiserte prosedyren
og/eller testbetingelsene kan påvirke sensitiviteten og spesisiteten til testen. Ikke avvik fra den
spesiserte prosedyren.
12. Vær oppmerksom på den totale analysetiden ved testing av mer enn én avføringsprøve. Tilsett
først diluent, og tilsett deretter konjugat til hvert rør med diluent. Tilsett deretter prøve til røret med
diluent/konjugat. Bland grundig alle de fortynnede prøvene og overfør til membranenheten. Det
15-minutters inkubasjonstrinnet begynne etter at den siste fortynnede prøve-konjugatblandingen
har blitt overført til den endelige membranenheten.
13. Hvis substratreagensen endres til en mørk blå/olett farge, ring tekniske tjenester for utskiftning.
14. Avføringsprøver kan inneholde potensielt smittefarlige stoffer og skal håndteres ved ”biologisk
sikkehetsnivå 2” som anbefalt i CDC/NIH-håndboken ”Biologisk sikkerhet i mikrobiologiske og
biomedisinske laboratorier”.
15. Bruk engangshansker ved utføring av testen.
16. Konjugat-, fortynningsmiddel- og vaskebuffer-reagentene inneholder 0,05 % ProClin® 300 som
konserveringsmiddel. Selv om konsentrasjonen er lav, er det kjent at ProClin® 300 er skadelig
(hudsensitisering kan forekomme). Hvis det oppstår sensitisering/irritasjon eller utslett, oppsøk lege.
Ta av kontaminerte klær, og vask dem før du bruker dem igjen. Håndter reagensene i henhold til
eksisterende bestemmelser for laboratoriesikkerhet og god laboratoriepraksis. Sikkerhetsdataark for
dette produktet fås på forespørsel. Kontakt avdelingen for teknisk støtte.
17. Følg nasjonale, regionale og lokale bestemmelser for avfallshåndtering.
18. Rapporter eventuelle alvorlige hendelser til TECHLAB og kompetent myndighet på EØSmedlemsstaten der brukeren og/eller pasienten benner seg.
TAKING, HÅNDTERING OG OPPBEVARING AV AVFØRINGSPRØVER
Akseptable prøvetyper Må ikke brukes
Ferske avføringsprøver
Frosne avføringsprøver
Prøver i transportmedier (Cary Blair, C&S)
Oppbevaring av
prøver Temperatur
Akseptabel
oppbevaringslengde
2 °C – 8 °C 72 timer Ideelle prøver er mindre enn 24 timer gamle
Frosne ≤ -10 °C Lengre enn 72timer
64
Avføringsprøver i formalinbasert ksativ (f.eks.
natriumacetatformalin, 10 % formalin, mertiolatformalin)
Avføringsprøver i alkoholbasert ksativ (f.eks.
polyvinylalkohol)
Kommentarer
Tin opp ved romtemperatur. Frysing og tining ere
ganger kan føre til prøvetapsaktivitet på grunn av
toksindegradering.
NO
1. Standard prøvetakings- og håndteringsprosedyrer som brukes internt for avføringsprøver er passende.
2. Avføringsprøver skal tas i rene, lekkasjebestandige beholdere.
3. Oppbevaring av avføringsprøver i diluenten anbefales IKKE.
4. Ikke la avføringsprøvene forbli i diluent/konjugat-blandingen i > 24 timer.
PRØVEFORBEREDELSE
1. Bring alle reagensene og det nødvendige antallet enheter til romtemperatur før bruk. Det anbefales
å fjerne reagensene fra skuminnsatsen for å redusere tiden som er nødvendig for å varme opp til
romtemperatur.
2. Sett opp og merk ett lite testrør for hver prøve, samt alternative eksterne kontroller etter behov.
3. Ved bruk av den svarte graderte dråpetellerenheten tilsett 750 µl (2. gradering fra spissen) diluenten
til hvert rør for avføringsprøver. For prøver i transportmedier, slik som Cary Blair eller C&S, tilsett
650 µl (1. gradering fra spissen) diluent til røret.
Prøvetype Diluentvolum
Ferske avføringsprøver 750 µl (2. gradering fra spissen)
Frosne avføringsprøver (frosne
ufortynnet)
Prøver i transportmedier (Cary Blair,
C&S)
Eksterne kontroller (positive og
negative)
4. Tilsett én dråpe konjugat (aske med rødt lokk) til hvert rør.
5. Få én kasserbar plastoverføringspipette (forsynt med settet) for hver prøve – pipettene har økt
graderinger ved 25 µL, 100 µL, 200 µL, 300 µL, 400 µL og 500 µL.
750 µl (2. gradering fra spissen)
650 µl (1. gradering fra spissen)
750 µl (2. gradering fra spissen)
750
650
µL
Gradert overføringspipette:
6. Bland alle prøvene grundig uansett konsistens – det er avgjørende at prøvene suspenderes
jevnt før overføring.
Flytende/halvfaste prøver – pipetter 25 µl prøve med overføringspipette og dispenser til diluent/
konjugat-blandingen. Bruk den samme overføringspipetten til å blande den fortynnede prøven.
Formede/faste prøver – Det må utvises forsiktighet for å ta riktig mengde formet avføring til
prøveblandingen. Bland prøven grundig ved bruk av en treapplikatorpinne og overfør en liten del
(omtrent 2 mm diameter, tilsvarende 25 µl) av prøven til diluent/konjugat-blandingen. Emulger
prøven ved bruk av applikatorpinnen.
Avføringsprøver i Cary Blair elle C&S transportmedier - pipetter 100 µl (2. gradering fra spissen av
overføringspipetten) prøver i diluent/konjugat-blandingen.
7. Alternative eksterne kontrollprøver:
Ekstern positiv kontroll - tilsett én dråpe positiv kontroll (aske med grått lokk) i diluent/konjugat-
blandingen.
Ekstern negativ kontroll - tilsett 25 μl diluent i diluent/konjugat-blandingen.
Page 66
MERK: Overføring av for lite prøve eller ufullstendig blanding og suspendering av prøven i diluent(konjugat-blandingen kan føre til et falskt negativt testresultat. Tilsetningen av for mye avføringsprøve kan
forårsake ugyldige resultater på grunn av begrenset prøveyt.
TESTPROSEDYRE
1. Få én membranenhet pr. prøve og én enhet pr. alternativ ekstern positiv eller negativ kontroll etter
behov. Folieposene som inneholder enhetene skal bringes til romtemperatur før de åpnes. Bruk
enheten umiddelbart etter åpning. Merk hver enhet tilstrekkelig og orienter den på en at overate
slik at ”C. DIFF COMPLETE”-påskriften er på bunnen av enhete og den lille prøvebrønnen benner
seg øverst i høyre hjørne av enheten.
Membranenhet Prøvebrønn
Reaksjonsvindu
2. Lukk hvert rør med fortynnet prøve og bland grundig. Riktig blanding kan kun oppnås gjennom å
utføre vorteks eller ved å vende røret. Når en pasientprøve eller en positiv kontroll har blitt fortynnet
i diluent/konjugat-blandingen, kan den inkuberes ved romtemperatur i hvilken som helst tidsperiode
på opptil 24 timer før tilsetning av membranenheten.
3. Bruk en ny overføringspipette, overfør 500 µl av den fortynnede prøve-konjugat-blandingen til
prøvebrønnen (mindre hull i øverste høyre hjørne i enheten) til en membranenhet, og se til at de
ytende prøven utstøtes på viklingsputen på innsiden av membranenheten. Ved lasting av prøven
i prøvebrønnen se til at spissen på overføringspipetten er vinklet mot reaksjonsvinduet (større hull
i midten av enheten). .
4. Inkuber enheten ved romtemperatur i 15 minutter – prøven vil vikles gjennom enheten, og et vått
område vil spres over reaksjonsvinduet.
MERKNAD FOR PRØVER SOM IKKE MIGRERER:
Noen ganger kan en fortynnet prøve ikke migrere riktig, og reaksjonsvinduet blir ikke helt vått.
Hvis reaksjonsvinduet ikke ser ut til å være helt vått innen 5 minutter etter tilsetning av prøven til
prøvebønnen, tilsett 100 µl (4 dråper) diluent til prøvebrønnen og vent i ytterligere 5 minutter
(i totalt 20 minutter).
5. Etter inkuberingen tilsett 300 μl vaskebuffer til reaksjonsvinduet ved bruk av den graderte hvite
dråpetellerenheten. La vaskebufferen yte gjennom reaksjonsvinduets membran og absorberes
fullstendig.
6. Tilsett 2 dråper substrat (aske med hvitt lokk) til reaksjonsvinduet. Avles og registrer resultatene
visuelt etter 10 minutter.
TOLKNING AV RESULTATER
1. Tolkning av testen er mest pålitelig når enheten avleses rett etter utløpet av den 10 minutters
reaksjonsperioden. Avles enheten ved en normal arbeidsavstand i et godt belyst område. Se med
en synslinje som er rett over enheten.
2. Observer enheten for forekomst av blå prikker i midten av reaksjonsvinduet, hvilket representerer den
interne positive kontrollen. Forekomsten av eventuell kontrollprikk(er) representerer en gyldig intern
kontroll. Bakgrunnen kan se ut til å være hvit til lyseblå i fargen. Observer enheten for forekomst av blå
linjer på ”Ag”- og ”Tox”-sidene av reaksjonsvinduet, hvilket representerer testlinjene. Linjene kan vises
svake til mørke i intensitet.
3. Positivt antigenresultat (”Ag”): Et positivt antigenresultat kan tolkes når som mellom tilsetningen
av substratet og den 10-minutters avlesingstiden. For et positivt antigenresultat er den blå ”Ag”linjen og den stiplede blå kontrolllinjen nedenfor ”C” er synlig (gur 1a). Linjene kan vises svake til
mørke i intensitet. En tydelig delvis linje tolkes som et positivt resultat. Ikke tolk membranmisfarging
som et positivt resultat. Et positivt resultat indikerer tilstedeværelsen av C. difcile.
4. Positivt antigen- og toksinresultat (”Tox”): Hvis antigenresultatet er positivt (dvs. en blå ”Ag”-
linje og en stiplet blå kontrollinje under ”C” er synlig), fortsett til tolkningen av toksinresultatet. Et
positivt toksinresultat kan tolkes når som mellom tilsetningen av substratet og den 10-minutters
avlesingstiden. For et positivt toksinresultat nnes en synlig blå ”Tox”-linje (gur 1b). Linjen kan
vises svake til mørke i intensitet. En tydelig delvis linje tolkes som et positivt resultat. Ikke tolk
membranmisfarging som et positivt resultat. Et positivt resultat indikerer tilstedeværelsen av
C. difcile-toksin.
5. Negativt resultat: En test kan ikke tolkes som negativ eller ugyldig inntil 10 minutter etter tilsetning
av substratet. En enkelt blå stiplet linje er synlig i midten av reaksjonsvinduet, under ”C”, og ingen
testlinjer er synlige på ”Ag”-siden eller ”Tox”-siden av reaksjonsvinduet (gur 1c). Et negativt resultat
i antigendelen indikerer at C. difcile-antigenet enten er fraværende i prøven eller at det er under
påvisningsgrensen til testen. Et negativt resultat i toksindelen indikerer at C. difcile-toksinet enten
er fraværende i prøven eller at det er under påvisningsgrensen til testen.
6. Ugyldig resultat: Ingen linjer er synlige i reaksjonsvinduet (gur 1d). Testresultatet er ugyldig hvis en
blåstiplet linje ikke er til stede under ”C” ved fullføring av reaksjonsperioden (gur 1e, 1f, 1g).
7. Negativt antigen (”Ag”), positivt toksin (”Tox”): En lav prosentandel prøve kan teste negativt for
antigen, men positivt for toksin. Disse prøvene skal anses som ubestemmelige og testes på nytt ved
bruk av en fersk prøve (gur 1h). Hvis prøven igjen tester negativt for antigen, men positivt for toksin,
rapporter som positivt toksinresultat.
FIGUR 1: C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE® TOLKNING AV RESULTATER
Figur 1a
Positivt antigenresultat
Figur 1d
Ugyldig resultat
NO
Figur 1b
Positivt antigen
- og toksinresultat
Figur 1e
Ugyldig resultat
Figur 1c
Negativt resultat
Figur 1f
Ugyldig resultat
65
Page 67
Figur 1g
Ugyldig resultat
KVALITETSKONTROLL
Internt: En stiplet blå linje må være synlig i midten av reaksjonsvinduet, under ”C” på hver membranen-
het som testes. Forekomsten av de blå kontrollprikkene bekrefter at prøven og reagensene ble riktig
tilsatt, at reagensene var aktive på tidspunktet for utføring av analysen og at prøven migrerte riktig
gjennom membranenheten. Det bekrefter også reaktiviteten til de andre reagensene som er tilknyttet
analysen. En uniform bakgrunn i resultatområdet anses som en intern negativ kontroll. Hvis testen har
blitt utført riktig, og reagensene fungerer riktig, vil bakgrunnen være hvit for å gi et tydelig resultat.
Eksternt: Reaktiviteten til C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE®-kitet skal veriseres ved mottak ved bruk
av den positive kontrollen og den negative kontrollen (diluent). Den positive kontrollen leveres med kitet
(aske med grått lokk). Den positive kontrollen bekrefter reaktiviteten til de andre reagensene som er
tilknyttet analysen, og er ikke beregnet til å garantere presisjon ved analytisk analyse-cut-off. Diluenten
brukes til den negative kontrollen. Flere tester kan utføres med kontrollene for å oppfylle kravene i lokale,
statlige og/eller nasjonale forskrifter og/eller akkrediteringsorganisasjoner.
BEGRENSNINGER
1. C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE®-testen brukes til å påvise C. difcile-antigen og toksin(er) i
avføringsprøver. Testen bekrefter tilstedeværelse av toksin i avføring, og denne informasjonen skal
tas i vurdering av legen i lys av den kliniske historikken og den fysiske undersøkelsen av pasienten.
C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE®-testen vil påvise nivåer av toksin A ved ≥ 0,63 ng/ml, toksin B ved
≥ 0,16 ng/ml og glutamatdehydrogenase ved ≥ 0,8 ng/ml.
2. Avføringsprøver er ekstremt komplekse. Optimale resultater med C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE®-
testen oppnås med prøvene som er mindre enn 24 timer gamle. De este ufortynnede prøvene kan
oppbevares mellom 2 °C og 8 °C i 72 timer før det merkes betydelig forringelse av toksinet. Hvis
prøvene ikke analyseres innenfor denne tidsperioden, kan de fryses og tines opp. Men gjentatt frysing
og tining kan imidlertid føre til tap av immunreaktiviteten til antigen og toksin A og B.
3. Noen prøber kan gi svake reaksjoner. Dette kan skyldes ere faktorer, slik som tilstedeværelse av lave
nivåer av antigen og/eller toksin, tilstedeværelsen av bindende stoffer eller inaktiverende enzymer i
avføringen. Linjene kan vises svake til mørke i intensitet. Disse prøvene skal rapporteres som positive
hvis noen blå linje, selv en delvis linje, er synlig. En tydelig delvis blå linje tolkes som et positivt resultat.
4. Avføringsprøver konserveres i 10 % formalin, mertiolatformalin, natriumacetatformalin eller
polyvinylalkohol kan ikke brukes.
5. C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE®-testen er kvalitativ. Intensiteten til fargen skal ikke tolkes kvantitativt.
6. Noen isolater av C. sordellii kan reagere i C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE®-testen på grunn av
produksjonen av immunologisk relaterte toksiner (1).
7. Koloniseringshastigheter på opptil 50 % har blitt rapportert hos spedbarn. En høy hastighet har også
blitt rapportert hos cystisk brosepasienter (1,3). Resultatene kan se positive ut i disse gruppene, men
skal ses i sammenheng med potensialet for å være en kolonisert bærer.
8. Den eneste ikke-C. difcile-organismen som reagerer i toksindelen av C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE®-
testen var Clostridium sordellii VPI 9048. Denne stammen produserer toksin HT og LT, som er homologe
for respektivt toksin A og B.
66
Figur 1h
Se nr. 7 for tolkning
NO
9. Det nnes ingen data om virkningene av skyllinger, bariumklyster, laksativer eller tarmklargjøringer på
ytelsen til C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE®-testen. Alle disse prosedyrene kan føre til omfattende
fortynning eller tilstedeværelse av tilsetningsmidler som kan påvirke testytelsen.
FORVENTEDE VERDIER
Clostridium difcile-sykdommen er primært en nosocomial sykdom hos eldre pasienter, og frekvensen til
sykdommen avhenger av faktorer slik som pasientpopulasjon, type institusjon og epidemiologi. Den rapporterte
forekomsten av C. difcile-sykdom hos pasienter med antibiotika-assosiert diaré kan strekke seg fra 5 til 20
%, og sykehusene kan oppleve rater som er lavere eller høyere enn dette området. Det er viktig å vurdere alle
testresultater i sammenheng med kliniske symptomer fordi noen friske voksne og store antall friske spedbarn
(opptil 50 %) vil være positive for C. difcile-toksin. I tillegg har C. difcile-bæringsrater på 22 % til 32 % blitt
rapportet i cystisk brose-pasienter (1,3). I studiene som ble gjennomført for denne enheten, ved bruk av symptomatiske pasienter, var forekomsten av toksin A og B 12 %, og GDH var 18 %. Et positivt resultat i antigendelen av C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE®-testen bekrefter tilstedeværelsen av C. difcile i en avføringsprøve;
et negativt resultat indikerer fraværet av organismen. Et positivt resultat i toksindelen av C. DIFF QUIK CHEK
COMPLETE® bekrefter tilstedeværelsen av C. difcile-toksin i en avføringsprøve; et negativt resultat indikerer
fraværet av toksinet eller tilstrekkelige nivåer av toksin for påvisning.
YTELSESKARAKTERISTIKKER
Klinisk evaluering av antigendelen av C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE®-testen
Antigendelen av C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE®-testen ble sammenlignet med bakteriell kultur. Prøver
som er inkludert i evalueringen ble innlevert til kliniske laboratorier for rutinemessig testing. Bakteriekulturtesten ble utført i henhold til interne prosedyrer. Resultatene vises i tabell1.
Tabell 1. Sammendrag av klinisk ytelse som sammenligner C. DIFF QUIK CHEK COMPLE-
C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE
Antigenlinje positiv
C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE
Antigenlinje negativ
Sensitivitet 90,5% 85,7 – 93,9
Spesisitet 93,1% 91,2 – 94,7
Prediktiv positiv verdi 76,4% 70,7 – 81,3
Prediktiv negativ verdi 97,6% 96,2 – 98,4
Korrelasjon 92,6% 91,8 – 93,4
TE®-testen med bakteriell kultur.
n = 1126
®
®
Uoverensstemmende prøver ble evaluert ved bruk av aktuelle ELISA-tester for C. difcile glutamatdehydrogenase.
29 av de 62 falske positive prøvene var positive med en annen GDH-test og ble ansett som ekte
positive.
Bakteriell kultur
Positiv
201 62
21 842
Bakteriell kultur
Negativ
95% kondensgrenser
Page 68
13 av de 21 falske negative prøvene var negative med en annen GDH-test og ble ansett som ekte
negative.
Antigendelen av C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE®-testen ble sammenlignet med vevkulturanalysen
for påvisning av C. difcile-toksinet. Prøver som er inkludert i evalueringen ble innlevert til kliniske
laboratorier for rutinemessig testing. Resultatene vises i tabell 2. Antigendelen av C. DIFF QUIK CHEK
COMPLETE®-testen påviste 98,7 % av de vevskultur-positive prøvene.
Tabell 2. Sammendrag av klinisk ytelse som sammenligner C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE®-
C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE
Antigenlinje positiv
C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE
Antigenlinje negativ
Klinisk evaluering av toksindelen av C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE®-testen
Toksindelen av C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE®-testen ble sammenlignet med vevskulturanalysen
ved to kliniske laboratorier og internt hos TECHLAB, Inc. Prøvene som var inkludert i evalueringen, ble
innlevert til de kliniske laboratoriene for rutinemessig testing. Resultatene vises i tabell 3.
Tabell 3. Sammendrag av klinisk ytelse som sammenligner C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE®-
C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE
Toksinlinje positiv
C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE
Toksinlinje negativ
testen med vevskulturanalysen.
n = 1126
®
®
testen med vevskulturanalysen.
n = 1126
®
®
Vevskultur
Positiv
154 109
2 861
Vevskultur
Positiv
137 6
19 964
Vevskultur
Negativ
Vevskultur
Negativ
95% kondensgrenser
Sensitivitet 87,8% 81,4 - 92,3
Spesisitet 99,4% 98,6 - 99,7
Prediktiv positiv verdi 95,8% 90,7 - 98,3
Prediktiv negativ verdi 98,1% 96,9 - 98,8
Korrelasjon 97,8% 97,6 - 98,0
Uoverensstemmende prøver ble evaluert ved bruk av aktuelle ELISA-tester for toksin A og B.
5 av de 6 falske positive prøvene var positive med ELISA og ble ansett som ekte positive.
12 av de 19 falske negative prøvene var negative med ELISA og ble ansett som ekte negative.
VIRKNING AV AVFØRINGSPRØVENS KONSISTENS
Virkningen av avføringsprøvens konsistens på C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE®-testen
Reaksjonen til avføringsprøvene av varierende konsistenser i antigendelen (n = 978) og toksindelen
(n = 981) til C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE®-testen vises i tabell 4 og 5. Prosentandelene positive
reaksjoner ved bruk av enten kulturanalysen eller C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE®-testen var lignende i
alle tre typer avføringsprøver (ytende, halvfast og fast). Alle prøvene ble innsendt for C. difcile-testing.
Grunnlaget for innsendingen var den kliniske historikken til pasienten og ikke konsistensen på prøven.
I antigendelen viste resultatene at C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE®-testen ga lignende ytelsen som
bakteriell kultur ved testing av prøver av ulik konsistens. I toksindelen viste resultatene at C. DIFF QUIK
CHEK COMPLETE®-testen ga lignende ytelsen som vevskulturanalyse ved testing av prøver av ulik
konsistens.
Tabell 4. Reaksjon med avføringsprøver av ulik konsistens i antigendelen
Positiv med
bakteriekulturanalyse
C. DIFF QUIK CHEK
COMPLETE
Antigenlinje positiv
Negativ med
bakteriekulturanalyse
C. DIFF QUIK CHEK
COMPLETE
Antigenlinje negativ
Tabell 5. Reaksjon med avføringsprøver av ulik konsistens i toksindelen av C. DIFF QUIK
Positiv med
vevskulturanalyse
C. DIFF QUIK CHEK
COMPLETE
Toksinlinje positiv
Negativ med
vevskulturanalyse
C. DIFF QUIK CHEK
COMPLETE
Toksinlinje negativ
av C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE®-testen
Antall prøver
(n = 978)
Flytende prøver
(n = 335)
59 (17,6%) 110 (21,1%) 19 (15,7%)
®
72 (21,5%) 128 (24,5%) 25 (20,7%)
276 (82,4%) 412 (78,9%) 102 (84,3%)
®
263 (78,5%) 394 (75,5%) 96 (79,3%)
CHEK COMPLETE®-testen
Antall prøver
(n = 981)
Flytende prøver
(n = 336)
43 (12,8%) 81 (15,5%) 8 (6,6%)
®
42 (12,5%) 72 (13,8%) 7 (5,7%)
293 (87,2%) 442 (84,5%) 114 (93,4%)
®
294 (87,5%) 451 (86,2%) 115 (94,3%)
NO
Halvfaste
prøver (n = 522)
Halvfaste
prøver (n = 523)
Faste prøver
(n = 121)
Faste prøver
(n = 122)
67
Page 69
ANALYTISK FØLSOMHET
Cutoff for analysen ble etablert ved konsentrasjoner på 0,63 ng/ml for toksin A, 0,16 ng/ml for toksin B
og 0,8 ng/ml for glutamatdehydrogenase.
