Roth X964, 6669, 0155, X965, 6671 User guide

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LB-Medien und -Agars

Empfohlene Medien zur Kultivierung von rekombinanten Escherichia coli in der
Molekularbiologie

X964, 6669, 0155, X965, 6671, 0159, X968, 6673, X969, 6675

Zusammensetzung in g/l (angenähert):

Best.­Nr.

Nährmedium

Trypton*

Pflanzliches

Pepton

Hefe-

extrakt

NaCl

Agar-

Agar

pH Wert

Granu­lierung

Menge im

Ansatz

X964

LB-Medium (Lennox)

10 g/l

-

5 g/l

5 g/l

-

7,0±0,2 - 20 g/l

6669

LB-Medium (Lennox), granuliert

10 g/l

-

5 g/l

5 g/l

-

7,0±0,2

granul.

20 g/l

0155

LB-Medium (Lennox) vegetal

-

10 g/l

5 g/l

5 g/l

-

7,0±0,2 - 20 g/l

X965

LB-Agar (Lennox)

10 g/l

-

5 g/l

5 g/l

15 g/l

7,0±0,2 - 35 g/l

6671

LB-Agar (Lennox), granuliert

10 g/l

-

5 g/l

5 g/l

15 g/l

7,0±0,2

granul.

35 g/l

0159

LB-Agar (Lennox) vegetal

-

10 g/l

5 g/l

5 g/l

15 g/l

7,0±0,2 - 35 g/l

X968

LB-Medium (Luria/Miller)

10 g/l

-

5 g/l

10 g/l

-

7,0±0,2 - 25 g/l

6673

LB-Medium (Luria/Miller), granul.

10 g/l

-

5 g/l

10 g/l

-

7,0±0,2

granul.

25 g/l

X969

LB-Agar (Luria/Miller)

10 g/l

-

5 g/l

10 g/l

15 g/l

7,0±0,2 - 40 g/l

6675

LB-Agar (Luria/Miller), granuliert

10 g/l

-

5 g/l

10 g/l

15 g/l

7,0±0,2

granul.

40 g/l

* Aus pankreatischem Verdau von Casein.

HERSTELLUNG

Die in der oben stehenden Tabelle angegebene Menge des Mediums wird in einem Liter destillierten Wassers
suspendiert. Gut mischen und unter häufigem Rühren/Schütteln erhitzen. LB-Agar sollte eine Minute kochen
bis das Pulver vollständig gelöst ist. Im Autoklaven bei 121 °C 15 Minuten lang sterilisieren.
Im Wasserbad auf 45-50 °C abkühlen lassen. Optional: Zugabe von Antibiotika nach Bedarf und nachdem das
Medium auf unter 50 °C abgekühlt ist. Gut mischen und in sterilisierte Röhrchen (Medium) bzw. Petrischalen
(Agar) gießen.
Nach dem Ansatz sollte das Medium bei 2-8 °C aufbewahrt werden und kann für etwa 4 Wochen verwendet
werden, solange die Sterilität garantiert ist. Die Farbe ist bernsteinfarben, gelierter Agar ist leicht schillernd.

EINSATZGEBIET

LB (Lysogeny Broth) Medien bilden eine Gruppe von reichhaltigen Nährlösungen zur Anzucht und Kultivierung
von E. coli Bakterien. Das erste LB-Medium wurde ursprünglich von Guiseppe Bertani im Jahr 1951 entwickelt,
um das Wachstum von Shigella und die Plaquebildung von P1, P2 und P3 Phagen1 zu optimieren. Seitdem
werden die Medien äußerst häufig zur Vermehrung von E. coli im Allgemeinen und von rekombinanten
E. coli im Besonderen verwendet, sowie zur Plasmidpropagation und die Proteinexpression in vitro.
Während der folgenden Jahre wurden einige Modifikationen eingeführt, u.a. durch das Weglassen der
ursprünglich enthaltenen Glucose. In einigen Formulierungen wurde das Natriumchlorid reduziert

