TAKARA LA Taq DCY209 User Manual
TaKaRa Code：DCY209
CycleavePCR®
Legionella
Detection Kit
（25 μl反应×50 次量）
说明书
宝生物工程(大连)有限公司
目 录
内 容 页 码
●制品说明 1
●制品内容 1
●保 存 1
●操作注意事项 2
●可能检出的菌种 2
●操作方法 4
●结果分析 5
●制品说明
Legionella pneumophila
染冷却水塔、循环式水浴槽、温泉等环境水中也存在。通过空气传播，经呼吸道吸入人体引起军团菌症。目
前，被发现的军团菌有 70 种以上，这些种类军团菌都有可能引起军团菌症。但从军团菌症患者和环境水检
出的结果看，
此方法费时，操作麻烦。
本制品是通过 Cycling Probe 法可以迅速、特异性检出
potentiator protein）基因和军团菌属菌共有的 5S rRNA 基因。制品中 mip 基因用 FAM 标记，5S 基因用
ROX 标记，内参照用 HEX 标记，在同一反应管内对 mip 基因、5S rRNA 及内参照（Internal Control）
同时进行扩增，通过三种不同荧光标记的探针可以对 mip 基因、5S rRNA 基因及内参照同时检出，实现多
通道同步检测。其中，对内参照反应的检测，可以监控反应是否正常进行，防止假阴性结果。制品中 DNA
聚合酶使用了改良后的 Hot Start 法用 DNA 聚合酶
扩增，大大提高 PCR 的检测灵敏度。本检测无需电泳，简单快速，灵敏度高，特异性强。
Cycling Probe 法技术原理图。本技术由 ID Biomedical 公司授权。
荧光淬灭物质 荧光物质
●制品内容（25 μl×50 次量）
1．
TaKaRa Ex Taq
2．Tli RNase H II（200 U/μl）*1 25 μl（50 次）
3．5×Reaction Mixture*2 250 μl（50 次）
4．Primer Mixture 150 μl（50 次）
5．Probe Mixture *3（FAM，HEX，ROX标记） 150 μl（50 次）
6．Mip Positive Control 10 μl（10 次）
7．5S Positive Control 10 μl（10 次）
8．dH
*1：Tli RNase H II是
*2：含有dNTP和Internal Control。
*3：荧光标记探针要注意避光。
【探针标记】
Lagionella pneumophila
RNA 碱基
扩增产物
2O 1.0 ml
Internal Control HEX Eclipse
为代表的军团菌属细菌是需氧型革兰氏阴性杆菌。广泛分布于土壤和淡水中，污
检出率最高。传统的军团菌检出主要手段是通过培养方法来判断，
L.pneumophila
TaKaRa Ex Taq
杂交
HS（5 U/μl） 12.5 μl（50 次）
Thermococcus litoralis
Target Reporter Quencher
mip FAM Eclipse
5S rRNA ROX Eclipse
来源的耐热性RNase H。
RNase H
在 RNA 部分切断
的 mip（macrophage infectivity
HS，可以有效抑制非特异性的 PCR
荧光强度增大
●保 存： -20℃。
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●操作注意事项
1. Real Time PCR仪的使用请参照仪器说明书进行。
2. 如果杂合探针、引物因混入核酸酶而被降解，则不能准确进行检测。实验者的汗液和唾液也会带入核酸酶，
操作时应注意。
3．本 Kit 是对基因进行检测的试剂盒，因此死菌也能被检测出来，当判断样品为阳性时，要用微生物学方法
进行再确认。
4. PCR 反应是灵敏度非常高的反应。为防止污染，建议从反应液的配制到检测的实验过程中，设定以下 3
个实验区域，并进行物理性隔离。
区域 1：反应液的配制及分装。此时不要开闭装有扩增产物或检测样品的 Tube 管。
区域 2：检测样品的制备。此时不要开闭装有扩增产物或检测样品的 Tube 管。
区域 3：向反应液中添加检测样品，进行反应、检出。
由于本制品是使用 Real Time PCR 的方法，扩增反应与检测同时进行，反应后的扩增产物不需要再进行
电泳。为了避免污染，严禁从 Tube 管中取出扩增产物。
●可能检出的菌种
1. 以下军团菌属使用本制品进行 5S rRNA 基因的检出确认。
ID-No Species Serogroup
1 NIIB0145
2 NIIB0040
3 NIIB0405
4 NIIB0057
5 NIIB0009
6 NIIB0687
7 NIIB0114
8 NIIB1254
9 NIIB0047
10 NIIB0113
11 NIIB0417
12 NIIB0406
13 NIIB0078
14 NIIB0049
15 NIIB0146
16 NIIB0408
17 NIIB0688
18 NIIB0689
19 NIIB0193
20 NIIB0234
21 NIIB0147
22 NIIB0404
23 NIIB0690
24 NIIB0691
L. adelaidensis
L. anisa
L. beliardensis
L. birminghamensis
L. bozemanii
L. bozemanii
L. brunensis
L. busanensis
L. cherrii
L. cincinnatiensis
L. donaldsonii
L. drozanskii
L. dumoffii
L. erythra
L. fairfieldensis
L. fallonii
L. feeleii
L. feeleii
L. geestiana
L. gormanii
L. gratiana
L. gresilensis
L. hackeliae
L. hackeliae
E 1762-AUS-E 49625
E WA-316-C3 35292
E Montbe'liard A1 700512
C 1407-AL-H 43702
1 C WIGA 33217
2 C Tronto-3 35545
E 441-1 43878
E KCTC 12084, K9951 700510
E ORW 35252
C 72-OH-H 43753
C MDA2706 BAA-693
E LLAP-1 700990
E NY23 33279
1 E SE-32A-C8 35303
E 1725-AUS-E 49588
E LLAP-10 700992
1 E WO-44C 35072
2 C 691-WI-H 35849
E 1308 49504
E LS-13 33297
E Lyon8420412 49413
E Gre'oux11D13 700509
1 C Lansing2 35250
2 C 798-PA-H 35999
Climical or
Environmental
Designation ATCC 检出
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