REPRODUSERBARHET
Reproduserbarheten til C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE®-testen ble bestemt ved bruk av 12 avføringsprøver som ble kodet fo å forhindre identiseringen i løpet av testingen. Testingen ble utført ved 3 uavhengige laboratorier, som testet prøvene i 3 dager. Prøvene ga de forventede resultatene 100 % av tiden.
KRYSSREAKTIVITET
Avføringsprøver som ble inokulert med følgende mikroorganismer til en endelig konsentrasjon på omtrent
108 eller høyere organismer pr. ml reagerte ikke i antigen- eller toksindelen av C. DIFF QUIK CHEK
COMPLETE®-testen:
Bakterie eller patogen: Aeromonas hydrophila, Bacillus cereus, Bacillus subtilis, Bacteroides fragilis,
Campylobacter coli, Campylobacter fetus, Campylobacter jejuni, Candida albicans, Clostridium
butyricum, Clostridium clostridiforme, Clostridium haemolyticum, Clostridium histolyticum, Clostridium
novyi, Clostridium perfringens, Clostridium septicum, Clostridium sordellii (non-toksigen), Clostridium
sporogenes, Enterobacter aerogenes, Enterobacter cloacae, Enterococcus faecalis, Escherichia coli
EIEC, Escherichia coli, Escherichia coli O157:H7, Escherichia coli ETEC, Klebsiella pneumoniae,
Peptostreptococcus anaerobius, Proteus vulgaris, Pseudomonas aeruginosa, Salmonella typhimurium,
Serratia liquifaciens, Shigella dysenteriae, Shigella exneri, Shigella sonnei, Staphylococcus aureus,
Staphylococcus aureus (Cowans), Staphylococcus epidermidis, Vibrio cholerae, Vibrio parahaemolyticus,
Yersinia enterocolitica
Den eneste ikke-C. difcile-organismen som reagerer i toksindelen av C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE®testen var Clostridium sordellii VPI 9048. Denne stammen produserer toksin HT og LT, som er homologe
for respektivt toksin A og B.
De følgende virusene på 10
COMPLETE®-testen:
Virus: Adenovirus type 1, 2, 3, 5, 40, 41, humant coronavirus, coxsackievirus B2, B3, B4, B5, echovirus
9, 11, 18, 22, 33, enterovirus type 68, 69, 70, 71, rotavirus.
INTERFERERENDE STOFFER
De følgende stoffene (amerikansk formel) hadde ingen virkning på testresultatene når de var til stede i
avføringen i de angitte konsentrasjonene: mucin (3,5 % w/v), humant blod (40 % v/v), bariumsulfat (5 %
w/v), Imodium® (5 % v/v), Kaopectate® (5 % v/v), Pepto-Bismol® (5 % v/v), stearin-/palmitinsyre (40 % w/v),
metronidazol (0,25 % w/v), vancomycin (0,25 % w/v).
3,3
8,25
til 10
TCID-enhete pr. 0,2 ml reagete ikke i C. DIFF QUIK CHEK
REAKSJONEN TIL KLINISKE ISOLATER SOM FÅS PÅ
CYKLOSERINCEFOKSITINFRUKTOSEAGAR (CCFA)
Totalt 103 C. difcile kliniske isolater, som fås fra anatomisk bakteriekultur på CCFA etter 3 dager ved
37 °C, ble testet i C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE®-testen. For analysen ble enkelte kolonier plukket
og suspendert i diluent som anbefalt for avføringsprøver. Alle 103 isolater ga en positiv antigenreaksjon
i testen.
70 av de 103 isolatene (68 %) var fra avføringsprøver som var positive for C. difcile-toksinet gjennom
vevkulturanalyse. Av disse ga 56 (80 %) en positiv toksinreaksjon ved screening etter anaerob vekst på
CCFA i 3 dager ved 37 °C.
68
NO
Page 70
TECHLAB® C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE
G
AVSEDD ANVÄNDNING
TECHLAB® C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE®-testet är en snabb immunoanalys av membranenzym
för samtidigt påvisande av Clostridium difcile glutamatdehydrogenasantigen och toxinerna A och B i
feacesprover. Testet påvisarC. difcile glutamatdehydrogenasantigen, som en undersökning för förekomst av C. difcile och bekräftar förekomst av toxigenisk C. difcile genom påvisande av toxinerna A
och B i feacesprover från personer med misstänkt C. difcile-sjukdom. Testet används för att underlätta
diagnosen C. difcile-sjukdom. Resultaten ska som med andra C. difcile-tester övervägas tillsammans
med patientens anamnes.
FÖRKLARING
Många patienter utvecklar mag-tarmbesvär som varierar från lindrig diarré till svår pseudomembranös
kolit efter antibiotikabehandling. Många fall av lindrigare former av mag-tarmsjukdom och de esta fall av
pseudomembranös kolit orsakas av toxigeniska stammar av Clostridium difcile (1). Denna organism är
en opportunistisk anaerob bakterie som växer i tarmen när normaloran har förändrats av antibiotikumet.
Toxigeniska stammar av C. difcile bär generna som kodar för toxinerna medan icke-toxigeniska stammar
inte bär toxingenerna. Sjukdomsdebuten är knuten till toxinerna som bildas av den toxigeniska organismen.
De kliniska symtomen i samband med sjukdomen antas primärt bero på toxin A, som är ett vävnadsskadande enterotoxin (2,3). C. difcile bildar även ett andra toxin som benämns toxin B. Toxin B, som har kallats för
organismens cytotoxin, är toxinet som påvisas av den vävnadsodlingsanalys som för närvarande används
av många laboratorier. Toxigeniska C. difcile-stammar bildar båda toxinerna eller enbart toxin B (4-7).
Glutamatdehydrogenasantigenet för C. difcile är en bra antigenmarkör för organismen i faeces eftersom
det bildas i stora mängder av alla toxigeniska eller icke-toxingeniska stammar (8-10). Antigenet kan påvisas i
faecesprover genom användning av C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE®-testet. Ett positivt resultat i testet för
glutamatdehydrogenasantigenet för C. difcile bekräftar förekomsten av denna organism i ett faecesprov; ett
negativt resultat indikerar frånvaro av organismen. Ett positivt resultat i testet för toxinerna A och B bekräftar
förekomst av toxigenisk C. difcile.
TESTPRINCIP
C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE®-testet använder specika antikroppar för glutamatdehydrogenasan-
tigen och toxinerna A och B för C. difcile. Anordningen innehåller ett reaktionsfönster med tre vertikala
linjer för immobiliserade antikroppar. Antigentestets linje (”Ag”) innehåller antikroppar mot C. difcile
glutamatdehydrogenasantigen. Kontrollinjen (”C”) är en prickig linje som innehåller anti-pepparrotsperoxidasantikroppar (anti-HRP, anti-horseradish peroxidase). Testlinjen för toxinerna A och B (”Tox”)
innehåller antikroppar mot toxinerna A och B för C. difcile . Konjugatet består av antikroppar till glutamatdehydrogenas och antikroppar till toxinerna A och B kopplade till pepparrotsperoxidas (HRP). För
att utföra testet tillsätts provet till ett rör som innehåller en blandning av Spädningsmedel och Konjugat.
Den utspädda prov-konjugatblandningen tillsätts till Provbrunnen och anordningen tillåts inkuberas till
rumstemperatur i 15minuter. Under inkubationen binds någon glutamatdehydrogenas och toxinerna
A och B i provet till antikroppsperoxidaskonjugatet. Antigen-antikropp-konjugatblandningen föryttas
genom ett lterdyna till ett membran där de fångas upp av de immobiliserade glutamatdehydrogenasspecika antikropparna och toxinerna A-och B-specika antikropparna i linjerna. Reaktionsfönstret
tvättas därefter med Tvättbuffert och därefter tillsätts Substrat. Efter 10minuters inkubation undersöks
”Ag”-reaktionen visuellt för tecken på en vertikal blå linje på Reaktionsfönstrets ”Ag”-sida. En blå linje
indikerar ett positivt test. Om ”Ag” är positivt ska ”Tox”-reaktionen undersökas visuellt för tecken på
en vertikal blå linje på Reaktionsfönstrets ”Tox”-sida. En blå linje indikerar ett positivt test. En positiv
”C”-reaktion, som indikeras av en vertikal blåprickig linje under Reaktionsfönstrets ”C”-del, bekräftar att
testet fungerar korrekt och att resultaten är giltiga.
®
MEDFÖLJANDE MATERIAL
Membrananordningar – varje påse innehåller 1 anordning
DEV
Spädningsmedel (22 ml per aska) – buffrad proteinlösning med
graderade pipetter (innehåller 0,05 % ProClin® 300)*
H412: Skadliga långtidseffekter för vattenlevande organismer
Tvättbuffert (12 ml per aska) – buffrad proteinlösning med
REA
WASH
Plastpipetter för engångsbruk – graderade vid 25 μL, 100 µL, 200 µL, 300 µL, 400 µL och 500 μL
IVD
*Signalord: Varning
H317: Kan orsaka alergisk hudreaktion
P261, P272, P280, P302, P352, P333, P313, P321, P362, P364, P501
graderade pipetter (innehåller 0,05 % ProClin® 300)*
H412: Skadliga långtidseffekter för vattenlevande organismer
Substrat (3,5 ml per aska) – lösning som innehåller tetrametylbensidin
REAGSUBS
Konjugat (2,5 ml per aska) – antikroppar specika för glutamatdehydrogenas
ENZCONJ
kopplade till pepparrotsperoxidas och antikroppar specika för toxinerna A och
B kopplade till pepparrotsperoxidas i en buffrad proteinlösning (innehåller 0,05 %
ProClin® 300)*
Positiv kontroll (2 ml) – antigen i en buffrad proteinlösning
För in vitro-diagnostiskt bruk
MATERIAL OCH UTRUSTNING SOM BEHÖVS MEN SOM INTE MEDFÖLJER
PRODUKTEN
Små provrör (t.ex. mikrocentrifugsrör av plast eller glasrör)
Applikatorpinnar Stoppur Centrifug
Engångshandskar för hantering av feacesprover Pipetter och spetsar
HÅLLBARHET OCH FÖRVARING
Kitets utgångsdatum anges på etiketten och tilldelas 24 månader från tillverkningsdatumet. Utgångsdatum
för varje komponent anges på de enskilda etiketterna. Kitet ska förvaras mellan 2°C och 8°C. Kitet och alla
komponenter förblir stabila under angivna utgångsdatum efter första öppning när de förvaras mellan 2°C
och 8°C. Låt alla komponenter få rumstemperatur före användning. Kitet förblir stabilt vid rumstemperatur
under efterföljande 8 timmars arbetsskift om den återförs till kylförvaring mellan skift.
FÖRSIKTIGHET
1. För in vitro-diagnostiskt bruk. Endast för yrkesmässig användning.
2. Reagenser från olika set får inte blandas eller bytas ut. Använd inte ett set efter passerat
utgångsdatum.
3. Varje komponent i setet ska granskas för eventuella tecken på läckage. Granska setet vid leverans
för att säkerställa att komponenterna inte är kalla eller varma, när man vidrör dem, på grund av
felaktiga fraktförhållanden.
4. Korkar, spetsar och pipetter är färgkodade och ska INTE blandas eller bytas ut!
5. Frys inte reagenserna. Setet ska förvaras mellan 2 °C och 8°C.
SV
69
Page 71
6. Påsen som innehåller Membrananordningen ska ligga i rumstemperatur innan den öppnas. Låt
25 μL100 μL200 μL300 μL400 μL500 μL
membrananordningar torka före användning.
7. Använd av feacesprover inom 72timmar efter insamlande för att uppnå optimala resultat. Prover
som är frysta kan förlora aktivitet på grund av nedfrysning och upptinande. Om frysta prover
används, ska de tinas upp i rumstemperatur.
8. Håll reagensaskor vertikalt för fördelning av reagenser för att säkerställa jämn droppstorlek och rätt volym.
9. Prover och membrananordningar ska hanteras och kastas som biologiskt riskavfall efter användning.
10. Membrananordningar får inte återanvändas.
11. Testet har optimerats för känslighet och specicitet. Ändringar i den angivna proceduren och/eller av
testförhållanden kan påverka testets känslighet och specicitet. Avvik inte från den angivna proceduren.
12. Var uppmärksam på den totala analystiden vid test av er än ett faecesprov. Tillsätt först
Spädningsmedel och tillsätt sedan konjugat i varje rör med Spädningsmedel. Tillsätt sedan provet
i röret med Spädningsmedel/Konjugat. Blanda alla de utspädda proverna noga och överför till
Membrananordningen. Inkubationssteget på 15 minuter påbörjas när den sista utspädda provkonjugatblandningen har överförts till den slutliga Membrananordningen.
13. Om Substrat-reagenset ändras till en mörkblå/mörklila färg, ring teknisk service för utbyte.
14. Faecesprover kan innehålla potentiellt infektiösa ämnen och ska hanteras på ”Biosäkerhetsnivå
2” enligt rekommendationer i bruksanvisningen ”Biosäkerhet i mikrobiologiska och biomedicinska
laboratorier” från CDC/NIH.
15. Använd engångshandskar vid utförande av testet.
16. Reagenserna konjugat, spädningsmedel och tvättbuffert innehåller 0,05 % ProClin® 300 som ett
konserveringsmedel. Även om koncentrationen är låg är ProClin® 300 känd för att vara skadligt
(hudsensibilisering kan uppstå). Om hudsensibilisering/-irritation eller hudutslag uppstår, kontakta
medicinsk rådgivning/uppsök sjukvård. Tag av kontaminerade kläder och tvätta dem innan de används
igen. Hantera reagenser enligt gällande föreskrifter för laboratoriesäkerhet och god laboratoriesed.
Säkerhetsdatablad för denna produkt nns tillgängliga på begäran. Kontakta teknisk support.
17. Följ nationella och lokala riktlinjer för avfallsbortskaffning.
18. Rapportera alla biverkningar till TECHLAB och den behöriga myndigheten i den EEA-medlemsstat
där användaren och/eller patienten benner sig.
INSAMLING, HANTERING OCH FÖRVARING AV FEACESPROVER
Tillåtna typer av prover Använd inte
Färska feacesprover
Frysta faecesprover
Prover i transportmedia (Cary Blair, C&S)
Provförvarings-
temperatur
Tillåten
förvaringslängd
2°C–8°C 72 timmar
Fryst ≤ -10°C Längre än 72timmar
Faecesprover i formalinbaserat xeringsmedel
(t.ex. natriumacetatformalin, 10% formalin,
mertiolatformalin)
Faecesprover i alkoholbaserat xeringsmedel
(t.ex. polyvinylalkohol)
Kommentarer
De idealiska proverna är mindre än 24 timmar
gamla
Tinas upp i rumstemperatur. Nedfrysning och
upptinande era gånger kan resultera i förlorad
provaktivitet på grund av toxinnedbrytning.
1. Standardprocedurer för insamlande och hantering som används på laboratoriet är lämpliga.
2. Faecesprover ska vara insamlade i rena, täta behållare.
3. Förvaring av prover i Spädningsmedel rekommenderas INTE.
4. Låt inte faecesproverna ligga i blandningen av spädningsmedel/konjugat i >24timmar.
FÖRBEREDANDANDE AV PROVER
1. Ta fram alla reagenser och erforderligt antal anordningar i rumstemperatur före användning. Det
rekommenderas att reagenserna tas ut ur insatsen av skumplast för att sänka tiden för uppvärmning
till rumstemperatur.
2. Ställ upp ett litet provrör och sätt på en etikett för varje prov och valfria externa kontroller vid behov.
3. Använd de svarta graderade pipetterna, tillsätt 750 µL (2:a graderingen från spetsen) spädningsmedel
i varje provrör för feacesprover. För prover i transportmedia, t.ex. Cary Blair eller C&S ska
650 µL (1:a graderingen från spetsen) av Spädningsmedel tillsättas i röret.
Provtyp Mängd spädningsmedel
Färska feacesprover 750 µL (2:a graderingen från spetsen)
Frysta feacesprover (fryst
outspädda)
Prover i transportmedia
(Cary Blair, C&S)
Externa kontroller (positiv och
negativ)
4. Tillsätt en droppeKonjugat (aska med röd kork) till varje rör.
5. Ta fram en plastpipett för engångsbruk (medföljer setet) för varje prov – pipetterna har graderingar i
reef vid 25 µL, 100 µL, 200 µL, 300 µL, 400 µL och 500 µL.
750 µL (2:a graderingen från spetsen)
650 µL (1:a graderingen från spetsen)
750 µL (2:a graderingen från spetsen)
750
650
µL
Graderad överföringspipett:
6. Blanda alla prover noga oavsett konsistens. Det är viktigt att proverna är jämnt blandade
före överföring.
Vätske-/halvfasta prover – pipettera 25 µL av provet med en överföringspipett och fördela i
Spädnings-/konjugat-blandningen. Använd samma överföringspipett för att blanda det utspädda
provet.
Formade/fasta prover – Försiktighet måste vidtas för att tillsätta rätt mängd formad faeces till
provblandningen. Blanda provet noga med en träapplikatorpinne och överför en liten portion prov
(cirka 2mm i diameter, motsvarande 25 µL) av provet i spädnings-/konjugatblandningen. Emulgera
provet med en applikatorpinne.
Faecesprover i Cary Blair eller C&S transportmedia - pipett 100 µL (2a graderingen från
överföringspipettens spets) av provet i spädnings-/konjugat-blandningen.
70
SV
Page 72
7. Valfria externa kontrollprov:
Extern positiv kontroll - tillsätt en droppe Positiv kontroll (aska med grå kork) i Spädnings-/
Konjugatblandningen.
Extern negativ kontroll - tillsätt 25 μL Spädningsmedel i Spädnings-/Konjugatblandningen.
OBS! Överförande av ett för litet prov eller underlåtenhet att blanda provet ordentligt i spädnings-/konjugatblandningen, kan resultera i ett falskt negativresultat. Tillsats av för mycket faecesprov kan leda till
ogiltiga resultat på grund av begränsat provöde.
TESTPROCEDUR
1. Ta fram en Membrananordning per prov och en anordning per valfri extern positiv eller negativ
kontroll vid behov. Foliepåsarna som innehåller anordningarna ska ligga i rumstemperatur innan de
öppnas. Använd anordningen omedelbart efter att påsen öppnats. Sätt en etikett på varje anordning
på lämpligt sätt och placera den på ett plant underlag så att texten ”C. DIFF COMPLETE” är på
anordningens undersida samt att den lilla provbrunnen är på anordningens översta högra hörn.
Membrananordning Provbrunn
Reaktionsfönster
2. Förslut varje rör med utspätt prov och blanda noga. Ordentlig blandning kan uppnås genom
centrifugering eller att vända röret upp och ner era gånger. När ett patientprov eller en Positiv
kontroll har spätts ut i Spädnings-/konjugat-blandningen kan det inkuberas till rumstemperatur i
upp till 24timmar innan det ska tillsättas till Membrananordningen.
3. Överför, med en ny överföringspipett, 500 µL av den utspädda prov-konjugatblandningen till
Provbrunnen (mindre hål på anordningens översta högra hörn) på en membrananordning, genom
att se till att driva ut vätskeprovet på spridningsdynan i Membrananordningen. När provet hälls
i provbrunnen, se till att överföringspipettens spets vinklas mot Reaktionsfönstret (större hål
anordningens mitt).
4. Inkubera anordningen i rumstemperatur i 15minuter – provet kommer att spridas genom
anordningen och ett område kommer att spridas tvärs över Reaktionsfönstret.
VAR UPPMÄRKSAM PÅ PROV SOM MISSLYCKAS ATT SPRIDAS:
Då och då misslyckas ett utspätt prov att spridas ordentligt och reaktionsfönstret blir inte helt
vått. Om reaktionsfönstret inte verkar bli helt vått inom 5 minuter efter att provet har tillsats till
provbrunnen, tillsätt 100 µL (4droppar) av spädningsmedel till provbrunnen och vänta ytterligare
5minuter (under totalt 20minuter).
5. Tillsätt, efter inkubationen, 300 μL Tvättbuffert till Reaktionsfönstret med hjälp av den graderade
vita pipetten. Låt Tvättbufferten rinna genom reaktionsfönstrets membran och sugas upp helt.
6. Tillsätt 2 dropparSubstrat (aska med vit kork) till Reaktionsfönstret. Läs av och skriv ner resultaten
efter 10minuter.
TOLKNING AV RESULTAT
1. Tolkningen av testet är pålitligast när anordningen avläses omedelbart när reaktionsperioden på
10minuter gått. Läs av anordningen på normalt arbetsavstånd i ett väl upplyst område. Titta med
en synlinje rakt ovanför anordningen.
2. Granska anordningen för tecken på blå prickar i Reaktionsfönstrets mitt som motsvarar den interna
positiva kontrollen. Tecken på någon(ra) kontrollprick(ar) motsvarar en giltig intern kontroll. Bakgrunden
kan vara vit till ljusblå till färgen. Granska anordningen för tecken på blå linjer på ”Ag”-och ”Tox”sidorna på Reaktionsfönstret som motsvarar testlinjerna. Linjerna kan vara bleka till mörka i intensitet.
3. Positiva antigen (”Ag”)-resultat: Ett positivt antigenresultat kan tolkas när som helst mellan
tillsatsen av Substrat och avläsningstidpunkten efter 10minuter. För ett positivt antigenresultat är
den blå ”Ag”-linjen och den blåprickiga kontrollinjen synliga (bild 1a). Linjerna kan vara bleka till
mörka i intensitet. En tydlig halv linje tolkas som ett positivt resultat. Tolka inte en missfärgning av
membranet som ett positivt resultat. Ett positivt resultat indikerar förekomsten av C. difcile.
4. Positiva antigen-och toxin (”Tox”)-resultat: Om ett resultat är positivt (dvs. en blå ”Ag”-linje
och en blåprickig kontroll under ”C” synliga), fortsätt tolkningen av toxinresultaten. Ett positivt
toxinresultat kan tolkas när som helst mellan tillsatsen av Substrat och avläsningstidpunkten efter
10minuter. För ett positivt toxinresultat är en blå ”Tox”-linje synligt (bild 1b). Linjen kan vara blek
till mörk i intensitet. En tydlig halv linje tolkas som ett positivt resultat. Tolka inte en missfärgning av
membranet som ett positivt resultat. Ett positivt resultat indikerar förekomsten av C. difcile-toxin.
