TAKARA LA Taq DRR20AG User Manual

TaKaRa LA Taq®

with GC Buffer

使 用 说 明 书

TaKaRa Code：DRR20AG

●包装量：

●制品说明

本制品是应用 LA PCR 原理研制的具有 3′→5′

Exonuclease 活性（Proof reading 活性）的耐热

性 DNA 聚合酶。无论是扩增短链 DNA 还是长链

DNA，其效率都优于其它同类产品，尤其在扩增大

于 10 kbp 的 DNA 片段方面，其优势更加明显，

而且保真性能强。当扩增具有复杂的二级结构（GC

rich 等）的模板或具有重复序列的模板时，使用

GC Buffer 进行 PCR 扩增将非常有效。使用本制

品扩增得到的 PCR 产物 3′端附有一个“A”碱基，

因此可直接克隆于 T-Vector 中。

●制品内容

TaKaRa LA Taq

2×GC Buffer I（5 mM Mg2+ Plus）*1 1.25 ml

2×GC Buffer II（5 mM Mg2+ Plus）*1 1.25 ml

6×Loading Buffer*2 1 ml

*1 请先使用 Buffer I，当使用 Buffer I 不能扩增时，

再试用 Buffer II。
*2 ① 电泳时，请按每 5 μl PCR 反应液中加入 1 μl
本制品的比例添加混合后进行电泳。
② 6×Loading Buffer 详细说明请见 TaKaRa 商品目

●保 存：

125 U

（5 U/μl） 25 μl

录。

-20℃

●活性定义

用活性化的大马哈鱼精子 DNA 作为模板/引物，在

74℃，30 分钟内，摄入 10 nmol 的全核苷酸为酸

性不溶物的活性定义为 1 个活性单位（U）。

●纯 度

1）10 U 的本酶和 0.6 μg的λ-

反应 1 小时，DNA 的电泳谱带不发生变化。

2）10 U 的 本 酶 和 0.6 μg 的 Supercoiled

pBR322 DNA 在 74℃下反应 1 小时，DNA 的

电泳谱带不发生变化。

3）10 U 的本酶和 0.6 μg的λDNA 在 74℃下反应

1 小时，DNA 的电泳谱带不发生变化。

●用 途

PCR 法扩增 DNA。

●PCR 反应性能

1） 以λDNA 为模板，可以很好地扩增 35 kbp 的

DNA 片段（使用 2×GC Buffer I）。

2） 以人基因组 DNA 为模板，可很好地扩增 17.5

kbp（β -Globin gene）的 DNA 片段（使用 2

×GC Buffer I）。

3） 以人基因组 DNA 为模板，可很好地扩增

proto oncogene 1,255 bp（GC 含量 65％）

的 DNA 片段（使用 2×GC Buffer I，II）。

Hin

d III 在 74℃下

c-jun

●应用例

以人基因组 DNA 为模板扩增 c-jun proto
oncogene 1,255 bp（GC 含量 65％）的 DNA
片段

1. 按下列组份配制 PCR 反应液。

TaKaRa LA Taq

2×GC Buffer I（or 2×GC Buffer II）25 μl

dNTP Mixture（各 2.5 mM） 8 μl

模板 DNA（人基因组 DNA）* 100 ng

Primer1（20 μM） 1 μl

Primer2（20 μM） 1 μl

灭菌蒸馏水 up to 50 μl

（5 U/μl） 0.5 μl

*【50 μl PCR 反应体系中模板 DNA 推荐使用量】

人基因组 DNA 0.1 μg～1 μg

大肠杆菌基因组 DNA 10 ng～100 ng
λDNA 0.5 ng～5 ng

质粒 DNA 0.1 ng～10 ng

2. PCR 反应条件。

94℃ 1 min.

94℃ 30 sec.

60℃ 30 sec.

72℃ 2 min.

注） PCR 反应条件视模板、引物等的结构条件不同

而各异。在实际操作中需根据模板、目的片段
的大小、碱基序列和引物的长短等具体情况，
设定最佳的反应条件（温度、时间等）。

30 Cycles

3. 结果。

M 1 2 M

2% Agarose gel 10 μl 电泳结果
M： DL2,000 DNA Marker*
1： 使用 2×GC Buffer I 的 1,255 bp

PCR 扩增产物

2： 使用2×GC Buffer II 的 1,255 bp

PCR 扩增产物

*（TaKaRa Code：D501A）

●注意事项

1. 使用 GC Buffer 进行 PCR 扩增时，建议使
用 Tm 值较高的引物。因此，引物最好设计
在 30 mer 左右。

2. 使用 GC Buffer 可能扩增的 GC rich 的
DNA 片段长度，会因 GC 含量不同而各有
差异。TaKaRa 公司曾经扩增过 2 kbp 的
GC 含量在 70％的 DNA 模板。同时也可应
用于 200 bp～300 bp 的短链 DNA GC
rich 模板。

3. 对于一般的 DNA 模板，TaKaRa 公司曾用

GC Buffer I 成功地扩增了 GC 含量在 50

％的 17.5 kbp 的人基因组 DNA 和 35 kbp

的λ DNA。但由于 GC Buffer 和一般的

PCR 用 Buffer 相比 DNA 变性效果较强（特

别是 GC Buffer II），因此，一般的 DNA 模

板使用 GC Buffer 进行 PCR 扩增时，有时

会降低 PCR 的扩增效率。

4. PCR 的反应液请在冰中配制，然后置于 PCR
反应仪上进行 PCR 反应。这种冷起动法（Cool
Start Method）可增强 PCR 扩增的特异性，
减少 PCR 过程中的非特异性反应，能得到良
好的 PCR 结果。

V2010.01