2,3

, um optimale
Bedingungen für salzsensitive Bakterienstämme oder die Verwendung salzsensitiver Antibiotika (z.B. Blasticidin,
Hygromycin B, Puromycin) zu schaffen. Standardantibiotika, die für die Selektion rekombinanter Bakterien
verwendet werden (z.B. Ampicillin, Tetracyclin, Kanamycin B oder Chloramphenicol), sind nicht salzsensitiv und
können problemlos mit Hochsalz-LB-Medium verwendet werden. Die niedrigeren Salzkonzentrationen werden
außerdem für die Phagenpropagation verwendet, da in diesen Fällen Magnesiumchlorid zugegeben werden
muss, das den osmotischen Druck weiter erhöht.
Trypton stellt Stickstoff, Vitamine, Mineralien und essentielle Aminosäuren für das Bakterienwachstum bereit.
Hefeextrakt ist eine reichhaltige Quelle für Vitamine, vor allem der B-Gruppe. Natriumchlorid liefert wichtige
Elektrolyte. In LB-Agar ist hochreiner Agar-Agar als Geliermittel zugegeben.
Durch Zugabe von Antibiotika kann ein selektives LB-Medium hergestellt werden. IPTG und X--Gal können
zur Induktion der Proteinexpression zugegeben werden (Blau/Weiß-Selektion). Die Addition von 10-20 mM
Magnesium (als MgCl2 oder MgSO4) kann in den flüssigen Medien die erzielte Zelldichte steigern.

Produkt-Datenblatt

2

MIKROBIOLOGISCHE TESTS

Die folgenden Ergebnisse wurden erzielt nach Inkubation von Referenzstämmen im angegebenen
Medium / Agar bei einer Temperatur von 35±2 °C für 18-24 Stunden.

Mikroorganismen

Wachstum

Escherichia coli ATCC 23724

Gut

Escherichia coli ATCC 53868

Gut

Escherichia coli ATCC 33694

Gut

Escherichia coli ATCC 33849

Gut

Nach:

1.) Bertani, G. Studies on lysogenesis. I. The mode of phage liberation by lysogenic Escherichia coli.
J. Bacteriol. 62:293-300 (1951)

2.) Lennox, E. S. Transduction of linked genetic characters of the host by bacteriophage P1.
Virology 1:190-206 (1955)

3.) Luria, S. E.; Adams, J. N.; Ting, R. C. Transduction of lactose-utilizing ability among strain of E. coli
and S. dysenteriae and the properties of the transducing phage particles. Virology 12:348-390 (1960)

4.) Miller, J. H. Experiments in molecular genetics. Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor,
N.Y. (1972)

5.) Atlas, R.M., Parks L.C. Handbook of Microbiological Media. CRC Press, Inc. London (1993)

6.) Sambrook and Russell. Molecular cloning: a laboratory manual, 3rd ed. Cold Spring Harbor Laboratory
Press, Cold Spring Harbor, N.Y. (2001)

LB-Medium (Lennox) 500 g X964.1

1 kg X964.2
2,5 kg X964.3
5 kg X964.4

LB-Medium (Lennox), 500 g 6669.1
granuliert 1 kg 6669.2

2,5 kg 6669.3
5 kg 6669.4

LB-Agar (Lennox) 500 g X965.1

1 kg X965.2
2,5 kg X965.3

LB-Agar (Lennox), 500 g 6671.1
granuliert 1 kg 6671.2

2,5 kg 6671.3

LB-Medium (Lennox) 500 g 0155.1
vegetal 1 kg 0155.2

LB-Medium (Luria/Miller) 500 g X968.1

1 kg X968.2
2,5 kg X968.3
5 kg X968.4

LB-Medium (Luria/Miller), 500 g 6673.1
granuliert 1 kg 6673.2

2,5 kg 6673.3
5 kg 6673.4

LB-Agar (Lennox) 500 g 0159.1
vegetal 1 kg 0159.2

LB-Agar (Luria/Miller) 500 g X969.1

1 kg X969.2
2,5 kg X969.3
5 kg X969.4

LB-Agar (Luria/Miller), 500 g 6675.1
granuliert 1 kg 6675.2

2,5 kg 6675.3

Carl Roth GmbH + Co. KG

Schoemperlenstraße 3-5 • 76185 Karlsruhe • Postfach 100121 • 76231 Karlsruhe
Telefon: [phone] • Fax: [phone] • [e-mail] • www.carlroth.de