5. Negativa resultat: Ett test kan inte tolkas som negativt eller ogiltigt förrän 10minuter efter tillsatsen
av Substrat. En enda blåprickig linje är synlig i mitten av Reaktionsfönstret under ”C” och inga
testlinjer är synliga på Reaktionsfönstrets ”Ag”-och ”Tox”-sidor, (bild 1c). Ett negativt resultat i
antigendelen indikerar frånvaro av C. difcile-antigen antingen i provet eller att det ligger under
spårbarhetsgränsen för testet. Ett negativt resultat i toxindelen indikerar frånvaro av C. difcile-toxin
antingen i provet eller att det ligger under spårbarhetsgränsen för testet.
6. Ogiltiga resultat: Inga linjer är synliga i reaktionsfönstret (bild 1d). Testresultatet är ogiltigt om ingen
blåprickig linje under ”C” är synlig när reaktionstiden förutit (bilderna 1e, 1f, 1g).
7. Negativt antigen (”Ag”), positivt toxin (”Tox”): En låg procentandel av prover kan ge negativt
testresultat för antigen men positivt för toxin. Dessa prover ska anses obestämbara och omtestas
med ett färskt prov (bild 1h). Om ett prov omtestas negativt för antigen men positivt för toxin,
rapportera det som ett positivt toxinresultat.
BILD 1: C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE® TOLKNING AV RESULTAT
Bild 1a
Positivt antigenresultat
Bild 1d
Ogiltigt resultat
Bild 1b
Positiva antigen
-och toxinresultat
Bild 1e
Ogiltigt resultat
SV
Bild 1c
Negativt resultat
Bild 1f
Ogiltigt resultat
71
Page 73
Bild 1g
Ogiltigt resultat
KVALITETSKONTROLL
Intern: En blåprickig linje måste vara synlig i mitten av Reaktionsfönstret under ”C” på varje Membran-
anordning som testas. Synliga blå kontrollprickar bekräftar att provet och reagenser tillsats korrekt, att
reagenserna var aktiva vid tidpunkten för analysen och att provet spreds ordentligt genom Membrananordningen. Det bekräftar också andra reagensers reaktivitet i samband med analysen. En jämn bakgrund
i resultatområdet anses som en intern negativ kontroll. Om testet har utförts korrekt och reagenserna
fungerar ordentligt blir bakgrunden vit för att ge ett urskiljbart resultat.
Extern: Reaktiviten för C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE®-setet ska kontrolleras vid leverans med an-
vändning av Positiv kontroll och negativ kontroll (Spädningsmedel). Positiv kontroll medföljer setet (aska
med grå kork). Positiv kontroll bekräftar andra reagensers reaktivitet i samband med analysen och är inte
avsedd för säkerställande av precision vid avslutning av det analytiska testet. Spädningsmedel används
för den negativa kontrollen. Ytterligare tester kan utföras med kontrollerna för att uppfylla de lokala,
statliga och/eller federala kraven och/eller kraven från auktoriserade organisationer.
BEGRÄNSNINGAR
1. C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE®-testet används för att påvisa C. difcile-antigen och toxin(er)
i faecesprover. Testet bekräftar förekomst av toxin i faeces och denna information ska bedömas
av en läkare i ljuset av patientens kliniska anamnes och undersökning av patienten. C. DIFF QUIK
CHEK COMPLETE®-testet påvisar nivåer av toxin A vid ≥0,63 ng/ml, toxin B vid ≥0,16 ng/ml, och
glutamatdehydrogenas vid ≥0,8 ng/ml.
2. Faecesprover är ytterst komplexa. Optimala resultat med C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE®-testet
erhålls med prover som är mindre än 24 timmar gamla. De esta outspädda prover kan lagras
mellan 2°C och 8°C under 72timmar innan markant försämring av toxinet observeras. Om prover
inte analyseras inom denna tidsperiod kan de frysas ner och tinas upp. Upprepad nerfrysning och
upptinande kan resultera i förlorad immunoreaktivitet av antigen och toxinerna A och B.
3. Vissa prover kan ge svaga reaktioner. Detta kan leda till ett antal faktorer såsom förekomst av låga
nivåer av antigen och/eller toxin, förekomst av bindande ämnen eller inaktiverade enzymer i faeces.
Linjerna kan vara bleka till mörka i intensitet. Dessa prover ska rapporteras som positiva om en blå
linje eller ens en halv linje observeras. En tydlig halv blå linje tolkas som ett positivt resultat
4. Feacesprover bevaras i 10 % formalin, mertiolatformalin, natriumacetatformalin, eller
polyvinylalkohol kan inte användas.
5. C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE®-testet är kvalitativt. Färgintensiteten ska inte tolkas kvantitativt.
6. Vissa isolerade C. sordellii kan reagera i C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE®-testet på grund av
bildande av immunologiskt besläktade toxiner (1).
7. Koloniseringsfrekvenser på upp till 50 % har rapporterats hos spädbarn. En hög frekvens har också
rapporterats hos patienter med cystisk bros (1,3). Resultat kan verka positiva hos dessa grupper
men bör betraktas i kombination med risken för att vara en koloniserad bärare.
Bild 1h
Se #7 för tolkning
8. Den enda icke-C. difcile-organismen som reagerade i toxindelen av C. DIFF QUIK CHEK
COMPLETE®-testet var Clostridium sordellii VPI 9048. Denna stam bildar toxinerna HT och LT som
är homologa till toxinerna A respektive B.
9. Det nns inga data på effekterna av kolonsköljning, bariumsulfatlavemang, laxeringsmedel eller
tarmförberedelser prestandan på C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE®-testet. Alla dessa procedurer
kan resultera i omfattande utspädning eller förekomst av tillsatser som kan påverka testresultatet.
FÖRVÄNTADE VÄRDEN
Sjukdomen Clostridium difcile är framförallt en nosokomial sjukdom bland äldre patienter och sjukdomens frekvens är beroende på faktorer som patientpopulation, typ av institution och epidemiologi.
Den rapporterade frekvensen av sjukdomen C. difcile hos patienter med antibiotikarelaterad diarré kan
variera från 5 till 20% och sjukhus kan erfara en lägre eller högre frekvens. Det är viktigt att betrakta
alla testresultat tillsammans med kliniska symtom eftersom en del friska vuxna och ett stort antal friska
spädbarn (upp till 50%) kommer att vara positiva för C. difcile-toxin. Dessutom har bärarfrekvensen för
C. difcile på 22% till 32% rapporterats hos patienter med cystisk bros (1,3). I studier som utförts för
denna anordning på symtomatiska patienter var incidensen för toxinerna A och B 12 % och GDH 18%.
Ett positivt resultat i antigendelen av C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE®-testet bekräftar förekomst av
C. difcile i ett faecesprov; ett negativt resultat indikerar frånvaro av organismen. Ett positivt resultat i
toxindelen av C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE®-testet bekräftar förekomst av C. difcile-toxin i ett faecesprov; ett negativt resultat indikerar frånvaro av toxin eller otillräckliga nivåer av toxin för spårbarhet.
PRESTANDAEGENSKAPER
Klinisk utvärdering av antigendelen av C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE®-testet
Antigendelen av C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE®-testet jämfördes med bakterieodling. Prover som
ingick i utvärderingen skickades till kliniska laboratorier för rutinmässig undersökning. Bakterieodlingstestet
utfördes enligt rutiner på inrättningen. Resultaten visas i tabell 1.
Tabell 1. Sammanfattning av klinisk prestanda i jämförelse av C. DIFF QUIK CHEK
C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE
Positiv antigenlinje
C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE
Negativ antigenlinje
Känslighet 90,5% 85,7 – 93,9
Specicitet 93,1% 91,2 – 94,7
Förutspått positivt värde 76,4% 70,7 – 81,3
Förutspått negativt värde 97,6% 96,2 – 98,4
Samband 92,6% 91,8 – 93,4
COMPLETE®-testet med bakterieodling
n = 1126
®
®
Bakterieodling
Positiv
201 62
21 842
Bakterieodling
Negativ
95% tillförlitlighets-
gränser
72
SV
Page 74
Avvikande prover utvärderades med användning av ELISA-test för C. difcile glutamatdehydrogenasantigen.
Tjugonio av de 62 falskt positiva proverna var positiva av ett annat GHD-test och ansågs sant positiva.
Tretton av de 21 falskt negativa proverna var negativa av ett annat GHD-test och ansågs sant
negativa.
Antigendelen av C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE®-testet jämfördes med vävnadsodlingsanalys för
spårbarhet för C. difcile-toxin. Prover som ingick i utvärderingen skickades till kliniska laboratorier för
rutinmässig undersökning. Resultaten visas i tabell 2. Antigendelen av C. DIFF QUIK CHEK
COMPLETE®-testet påvisade 98,7% av vävnadsodlingspositiva prov.
Tabell 2. Sammanfattning av klinisk prestanda i jämförelse av C. DIFF QUIK CHEK
C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE
Positiv antigenlinje
C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE
Negativ antigenlinje
Klinisk utvärdering av toxindelen av C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE®-testet
Toxindelen av C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE®-testet jämfördes med vävnadsodlingsanalys vid två
kliniska laboratorier och på TECHLAB, Inc. Prover som ingick i utvärderingen skickades till kliniska
laboratorier för rutinmässig undersökning. Resultaten visas i tabell 3.
Tabell 3. Sammanfattning av klinisk prestanda i jämförelse av C. DIFF QUIK CHEK
C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE
Positiv toxinlinje
C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE
Negativ toxinlinje
COMPLETE®-testet med vävnadsodlingsanalys
n = 1126
®
®
Vävnadsodling
Positiv
COMPLETE®-testet med vävnadsodlingsanalys
n = 1126
®
®
Vävnadsodling
Positiv
Vävnadsodling
Negativ
154 109
2 861
Vävnadsodling
Negativ
137 6
19 964
95%
tillförlitlighetsgränser
Känslighet 87,8% 81,4 - 92,3
Specicitet 99,4% 98,6 - 99,7
Förutspått positivt värde 95,8% 90,7 - 98,3
Förutspått negativt värde 98,1% 96,9 - 98,8
Samband 97,8% 97,6 - 98,0
Avvikande prover utvärderades med användning av ELISA-test för toxinerna A och B.
Fem av de 6 falskt positiva proverna var positiva med ELISA och ansågs sant positiva.
Tolv av de 19 falskt negativa proverna var negativa med ELISA och ansågs sant negativa.
EFFEKT AV KONSISTENS PÅ FEACESPROV
Effekt av konsistens på faecesprov på C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE®-testet
Reaktionen för feacesprover av varierande konsistens i antigendelen (n=978) och toxindelen (n=981)
av C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE®-testet visas i tabellerna 4 och 5. Procentandelen av positiva
reaktioner med användning av odlingsanalys eller C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE®-testet var lika i
alla tre typerna av faecesprover (vätska, halvfast och fast). Alla proverna skickades för C. difcile-test.
Grunden till skickandet av proverna var patientens kliniska anamnes och inte provets konsistens. I
antigendelen visade resultaten att C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE®-testet utfördes på samma sätt som
bakterieodling vid test av prover av olika konsistens. I toxindelen visade resultaten att C. DIFF QUIK
CHEK COMPLETE®-testet utfördes på samma sätt som vävnadsodlingsanalys vid test av prover av
olika konsistens.
Tabell 4. Reaktion av feacesprover av varierande konsistens på antigendelen
Positiv genom
bakterieodlingsanalys
C. DIFF QUIK CHEK
COMPLETE
Positiv antigenlinje
Negativ genom
bakterieodlingsanalys
C. DIFF QUIK CHEK
COMPLETE
Negativ antigenlinje
av C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE®-testet
Antal prover
(n = 978)
Flytande prover
(n = 335)
59 (17,6%) 110 (21,1%) 19 (15,7%)
®
72 (21,5%) 128 (24,5%) 25 (20,7%)
276 (82,4%) 412 (78,9%) 102 (84,3%)
®
263 (78,5%) 394 (75,5%) 96 (79,3%)
SV
Halvfasta
prover (n = 522)
Fasta prover
(n = 121)
73
Page 75
Tabell 5. Reaktion av feacesprover av varierande konsistens på toxindelen av C. DIFF QUIK
Positiv genom
vävnadsodlingsanalys
C. DIFF QUIK CHEK
COMPLETE
Positiv toxinlinje
Negativ genom
vävnadsodlingsanalys
C. DIFF QUIK CHEK
COMPLETE
Negativ toxinlinje
ANALYTISK KÄNSLIGHET
Avslutningen för analysen fastställdes vid koncentrationer på 0,63ng/ml för toxin A, 0,16ng/ml för toxin
B och 0,8ng/ml för glutamatdehydrogenas.
REPRODUCERBARHET
Reproducerbarheten för C. DIFF QUIK CHEK COMPLETEE®-testet fastställdes med 12 feacesprover
som kodades för att förhindra identiering under testet. Testet utfördes vid 3 oberoende laboratorier som
testade proverna i 3 dagar. Proverna gav de förväntade resultaten 100 % av tiden.
KORSREAKTIVITET
Faecesprover inokulerade med följande mikroorganismer till en slutlig koncentration på cirka 108 eller er
organismer per ml reagerade inte i antigen-eller toxindelen av C. DIFF QUIK CHEK COMPLETEE®-testet:
Bakterie eller Patogen: Aeromonas hydrophila, Bacillus cereus, Bacillus subtilis, Bacteroides fragilis,
Campylobacter coli, Campylobacter fetus, Campylobacter jejuni, Candida albicans, Clostridium
butyricum, Clostridium clostridiforme, Clostridium haemolyticum, Clostridium histolyticum, Clostridium
novyi, Clostridium perfringens, Clostridium septicum, Clostridium sordellii (icke-toxigen), Clostridium
sporogenes, Enterobacter aerogenes, Enterobacter cloacae, Enterococcus faecalis, Escherichia coli
EIEC, Escherichia coli, Escherichia coli O157:H7, Escherichia coli ETEC, Klebsiella pneumoniae,
Peptostreptococcus anaerobius, Proteus vulgaris, Pseudomonas aeruginosa, Salmonella typhimurium,
Serratia liquifaciens, Shigella dysenteriae, Shigella exneri, Shigella sonnei, Staphylococcus aureus,
Staphylococcus aureus (Cowans), Staphylococcus epidermidis, Vibrio cholerae, Vibrio parahaemolyticus,
Yersinia enterocolitica
Den enda icke-C. difcile-organismen som reagerade i toxindelen av C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE®testet var Clostridium sordellii VPI 9048. Denna stam bildar toxinerna HT och LT som är homologa till
toxinerna A respektive B.
Följande virus på 10
COMPLETE®-testet:
Virus: Adenovirus av typerna 1, 2, 3, 5, 40, 41, humant coronavirus, coxsackievirus B2, B3, B4, B5,
echovirus 9, 11, 18, 22, 33, enterovirus typ 68, 69, 70, 71, rotavirus.
CHEK COMPLETE®-testet
Antal prover
(n = 981)
®
®
3,3
8,25
to 10
Flytande prover
(n = 336)
43 (12,8%) 81 (15,5%) 8 (6,6%)
42 (12,5%) 72 (13,8%) 7 (5,7%)
293 (87,2%) 442 (84,5%) 114 (93,4%)
294 (87,5%) 451 (86,2%) 115 (94,3%)
TCID-enheter per 0,2 ml reagerade inte i C. DIFF QUIK CHEK
Halvfasta
prover (n = 523)
Fasta prover
(n = 122)
STÖRANDE ÄMNEN
Följande ämnen (USA formulering) hade ingen effekt på testresultaten vid förekomst i faeces i angivna
koncentrationer: mucin (3,5% vikt/vol), humanblod (40% vol/vol), bariumsulfat (5% vikt/vol), Imodium®
(5% vol/vol), Kaopectate® (5% vol/vol), Pepto-Bismol® (5% vol/vol), stearin-/palmitinsyra (40% vikt/vol),
metronidazol (0,25% vikt/vol), vankomycin (0,25 % vikt/vol).
REAKTION PÅ KLINISKA ISOLERAT ERHÅLLNA PÅ CYKLOSERIN-CEFOXITINFRUKTOS-AGAR (CCFA)
Totalt 103 kliniskt isolerade C. difcile som erhölls genom anaerob bakterieodling på CCFA efter 3dagar
vid 37°C testades i C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE®-testet. För analysen valdes och blandades individuella kolonier i Spädningsmedel som rekommenderas för feacesprover. Alla 103 isolater gav en positiv
antigenreaktion i testet.
Sjuttio av de 103 isolaterna (68%) var från feacesprover som var positiva för C. difcile -toxin genom
vävnadsodlingsanalys. Av dessa gav 56 (80%) en positiv toxinreaktion vid undersökning efter anaerob
växt på CCFA under 3 dagar vid 37°C.
74
SV
Page 76
TECHLAB® C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE
REAGWASH
REAGSUBS
ENZCONJ
KULLANIM AMACI
TECHLAB® C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE®, tek bir reaksiyon kanalında Clostridium difcile glutamat
dehidrojenaz antijeni ile A ve B toksinlerinin eşzamanlı olarak algılanmasında kullanılan hızlı bir membran
enzimi bağışıklık testidir. Test, C. difcile hastalığı olduğundan şüphelenilen kişilerden alınan dışlı
örneklerinde A ve B toksinleri arayarak toksijen C. difcile varlığını doğrulamakta ve C. difcile varlığını
test ederek C. difcile antijeni, glutamat dehidrojenazı bulunup bulunmadığını algılamaktadır. Test, C.
difcile hastalığının teşhisinde yardımcı bir araç olarak kullanılmak üzere tasarlanmıştır. Diğer C. difcile
testleri gibi, sonuçlar hasta geçmişi göz önünde bulundurularak değerlendirilmelidir.
AÇIKLAMA
Antibiyotik tedavisi sonrasında, çoğu hastada gastrointestinal sorunlar görülmektedir ve bunlar orta
şiddette diyareden, şiddetli psödomembranöz kolite kadar geniş bir aralıkta değişmektedir. Çoğu durumda,
gastrointestinal hastalıkların orta şiddette olan biçimleri ile birçok psödomembranöz kolit rahatsızlığı toksijen
Clostridium difcile türlerinden kaynaklanmaktadır (1). Bu organizma, normal ora antibiyotik ile değiştiğinde
bağırsak içerisinde gelişen fırsatçı bir anaerobik bakteridir. Toksijen C. difcile türleri, toksinleri kodlayan
genler taşırken, toksijen olmayan türler toksin genleri taşımaz. Hastalık başlangıcı, toksijen organizmalar
tarafından üretilen toksinlerle ilgilidir. Hastalık ile ilişkili klinik belirtilerin birincil olarak dokulara hasar veren
bir enterotoksin olan A toksini ile ilişkili olduğuna inanılmaktadır (2,3). C. difcile aynı zamanda B toksini
adı verilen bir toksin daha üretmektedir. Organizmanın sitotoksini olarak bilinen B toksini, mevcut durumda
çoğu laboratuvarda kullanılan doku kültürü testleri tarafından algılanabilmektedir. Toksijen C. difcile
türleri ya bu iki toksini birden üretmekte ya da yalnızca B toksini üretmektedir (4-7). C. difcile glutamat
dehidrojenazı dışkıdaki organizmalar için iyi bir antijen göstergesidir, çünkü toksijen olan ya da olmayan
tüm türler tarafından üretilmektedir (8-10). Dışkı örneklerindeki antijen C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE®
testi kullanılarak saptanabilir. C. difcile glutamat dehidrojenazı açısından pozitif sonuç veren testler, dışkı
örneğinde bu organizmanın bulunduğunu doğrularken, negatif bir sonuç bu organizmanın mevcut olmadığını
gösterir. A ve B toksinleri için gerçekleştirilen testin pozitif sonuç vermesi halinde, toksijen C. difcile
bulunduğu doğrulanmış olur.
TEST PRENSİBİ
C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE® testi özel olarak C. difcile glutamat dehidrojenaz ile A ve B
toksinlerine özel antikorlar kullanılmaktadır. Cihaz, üç adet dikey immobilize antikor çizgisi ile bir adet
Reaksiyon Bölmesi bulunmaktadır. Antijen test çizgisi (“Ag”) C. difcile glutamat dehidrojenaz antikorları
içermektedir. Kontrol çizgisi (“C”) horseradish peroksidazı (HRP) antikorları içeren bir kesik çizgidir. A ve
B toksinleri test çizgisi (“Tox”) C. difcile A ve B toksinlerinin antikorlarını içermektedir. Konjugat glutamat
dehidrojenaz, A ve B toksinleri ile horseradish peroksidazı antikorları içermektedir. Testi gerçekleştirmek
için, örneğin Seyreltici ve Konjugat karışımı içeren bir tüpe konulması gerekmektedir. Seyreltilmiş örnek
- konjugat karışımı Örnek Çukuruna eklenir ve cihazın 15 dakika boyunca oda sıcaklığında enkübe
olması beklenir. Enkübasyon sırasında, örnek içerisindeki glutamat dehidrojenaz ile A ve B toksinleri,
antikor-peroksidaz konjugatlarına bağlanır. Antijen-antikor-konjugat kompleksleri bir ltre süzgeci
içerisinden membrana doğru ilerler ve burada immobilize glutamat dehidrojenaza özel antikor çizgisi
ile A ve B toksinlerine özel antikor çizgisi tarafından yakalanır. Bunun ardından, Reaksiyon Bölmesi
Yıkama Tamponu ile yıkanır ve Substrat eklenir. 10 dakikalık enkübasyon dönemi sonrasında, Reaksiyon
Bölmesinin "Ag" bölümünde dikey mavi çizgi görüntülenip görüntülenmediğine bakılarak "Ag" reaksiyonu
görsel olarak doğrulanır. Mavi çizgi, test sonucunun pozitif olduğunu gösterir. “Ag” pozitif olduğunda,
Reaksiyon Bölmesinin "Tox" bölümünde dikey mavi çizgi görüntülenip görüntülenmediğine bakılarak
“Tox” reaksiyonunu görsel olarak doğrulanır. Mavi çizgi, test sonucunun pozitif olduğunu gösterir.
Reaksiyon Bölmesinin "C" kısmı altında dikey mavi kesik çizgi ile gösterilen pozitif “C” reaksiyonu, testin
doğru şekilde çalıştığını ve sonuçların geçerli olduğunu doğrular.
®
ÜRÜNLE BİRLİKTE VERİLEN MATERYALLER
Membran Cihazları – her kesede 1 cihaz bulunur
DEV
Seyreltici (her bir şişede 22 mL) – Kademeli damlalık tertibatı bulunan
tamponlu protein solüsyonu (%0,05 ProClin® 300 içerir)*
H412: Sucul ortam için uzun süreli etkilerle birlikte zararlıdır
Yıkama Tamponu (her bir şişede 12 mL) – Kademeli damlalık tertibatı bulunan
tamponlu solüsyon (%0,05 ProClin® 300 içerir)*
H412: Sucul ortam için uzun süreli etkilerle birlikte zararlıdır
Substrat (her bir şişede 3,5 mL) – Tetrametilbenzidin içeren solüsyon
Konjugat (her bir şişede 2,5 mL) – Horseradish peroksidaz ile birleşmiş olan
glutamat dehidrojenaza özel antikor ile tamponlu bir protein solüsyonu içinde
horseradish peroksidaz ile birleşmiş olan A ve B toksinlerine özel antikorlar
(%0,05 ProClin® 300 içerir)*
Pozitif Kontrol (2 mL) – Tamponlu protein solüsyonu içerisinde antijen
Tek kullanımlık plastik aktarım pipetleri – 25 µL, 100 µL, 200 µL, 300 µL, 400 µL ve 500 µL ölçekli
IVD
*İşaret Sözcüğü: Uyarı
H317: Alerjik deri reaksiyonuna sebep olabilir
P261, P272, P280, P302, P352, P333, P313, P321, P362, P364, P501
In vitro tanısal kullanım için
GEREKLİ OLAN ANCAK ÜRÜNLE BİRLİKTE VERİLMEYEN MATERYAL
VE EKİPMANLAR
Küçük test tüpleri (örn. plastik mikrosantrifüj tüpleri ya da cam tüpler)
Uygulama çubukları Zamanlayıcı Vorteks karıştırıcı
Dışkı örnekleri ile ilgilenirken kullanılacak tek kullanımlık eldivenler Pipet cihazı ve uçları
RAF ÖMRÜ VE SAKLAMA
Kitin son kullanım tarihi etiket üzerinde verilmiştir ve üretim tarihinden itibaren 24 aydır. Her bir bileşenin
son kullanım tarihi, bileşen etiketlerinde verilmiştir. Kit 2°C ile 8°C arası sıcaklıkta saklanmalıdır. Kit ve tüm
bileşenleri, ilk kez açıldıktan sonra 2°C ile 8°C arasında saklandığında listelenen son kullanım tarihlerine
kadar stabil kalır. Kullanım öncesinde tüm bileşenleri oda sıcaklığına getirin. Kit, vardiyalar arasında
soğutulmuş saklama koşullarına geri konduğunda, sonraki 8 saatlik çalışma vardiyası boyunca oda
sıcaklığında stabil kalır.
ÖNLEMLER
1. In vitro tanısal kullanım içindir. Yalnızca profesyonel kullanım içindir.
2. Farklı kitlerin ayıraçları karıştırılmamalı ya da dönüşümlü olarak kullanılmamalıdır. Son kullanım tarihi
geçmiş kitleri kullanmayın.
3. Kit içerisindeki her bir bileşen, sızıntı emarelerine karşı kontrol edilmelidir. Teslim alındığında,
kiti kontrol ederek bileşenlerin uygunsuz nakliye koşulları nedeniyle donmuş ya da ısınmış olup
olmadığına bakın.
4. Kapaklar, uçlar ve damlalık tertibatları renklerle işaretlenmiştir, bunları KARIŞTIRMAYIN ya da
birbirinin yerine KULLANMAYIN!
TR
75
Page 77
5. Ayıraçları dondurmayın. Kit 2°C ila 8°C arası sıcaklıkta saklanmalıdır.
25 μL100 μL200 μL300 μL400 μL500 μL
6. Membran Cihazını içeren kese açılmadan önce oda sıcaklığında olmalıdır. Kullanım öncesinde
membran cihazlarının kuru olmasına dikkat edin.
7. En iyi sonuçları elde etmek için 72 saat içerisinde topladığınız dışkı örneklerini kullanın. Donmuş
örnekler, donma ve çözünme nedeniyle aktiiğini kaybedebilir. Donmuş örnek kullanacaksanız,
örnekleri oda sıcaklığında çözün.
8. Ayıraçları hazırlarken damla boyutunun tutarlı, hacmin de doğru olmasını sağlamak için ayıraç
şişelerini dikey tutun.
9. Örnekler ile membran cihazları biyolojik tehlike içeren madde gibi kullanılmalı ve kullanım sonrasında
da bu şekilde atılmalıdır.
10. Membran cihazları yeniden kullanılamaz.
11. Test hassasiyet ve özgüllük açısından optimize edilmiştir. Belirtilen prosedür ve/veya test koşullarında
değişiklik olması, testin hassasiyetini ve özgüllüğünü etkileyebilir. Belirtilen prosedürün dışına çıkmayın.
12. Birden fazla dışkı örneğini test ederken toplam test süresine dikkat edin. Önce Seyreltici ekleyin ve
ardından her bir Seyreltici tüpüne Konjugat ekleyin. Daha sonra, Seyreltici/Konjugat tüpüne örneği ekleyin.
Seyreltilmiş örnekleri iyice karıştırın ve Membran Cihazına aktarın. 15 dakikalık enkübasyon aşaması, en
son seyreltilmiş olan örnek-konjugat karışımı son Membran Cihazına eklendikten sonra başlar.
13. Substrat ayıracı koyu mavi/mor bir renk alırsa, değiştirilmesi için teknik servisi arayın.
14. Dışkı örnekleri, potansiyel olarak bulaşıcı maddeler içerebilir ve CDC/NIH Kılavuzu "Mikrobiyolojik
ve Biyomedikal Laboratuvarlarda Biyogüvenlik" içerisinde önerilen şekilde "2. Seviye Biyogüvenlik"
tedbirleri çerçevesinde kullanılmalıdır.
15. Testi gerçekleştirirken tek kullanımlık eldiven takın.
16. Konjugat, Seyreltici ve Yıkama Tamponu ayırıcılarında koruyucu olarak %0,05 ProClin® 300 bulunur.
Derişiminin düşük olmasına rağmen, ProClin® 300’ün zararlı olduğu bilinmektedir (deride hassasiyet
oluşabilir). Deride hassasiyet/tahriş ya da kızarıklık meydana gelirse tıbbi/tavsiye yardım alın.
Kontamine olan elbiseleri çıkarın ve tekrar kullanmadan önce yıkayın. Ayıraçlarla ilgili işlemlerde
mevcut laboratuvar güvenliği yönetmeliklerine ve iyi laboratuvar uygulamalarına riayet edin. Bu
ürünün Güvenlik Veri Kağıtları talep üzerine temin edilebilir; teknik desteğe başvurun.
17. Atık bertaraf yönetmeliklerine dair ulusal, bölgesel ve yerel kurallara uyun.
18. Herhangi bir ciddi olayı TECHLAB’a ve kullanıcının ve/veya hastanın bulunduğu AET Üye Devletin
yetkili makamına bildirin.
DIŞKI ÖRNEKLERİNİN TOPLANMASI, SAKLANMASI VE KULLANILMASI
Kabul Edilebilir Örnek Türleri Kullanmayın
Taze Dışkı Örnekleri
Donmuş Dışkı Örnekleri
Nakliye aracı (Cary Blair, C&S) içerisinde
tutulan örnekler
Örnek Saklama
Sıcaklık
Kabul edilebilir saklama
süresi uzunluğu
2°C – 8°C 72 saat
Donmuş ≤ -10°C
72 saatten daha uzun
süre
Formalin bazlı ksatierde (örn. sodyum asetat
formalin, %10 formalin, mertiolat formalin) tutulan
dışkı örnekleri
Alkol bazlı ksatierde (örn. polivinil alkol)
içerisinde tutulan dışkı örnekleri
Yorumlar
İdeal örnekler 24 saatten daha kısa süre
saklanmış olanlardır
Oda sıcaklığında çözün. Birden fazla donma ve
çözünme, toksin bozunması nedeniyle örnek
aktiiğinde kayıp görülmesine neden olabilir.
1. Dışkı örnekleri için kurum içinde kullanılan standart toplama ve işleme prosedürleri uygundur.
2. Dışkı örnekleri temiz ve sızdırmaz kaplara alınmalıdır.
3. Dışkı örneklerinin Seyreltici içerisinde saklanması ÖNERİLMEZ.
4. Dışkı örneklerinin 24 saatten daha uzun süre Seyreltici/Konjugat içerisinde kalmasına izin vermeyin.
ÖRNEK HAZIRLAMA
1. Kullanım öncesinde tüm ayıraçları ve istenilen cihaz sayısını oda sıcaklığına getirin. Ayıraçların oda
sıcaklığına gelmesi için gereken süreyi azaltmak amacıyla reaktieri köpük koruyucudan çıkarmanız
önerilir.
2. Her bir örnek için küçük bir test tüpü ayırın ve etiketleyin, gerekli olduğunda bunları harici kontroller
için de gerçekleştirin.
3. Siyah ölçekli damlalık tertibatını kullanarak, dışkı örnekleri için her bir tüpe 750 µL (uçtan 2. ölçek)
Seyreltici ekleyin. Cary Blair ya da C&S gibi nakliye araçları içerisinde örnekler için tüpe
650 µL Seyreltici ekleyin (ucun 1. kademesinden).
Örnek Türü Seyreltici Hacmi
Taze Dışkı Örnekleri 750 µL (uçtan 2. ölçek)
Donmuş Dışkı Örnekleri (donmuş ve
seyreltilmemiş)
Nakliye aracı (Cary Blair, C&S)
içerisinde tutulan örnekler
750 µL (uçtan 2. ölçek)
650 µL (ucun 1. kademesinden)
750
650
µL
Harici Kontroller (pozitif ve negatif) 750 µL (uçtan 2. ölçek)
4. Her bir tüpe bir damla Konjugat (kırmızı kapaklı şişe) ekleyin.
5. Her bir örnek için bir adet tek kullanımlık plastik transfer pipeti (kitle birlikte verilmiştir) alın - pipetlerin
25 µL, 100 µL, 200 µL, 300 µL, 400 µL ve 500 µL olarak artan ölçekleri vardır.
Ölçekli Aktarım Pipeti:
6. Kıvama bakmadan tüm örnekleri iyice karıştırın- aktarım öncesinde örneklerin eşit derecede
karışmış olması gerekmektedir.
Sıvı/Yarı-katı örnekler – bir aktarım pipeti ile 25 µL örnek alın ve Seyreltici/Konjugat karışımına
ekleyin. Seyreltilmiş örneği karıştırmak için aynı aktarım pipetini kullanın.
Şekilli/Katı örnekler – Örnek karışımına doğru miktarda şekilli dışkı eklenmesi için dikkatli olunması
gerekmektedir. Örneği ahşap bir uygulama çubuğu kullanarak iyice karıştırın ve az miktarda
(yaklaşık 2 mm çaplı, 25 µL miktarda) örneği Seyreltici/Konjugat karışımına aktarın. Uygulama
çubuğunu kullanarak örneği emülsiyon haline getirin.
Cary Blair ya da C&S nakliye araçları içerisindeki dışkı örnekleri - pipet kullanarak 100 µL (aktarım
pipetinin ucundan 2. ölçek) örneği Seyreltici/Konjugat karışımına alın.
76
TR
Page 78
7. Opsiyonel Harici Kontrol Örnekleri:
Harici Pozitif Kontrol - Seyreltici/Konjugat karışımına bir damla Pozitif Kontrol (gri kapaklı şişe)
ekleyin.
Harici Negatif Kontrol - Seyreltici/Konjugat karışımına 25 μL Seyreltici ekleyin.
NOT: Çok az örnek aktarılması ya da örneğin karıştırılmaması veya Seyreltici/Konjugat karışımında
yeteri kadar bekletilmemesi, yalancı negatif test sonucu alınmasına neden olabilir. Çok fazla dışkı örneği
eklenmesi, kısıtlı örnek akışı nedeniyle geçersiz sonuçlar alınmasına neden olabilir.
TEST PROSEDÜRÜ
1. Örnek başına bir Membran Cihazı alın ve gerekli olduğunda, opsiyonel harici pozitif veya negatif
kontrol için bir cihaz alın. Cihazların içerisinde olduğu folyolar açılmadan önce oda sıcaklığına
getirilmelidir. Cihazı folyoyu açar açmaz kullanın. Her bir cihazı uygun şekilde etiketleyin ve düz
bir yüzey üzerinde, “C. DIFF COMPLETE” yazısı aşağı, küçük Örnek Çukuru da cihazın sağ üst
köşesine gelecek şekilde tutun.
Membran Cihazı Örnek Çukuru
Reaksiyon Bölmesi
2. Her bir seyreltilmiş örnek tüpünü kapatın ve iyice karıştırın. Tüpü girdap oluşturacak şekilde
çalkalamak ya da yukarı aşağı çevirmek suretiyle uygun karışım elde edilebilir. Hasta örneği ya
da Pozitif Kontrol Seyreltici/Konjugat karışımı içerisinde seyreltildikten sonra, Membran Cihazına
eklenmeden önceki 24 saatlik döneme kadar oda sıcaklığında enkübe edilebilir.
3. Yeni bir aktarım pipeti kullanarak 500 µL seyreltilmiş örnek-konjugat karışımını Membran Cihazının
Örnek Çukuruna (cihazın sağ üst köşesindeki küçük delik) ekleyin, bu sırada sıvı örneğin Membran
Cihazı içindeki emme bölümüne geçmesine özen gösterin. Örneği, örnek çukuruna alırken, aktarım
pipetinin uç kısmının Reaksiyon Bölmesine (cihazın orta kısmındaki büyük delik) doğru bir açıda
olduğundan emin olun.
4. Cihazı 15 dakika boyunca oda sıcaklığında enkübe edin – örnek cihaz tarafından emilecek ve ıslak
alan Reaksiyon Bölmesi boyunca yayılacaktır.
DAĞILMAYAN ÖRNEKLER İÇİN NOT:
Bazı durumlarda, seyreltilmiş bir örnek uygun şekilde dağılmaz ve Reaksiyon Bölmesi tamamen
ıslanmaz. Reaksiyon Bölmesi, örnek, Örnek Çukuruna eklendikten sonraki 5 dakika içerisinde
tamamen ıslanmazsa, Örnek Çukuruna 100 µL (4 damla) Seyreltici ekleyin ve 5 dakika daha
bekleyin (toplam 20 dakika).
5. Enkübasyon sonrasında, ölçekli damlalık tertibatını kullanarak, 300 μL Yıkama Tamponunu
Reaksiyon Bölmesine ekleyin. Yıkama Tamponunun Reaksiyon Bölmesi membranından geçmesini
ve tamamen emilmesini bekleyin.
6. Reaksiyon Bölmesine 2 damla Substrat (beyaz kapaklı şişe) ekleyin. 10 dakika sonra sonuçları
görsel olarak gözlemleyin ve kaydedin.
SONUÇLARIN YORUMLANMASI
1. Cihaz 10 dakikalık reaksiyon süresi bittikten hemen sonra incelendiğinde, test en güvenilir şekilde
yorumlanır. Cihazı, normal çalışma mesafesinde, iyi ışıklandırılmış bir alanda gözlemleyin. Doğrudan
cihazın üzerinden bakın.
2. Dahili pozitif kontrolü temsil eden şekilde Reaksiyon Bölmesinin orta kısmında mavi noktalar olup
olmadığına bakın. Kontrol noktasının/noktalarının görüntülenmesi, geçerli bir dahili kontrol olduğunu
gösterir. Arka plan, açık mavi renkte görülebilir. Reaksiyon Bölmesinin test çizgilerini temsil eden
"Ag" ve "Tox" kısımlarında mavi çizgi olup olmadığına bakın. Çizgiler yoğunluğa bağlı olarak açık
veya koyu olarak görüntülenebilir.
3. Pozitif Antijen (“Ag”) Sonucu: Pozitif bir antijen sonucu Substrat eklenmesinden 10 dakikalık
test değerlendirme süresinin sonuna kadarki süreçte herhangi bir noktada yorumlanabilir. Pozitif bir
antijen sonucunda, mavi "Ag" çizgisi ve "C" bölümündeki kesik mavi kontrol çizgisi görüntülenir (Şekil
1a). Çizgiler yoğunluğa bağlı olarak açık veya koyu olarak görüntülenebilir. Net bir kısmi çizgi pozitif
sonuç olarak yorumlanır. Membran renk değişimini pozitif sonuç olarak yorumlamayın. Pozitif sonuç,
C. difcile bulunduğunu gösterir.
4. Pozitif Antijen ve Toksin (“Tox”) Sonucu: Antijen sonucu pozitifse (“Ag” çizgisinde mavi bir
çizgi, “C” bölümü altında da kesik mavi kontrol çizgisi görüldüğünde) toksin sonucu yorumu için
ilerleyin. Pozitif bir toksin sonucu Substrat eklenmesinden 10 dakikalık test değerlendirme süresinin
sonuna kadarki süreçte herhangi bir noktada yorumlanabilir. Pozitif bir toksin sonucunda, mavi bir
"Tox" çizgisi görülür (Şekil 1b). Çizgi yoğunluğa bağlı olarak açık veya koyu olarak görüntülenebilir.
Net bir kısmi çizgi pozitif sonuç olarak yorumlanır. Membran renk değişimini pozitif sonuç olarak
yorumlamayın. Pozitif sonuç, C. difcile toksini bulunduğunu gösterir.
5. Negatif Sonuç: Test, Substrat eklenmesinden sonraki 10 dakika öncesinde negatif ya da geçersiz
olarak yorumlanamaz. Reaksiyon Bölmesinin orta kısmında, "C" bölümünün altında tek bir kesik mavi
çizgi göründüğünde ve Reaksiyon Bölmesinin "Ag" veya "Tox" kısmında test çizgisi görülmediğinde
(Şekil 1c). Antijen kısmında negatif sonuç alınması C. difcile antijeninin bulunmadığını ya da test
saptama seviyesinin altında olduğunu gösterir. Toksin kısmında negatif sonuç alınması C. difcile
toksininin bulunmadığını ya da test saptama seviyesinin altında olduğunu gösterir.
6. Geçersiz Sonuç: Reaksiyon Bölmesinde görünür çizgi olmaması (Şekil 1d). Reaksiyon süresinin
sonunda "C" bölümünün alt kısmında mavi kesik çizgi olmadığında, test sonucu geçersizdir (Şekil
1e, 1f, 1g).
7. Negatif Antijen (“Ag”), Pozitif Toksin (“Tox”): Çok az örnekte, antijen testi negatif çıkabilirken,
toksin testi pozitif olabilir. Bu örnekler, belirsiz olarak değerlendirilmeli ve taze bir örnek kullanılarak
test yinelenmelidir (Şekil 1h). Yeniden yapılan testte de antijen sonucu negatif, toksin sonucu pozitif
olduğunda, bu durumu pozitif toksin sonucu olarak rapor edilmelidir.
ŞEKİL 1: C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE® SONUÇLARIN YORUMLANMASI
Şekil 1a
Pozitif Antijen Sonucu
Şekil 1b
Pozitif Antijen
ve Toksin Sonucu
Şekil 1c
Negatif Sonuç
TR
77
Page 79
Şekil 1d
Geçersiz Sonuç
Şekil 1g
Sonuç
KALİTE KONTROLÜ
Dahili: Test edilen tüm Membran Cihazlarında, Reaksiyon Bölmesinin ortasında “C” kısmında kesik mavi
bir çizgi görülmelidir. Mavi kontrol çizgileri, örnek ve ayıraçların doğru şekilde eklendiğini, ayıraçların test
sırasında aktif olduğunu ve örneğin Membran Cihazı boyunca düzgün şekilde dağıldığını doğrular. Aynı
zamanda, test ile ilişkili diğer ayıraçların reaktiiğini de doğrular. Sonuç alanının arka planının eşbiçimli
olması, dahili negatif kontrol olarak görülür. Test doğru şekilde yapılmışsa ve ayıraçlar doğru şekilde
çalışıyorsa, arka plan görülebilir bir sonuç verecek şekilde beyaz olacaktır.
Harici:C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE® kitinin reaktiiği, teslimat sonrasında Pozitif Kontrol ve negatif
kontrol (Seyreltici) kullanılarak doğrulanmalıdır. Pozitif Kontrol kit ile birlikte verilmektedir (gri kapaklı şişe).
Pozitif Kontrol test ile ilişkili diğer ayıraçların reaktiiğini test eder ve analitik test geçirimi hassaslığını
sağlamak üzere tasarlanmamıştır. Seyreltici negatif kontrol için kullanılır. Yerel, devlet ve/veya federal
yönetmelikleri ve/veya akreditasyon kurumlarının gerekliliklerini karşılamak için ilave testler yapılabilir.
SINIRLAMALAR
1. C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE® testi, dışkı örneklerinde C. difcile antijen ve toksinlerinin saptanması
için kullanılır. Test, dışkıdaki toksin varlığını doğrular ve bu bilgi, doktor tarafından hastanın klinik geçmişi
ve ziksel muayene sonuçlarının ışığında yorumlanmalıdır. C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE®testi,
şu seviyelerde saptama yapacaktır: A toksini: ≥0,63 ng/mL, B toksini: ≥0,16 ng/mL, ve glutamat
dehidrojenaz: ≥0,8 ng/mL.
2. Dışkı örnekleri son derece komplekstir. C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE® testinden en iyi sonuçları
almak için en geç 24 saat içerisinde toplanmış örneklerin kullanılması gerekmektedir. Birçok
seyreltilmemiş örnek, toksinde büyük oranda bozunma görünmeden 2°C ila 8°C arası sıcaklıkta
72 saat saklanabilir. Örnekler bu süre içerisinde test edilmediğinde, dondurulabilir ya da çözülebilir.
Ancak, dondurma ve çözme işlemleri arka arkaya gerçekleştirildiğinde antijen ile A ve B toksinleri
immünreaktivitesinde kayıp olabilir.
3. Bazı örnekler zayıf reaksiyon verebilir. Bu birkaç faktörden kaynaklanıyor olabilir; düşük antijen ve/
veya toksin seviyeleri , bağlayıcı maddelerin bulunması veya dışkıda inaktive edici enzimler olması.
Çizgiler yoğunluğa bağlı olarak açık veya koyu olarak görüntülenebilir. Kısmi bile olsa herhangi bir
mavi çizgi gözlemlendiğinde, bu örnekler pozitif olarak rapor edilmelidir. Net bir kısmi mavi çizgi
pozitif sonuç olarak yorumlanır.
78
Şekil 1e
Geçersiz Sonuç
Şekil 1h
Yorum için bkz. #7
TR
Şekil 1f
Geçersiz Sonuç
4. %10 Formalin, mertiolat formalin, sodyum asetat formalin ya da polivinil alkolde saklanan dışkı
örnekleri kullanılamaz.
5. C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE® testi nitel bir testtir. Rengin yoğunluğu nicel olarak
yorumlanmamalıdır.
6. İmmünolojik olarak ilgili toksinlerin üretimi nedeniyle C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE® testinde C.
sordellii reaktivitesi de görülebilir (1).
7. Bebeklerde %50'ye kadar kolonizasyon oranı rapor edilmiştir. Kistik broz hastalarında da yüksek
bir oran rapor edilmiştir (1, 3). Bu gruplarda, sonuçlar pozitif görülebilir ancak testler kolonize taşıyıcı
olma potansiyeli çerçevesinde değerlendirilmelidir.
8. C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE® testi toksin bölümünde reaksiyon gösteren tek C. difcile dışı
organizma Clostridium sordellii VPI 9048'dir. Bu tür, sırasıyla A ve B toksinleri ile homolog olan HT
ve LT toksinlerini üretir.