Die Firma ist eine Kommanditgesellschaft mit Sitz in Karlsruhe, Reg. Gericht Mannheim HRA 100055. P ersönlich haftende Gesellschafterin ist die Roth Chemie GmbH
mit Sitz in Karlsruhe, Reg. Gericht Mannheim HRB 100428. Geschäftsführer: André Houdelet sse 07/2021

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LB Media and -Agars

Recommended media for growth of recombinant Escherichia coli in genetic
engineering

X964, 6669, 0155, X965, 6671, 0159, X968, 6673, X969, 6675

Approximate formulation in g/l:

Art.
No.

Nutrient Medium

Tryptone*

Vegetable

peptone

Yeast

extract

NaCl

Agar-

Agar

pH

value

Granul-

ation

Preparation

X964

LB Broth (Lennox)

10 g/l

-

5 g/l

5 g/l

-

7.0±0.2 - 20 g/l

6669

LB Broth (Lennox), granulated

10 g/l

-

5 g/l

5 g/l

-

7.0±0.2

yes

20 g/l

0155

LB Broth (Lennox) vegetal

-

10 g/l

5 g/l

5 g/l

-

7.0±0.2 - 20 g/l

X965

LB Agar (Lennox)

10 g/l

-

5 g/l

5 g/l

15 g/l

7.0±0.2 - 35 g/l

6671

LB Agar (Lennox), granulated

10 g/l

-

5 g/l

5 g/l

15 g/l

7.0±0.2

yes

35 g/l

0159

LB Agar (Lennox) vegetal

-

10 g/l

5 g/l

5 g/l

15 g/l

7.0±0.2 - 35 g/l

X968

LB Broth (Luria/Miller)

10 g/l

-

5 g/l

10 g/l

-

7.0±0.2 - 25 g/l

6673

LB Broth (Luria/Miller), granulated

10 g/l

-

5 g/l

10 g/l

-

7.0±0.2

yes

25 g/l

X969

LB Agar (Luria/Miller)

10 g/l

-

5 g/l

10 g/l

15 g/l

7.0±0.2 - 40 g/l

6675

LB Agar (Luria/Miller), granulated

10 g/l

-

5 g/l

10 g/l

15 g/l

7.0±0.2

yes

40 g/l

* Pancreatically digested peptone from casein.

PREPARATION

Suspend the amount of the powdered medium mentioned in the table (see above) in one litre of distilled or
deionized water. Mix well and heat with frequent agitation. LB agars should be boiled for one minute until fully
dissolved. Sterilize in an autoclave at 121 °C for 15 minutes.
Cool to 45-50 °C in a water bath. Optionally add antibiotics as required after the medium has cooled to below
50 °C. Mix well and dispense into sterilized tubes (broth) or petri dishes (agar). The prepared medium should
be stored at 2-8 °C and may be used for approx. 4 weeks, as long as sterility is guaranteed. The colour is
amber, hardened agars are slightly opalescent.