9. Kolonik yıkama, baryum lavmanı, laksatier ya da bağırsak preparatlarının C. DIFF QUIK CHEK
COMPLETE® testi performansına etkisi ile ilgili herhangi bir veri bulunmamaktadır. Bu prosedürler
aşırı seyreltmeye ya da örnekte test performansını etkileyebilecek katkı maddelerinin bulunmasına
neden olabilir.
BEKLENEN DEĞERLER
Clostridium difcile hastalığı, temel olarak yaşlı hastalarda görülen nosokomiyal bir hastalıktır ve bu
hastalığın görülme sıklığı hasta nüfusu, kurum türü ve epidemiyoloji gibi faktörlere bağlıdır. Antibiyotik
ilişkili diyaresi olan hastalarda rapor edilmiş olan C. difcile hastalığı oranı %5 ile 20 arasındadır ve
hastanelerde bu oranlardan daha düşük ya da yüksek oranlar görülebilir. Bazı sağlıklı yetişkinler ile
büyük miktarda sağlıklı bebekte (%50'ye kadar) C. difcile toksini pozitif sonuç verebileceğinden,
test sonuçlarının klinik semptomlar ile birlikte değerlendirilmesi önemlidir. Buna ek olarak, kistik
broz hastalarında %22 ila %32 arası bir C. difcile taşıyıcı oranı olduğu rapor edilmiştir (1,3). Bu
cihaz için gerçekleştirilen ve semptom gösteren hastalar üzerinde yürütülen çalışmalarda A ve B
toksinlerine rastlanma oranı %12, GDH oranı ise %18'dir. C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE® testinin
antijen bölümünde alınan pozitif sonuç, dışkı örneğinde C. difcile bulunduğunu, negatif sonuç ise bu
organizmanın bulunmadığını gösterir. C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE® testinin toksin bölümünde alınan
pozitif sonuç, dışkı örneğinde C. difcile bulunduğunu, negatif sonuç ise toksin bulunmadığını ya da toksin
düzeyinin saptama için yetersiz olduğunu gösterir.
PERFORMANS ÖZELLİKLERİ
C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE® testinin antijen bölümünün klinik değerlendirmesi
C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE® testinin antijen bölümünün bakteri kültürü ile karşılaştırılması.
Değerlendirmeye dahil edilen örnekler, rutin test için klinik laboratuvara gönderilmiştir. Kurum içi
prosedürlere uygun şekilde bakteri kültürü testi yapılmıştır. Sonuçlar Tablo 1'de gösterilmektedir.
Tablo 1. C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE® testinin bakteri kültürü ile karşılaştırmasına yönelik
klinik performans özeti
n = 1126
C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE
Antijen Çizgisi Pozitif
C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE
Antijen Çizgisi Negatif
Bakteri Kültürü
Pozitif
®
®
201 62
21 842
Bakteri Kültürü
Negatif
Page 80
%95 Güvenilirlik Sınırı
Hassasiyet 90,5% 85,7 – 93,9
Özgüllük 93,1% 91,2 – 94,7
Pozitif Belirleyicilik Değeri 76,4% 70,7 – 81,3
Negatif Belirleyicilik Değeri 97,6% 96,2 – 98,4
Korelasyon 92,6% 91,8 – 93,4
Farklı örnekler güncel ELISA testleri kullanılarak C. difcile glutamat dehidrojenaz için
değerlendirilmiştir.
62 yalancı pozitif örneğin yirmi dokuzu, başka bir GDH testinde de pozitif sonuç vermiş ve gerçek
pozitif olarak değerlendirilmiştir.
21 yalancı negatif örneğin on üçü başka bir GDH testinde de negatif sonuç vermiş ve gerçek
negatif olarak değerlendirilmiştir.
C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE® testinin antijen bölümü, C. difcile toksini saptaması için doku
kültürü testi ile karşılaştırılmıştır. Değerlendirmeye dahil edilen örnekler, rutin test için klinik laboratuvara
gönderilmiştir. Sonuçlar Tablo 2'de verilmiştir. C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE® testinin antijen
bölümünde doku kültürü-pozitif örneklerinin %98,7'si algılanmıştır.
Tablo 2. C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE® testinin doku kültürü testi ile karşılaştırmasına
C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE® testinin toksin bölümünün klinik değerlendirmesi
C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE® testinin toksin bölümü iki klinik laboratuvarda ve TECHLAB, Inc'de
kurum içinde doku kültürü testi ile karşılaştırılmıştır. Bu değerlendirmeye dahil edilen örnekler, rutin testler
için klinik laboratuvarlara gönderilmiştir. Sonuçlar Tablo 3'de gösterilmektedir.
yönelik klinik performans özeti
n = 1126
C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE
Antijen Çizgisi Pozitif
C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE
Antijen Çizgisi Negatif
Doku Kültürü
Pozitif
®
®
154 109
2 861
Doku Kültürü
Negatif
Tablo 3. C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE® testinin doku kültürü testi ile karşılaştırmasına
yönelik klinik performans özeti
n = 1126
C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE
Toksin Çizgisi Pozitif
C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE
Toksin Çizgisi Negatif
Doku Kültürü
Pozitif
®
®
137 6
19 964
Doku Kültürü
Negatif
%95 Güvenilirlik Sınırı
Hassasiyet 87,8% 81,4 - 92,3
Özgüllük 99,4% 98,6 - 99,7
Pozitif Belirleyicilik Değeri 95,8% 90,7 - 98,3
Negatif Belirleyicilik Değeri 98,1% 96,9 - 98,8
Korelasyon 97,8% 97,6 - 98,0
Farklı örnekler güncel ELISA testleri kullanılarak A ve B toksinleri için test edilmiştir.
6 adet yalancı pozitif örnekten beşi ELISA ile pozitif sonuç vermiş ve gerçek pozitif olarak
değerlendirilmiştir.
19 yalancı negatif örneğin on ikisi ELISA testinde de negatif sonuç vermiş ve gerçek negatif olarak
değerlendirilmiştir.
DIŞKI ÖRNEĞİ KIVAMININ ETKİSİ
Dışkı örneği kıvamının C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE® üzerindeki etkisi
C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE® testinin antijen bölümünde (n=978) ve toksin bölümünde (n=981) farklı
kıvamlardaki dışkı örneklerinin reaksiyonları Tablo 4 ve 5'te verilmiştir. Kültür testi ya da C. DIFF QUIK
CHEK COMPLETE® testi kullanılarak elde edilen pozitif reaksiyon yüzdeleri üç tür dışkı örneğinde de
(sıvı, yarı katı ve katı) benzerdir. Tüm örnekler C. difcile testi için gönderilmiştir. Gönderi sırasında örnek
kıvamı değil, hasta geçmişi temel alınmıştır. Antijen bölümünde, sonuçlar, farklı kıvamlarda örnekler test
edilirken C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE® testinin bakteri kültüründe de benzer şekilde performans
gösterdiğini ortaya çıkarmıştır. Toksin bölümünde, sonuçlar, farklı kıvamlarda örnekler test edilirken C.
DIFF QUIK CHEK COMPLETE® testinin doku kültürü testinde de benzer şekilde performans gösterdiğini
ortaya çıkarmıştır.
TR
79
Page 81
Tablo 4. C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE® testinin antijen bölümünde farklı kıvamda
Tablo 5. C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE® testinin toksin bölümünde farklı kıvamda dışkı
ANALİTİK HASSASİYET
Test geçirimi A toksini için 0,63 ng/mL, B toksini için 0,16 ng/mL ve glutamat dehidrojenaz için 0,8 ng/mL
konsantrasyonda olacak şekilde belirlenmiştir.
TEKRARLANABİLİRLİK
C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE® testinin tekrarlanabilirliği, test sırasında tanımlanmamak üzere
kodlanmış 12 adet dışkı örneği kullanımını içermektedir. Test, örnekleri 3 gün boyunca test eden 3 adet
bağımsız laboratuvarda gerçekleştirilmiştir. Örnekler, %100 oranda beklenen sonuçları vermiştir.
ÇAPRAZ REAKSİYON
Nihai konsantrasyon olarak yaklaşık 108 ya da daha yüksek değerde bulunmak şartıyla, aşağıdaki
organizasyonlarla aşılanmış olan dışkı örnekleri, C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE® testinin antijen ya da
toksin bölümünde reaksiyona girmemiştir:
dışkı örneklerinin reaksiyonu
Örnek sayısı
(n = 978)
Bakteri kültürü testinde
pozitif
C. DIFF QUIK CHEK
COMPLETE
Antijen Çizgisi Pozitif
Bakteri kültürü testinde
negatif
C. DIFF QUIK CHEK
COMPLETE
Antijen Çizgisi Negatif
Doku kültürü testinde pozitif 43 (12,8%) 81 (15,5%) 8 (6,6%)
C. DIFF QUIK CHEK
COMPLETE
Toksin Çizgisi Pozitif
Doku kültürü testinde
negatif
C. DIFF QUIK CHEK
COMPLETE
Toksin Çizgisi Negatif
®
®
örneklerinin reaksiyonu
Örnek sayısı
(n = 981)
®
®
Sıvı Örnekler
(n = 335)
59 (17,6%) 110 (21,1%) 19 (15,7%)
72 (21,5%) 128 (24,5%) 25 (20,7%)
276 (82,4%) 412 (78,9%) 102 (84,3%)
263 (78,5%) 394 (75,5%) 96 (79,3%)
Sıvı Örnekler
(n = 336)
42 (12,5%) 72 (13,8%) 7 (5,7%)
293 (87,2%) 442 (84,5%) 114 (93,4%)
294 (87,5%) 451 (86,2%) 115 (94,3%)
Yarı-katı
Örnekler (n = 522)
Yarı-katı
Örnekler (n = 523)
Katı Örnekler
(n = 121)
Katı Örnekler
(n = 122)
Bakteri veya Patojen: Aeromonas hydrophila, Bacillus cereus, Bacillus subtilis, Bacteroides fragilis,
Campylobacter coli, Campylobacter fetus, Campylobacter jejuni, Candida albicans, Clostridium
butyricum, Clostridium clostridiforme, Clostridium haemolyticum, Clostridium histolyticum, Clostridium
novyi, Clostridium perfringens, Clostridium septicum, Clostridium sordellii (toksijen olmayan), Clostridium
sporogenes, Enterobacter aerogenes, Enterobacter cloacae, Enterococcus faecalis, Escherichia coli
EIEC, Escherichia coli, Escherichia coli O157:H7, Escherichia coli ETEC, Klebsiella pneumoniae,
Peptostreptococcus anaerobius, Proteus vulgaris, Pseudomonas aeruginosa, Salmonella typhimurium,
Serratia liquifaciens, Shigella dysenteriae, Shigella exneri, Shigella sonnei, Staphylococcus aureus,
Staphylococcus aureus (Cowans), Staphylococcus epidermidis, Vibrio cholerae, Vibrio parahaemolyticus,
Yersinia enterocolitica
C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE® testi toksin bölümünde reaksiyon gösteren tek C. difcile dışı
organizma Clostridium sordellii VPI 9048'dir. Bu tür, sırasıyla A ve B toksinleri ile homolog olan HT ve LT
toksinlerini üretir.
0,2 mL'de 10
COMPLETE® testinde reaksiyona girmemiştir:
Virüsler: Adenovirüs türleri 1, 2, 3, 5, 40, 41, İnsan koronavirüsü, Koksakivirüs B2, B3, B4, B5, Ekovirüs
9, 11, 18, 22, 33, Enterovirüs türleri 68, 69, 70, 71, Rotavirüs.
ETKİLEŞEN MADDELER
Dışkıda aşağıda belirtilen konsantrasyonlarda bulunduğunda, test sonuçları üzerinde etkisi olmayan
maddeler (A.B.D. formülasyonu) aşağıda verilmiştir: musin (%3,5 w/v), insan kanı (%40 v/v), baryum
sülfat (%5 w/v), Imodium® (%5 v/v), Kaopectate® (%5 v/v), Pepto-Bismol® (%5 v/v), sterik/palmitik asit
(%40 w/v), Metronidazol (%0,25 w/v), Vankomisin (%0,25 w/v).
3,3
8,25
ila 10
TCID biriminde görülme şartıyla, aşağıdaki virüsler C. DIFF QUIK CHEK
SİKLOSERİN-SEFOKSİTİN-FRUKTOZ AGAR (CCFA) İLE ELDE EDİLEN
KLİNİK İZOLATLARIN REAKSİYONU
37°C sıcaklıkta CCFA üzerinde anaerobik bakteri kültürü testi yapılmasından 3 gün sonra elde edilen
toplam 103 C. difcile klinik izolatı C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE® testi ile test edilmiştir. Analiz için,
dışkı örnekleri için önerilen şekilde bağımsız koloniler seçilmiş ve Seyrelticide bekletilmiştir. 103 izolatın
tümü teste pozitif antijeni reaksiyonu vermiştir.
103 izolatın yetmişi (%68) doku kültürü testinde C. difcile toksini için pozitif sonuç veren dışkı örneklerine
aittir. Bunların 56 tanesi (%80) 3 gün boyunca 37°C'de CCFA üzerinde gerçekleşen anaerobik büyüme
sonrasında değerlendirildiğinde pozitif toksin reaksiyonu vermiştir.
80
TR
Page 82
TECHLAB® C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE
G
REAGSUBS
ENZCONJ
IVD
НАЗНАЧЕНИЕ
Анализ TECHLAB® C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE® – это мембранный иммуноферментный экспрессанализ, предназначенный для одновременного обнаружения антигенов глутаматдегидрогеназы и
токсинов А и В Clostridium difcile в одной реакционной лунке. Анализ позволяет обнаружить антиген
C. difcile – глутаматдегидрогеназу, что дает возможность подтвердить присутствие бактерий C. difcile.
Кроме того, анализ позволяет подтвердить наличие токсикогенных бактерий C. difcile, выявляя токсины
А и В в пробах фекалий, взятых у людей, которые, возможно, имеют заболевания, вызванные C. difcile.
Анализ должен использоваться как вспомогательное средство при диагностике заболеваний, вызванных
C. difcile. Как и для других анализов C. difcile, результаты анализа должны интерпретироваться с учетом
истории болезни пациента.
ОПИСАНИЕ
После лечебного курса с использованием антибиотиков у многих пациентов возникают проблемы с
желудочно-кишечным трактом: это может быть как непродолжительная диарея, так и тяжелые формы
псевдомембранозного колита. Многие случаи легких форм заболеваний желудочно-кишечного тракта и
большинство случаев псевдомембранозного колита вызываются токсикогенными штаммами Clostridium
difcile (1). Этот организм является оппортунистической анаэробной бактерией, которая размножается
в кишечнике, если нормальная флора изменяется под влиянием антибиотика. Токсикогенные штаммы
C. difcile имеют гены, которые обусловливают выработку токсинов, в то время как нетоксикогенные
штаммы не имеют таких генов. Начало заболевания связано с токсинами, которые вырабатываются
токсикогенным организмом. Считается, что клинические симптомы данного заболевания прежде всего
вызываются токсином А – энтеротоксином, который повреждает ткани (2,3). Бактерии C. difcile также
вырабатывают второй вид токсина – токсин В. Токсин В, который называют цитотоксином организма, –
это токсин, который обнаруживается с помощью анализа тканевой культуры, используемого во
многих лабораториях. Токсикогенные штаммы C. difcile могут вырабатывать оба токсина или только
токсин В (4–7). Глутаматдегидрогеназа C. difcile – это качественный антиген-маркер для организма в
фекалиях, так как он вырабатывается в больших количествах всеми штаммами: как токсикогенными, так
нетоксикогенными (8–10). Антиген можно обнаружить в пробах фекалий с помощью анализа C. DIFF
QUIK CHEK COMPLETE®. Положительный результат анализа на наличие глутаматдегидрогеназы C.
difcile подтверждает присутствие этого организма в пробе фекалий; отрицательный результат указывает
на отсутствие этого организма. Положительный результат теста на наличие токсинов А и В подтверждает
присутствие токсикогенных штаммов C. difcile.
ПРИНЦИП ДЕЙСТВИЯ АНАЛИЗА
В анализе C. DIFF QUIK CHECK COMPLETE® используются антитела, специфичные для
глутаматдегидрогеназы и токсинов А и В штаммов C. difcile. Устройство включает окно реакции с тремя
линиями неподвижных антител. Тестовая линия антигена («Ag») содержит антитела к глутаматдегидрогеназе
C. difcile. Контрольная линия («С») – это пунктирная линия, которая содержит антитела пероксидазы хрена
(HRP). Тестовая линия токсинов А и В («Tox») содержит антитела к токсинам А и В C. difcile. Конъюгат
содержит антитела к глутаматдегидрогеназе и антитела к токсинам А и В, которые соединены с молекулами
пероксидазы хрена. Для проведения анализа проба добавляется в пробирку, содержащую смесь
растворителя и конъюгата. Растворенная смесь пробы и конъюгата добавляется в лунку для пробы, после
чего устройство необходимо оставить на 15 минут, чтобы произошла инкубация при комнатной температуре.
В ходе инкубации молекулы глутаматдегидрогеназы и токсинов А и В в пробе связываются с конъюгатами
антител и пероксидазы. Комплексы антиген-антитело-конъюгат проникают через фильтровальную ткань
и попадают на мембрану, где они захватываются неподвижными антителами в линиях, специфичными к
глутаматдегидрогеназе и токсинам А и В. Затем окно реакции промывается с использованием буферного
раствора для промывания, после чего добавляется субстрат. После 10-минутного инкубационного периода
реакция «Ag» проверяется визуально: на стороне «Ag» окна реакции должна появиться вертикальная
голубая линия. Появление голубой линии указывает на положительный результат анализа. Если результат
анализа «Ag» положительный, необходимо визуально проверить реакцию «Tox»: на стороне «Tox» окна
реакции должна появиться голубая линия. Появление голубой линии указывает на положительный результат
анализа. Положительная реакция «С», на которую указывает вертикальная голубая линия в области «С»
окна реакции подтверждает, что анализ выполнен правильно и результаты являются достоверными.
®
ПРЕДОСТАВЛЕННЫЕ МАТЕРИАЛЫ
Мембранные устройства – каждая упаковка содержит 1 устройство
DEV
Растворитель (флакон, 22 мл) – буферный белковый раствор
с градуированной пипеткой (содержит 0,05 % ProClin® 300)*
H412: Вредный для водных организмов с долговременными последствиями
Буферный раствор для промывания (флакон, 12 мл) – буферный раствор
REA
WASH
Одноразовые пластиковые пипетки – с градуированной шкалой 25 мкл, 100 мкл, 200 мкл, 300 мкл,
400 мкл и 500 мкл
*Сигнальное слово: Предупреждение
H317: Может вызывать аллергическую кожную реакцию
P261, P272, P280, P302, P352, P333, P313, P321, P362, P364, P501
с градуированной пипеткой (содержит 0,05 % ProClin® 300)*
H412: Вредный для водных организмов с долговременными последствиями
Субстрат (флакон, 3,5 мл) – раствор тетраметилбензидина
Конъюгат (флакон, 2,5 мл) – антитела к глутаматдегидрогеназе,
соединенные с молекулами пероксидазы хрена, и антитела к токсинам А и В,
соединенные с молекулами пероксидазы хрена, в буферном белковом
растворе (содержит 0,05 % ProClin® 300)*
Положительный контрольный образец (2 мл) – антиген в буферном
белковом растворе
Для диагностики in vitro
НЕОБХОДИМЫЕ МАТЕРИАЛЫ И ОБОРУДОВАНИЕ, НЕ ВКЛЮЧЕННЫЕ В
КОМПЛЕКТ ПОСТАВКИ
Тестовые пробирки небольшого размера (например, пластиковые пробирки для микроцентрифуги
или стеклянные пробирки)
Палочки-тампоны Таймер Вихревый смеситель
Одноразовые перчатки для работы с пробами фекалий Пипеттор и насадки
СРОКИ И УСЛОВИЯ ХРАНЕНИЯ
Срок годности набора указан на наклейке и составляет 24 месяца после даты производства. Сроки
годности каждого компонента указаны на отдельных наклейках. Набор должен храниться при
температуре 2–8 °C. Набор и все компоненты сохраняют стабильность в течение указанного срока
годности после первого открытия упаковки при условии хранения при температуре 2–8 °С. Прежде чем
использовать, подождите, пока все компоненты нагреются до комнатной температуры. Набор будет
сохранять стабильность при комнатной температуре в течение последующих 8-часовых рабочих смен,
при условии что он возвращается в холодильник между сменами.
МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ
1. Только для диагностики in vitro. Только для профессионального использования.
2. Не следует смешивать реагенты из различных наборов или брать реагенты из различных наборов.
Не используйте набор, если его срок годности истек.
3. Осмотрите каждый компонент набора на наличие утечек. После получения осмотрите
набор, чтобы убедиться, что компоненты не замерзли и не являются теплыми на ощупь из-за
неправильных условий транспортировки.
4. Крышки, насадки и пипетки помечаются различными цветами; НЕ путайте их и НЕ меняйте их!
RU
81
Page 83
5. Не замораживайте реагенты. Набор должен храниться при температуре 2–8 °C.
25 μL100 μL200 μL300 μL400 μL500 μL
6. Упаковка с мембранным устройством должна иметь комнатную температуру, прежде чем ее
можно будет открыть. Мембранные устройства должны быть сухими перед использованием.
7. Пробы фекалий должны использоваться в течение 72 часов после забора пробы, чтобы
обеспечить оптимальные результаты. Замерзшие пробы могут утратить активность из-за
замерзания и последующего размораживания. В случае использования замороженных образцов
дождитесь, пока они нагреются до комнатной температуры.
8. Держите флакон с реагентом вертикально, чтобы обеспечить одинаковый размер капель и
набрать необходимый объем реагента.
9. Пробы и мембранные устройства должны обрабатываться и утилизироваться после использования
как источники потенциальной биологической опасности.
10. Запрещается повторно использовать мембранные устройства.
11. Данный анализ был оптимизирован с точки зрения чувствительности и специфичности.
Отклонения от указанной процедуры и/или условий проведения анализа могут повлиять на
чувствительность и специфичность анализа. Не отклоняйтесь от указанной процедуры.
12. Если анализируется несколько проб фекалий, контролируйте общее время анализа. Сначала
добавьте растворитель, затем добавьте конъюгат в каждую пробирку с растворителем.
Затем добавьте пробу в пробирку с растворителем и конъюгатом. Тщательно перемешайте все
растворенные пробы и поместите их в мембранное устройство. 15-минутный инкубационный
период начинается после того, как последняя смесь с раствором пробы и конъюгата помещена в
мембранное устройство.
13. Если цвет реагента субстрата меняется на синий или фиолетовый, свяжитесь со службой
технической поддержки, чтобы произвести замену.
14. Пробы фекалий могут содержать потенциально инфекционные агенты, и манипуляции с ними
должны производиться в соответствии с требованиями «Уровня биологической опасности 2», как
рекомендовано в Руководстве CDC/NIH «Биологическая безопасность в микробиологических и
биомедицинских лабораториях».
15. При выполнении анализа необходимо надевать одноразовые перчатки.
16. Реагенты Конъюгат, Растворитель и Буферный раствор для промывания содержат 0,05 %
ProClin® 300 в качестве консерванта. Хотя его концентрация мала, ProClin® 300 является
известным вредным веществом (может раздражать кожу). В случае повышения чувствительности/
появления на коже раздражения или сыпи обратитесь к медицинскому специалисту. Снимите
загрязненную одежду и постирайте ее, прежде чем одевать снова. Работа с реагентами должна
проводиться в соответствии с действующими требованиями техники безопасности в лаборатории
и надлежащими лабораторными практиками. Паспорта безопасности для данного продукта
предоставляются по запросу, обратитесь в службу технической поддержки..
17. Следуйте правилам утилизации отходов, которые действуют в вашей стране, регионе и местности.
18. Уведомляйте о любых серьезных инцидентах TECHLAB и ответственные органы власти в
государстве-участнике ЕЭЗ, где находится пользователь и/или пациент.
ЗАБОР ПРОБ ФЕКАЛИЙ, ОБРАЩЕНИЕ С НИМИ И ХРАНЕНИЕ
Приемлемые типы проб Запрещено использовать
Свежие пробы фекалий
Замороженные пробы фекалий
Пробы в транспортной среде (Cary Blair, C&S)
Пробы фекалий, выдержанные в формалиновом
фиксаторе (например, формалин с ацетатом натрия,
раствор формалина 10 %, формалин с мертиолятом)
Пробы фекалий, выдержанные в спиртовом фиксаторе
(например, поливиниловый спирт)
Хранение проб
Температура
2–8 °C 72 часа
Замороженные ≤ –10 °C Более чем 72 часа
1. Допускается использовать стандартные процедуры забора пробы и методы обращения, которые
используются в лаборатории для работы с пробами фекалий.
2. Пробы фекалий должны храниться в чистых и герметичных контейнерах.
3. НЕ РЕКОМЕНДУЕТСЯ хранить пробы фекалий в растворителе.
4. Не допускайте, чтобы пробы фекалий находились в смеси растворителя и конъюгата в течение
более чем 24 часов.
ПОДГОТОВКА ПРОБЫ
1. Дождитесь, пока все реагенты и необходимое количество устройств нагреются до комнатной
температуры, прежде чем их использовать. Рекомендуется извлечь реагенты из пенопластового
вкладыша, чтобы они могли быстрее нагреться до комнатной температуры.
2. Подготовьте и промаркируйте по одной небольшой тестовой пробирке для каждой пробы и для
дополнительных внешних контрольных образцов, если необходимо.
3. Используя черную градуированную пипетку, добавьте 750 мкл (2-е деление от кончика) растворителя
в каждую пробирку для проб фекалий. Для проб в транспортных средах, таких как Cary Blair или
C&S, добавьте 650 мкл (1-я градуированная полоска от кончика) растворителя в пробирку.
Допустимый срок
хранения
Комментарии
Идеальные пробы должны быть взяты не более
чем за 24 часа до анализа
Дождитесь, пока проба нагреется до комнатной
температуры. Многократное замораживание
и размораживание может привести к утрате
активности пробы из-за разрушения токсинов.
Тип пробы Объем растворителя
Свежие пробы фекалий 750 мкл (2-е деление от кончика)
Замороженные пробы фекалий
(замороженные, без растворителя)
Пробы в транспортной среде
(Cary Blair, C&S)
Внешние контрольные пробы
(положительная и отрицательная)
4. Добавьте по одной капле конъюгата (флакон с красной крышкой) в каждую пробирку.
5. Используйте одну одноразовую пластиковую пипетку (входит в комплект поставки) для каждой
пробы. Каждая пипетка имеет градуировку с делениями 25 мкл, 100 мкл, 200 мкл, 300 мкл, 400 мкл
и 500 мкл.
750 мкл (2-е деление от кончика)
650 мкл (1-я градуированная полоска от
кончика)
750 мкл (2-е деление от кончика)
750
650
µL
Градуированная пипетка:
82
RU
6. Тщательно перемешайте все пробы независимо от консистенции. Важно, чтобы проба
образовала однородную суспензию, прежде чем переносить ее.
Жидкие/полужидкие пробы – наберите 25 мкл пробы в пипетку и поместите пробу в смесь
растворителя и конъюгата. Используя ту же пипетку, перемешайте растворенную пробу.
Page 84
Затвердевшие/плотные пробы – необходимо добавить правильное количество затвердевших фекалий в
смесь с пробой. Тщательно перемешайте пробу, используя деревянную палочку-тампон, и переместите
небольшую часть (диаметром приблизительно 2 мм, эквивалент 25 мкл) пробы в смесь растворителя и
конъюгата. Измельчите пробу с помощью палочки-тампона.
Пробы фекалий в транспортной среде Cary Blair или C&S – добавьте 100 мкл (2-я градуированная
полоска от кончика) пробы в смесь растворителя и конъюгата.
7. Дополнительные пробы для внешнего контроля:
Положительный контрольный образец для внешнего контроля – добавьте одну каплю
положительного контрольного образца (флакон с серой крышкой) в смесь растворителя и
конъюгата.
Отрицательный контрольный образец для внешнего контроля – добавьте 25 мкл растворителя в
смесь растворителя и конъюгата.
ПРИМЕЧАНИЕ. Если добавлено слишком маленькое количество пробы или не удалось размешать и
добиться однородной суспензии пробы в смеси растворителя и конъюгата, это может привести
к неверному отрицательному результату анализа. Если добавлено слишком большое количество
пробы фекалий, могут быть получены неправильные результаты из-за ограниченного тока пробы.
ПРОЦЕДУРА АНАЛИЗА
1. Подготовьте одно мембранное устройство на пробу и одно устройство на каждый дополнительный
положительный или отрицательный образец для внешнего контроля, если необходимо. Упаковка
из фольги, в которой находятся устройства, должна нагреться до комнатной температуры, прежде
чем можно будет ее использовать. Используйте устройство сразу же после раскрытия упаковки.
Промаркируйте каждое устройство соответствующим образом и расположите его на плоской
поверхности таким образом, чтобы надпись «C. DIFF COMPLETE» находилась внизу устройства, а
небольшая лунка для пробы – в верхнем правом углу устройства.
Мембранное устройство Лунка для пробы
Окно реакции
2. Закройте каждую пробирку с растворенной пробой и тщательно перемешайте содержимое.
Для этого достаточно несколько раз перевернуть пробирку или сделать ею несколько круговых
движений. После того как проба пациента или положительный контрольный образец
растворились в смеси растворителя и конъюгата, необходимо оставить ее на некоторое время
(до 24 часов) для инкубации при комнатной температуре, прежде чем добавлять в мембранное
устройство.
3. Используя новую пипетку, перенесите 500 мкл растворенной смеси пробы и конъюгата в лунку
для пробы (углубление меньшего размера в верхнем правом углу устройства) мембранного
устройства: жидкая проба должна попасть на капиллярную прокладку в мембранном
устройстве. При добавлении пробы в лунку убедитесь, что кончик пипетки наклонен в
направлении окна реакции (более крупное углубление в центре устройства). .
4. Обеспечьте инкубацию в устройстве при комнатной температуре по крайней мере в течение 15
минут: проба за счет капиллярного эффекта проникнет через устройство, и влажный участок
достигнет окна реакции.
УБЕДИТЕСЬ, ЧТО ВПИТЫВАНИЕ ПРОБЫ ПРОИЗОШЛО:
Иногда растворенная проба не впитывается надлежащим образом, и окно реакции не
увлажняется полностью. Если окно реакции не увлажняется полностью в течение 5 минут
после добавления пробы в лунку, добавьте 100 мкл (4 капли) растворителя в лунку для пробы и
подождите еще 5 минут (всего 20 минут).
5. После инкубации добавьте 300 мкл буферного раствора для промывания в окно реакции,
используя градуированную пипетку с белым колпачком. Буферный раствор для промывания
должен пройти через мембрану окна реакции и полностью впитаться.
6. Добавьте 2 капли субстрата (флакон с белым колпачком) в окно реакции. Осмотрите окно и
запишите результаты визуального осмотра через 10 минут.
ИНТЕРПРЕТАЦИЯ РЕЗУЛЬТАТОВ
1. Интерпретация анализа наиболее достоверна, когда показания устройства прочитываются сразу же
после завершения 10-минутного периода реакции. Осмотрите устройство на стандартном рабочем
расстоянии в хорошо освещенном помещении. Необходимо смотреть на устройство сверху.
2. Убедитесь, что на устройстве по центру окна реакции отображаются голубые точки, которые указывают
на результат внутреннего положительного контрольного образца. Появление контрольных точек
показывает, что внутренний контроль был выполнен надлежащим образом. Фон может иметь белый
цвет или слегка голубоватый. Осмотрите устройство на наличие голубых линий на участках «Ag» и
«Tox» в окне реакции, где находятся тестовые линии. Линии могут иметь различную интенсивность
окраски: от легкого оттенка до темного цвета.
3. Положительный результат антигена («Ag»): Положительный результат антигена может быть
определен в любой момент времени между добавлением субстрата и временем считывания
результатов (10 минут). При положительном результате антигена отображается голубая линия «Ag»
и голубая пунктирная контрольная линия под надписью «С» (Рис. 1а). Линии могут иметь различную
интенсивность окраски: от легкого оттенка до темного цвета. Явная частичная линия интерпретируется
как положительный результат. Не следует интерпретировать изменение цвета мембраны как
положительный результат. Положительный результат указывает на присутствие штаммов C. difcile.
4. Положительный результат антигена и токсина («Tox»): Если результат антигена положительный
(т. е. отображается голубая линия «Ag» и голубая пунктирная контрольная линия «С»), необходимо
проверить результат контроля на наличие токсина. Положительный результат токсина может быть
определен в любой момент времени между добавлением субстрата и временем считывания
результатов (10 минут). При положительном результате токсина отображается голубая линия «Tox»
(Рис. 1б). Линия может иметь различную интенсивность окраски: от легкого оттенка до темного цвета.
Явная частичная линия интерпретируется как положительный результат. Не следует интерпретировать
изменение цвета мембраны как положительный результат. Положительный результат указывает на
присутствие токсина C. difcile.
5. Отрицательный результат: Тест не может интерпретироваться к ак отрицательный или
недействительный, пока не прошло 10 минут после добавления субстрата. Единственная голубая
пунктирная линия отображается в середине окна реакции под надписью «С», при этом тестовые линии
на участках «Ag» или «Tox» в окне реакции отсутствуют (Рис. 1в). Отрицательный результат в области
антигена показывает, что антиген C. difcile отсутствует в пробе или его содержание не превышает
предел детектирования анализа. Отрицательный результат в области токсина показывает, что токсин
C. difcile отсутствует в пробе или его содержание не превышает предел детектирования анализа.
6. Недействительный результат: Линии не отображаются в окне реакции (Рис. 1г). Результат анализа
является недопустимым, если после завершения периода реакции под надписью «С» не отображается
голубая пунктирная линия (Рис. 1д, 1е, 1ж).
7. Отрицательный результат антигена («Ag»), положительный результат токсина («Tox»):
Незначительная доля проб при анализе может давать отрицательный результат для антигена и
положительный для токсина. Такие пробы должны считаться неопределенными, и необходимо повторно
провести анализ, используя свежую пробу (Рис. 1з). Если при повторном анализе будет получен
отрицательный результат для антигена и положительный для токсина, необходимо зарегистрировать
результат как положительный результат для токсина.
RU
83
Page 85
РИС. 1: ИНТЕРПРЕТАЦИЯ РЕЗУЛЬТАТОВ C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE
Рис. 1а
Положительный результат
антигена
Рис. 1г
Недействительный результат
Рис. 1ж
Недействительный результат
КОНТРОЛЬ КАЧЕСТВА
Внутренний: Голубая пунктирная линия должна отображаться по центру окна реакции под надписью
«С» на каждом тестируемом мембранном устройстве. Появление голубой контрольной пунктирной
линии подтверждает, что проба и реагенты были добавлены правильно, что реагенты были активными
на момент выполнения анализа и что проба надлежащим образом попала на мембранное устройство.
Это также подтверждает реактивность других реагентов, связанных с анализом. Однородный фон в
области результата должен рассматриваться как отрицательный результат внутреннего контроля. Если
анализ был выполнен правильно и реагенты прореагировали надлежащим образом, фон должен быть
белым, чтобы обеспечить четкое отображение результатов.
Внешний: Реактивность набора C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE® должна проверяться после
получения с использованием положительного контрольного образца и отрицательного контрольного
образца (растворитель). Положительный контрольный образец входит в комплект поставки набора
(флакон с серой крышкой). Положительный контрольный образец подтверждает реактивность других
реагентов, связанных с анализом, но не обеспечивает точность результатов анализа. Растворитель
используется как отрицательный контрольный образец. Можно выполнить дополнительные тесты,
используя контрольные образцы, которые соответствуют требованиям местных, областных и/или
федеральных норм и требованиям аккредитующих организаций.
Рис. 1б
Положительный результат
антигена и токсина
Рис. 1д
Недействительный результат
Рис. 1з
См. пункт №7 для
интерпретации
®
Рис. 1в
Отрицательный результат
Рис. 1е
Недействительный результат
ОГРАНИЧЕНИЯ
1. Анализ C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE® используется для распознавания антигена и токсинов
C. difcile в пробах фекалий. Анализ позволяет подтвердить наличие токсина в фекалиях,
и эта информация должна учитываться лечащим врачом наряду с историей болезни и
результатами физического осмотра пациента. Анализ C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE® позволяет
распознать токсин А при концентрации ≥ 0,63 нг/мл, токсин В – при концентрации ≥ 0,16 нг/мл и
глутаматдегидрогеназу – при концентрации ≥ 0,8 нг/мл.
2. Пробы фекалий имеют очень сложную структуру. Оптимальные результаты анализа C. DIFF
QUIK CHEK COMPLETE® можно получить для проб, которые были взяты не более чем за 24
часа до анализа. Большинство нерастворенных проб можно хранить при температуре 2–8 °С в
течение 72 часов, после чего начинается значительное разрушение токсина. Если пробы не
были проанализированы в течение этого периода, их можно заморозить и затем разморозить
перед анализом. Однако повторное замораживание и размораживание может привести к утрате
иммунореактивности антигена и токсинов А и В.
3. Для некоторых проб наблюдаются слабые реакции. Это может быть вызвано различными
факторами, такими как низкая концентрация антигена и/или токсина, присутствие связующих
веществ или наличие инактивирующих ферментов в фекалиях. Линии могут иметь различную
интенсивность окраски: от легкого оттенка до темного цвета. Эти пробы должны регистрироваться
как положительные, если отображается любая, даже частичная, линия голубого цвета. Явная
частичная линия голубого цвета интерпретируется как положительный результат.
4. Не разрешается использовать пробы фекалий, которые хранились в 10-процентном растворе
формалина, в формалине с мертиолятом, в формалине с ацетатом натрия или в поливиниловом
спирте.
5. Анализ C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE® является качественным. Интенсивность окраски не
должна интерпретироваться количественно.
6. Некоторые штаммы C. sordellii могут реагировать во время анализа C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE®
в связи с тем, что они вырабатывают иммунологически связанные токсины (1).
7. Для младенцев может регистрироваться уровень колонизации микрофлоры кишечника до 50 %.
Высокий уровень также может регистрироваться для пациентов с муковисцидозом (1,3). В этих
группах результаты могут быть положительными, однако они должны рассматриваться с учетом
возможности быть носителем колоний этих бактерий.
8. Единственный организм, который не относится к C. difcile и дает реакцию в области анализа C.
DIFF QUIK CHEK COMPLETE®, – это штамм Clostridium sordellii VPI 9048. Этот штамм вырабатывает
токсины HT и LT, которые являются гомологичными для токсинов А и В соответственно.
9. Отсутствуют данные, которые говорят о влиянии промывания толстой кишки, бариевой клизмы,
слабительных или подготовки кишечника на результаты анализа C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE®.
Все эти процедуры могут привести к значительному разжижению фекалий или могут вызвать
присутствие добавок, которые могут повлиять на результаты анализа.
ОЖИДАЕМЫЕ ЗНАЧЕНИЯ
Заболевания Clostridium difcile – это в основном нозокомиальные заболевания пациентов престарелого
возраста, и частота этих заболеваний зависит от различных факторов, например от количества пациентов,
типа учреждения и эпидемиологической обстановки. Зарегистрированная частота заболеваний C. difcile
у пациентов с диареей после приема антибиотиков может составлять от 5 % до 20 %, и в больницах
может фиксироваться уровень заболеваемости ниже или выше этого диапазона. Важно рассматривать
результаты анализа с учетом клинических симптомов, так как пробы фекалий некоторых здоровых взрослых
и большого количества здоровых младенцев (до 50 %) дают положительный результат при анализе на
наличие токсина C. difcile. Кроме того, уровень носительства C. difcile в диапазоне от 22 % до 32 % был
отмечен для пациентов с муковисцидозом (1,3). В исследованиях, которые проводились для этого устройства
с участием пациентов с симптомами, уровень присутствия токсинов А и В составил 12 %, а значение
глутаматдегидрогеназы (GDH) – 18 %. Положительный результат в области антигена при анализе C. DIFF
QUIK CHEK COMPLETE® подтверждает присутствие штаммов C. difcile в пробе фекалий; отрицательный
результат указывает на отсутствие этих организмов. Положительный результат в области токсина при
84
RU
Page 86
анализе C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE® подтверждает присутствие токсина C. difcile в пробе фекалий;
отрицательный результат указывает на отсутствие токсина или недостаточно высокую концентрацию токсина
для обнаружения.
ХАРАКТЕРИСТИКИ РАБОТЫ
Клиническая оценка обнаружения антигена с помощью анализа C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE
Участок антигена анализа C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE® сравнивался с бактериальной культурой.
Пробы, которые участвовали в оценке, были отправлены в клинические лаборатории для проведения
стандартных анализов. Анализ бактериальной культуры был выполнен в соответствии с внутренними
процедурами. Результаты показаны в Таблице 1.
Таблица 1. Обзор клинической производительности: сравнение анализа C. DIFF QUIK CHEK
C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE
Линия антигена – положительный
C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE
Линия антигена – отрицательный
COMPLETE® с бактериальной культурой
n = 1126
®
®
Бактериальная
Положительный
культура
Бактериальная
Отрицательный
201 62
21 842
Предел достоверности
культура
95 %
®
Чувствительность 90,5% 85,7 – 93,9
Специфичность 93,1% 91,2 – 94,7
Прогнозируемое положительное значение 76,4% 70,7 – 81,3
Прогнозируемое отрицательное значение 97,6% 96,2 – 98,4
Корреляция 92,6% 91,8 – 93,4
Противоречивые пробы оценивались с использованием текущих анализов ELISA на наличие
глутаматдегидрогеназы C. difcile.
29 из 62 ложно положительных проб показали положительный результат при использовании другого
анализа GDH, поэтому они рассматривались как истинно положительные.
13 и 21 ложно отрицательной пробы показали отрицательный результат при использовании
другого анализа на наличие глутаматдегидрогеназы (GDH), поэтому они рассматривались как
истинно отрицательные.
Участок антигена анализа C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE® сравнивался с анализом тканевой
культуры с целью обнаружения токсина C. difcile. Пробы, которые участвовали в оценке, были
отправлены в клинические лаборатории для проведения стандартных анализов. Результаты показаны
в Таблице 2. Участок антигена анализа C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE® обнаружил антиген в 98,7 %
образцах тканевых культур с положительным результатом.
Таблица 2. Обзор клинической производительности: сравнение анализа C. DIFF QUIK CHEK
C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE
Линия антигена – положительный
C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE
Линия антигена – отрицательный
Клиническая оценка обнаружения токсина с помощью анализа C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE
Участок токсина анализа C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE® сравнивался с анализом тканевой культуры
в двух клинических лабораториях и в собственной лаборатории TECHLAB, Inc. Пробы, которые
участвовали в оценке, были отправлены в клинические лаборатории для проведения стандартных
анализов. Результаты показаны в Таблице 3.
Таблица 3. Обзор клинической производительности: сравнение анализа C. DIFF QUIK CHEK
C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE
Линия токсина – положительный
C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE
Линия токсина – отрицательный
COMPLETE® с анализом тканевой культуры
n = 1126
®
®
Тканевая культура
Положительный
COMPLETE® с анализом тканевой культуры
n = 1126
®
®
Тканевая культура
Положительный
Тканевая культура
Отрицательный
154 109
2 861
Тканевая культура
Отрицательный
137 6
19 964
Предел достоверности
95 %
®
Чувствительность 87,8% 81,4 - 92,3
Специфичность 99,4% 98,6 - 99,7
Прогнозируемое положительное значение 95,8% 90,7 - 98,3
Прогнозируемое отрицательное значение 98,1% 96,9 - 98,8
Корреляция 97,8% 97,6 - 98,0
Противоречивые пробы оценивались с использованием текущих анализов ELISA на наличие
токсинов А и В.
5 из 6 ложно положительных проб дали положительный результат при анализе ELISA, поэтому
они рассматривались как истинно положительные.
12 и 19 ложно отрицательных проб показали отрицательный результат при анализе ELISA,
поэтому они рассматривались как истинно отрицательные.
RU
85
Page 87
ВЛИЯНИЕ КОНСИСТЕНЦИИ ПРОБЫ ФЕКАЛИЙ
Влияние консистенции пробы фекалий на результаты анализа C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE
Реакция проб фекалий различной консистенции на участке антигена (n=978) и на участке токсина
(n=981) анализа C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE® описана в Таблицах 4 и 5. Процентные доли
положительных реакций с использованием анализа культуры или анализа C. DIFF QUIK CHEK
COMPLETE® были сходными для всех трех типов проб фекалий (жидкая, вязкая, твердая). Все пробы
прошли анализ на наличие штаммов C. difcile. Основанием для анализа была история болезни
пациента, а не консистенция пробы. На участке антигена результаты показывают, что в ходе анализа
C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE® были получены примерно одинаковые результаты обнаружения
бактериальных культур при анализе проб с различной консистенцией. На участке токсина результаты
показывают, что в ходе анализа C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE® были получены примерно
одинаковые результаты обнаружения тканевых культур при анализе проб с различной консистенцией.
Таблица 4. Реакция проб фекалий с различной консистенцией на участке
Положительный при анализе
бактериальной культуры
C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE
Линия антигена – положительный
Отрицательный при анализе
бактериальной культуры
C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE
Линия антигена – отрицательный
Таблица 5. Реакция проб фекалий с различной консистенцией на участке токсина анализа C.
Положительный при анализе
тканевой культуры
C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE
Линия токсина – положительный
Отрицательный при анализе
тканевой культуры
C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE
Линия токсина – отрицательный
антигена анализа C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE
Количество проб
(n = 978)
Жидкие пробы
(n = 335)
59 (17,6%) 110 (21,1%) 19 (15,7%)
®
72 (21,5%) 128 (24,5%) 25 (20,7%)
276 (82,4%) 412 (78,9%) 102 (84,3%)
®
263 (78,5%) 394 (75,5%) 96 (79,3%)
DIFF QUIK CHEK COMPLETE
Количество проб
(n = 981)
®
Жидкие пробы
(n = 336)
43 (12,8%) 81 (15,5%) 8 (6,6%)
®
42 (12,5%) 72 (13,8%) 7 (5,7%)
293 (87,2%) 442 (84,5%) 114 (93,4%)
®
294 (87,5%) 451 (86,2%) 115 (94,3%)
®
Вязкие пробы
(n = 522)
Вязкие пробы
(n = 523)
Плотные пробы
(n = 121)
Плотные пробы
(n = 122)
®
АНАЛИТИЧЕСКАЯ ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТЬ
Предел детектирования анализа: концентрация 0,63 нг/мл для токсина А, 0,16 нг/мл для токсина В и
0,8 нг/мл для глутаматдегидрогеназы.