USES

LB (Lysogeny Broth) media is a group of nutritionally rich growth solutions for the propagation and mainten­ance of E. coli bacteria. Originally, the first LB medium has been developed by Guiseppe Bertani in 1951 in
order to optimise growth of Shigella and plaque formation of P1, P2 and P3 phages1. Since then, the media
were, and still are, widely used for growth of E. coli in general and recombinant E. coli in particular, as well as
for propagation of plasmids and expression proteins in vitro.
During the following years, some modifications were implemented including the omittance of the originally used
glucose. In some formulations, sodium chloride has been reduced

2,3

, in order to provide optimised conditions
for salt sensitive bacterial strains or salt sensitive antibiotics (e.g. blasticidin, hygromycin B, puromycin).
Standard antibiotics used for selection of recombinants, for instance ampicillin, tetracycline, kanamycin B or
chloroamphenicol, are not salt sensitive and may well be used with high-salt LB medium. Lower salt concen­trations are also used for phage propagation, since magnesium chloride has to be added, raising the osmotic
pressure further.
Tryptone provides nitrogen, vitamins, minerals and amino acids essential for growth. Yeast extract is a rich
source of vitamins, particularly the B-group. Sodium chloride supplies essential electrolytes for transport and
osmotic balance. In LB agars, high-pure agar-agar is added as solidifying agent.
By addition of antibiotics, a selective LB medium may be prepared. IPTG and X--Gal may be added for
induction of protein expression. In the liquid media, addition of 10-20 mM magnesium (as MgCl2 or MgSO4)
may increase the cell density achieved.

Product Data Sheet

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MICROBIOLOGICAL TEST

The following results were obtained in the performance of the given medium from type cultures after
incubation at a temperature of 35±2 °C and observed after 18-24 hours.

Microorganisms

Growth

Escherichia coli ATCC 23724

Good

Escherichia coli ATCC 53868

Good

Escherichia coli ATCC 33694

Good

Escherichia coli ATCC 33849

Good

Acc. to:

1.) Bertani, G. Studies on lysogenesis. I. The mode of phage liberation by lysogenic Escherichia coli.
J. Bacteriol. 62:293-300 (1951)

2.) Lennox, E. S. Transduction of linked genetic characters of the host by bacteriophage P1.
Virology 1:190-206 (1955)

3.) Luria, S. E.; Adams, J. N.; Ting, R. C. Transduction of lactose-utilizing ability among strain of E. coli
and S. dysenteriae and the properties of the transducing phage particles. Virology 12:348-390 (1960)

4.) Miller, J. H. Experiments in molecular genetics. Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor,
N.Y. (1972)

5.) Atlas, R.M., Parks L.C. Handbook of Microbiological Media. CRC Press, Inc. London (1993)

6.) Sambrook and Russell. Molecular cloning: a laboratory manual, 3rd ed. Cold Spring Harbor Laboratory
Press, Cold Spring Harbor, N.Y. (2001)

LB Broth (Lennox) 500 g X964.1

1 kg X964.2

2.5 kg X964.3
5 kg X964.4

LB Broth (Lennox), 500 g 6669.1
granulated 1 kg 6669.2

2.5 kg 6669.3
5 kg 6669.4

LB Agar (Lennox) 500 g X965.1

1 kg X965.2

2.5 kg X965.3

LB Agar (Lennox), 500 g 6671.1
granulated 1 kg 6671.2

2.5 kg 6671.3

LB Broth (Lennox) 500 g 0155.1
vegetal 1 kg 0155.2

LB Broth (Luria/Miller) 500 g X968.1

1 kg X968.2

2.5 kg X968.3
5 kg X968.4

LB Broth (Luria/Miller), 500 g 6673.1
granulated 1 kg 6673.2

2.5 kg 6673.3
5 kg 6673.4

LB Agar (Lennox) 500 g 0159.1
vegetal 1 kg 0159.2

LB Agar (Luria/Miller) 500 g X969.1

1 kg X969.2

2.5 kg X969.3
5 kg X969.4

LB Agar (Luria/Miller), 500 g 6675.1
granulated 1 kg 6675.2

2.5 kg 6675.3

Carl Roth GmbH + Co. KG

Schoemperlenstraße 3-5 • 76185 Karlsruhe • P.O. Box 100121 • 76231 Karlsruhe
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