ВОСПРОИЗВОДИМОСТЬ
Воспроизводимость анализа C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE® была определена с использованием
12 проб фекалий, которым были присвоены коды, чтобы избежать идентификации во время анализа.
Тестирование проводилось в 3 независимых лабораториях, каждая из которых проверяла пробы в
течение 3 дней. При анализе проб был получен прогнозируемый результат 100 % во всех случаях.
ПЕРЕКРЕСТНАЯ РЕАКТИВНОСТЬ
Пробы фекалий с присутствием следующих микроорганизмов с конечной концентрацией
приблизительно 108 или более организмов на мл не вызывали реакцию на участках антигена или
токсина анализа C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE®:
Бактерия или патогенный организм: Aeromonas hydrophila, Bacillus cereus, Bacillus subtilis,
Bacteroides fragilis, Campylobacter coli, Campylobacter fetus, Campylobacter jejuni, Candida albicans,
Clostridium butyricum, Clostridium clostridiforme, Clostridium haemolyticum, Clostridium histolyticum,
Clostridium novyi, Clostridium perfringens, Clostridium septicum, Clostridium sordellii (нетоксикогенные
штаммы), Clostridium sporogenes, Enterobacter aerogenes, Enterobacter cloacae, Enterococcus
faecalis, Escherichia coli EIEC, Escherichia coli, Escherichia coli O157:H7, Escherichia coli ETEC,
Klebsiella pneumoniae, Peptostreptococcus anaerobius, Proteus vulgaris, Pseudomonas aeruginosa,
Salmonella typhimurium, Serratia liquifaciens, Shigella dysenteriae, Shigella exneri, Shigella sonnei,
Staphylococcus aureus, Staphylococcus aureus (Cowan), Staphylococcus epidermidis, Vibrio cholerae, Vibrio
parahaemolyticus, Yersinia enterocolitica
Единственный организм, который не относится к C. difcile и дает реакцию в области анализа
C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE®, – это штамм Clostridium sordellii VPI 9048. Этот штамм вырабатывает
токсины HT и LT, которые являются гомологичными для токсинов А и В соответственно.
Следующие вирусы в количестве от 10
анализе C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE®:
Вирусы: Аденовирусы типов 1, 2, 3, 5, 40, 41, коронавирусы человека, вирусы Коксаки В2, В3, В4, В5,
ECHO-вирусы 9, 11, 18, 22, 33, энтеровирусы типов 68, 69, 70, 71, ротавирусы.
ПРИМЕСИ
Следующие вещества (формулировка США) не влияют на результаты теста в случае присутствия в
фекалиях в указанных концентрациях: муцин (3,5 %, вес/объем), человеческая кровь (40 % от объема),
сульфат бария (5 %, вес/объем), Imodium® (5 % от объема), Kaopectate® (5 % от объема), Pepto-Bismol®
(5 % от объема), стерическая/пальмитиновая кислота (40 %, вес/объем), метронидазол (0,25 %, вес/
объем), ванкомицин (0,25 %, вес/объем).
3,3
8,25
до 10
TCID единиц на 0,2 мл не вызывали реакцию в
РЕАКЦИЯ КЛИНИЧЕСКИХ ШТАММОВ, ПОЛУЧЕННЫХ В АГАРЕ
ЦИКЛОСЕРИН-ЦЕФОКСИТИН-ФРУКТОЗА (CCFA)
Всего было проверено 103 клинических штамма C. difcile, полученных из анаэробной бактериальной
культуры на агаре CCFA после 3 дней при температуре 37 °C, с использованием анализа C. DIFF
QUIK CHEK COMPLETE®. В рамках анализа отдельные колонии отбирались и перемешивались в
растворителе, как рекомендуется для проб фекалий. Все 103 штамма дали положительную реакцию
на антиген в ходе анализа.
70 из 103 штаммов (68 %) были получены из проб фекалий, которые дали положительный результат
на наличие токсина C. difcile при анализе тканевой культуры. 56 из них (80 %) дали положительную
реакцию на токсин при проверке после анаэробного роста на агаре CCFA в течение 3 дней при
температуре 37 °C.
86
RU
Page 88
TECHLAB® C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE
DEV
G
IVD
UTILIZAÇÃO PREVISTA
O teste TECHLAB® C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE® é um ensaio imunoenzimático rápido de membrana
para a deteção simultânea do antígeno glutamato desidrogenase e das toxinas A e B do Clostridium dif-
cile num único poço de reação. O teste deteta o antígeno da C. difcile, glutamato desidrogenase, como
ltro para a presença de C. difcile e conrma a presença de C. difcile toxigénico detetando as toxinas
A e B em amostras fecais de indivíduos com suspeita de contrair a doença C. difcile. O teste deve ser
utilizado como um auxílio no diagnóstico da doença C. difcile. Tal como com outros testes de C. difcile,
os resultados devem ser considerados conjuntamente com o histórico do doente.
EXPLICAÇÃO
Após o tratamento com antibióticos, muitos doentes desenvolvem problemas gastrointestinais, que vão desde
diarreia leve a colite pseudomembranosa grave. Muitos casos das formas mais leves da doença gastrointestinal
e a maioria dos casos de colite pseudomembranosa são causados por estirpes toxigénicas do Clostridium
difcile (1). Este organismo é uma bactéria anaeróbica oportunista que cresce no intestino logo que existam
alterações da ora normal devido aos antibióticos. As estirpes toxigénicas do C. difcile carregam os genes
que codicam as toxinas enquanto as estirpes não toxigénicas não carregam os genes da toxina. O início da
doença está associado às toxinas que são produzidas pelo organismo toxigénico. Acredita-se que os sintomas
clínicos associados à doença acontecem devido, principalmente, à toxina A, que é uma enterotoxina prejudicial
para os tecidos (2, 3). O C. difcile também produz uma segunda toxina, designada toxina B. A toxina B, que
foi referida como citotoxina do organismo, é a toxina detetada pelo ensaio de cultura de tecidos atualmente
utilizado por muitos laboratórios. As estirpes toxigénicas do C. difcile produzem ambas as toxinas, ou
apenas a toxina B (4-7). O glutamato desidrogenase do C. difcile é um bom marcador de antígeno do
organismo em fezes, porque é produzido em grandes quantidades por todas as estirpes, toxigénicas ou
não toxigénicas (8-10). O antígeno pode ser detetado em amostras fecais utilizando o teste C. DIFF QUIK
CHEK COMPLETE®. Um resultado positivo no teste de glutamato desidrogenase do C. difcile conrma a
presença deste organismo numa amostra fecal; um resultado negativo indica a ausência do organismo. Um
resultado positivo no teste de toxinas A e B conrma a presença de C. difcile toxigénico.
PRINCÍPIO DO TESTE
O teste de C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE® utiliza anticorpos especícos do glutamato desidrogenase
e das toxinas A e B do C. difcile. O dispositivo contém uma Janela de Reação com três linhas verticais
de anticorpos imobilizados. A linha de teste de antígeno (“Ag”) contém anticorpos contra a glutamato
desidrogenase do C. difcile. A linha de controlo (“C”) é uma linha pontilhada que contém anticorpos
de antiperoxidase de rábano (HRP). A linha de teste de toxinas A e B (“Tox”) contém anticorpos contra
toxinas A e B do C. difcile. O Conjugado é composto por anticorpos da glutamato desidrogenase e
anticorpos das toxinas A e B acompanhadas de peroxidase de rábano. Para executar o teste, a amostra é
adicionada a um tubo contendo uma mistura de Diluente e Conjugado. A mistura de amostra-conjugado
diluída é adicionada ao Poço de Amostras e o dispositivo pode incubar à temperatura ambiente durante 15
minutos. Durante a incubação, qualquer glutamato desidrogenase e toxinas A e B da amostra ligam-se aos
conjugados peroxidase-anticorpo. Os complexos de conjugado antígenos-anticorpo migram através uma
almofada de ltro para uma membrana onde são capturados pela glutamato desidrogenase imobilizada
especíca e anticorpos especícos das toxinas A e B nas linhas. A Janela de Reação é posteriormente
lavada com um Tampão de Lavagem, seguido pela adição de Substrato. Após um período de incubação
de 10 minutos, a reação “Ag” é examinada visualmente para vericar o aparecimento de uma linha vertical
azul no lado “Ag” da Janela de Reação. Uma linha azul indica um teste positivo. Se a “Ag” for positiva, então a reação “Tox” deve ser examinada visualmente para o aparecimento de uma linha azul no lado “Tox”
da Janela de Reação. Uma linha azul indica um teste positivo. Uma reação positiva em “C”, indicada por
uma linha azul pontilhada vertical na parte “C” da Janela de Reação, conrma que o teste está a funcionar
corretamente e os resultados são válidos.
®
MATERIAIS FORNECIDOS
Dispositivos de membrana – cada saqueta contém 1 dispositivo
Diluente (22 ml por frasco) – solução de proteína tamponizada com conjunto
de conta-gotas graduado (contém 0,05% de ProClin® 300)*
H412: Nocivo para os organismos aquáticos com efeitos duradouros
Tampão de Lavagem (12 ml por frasco) – solução tamponizada com conjunto
REA
WASH
Pipetas de transferência de plástico descartáveis – graduadas em 25 µL, 100 µL, 200 µL, 300 µL,
400µL e 500 µL.
*Palavra-sinal: Aviso
H317: Pode causar uma reação cutânea alérgica
P261, P272, P280, P302, P352, P333, P313, P321, P362, P364, P501
MATERIAIS E EQUIPAMENTO NECESSÁRIOS MAS NÃO FORNECIDOS
Pequenos tubos de ensaio (p. ex., tubos de microcentrifugadora de plástico ou tubos de vidro)
Sticks de aplicação Temporizador Misturador de vórtice
Luvas descartáveis para manusear amostras fecais Pipeta e pontas
VALIDADE E ARMAZENAMENTO
O prazo de validade do kit está indicada no rótulo e é de 24 meses a contar da data de fabrico. Os prazos
validade para cada componente estão indicados nos rótulos individuais. O kit deve ser conservado entre
2°C e 8°C. O kit e todos os componentes permanecem estáveis dentro dos prazos de validade indicados
após a primeira abertura, quando conservados entre 2°C e 8°C. Coloque todos os componentes à
temperatura ambiente antes de utilizá-los. O kit permanecerá estável à temperatura ambiente durante os
turnos de trabalho seguintes de 8 horas, se voltar a ser conservado refrigerado entre os turnos.
PRECAUÇÕES
1. Para utilização com diagnóstico in vitro. Apenas para uso prossional.
2. Reagentes de kits diferentes não devem ser misturados ou trocados. Não utilize um kit após a data de
3. Cada componente do kit deve ser inspecionado relativamente a sinais de fuga. Na chegada, inspecione
4. Os conjuntos de tampas, pontas e conta-gotas estão codicados por cores; NÃO misture nem troque!
5. Não congele os reagentes. O kit deve ser armazenado entre 2° C e 8° C.
conta-gotas graduado (contém 0,05% de ProClin® 300)*
H412: Nocivo para os organismos aquáticos com efeitos duradouros
Substrato (3,5 ml por frasco) – solução contendo tetrametilbenzidina
REAGSUBS
Conjugado (2,5 ml por frasco) – anticorpos especícos para glutamato
ENZCONJ
desidrogenase associado a peroxidase de rábano e anticorpos especícos
para toxinas A e B associados a peroxidase de rábano numa solução de
proteínas tamponizada (contém 0,05% de ProClin® 300)*
Controlo positivo (2 ml) – antígeno numa solução de proteínas tamponizada
Para utilização com diagnóstico in vitro
validade.
o kit para garantir que os componentes não estão congelados ou quentes ao toque devido a condições
de transporte inadequadas.
PT
87
Page 89
6. A bolsa que contém o Dispositivo de Membrana deve estar à temperatura ambiente antes da abertura.
25 μL100 μL200 μL300 μL400 μL500 μL
Mantenha os dispositivos de membrana secos antes de usar.
7. Utilize amostras fecais no espaço de 72 horas após a recolha para obter resultados ideais. As amostras
que são congeladas podem perder atividade devido ao congelamento e descongelamento. Se utilizar
amostras congeladas, descongele-as à temperatura ambiente.
8. Mantenha os frascos de reagente na vertical quando dispensar os reagentes para garantir um tamanho
de gotas consistente e um volume correto.
9. Após a utilização, as amostras e os dispositivos de membrana devem ser tratados e eliminados como
potenciais riscos biológicos.
10. Os dispositivos de membrana não podem ser reutilizados.
11. O teste foi otimizado quanto à sensibilidade e à especicidade. As alterações ao procedimento
especicado e/ou às condições de teste podem afetar a sensibilidade e a especicidade do teste. Não
se desvie do procedimento especicado.
12. Esteja atento ao tempo total do ensaio quando testar mais de uma amostra fecal. Adicione Diluente
primeiro, seguido de Conjugado a cada tubo de Diluente. Em seguida, adicione a amostra ao tubo de
Diluente/Conjugado. Misture cuidadosamente todas as amostras diluídas e transra para o Dispositivo
de Membrana. A etapa de incubação de 15 minutos começa após a última mistura de amostra-
conjugado diluída ter sido transferida para o Dispositivo de Membrana nal.
13. Se o reagente do Substrato mudar para uma cor azul escura/violeta ligue para os serviços técnicos
pedindo a substituição.
14. As amostras fecais podem conter agentes potencialmente infeciosos e devem ser manuseados
ao “Nível 2 de Biossegurança” conforme recomendado no Manual CDC/NIH “Biossegurança nos
Laboratórios Microbiológicos e Biomédicos.”
15. Use luvas descartáveis quando zer o teste.
16. O Conjugado, o Diluente e os reagentes do Tampão de Lavagem contêm 0,05% de ProClin® 300 como
conservante. Embora a concentração seja baixa, ProClin® 300 é conhecido por ser nocivo (pode ocorrer
sensibilização cutânea). Se surgir sensibilização /irritação ou erupção cutânea, procure ajuda/conselhos
médicos. Retire a roupa contaminada e lave-a antes de a voltar a usar. Manuseie os reagentes de acordo
com os regulamentos existentes relativos à segurança laboratorial e às boas práticas laboratoriais.
Estão disponíveis Fichas de Dados de Segurança relativas a este produto; contacte o apoio técnico.
17. Respeite as indicações nacionais, regionais e locais relacionadas com a eliminação de resíduos.
18. Comunique qualquer incidente grave à TECHLAB e à autoridade competente do Estado-Membro do
EEE onde o utilizador e/ou paciente está estabelecido.
RECOLHA, MANIPULAÇÃO E ARMAZENAMENTO DE AMOSTRAS FECAIS
Tipos de Amostras Aceitáveis Não Utilizar
Amostras Fecais Frescas
Amostras Fecais Congeladas
Amostras em meios de transporte (Cary Blair, C&S)
Amostras fecais em xador à base de formol
(ou seja, acetato de sódio formol, formol a
10%, mertiolato formol)
Amostras fecais em xador à base de álcool
(ou seja, álcool polivinílico)
Armazenamento
das Amostras
Temperatura
Duração aceitável do
armazenamento
Comentários
2° C – 8° C 72 horas As amostras ideais têm menos de 24 horas
Descongelar à temperatura ambiente. Congelar e
Congeladas ≤ -10° C Mais de 72horas
1. Os procedimentos padrão de recolha e manipulação utilizados internamente para amostras fecais
são adequados.
2. As amostras fecais devem ser recolhidas em recipientes limpos e à prova de fugas.
3. NÃO se recomenda armazenar as amostras fecais no Diluente.
4. Não permita que as amostras fecais permaneçam na mistura de Diluente/Conjugado
durante >24 horas.
PREPARAÇÃO DE AMOSTRAS
1. Coloque todos os reagentes e o número necessário de dispositivos à temperatura ambiente
antes de utilizar. Recomenda-se retirar os reagentes da inserção de espuma para reduzir o tempo
necessário para aquecer até à temperatura ambiente.
2. Prepare e rotule um pequeno tubo de ensaio para cada amostra e os controlos externos opcionais,
se necessário.
3. Utilize o conjunto do conta-gotas graduado preto, adicione 750 µL (2ª graduação a partir da ponta)
de Diluente a cada tubo para amostras fecais. Para amostras em meio de transporte, como Cary
Blair ou C&S, adicione 650 µL de (1ª graduação a partir da ponta) Diluente ao tubo.
descongelar várias vezes pode resultar na perda
de atividade da amostra devido à degradação de
toxinas.
Tipo de Amostra Volume de Diluente
Amostras Fecais Frescas 750 µL (2a graduação a partir da ponta)
Amostras Fecais Congeladas
(congeladas não diluídas)
Amostras em meios de transporte
(Cary Blair, C&S)
Controlos Externos (positivo e
negativo)
4. Adicione uma gota de Conjugado (frasco com tampa vermelha) a cada tubo.
5. Obtenha uma pipeta de transferência de plástico descartável (fornecida com o kit) para cada
amostra - as pipetas têm graduações destacadas de 25 µL, 100 µL, 200 µL, 300 µL, 400 µL e
500 µL.
750 µL (2a graduação a partir da ponta)
650 µL (1ª graduação a partir da ponta)
750 µL (2a graduação a partir da ponta)
750
650
µL
Pipeta de Transferência Graduada:
88
PT
Page 90
6. Misture cuidadosamente todas as amostras independentemente da consistência - é essencial
que as amostras quem uniformemente suspensas antes da transferência.
Amostras líquidas/semissólidas – pipete 25 µL de amostra com uma pipeta de transferência e
dispense-a para a mistura de Diluente/Conjugado. Utilize a mesma pipeta de transferência para
misturar a amostra diluída.
Amostras formadas/sólidas – Tenha cuidado para adicionar a quantidade correta de fezes
formadas à mistura da amostra. Misture a amostra cuidadosamente utilizando um stick de
aplicação de madeira e transra uma pequena porção (cerca de 2 mm de diâmetro, o equivalente
a 25 µl) da amostra para a mistura Diluente/Conjugado. Emulsione a amostra utilizando o stick de
aplicação.
Amostras fecais nos meios de transporte Cary Blair ou C&S - pipete 100 µL (2.ª graduação a partir
da ponta da pipeta de transferência) da amostra para a mistura de Diluente/Conjugado .
7. Amostras de Controlo Externo Opcionais:
Controlo Positivo Externo - adicione uma gota de Controlo Positivo (frasco com tampa cinzenta) à
mistura de Diluente/Conjugado.
Controlo Negativo Externo - adicione 25 μL de Diluente à mistura de Diluente/Conjugado.
NOTA: Transferir muito pouca amostra, ou falhar na mistura e suspensão completa da amostra na mistura de
Diluente/Conjugado, pode produzir um resultado de teste falso negativo. A adição de amostra fecal em excesso
pode causar resultados inválidos devido ao uxo de amostra limitado.
PROCEDIMENTO DE TESTE
1. Obtenha um Dispositivo de Membrana por amostra e um dispositivo por controlo negativo ou
positivo externo opcional, conforme necessário. Os sacos de papel de alumínio que contêm os
dispositivos devem ser colocados à temperatura ambiente antes da abertura. Utilize o dispositivo
imediatamente após a abertura. Rotule cada dispositivo adequadamente e oriente-o numa
superfície plana de forma a que a impressão “C. DIFF COMPLETE” esteja na parte inferior do
dispositivo, e o Poço de Amostras pequeno esteja localizado no canto superior direito do
dispositivo.
Dispositivo de Membrana Poço de Amostras
Janela de Reação
2. Feche todos os tubos com a amostra diluída e misture cuidadosamente. É possível atingir uma
mistura adequada agitando em vórtice ou invertendo o tubo. Assim que uma amostra de doente
ou Controlo Positivo tiver sido diluída na mistura de Diluente/Conjugado, pode ser incubada à
temperatura ambiente por qualquer período até 24 horas antes de adicionar ao Dispositivo de
Membrana.
3. Utilizando uma pipeta de transferência nova, transra 500 µL da mistura de amostra-conjugado
diluída para o Poço de Amostras (orifício mais pequeno no canto superior direito do dispositivo)
de um Dispositivo de Membrana, tornando certa a expulsão da amostra de líquido para a almofada
de drenagem dentro do Dispositivo de Membrana. Quando carregar a amostra para o poço de
amostras, certique-se de que a ponta da pipeta de transferência está oblíqua em relação à Janela
de Reação (orifício maior no meio do dispositivo).
4. Incube o dispositivo à temperatura ambiente durante 15 minutos – a amostra penetrará através
do dispositivo e uma área húmida espalhar-se-á ao longo da Janela de Reação.
NOTA PARA AMOSTRAS QUE NÃO MIGRAM:
Ocasionalmente, uma amostra diluída não migra corretamente e a Janela de Reação não se
molha totalmente. Se a Janela de Reação não parecer estar completamente molhada no espaço
de 5 minutos após a adição da amostra ao Poço de Amostras, então adicione 100 µl (4 gotas) de
Diluente ao Poço de Amostras e espere mais 5minutos (num total de 20 minutos).
5. Após a incubação, adicione 300 µL de Tampão de Lavagem à Janela de Reação utilizando o
conjunto do conta-gotas branco graduado. Permita que o Tampão de Lavagem ua através da
membrana da Janela de Reação e seja totalmente absorvido.
6. Adicione 2 gotas de Substrato (frasco com tampa branca) à Janela de Reação. Leia e registe os
resultados visualmente após 10 minutos.
INTERPRETAÇÃO DOS RESULTADOS
1. A interpretação do teste é mais ável quando o dispositivo é lido imediatamente no nal do período
de reação de 10 minutos. Leia o dispositivo a uma distância de trabalho normal numa área bem
iluminada. Veja com uma linha de visão diretamente sobre o dispositivo.
2. Observe o dispositivo quanto ao aparecimento de pontos azuis no meio da Janela de Reação
representando o controlo positivo interno. O aparecimento de qualquer(quaisquer) ponto(s) de
controlo representa um controlo interno válido. O fundo pode aparecer com cor branca a azul clara.
Observe o dispositivo quanto ao aparecimento de linhas azuis nos lados “Ag” e “Tox” da Janela de
Reação representando as linhas de teste. As linhas podem aparecer com uma intensidade ténue a
escura.
3. Resultado de Antígeno Positivo (“Ag”): Um resultado positivo de antígeno pode ser interpretado
a qualquer altura entre a adição de Substrato e os 10 minutos de tempo de leitura. Para um
resultado positivo de antígeno, a linha “Ag” azul e a linha de controlo azul pontilhada abaixo de
“C” estão visíveis (Figura 1a). As linhas podem aparecer com uma intensidade ténue a escura. Uma
linha parcial óbvia é interpretada como um resultado positivo. Não interprete a descoloração da
membrana como um resultado positivo. Um resultado positivo indica a presença de C. difcile.
4. Resultado Positivo de Antígeno e Toxinas (“Tox”): Se o resultado do antígeno for positivo (ou
seja, uma linha “Ag” azul e um controlo azul pontilhado abaixo de “C” forem visíveis), avance para
a interpretação do resultado da toxina. Um resultado positivo de toxina pode ser interpretado a
qualquer altura entre a adição de Substrato e os 10minutos de tempo de leitura. Para um resultado
de toxina positivo, estará visível uma linha “Tox” azul (Figura 1b). As linhas podem aparecer com
uma intensidade ténue a escura. Uma linha parcial óbvia é interpretada como um resultado positivo.
Não interprete a descoloração da membrana como um resultado positivo. Um resultado positivo
indica a presença de toxina de C. difcile.
5. Resultado Negativo: um teste não pode ser interpretado como negativo ou inválido até 10 minutos
após a adição de Substrato. Uma linha azul pontilhada simples está visível no meio da Janela de
Reação, abaixo de “C” e nenhuma linha de teste está visível no lado “Ag” ou no lado “Tox” da Janela
de Reação (Figura 1c). Um resultado negativo na porção de antígeno indica que o antígeno de C.
difcile está ausente da amostra ou está abaixo do limite de deteção do teste. Um resultado negativo
na porção de toxina indica que a toxina de C. difcile está ausente da amostra ou está abaixo do
limite de deteção do teste.
6. Resultado Inválido: não está visível nenhuma linha na Janela de Reação (Figura 1d). O resultado
do teste é inválido se uma linha pontilhada azul não estiver presente abaixo de “C” no m do
período de reação (Figuras 1e, 1f, 1g).
7. Antígeno Negativo (“Ag”), Toxina Positiva (“Tox”): Uma percentagem baixa de amostras pode
ter resultado negativo para o antígeno mas positivo para a toxina. Estas amostras devem ser
consideradas como indeterminadas e testadas novamente utilizando uma amostra fresca (Figura
1h). Se a amostra for testada novamente com resultado negativo para o antígeno mas positivo para
a toxina, registe como resultado de toxina positivo.
PT
89
Page 91
FIGURA 1: INTERPRETAÇÃO DE RESULTADOS DO C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE
Figura 1a
Resultado de Antígeno
Positivo
Figura 1d
Resultado Inválido
Figura 1g
Resultado Inválido
CONTROLO DE QUALIDADE
Interno: uma linha pontilhada azul deve estar visível no meio da Janela de Reação, abaixo de “C” em
cada Dispositivo de Membrana testado. O aparecimento dos pontos de controlo azuis conrma que a
amostra e os reagentes foram adicionados corretamente, que os reagentes estavam ativos no momento
da realização do ensaio e que a amostra migrou corretamente através do Dispositivo de Membrana.
Também conrma a reatividade dos outros reagentes associados ao ensaio. Um fundo uniforme na área
de resultados é considerado um controlo negativo interno. Se o teste tiver sido realizado corretamente
e os reagentes estiverem a funcionar adequadamente, o fundo será branco para dar um resultado
percetível.
Externo: a reatividade do kit C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE® deve ser vericada assim que o receber
utilizando o Controlo Positivo e o controlo negativo (Diluente). O Controlo Positivo é fornecido com o
kit (frasco com tampa cinzenta). O Controlo Positivo conrma a reatividade dos outros reagentes associados ao ensaio e não se destina a assegurar precisão no corte analítico do ensaio. Utiliza-sediluente
para o controlo negativo. Podem ser realizados testes adicionais com os controlos para cumprir as
exigências dos regulamentos locais, estatais e/ou federais e/ou das organizações acreditadas.
Figura 1b
Resultado de Antígeno e
Toxina Positivo
Figura 1e
Resultado Inválido
Figura 1h
Ver #7 para Interpretação
Figura 1c
Resultado Negativo
Figura 1f
Resultado Inválido
®
LIMITAÇÕES
1. O teste C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE® é utilizado para detetar o antígeno e a(s) toxina(s) do
C. difcile em amostras fecais. O teste conrma a presença da toxina nas fezes e esta informação
deve ser tomada em consideração pelo médico à luz do histórico clínico e do exame físico do doente.
O teste C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE®detetará níveis de toxina A a ≥0,63 ng/ml, toxina B a ≥0,16
ng/ml e glutamato desidrogenase a ≥0,8 ng/ml.
2. As amostras fecais são extremamente complexas. Os resultados ideais com o teste C. DIFF QUIK
CHEK COMPLETE® são obtidos com as amostras que têm menos de 24horas. As amostras mais
diluídas podem ser armazenadas entre 2° C e 8° C durante 72 horas antes de se observar uma
degradação signicativa da toxina. Se as amostras não forem testadas dentro deste período
de tempo, podem ser congeladas e descongeladas. No entanto, repetidos congelamentos e
descongelamentos podem resultar em perda de imunorreatividade de antígenos e toxinas A e B.
3. Algumas amostras podem dar reações fracas. Isto pode acontecer devido a uma série de fatores
como a presença de baixos níveis de antígeno e/ou de toxina, a presença de substâncias aglutinantes
ou enzimas inativadoras nas fezes. As linhas podem aparecer com uma intensidade ténue a escura.
Estas amostras devem ser reportadas como positivas se se observar qualquer linha azul, mesmo que
seja parcial. Uma linha azula parcial óbvia é interpretada como um resultado positivo.
4. Não podem ser utilizadas amostras fecais preservadas em formol a 10 %, mertiolato formol,
acetato de sódio formol ou álcool polivinílico.
5. O teste C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE® é qualitativo. A intensidade da cor não deve ser
interpretada quantitativamente.
6. Alguns isolados de C. sordellii podem reagir no teste C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE® devido à
produção de toxinas imunologicamente relacionadas (1).
7. Foram reportadas em crianças taxas de colonização até 50 %. Uma taxa elevada foi também
relatada em doentes com brose cística (1,3). Os resultados podem aparecer positivos nestes
grupos, mas devem ser vistos juntamente com o potencial de serem um transportador colonizado.
8. O único organismo nãoC. difcile que reage na porção de toxina do teste C. DIFF QUIK CHEK
COMPLETE® foi o Clostridium sordelliiVPI 9048. Esta estirpe produz toxinas HT e LT, que são
homólogas às toxinas A e B, respetivamente.
9. Não existem dados sobre os efeitos de lavagens intestinais, enemas de bário, laxantes ou
preparações para os intestinos no desempenho do teste C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE®. Todos
estes procedimentos podem resultar na diluição extensiva ou na presença de aditivos que podem
afetar o desempenho do teste.
VALORES ESPERADOS
A doença Clostridium difcile é essencialmente uma doença nosocomial de doentes idosos, e a frequência da doença depende de fatores como a população de doentes, o tipo de instituição e a epidemiologia. A incidência reportada da doença C. difcile em doentes com diarreia associada a antibióticos
pode variar de 5 a 20% e os hospitais podem experimentar taxas menores ou maiores do que este
intervalo. É importante considerar quaisquer resultados de teste em conjunto com sintomas clínicos
porque alguns adultos saudáveis e um grande número de crianças saudáveis (até 50%) terão um
resultado positivo para a toxina de C. difcile. Para além disso, foram reportadas taxas de transporte de
22% a 32% do C. difcile em doentes com brose cística (1,3). Em estudos levados a cabo para este
dispositivo, utilizando doentes sintomáticos, a incidência de toxinas A e B foi de 12% e de GDH foi de
18%. Um resultado positivo na porção de antígeno do teste C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE® conrma
a presença de C. difcile numa amostra fecal; um resultado negativo indica a ausência do organismo.
Um resultado positivo na porção da toxina do teste C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE® conrma a
presença de C. difcile numa amostra fecal; um resultado negativo indica a ausência da toxina ou níveis
insucientes de toxina para deteção.
90
PT
Page 92
CARACTERÍSTICAS DE DESEMPENHO
Avaliação clínica da porção de antígeno do teste C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE
A porção de antígeno do teste C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE® foi comparada com a cultura bacteriológica. As amostras incluídas na avaliação foram apresentadas aos laboratórios clínicos para ensaios
de rotina. O teste de cultura bacteriológica foi realizado de acordo com procedimentos internos. Os
resultados estão exibidos na Tabela 1.
Tabela 1. Resumo do desempenho clínico comparando o teste C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE®
C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE
Linha de Antígeno Positiva
C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE
Linha de Antígeno Negativa
com a cultura bacteriológica
n = 1126
®
®
Cultura Bacteriológica
Positiva
201 62
21 842
®
Cultura Bacteriológica
Negativa
Limites de Conança
95%
Sensibilidade 90,5% 85,7 – 93,9
Especicidade 93,1% 91,2 – 94,7
Valor Preditivo Positivo 76,4% 70,7 – 81,3
Valor Preditivo Negativo 97,6% 96,2 – 98,4
Correlação 92,6% 91,8 – 93,4
Foram avaliadas amostras discrepantes usando testes ELISA para glutamato desidrogenase de
C. difcile.
Vinte e nove das 62 amostras com resultado positivo falso foram positivas noutro teste de GDH
e foram consideradas positivas verdadeiras.
Treze das 21 amostras com resultado negativo falso foram negativas noutro teste de GDH e
foram consideradas negativas verdadeiras.
A porção de antígeno do teste C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE® foi comparada com o ensaio de
cultura de tecidos para a deteção da toxina de C. difcile. As amostras incluídas na avaliação foram
apresentadas aos laboratórios clínicos para ensaios de rotina. Os resultados são mostrados na Tabela 2.
A porção de antígeno do teste C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE® detetou 98,7% das amostras positivas
de cultura de tecidos.
Tabela 2. Resumo do desempenho clínico comparando o teste C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE
C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE
Linha de Antígeno Positiva
C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE
Linha de Antígeno Negativa
com o ensaio de cultura de tecidos
n = 1126
®
®
Cultura de Tecidos
Positiva
154 109
2 861
Cultura de Tecidos
Negativa
Avaliação clínica da porção de toxina do teste C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE
A porção de toxina do teste C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE® foi comparada com o ensaio de cultura
de tecidos em dois laboratórios clínicos e internamente no TECHLAB, Inc. As amostras incluídas na
avaliação foram apresentadas aos laboratórios clínicos para ensaios de rotina. Os resultados estão
exibidos na Tabela 3.
Tabela 3. Resumo do desempenho clínico comparando o teste C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE
C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE
Linha de Toxina Positiva
C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE
Linha de Toxina Negativa
com o ensaio de cultura de tecidos
n = 1126
®
®
Cultura de Tecidos
Positiva
137 6
19 964
®
Cultura de Tecidos
Limites de Conança
Sensibilidade 87,8% 81,4 - 92,3
Especicidade 99,4% 98,6 - 99,7
Valor Preditivo Positivo 95,8% 90,7 - 98,3
Valor Preditivo Negativo 98,1% 96,9 - 98,8
Correlação 97,8% 97,6 - 98,0
As amostras discrepantes foram avaliadas usando testes ELISA atuais para as toxinas A e B.
Cinco das 6 amostras com resultado positivo falso tiveram resultado positivo no teste ELISA e
foram consideradas positivas verdadeiras.
Doze das 19 amostras com resultado negativo falso tiveram resultado negativo pelo teste ELISA
e foram consideradas negativas verdadeiras.
EFEITO DA CONSISTÊNCIA DA AMOSTRA FECAL
Efeito da consistência da amostra fecal no teste C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE
A reação das amostras fecais de consistências diferentes na porção de antígeno (n=978) e na porção de
®
toxina (n=981) do teste C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE® é mostrada nas Tabelas 4 e 5. As percentagens das reações positivas utilizando um ensaio de cultura ou um teste C. DIFF QUIK CHEK COMPLE-
TE® foram similares em todos os três tipos de amostras fecais (líquidas, semissólidas e sólidas). Todas
as amostras foram submetidas ao teste de C. difcile. A base da apresentação foi o histórico clínico do
doente e não a consistência da amostra. Na porção do antígeno, os resultados mostram que o teste
C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE® teve resultados similares à cultura bacteriológica ao testar amostras
de consistências diferentes. Na porção da toxina, os resultados mostram que o teste C. DIFF QUIK
CHEK COMPLETE® teve resultados similares à cultura bacteriológica ao testar amostras de consistên-
cias diferentes.
®
Negativa
95%
®
PT
91
Page 93
Tabela 4. Reação de amostras fecais de diferentes consistências na porção de antígeno do teste
Tabela 5. Reação de amostras fecais de diferentes consistências na porção de toxina do teste
SENSIBILIDADE ANALÍTICA
O corte para o ensaio foi estabelecido em concentrações de 0,63 ng/ml para a toxina A, 0,16 ng/ml para
a toxina B e 0,8 ng/ml para a glutamato desidrogenase.
REPRODUTIBILIDADE
A reprodutibilidade do teste C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE® foi determinada utilizando 12 amostras
fecais que foram codicadas para evitar a sua identicação durante o teste. O teste foi efetuado em
3 laboratórios independentes, que testaram as amostras durante 3 dias. As amostras produziram os
resultados esperados 100% das vezes.
C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE
Número de amostras
(n = 978)
Positivo para ensaio de
cultura bacteriológica
C. DIFF QUIK CHEK
COMPLETE
Linha de Antígeno Positiva
Negativo para ensaio de
cultura bacteriológica
C. DIFF QUIK CHEK
COMPLETE
Linha de Antígeno Negativa
®
®
C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE
Número de amostras
(n = 981)
Positivo para ensaio de
cultura de tecido
C. DIFF QUIK CHEK
COMPLETE
Linha de Toxina Positiva
Negativo para ensaio de
cultura de tecido
C. DIFF QUIK CHEK
COMPLETE
Linha de Toxina Negativa
®
®
Amostras Líquidas
Amostras Líquidas
®
(n = 335)
Amostras
semissólidas
(n = 522)
Amostras Sólidas
(n = 121)
59 (17,6%) 110 (21,1%) 19 (15,7%)
72 (21,5%) 128 (24,5%) 25 (20,7%)
276 (82,4%) 412 (78,9%) 102 (84,3%)
263 (78,5%) 394 (75,5%) 96 (79,3%)
®
(n = 336)
Amostras
semissólidas
(n = 523)
Amostras Sólidas
(n = 122)
43 (12,8%) 81 (15,5%) 8 (6,6%)
42 (12,5%) 72 (13,8%) 7 (5,7%)
293 (87,2%) 442 (84,5%) 114 (93,4%)
294 (87,5%) 451 (86,2%) 115 (94,3%)
REATIVIDADE CRUZADA
As amostras fecais inoculadas com os microrganismos seguintes a uma concentração nal de aproximadamente 108 organismos ou superior por ml não reagiram na porção de antígeno ou toxina do teste
C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE®:
Bactéria ou Patogénio: Aeromonas hydrophila, Bacillus cereus, Bacillus subtilis, Bacteroides fragilis,
Campylobacter coli, Campylobacter fetus, Campylobacter jejuni, Candida albicans, Clostridium
butyricum, Clostridium clostridiforme, Clostridium haemolyticum, Clostridium histolyticum, Clostridium
novyi, Clostridium perfringens, Clostridium septicum, Clostridium sordellii (não toxigénico), Clostridium sporogenes, Enterobacter aerogenes, Enterobacter cloacae, Enterococcus faecalis, Escherichia
coli EIEC, Escherichia coli, Escherichia coli O157:H7, Escherichia coli ETEC, Klebsiella pneumoniae,
Peptostreptococcus anaerobius, Proteus vulgaris, Pseudomonas aeruginosa, Salmonella typhimurium,
Serratia liquifaciens, Shigella dysenteriae, Shigella exneri, Shigella sonnei, Staphylococcus aureus,
Staphylococcus aureus (Cowans), Staphylococcus epidermidis, Vibrio cholerae, Vibrio parahaemolyticus,
Yersinia enterocolitica
O único organismo nãoC. difcile que reage na porção de toxina do teste C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE® foi o Clostridium sordelliiVPI 9048. Esta estirpe produz toxinas HT e LT, que são homólogas às
toxinas A e B, respetivamente.
Os vírus seguintes de 10
COMPLETE®:
Vírus: Tipos de adenovírus 1, 2, 3, 5, 40, 41, coronavírus humanos, vírus de Coxsackie B2, B3, B4, B5,
Ecovírus 9, 11, 18, 22, 33, tipo de Enterovírus 68, 69, 70, 71, Rotavírus.
SUBSTÂNCIAS INTERFERENTES
As seguintes substâncias (formulação dos EUA) não tiveram nenhum efeito sobre os resultados dos
testes quando presentes nas fezes nas concentrações indicadas: mucina (3,5% p/v), sangue humano
(40% v/v), sulfato de bário (5% p/v), Imodium® (5% v/v), Kaopectate® (5% v/v), Pepto-Bismol® (5%
v/v), ácido esteárico/palmítico (40% p/v), Metronidazol (0,25% p/v), Vancomicina (0,25% p/v).
3,3
8,25
to 10
unidades TCID por 0,2 ml não reagiram no teste C. DIFF QUIK CHEK
REAÇÃO DE ISOLADOS CLÍNICOS OBTIDA EM GELOSE CICLOSERINA
CEFOXITINA-FRUTOSE (CCFA)
Testou-se um total de 103 isolados clínicos de C. difcile, obtidos por cultura bacteriológica anaeróbica
em CCFA após 3 dias a 37° C, no teste C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE®. Para a análise, as colónias
individuais foram escolhidas e suspensas em Diluente conforme recomendado para amostras fecais.
Todos os 103 isolados tiveram uma reação de antígeno positiva no teste.
Setenta dos 103 isolados (68%) resultaram de amostras fecais que tiveram um resultado positivo para
a toxina do C. difcile por ensaio de cultura de tecido. Destes, 56 (80%) tiveram uma reação de toxina
positiva quando ltrados após o crescimento anaeróbico em CCFA durante 3 dias a 37° C.
GARANTIA DE QUALIDADE DO PRODUTO
Sujeita aos direitos do consumidor estipulados por lei, esta garantia se aplica ao produto TECHLAB,
desde que o produto não tenha sido violado ou adulterado. Para que o produto tenha o melhor desempenho, é necessário que o consumidor siga as Precauções, Limitações e Procedimentos do Teste
contidas nas Instruções de Uso do produto. Antes de ser liberado para venda, cada lote do produto
passa por testes especícos, que são repetidos periodicamente até a data de validade indicada no
rótulo. Certicados de Análise para cada lote podem ser solicitados no Atendimento ao Cliente. Problemas técnicos podem ser endereçados ao Atendimento Técnico. Quaisquer problemas que impeçam o
produto de ter um bom desempenho, que sejam devido a defeitos de fabricação, serão resolvidos sem
nenhum custo para o cliente.
92
PT
Page 94
REFERENCES / REFERENCIAS / LITERATURHINWEISE / RÉFÉRENCES / LITERATURA /
REFERENCIÁK /
/
BIBLIOGRAFIA /
REFERENTIES /
REFERANSER / REFERANSER /
REFERANSLAR / ССЫЛКИ
REFERENCER /
ΒΙΒΛΙΟΓΡΑΦΙΑ
REFERÊNCIAS
: 1-18.
Lyerly, D. M., H. C. Krivan, and T. D. Wilkins. 1988.
1.
Lyerly, D. M., K. E. Saum, D. K. MacDonald, and T. D. Wilkins. 1985. Effects of
2.
Borriello, S. P., F. E. Barclay, A. R. Welch, J. M. Ketley, T. J. Mitchell, J. Stephen, and G. E. Grifn. 1985. Host and microbial determinants of the spectrum of
3.
disorders. Microecol. Ther.
Lyerly, D. M., N. M. Sullivan, and T. D. Wilkins. 1983. Enzyme-linked immunosorbent assay for
4.
Laughon, B. E., R. P. Viscidi, S. L. Gdovin, R. H. Yolken, and J. G. Bartlett. 1984. Enzyme immunoassays for detection of
5.
Lyerly, D. M., L. A. Barroso, and T. D. Wilkins. 1992. Characterization of a toxin A-/toxin B+ isolate of
6.
Dove, C. H., S. Z. Wang, S. B. Price, C. J. Phelps, D. M. Lyerly, T. D. Wilkins, and J. L. Johnson. 1990. Molecular characterization of the
7.
Zheng, L., S. F. Keller, D. M. Lyerly, R. J. Carman, C. W. Genheimer, C. A. Gleaves, S. J. Kohlhepp, S. Young, S. Perez, and K. Ye. 2004. Multicenter Evaluation of a New Screening Test that Detects
8.
9.
10.
in Fecal Specimens. J. Clin. Microbiol.
difcile
Miles, B. L., J. A. Siders, and S. D. Allen. 1988. Evaluation of a commercial latex test for
Lyerly, D. M., and T. D. Wilkins. 1986. Commercial latex test for
: 231- 236.
15
Clostridium difcile
: 3837-3840.
42
: its disease and toxins. Clin. Microbiol. Rev.
Clostridium difcile
Clostridium difcile
Clostridium difcile
Toxin A does not detect Toxin A. J. Clin. Microbiol.
toxins given intragastrically to animals. Infect. Immun.
Clostridium difcile
Clostridium difcile
1
toxin A. J. Clin. Microbiol.
for reactivity with
Clostridium difcile
. Infect. Immun.
C. difcile
Clostridium difcile
and cross-reactions with other bacteria. J. Clin. Microbiol.
23
: 349-352.
47
Clostridium difcile
: 72-78.
17
toxins A and B in fecal specimens. J. Infect. Dis.
: 4633-4639.
60
: 622-623.
toxin A gene. Infect. Immun.
/
mediated gastrointestinal
: 781-788.
149
: 480-488.
58
Clostridium
: 2452-2455.
26
Page 95
Revisions/Revisão
EN Added Product Quality Guarantee p. 8 Issued: 01/2025
PT Garantia Adicional de Qualidade do Produto p. 92 Issued: 01/2025
Page 96
Developed and
CH REP
MedEnvoy Switzerland
We
6827
The Netherlands
EC REP
Emergo Europe
Manufactured by:
TECHLAB, Inc.
2001 Kraft Drive
Blacksburg, VA 24060-6358, USA
TEL 1-800-832-4522 USA
TEL 1-540-953-1664 Outside USA
www.techlab.com
stervoortsedijk 60
AT Arnhem
Gotthardstrasse 28
6302 Zug
Switzerland
Technical Support - Advice Line
Further information can be obtained from contacting TECHLAB® Technical Support:
US +1 800 TECHLAB
Phone (540) 953-1664
Fax (540) 953-1665
Email [email protected]
Made in the USA.
© 2025 TECHLAB, Inc. All rights reserved.
C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE, the TECHLAB Logo, and TECHLAB are trademarks of TECHLAB, Inc.
ProClin is a trademark of Rohm and Haas Company.
All other trademarks referenced are trademarks of their respective owners.
RMS #91-T525C-02-TL Issued: 01/2025
Please
Recycle
Loading...