Qiagen FTA® Foam Tip Applicator, FTA® Purification Reagent, Punches Harris Uni-Core, Ø: 3.0 mm, 4 unit(s) User guide [de]

Gebrauchsanweisung

FTA®-Karten

Von Qiagen

Beschreibung:

FTA-Karten wurden entwickelt zur Sammlung, zum Transport,
zur Archivierung und zur Aufreinigung von Nukleinsäuren bei
Raumtemperatur und zur nachfolgenden PCR-Analyse. Die
Nukleinsäure kann aus einer breiten Vielfalt von biologischen
Proben wie Blut, bukkale Zellen, Gewebe, Kulturzellen,
Mikroorganismen sowie Pflanzengewebe u. v. a. gewonnen
werden. FTA-Karten werden mit einer patentierten
chemischen Reagenzmischung beschichtet, welche die Zell­membranen lysiert und Proteine bei Berührung denaturiert.
Nukleinsäuren werden immobilisiert und gegen UV-Schäden
und mikrobielle Kontamination bzw. Pilzbefall geschützt. In
den Proben enthaltene infektiöse Erreger werden beim
Auftragen auf die FTA-Karten inaktiviert. FTA-Karten sind in
verschieden Ausführung erhältlich, wie z.B. CLASSIC, MINI,
MICRO und die Gene Card. FTA-Farbindikatorkarten färben
sich beim Auftrag der Probe von rosarot nach weiß und
werden für den Auftrag farbloser Proben empfohlen. Bei der
Verwendung der FTA-Karten wird die Probe (Flüssigprobe
bzw. gepresstes Gewebe) einfach aufgetragen und bei
Zimmertemperatur luftgetrocknet. Dann entnimmt man mit
einer speziellen Stanze eine kleine Scheibe (1,2 mm bzw. 2.0
mm, je nach Auftrag) und setzt diese nach dem Waschen bei
der PCR-Analyse als Template ein.

Vorsichtsmaßnahmen:
Handhabung: Wir empfehlen dringend das Tragen von

Handschuhen, um eine Kontamination der FTA-Karten zu
vermeiden. Befolgen Sie immer die üblichen
Vorsichtsmaßnahmen bei der Handhabung von biologischen
Proben.

Lagerung: Lagern Sie die unbenutzten Karten in der
Originalverpackung in einer kühlen, trockenen und sauberen
Umgebung. Nachdem Sie die Proben aufgetragen haben,
lassen Sie diese trocknen. Danach sollen die Proben bei
Zimmertemperatur in einer trockenen Umgebung gelagert
werden.

ANWENDUNG:
Auftragen von Blutproben (frisches Vollblut bzw. mit

gerinnungshemmenden Mitteln: EDTA, Natriumcitrat,
ACD oder Heparin):

1. Markieren Sie die FTA-Karte mit der jeweiligen Probenbe­zeichnung.

2. Tropfen Sie das Blut (<125 µl pro 2,5 cm Kreis, < 75 µl pro
2 cm Kreis) in einer konzentrischen Kreisbewegung auf
die Karte innerhalb des markierten Kreises. Vermeiden
Sie zu große Mengen Blut, da diese die Chemikalien auf
der Karte überladen würden. Verreiben oder verschmieren
Sie das Blut nicht auf der Karte.

3. Die auf FTA-Karten aufgetragenen Proben können direkt
bei Zimmertemperatur gelagert werden.

Hinweis: Werden die Proben kurz nach dem Auftragen

auf FTA-Karten analysiert, so lassen Sie diese vor der
Ausstanzung eine Stunde bei Zimmertemperatur trocknen.
Bitte nicht erhitzen um die Trocknungsdauer zu verkürzen.

4. Bitte beachten Sie: Trockene Blutstropfen erscheinen
dunkler als frische. Diese Farbänderung ist normal und
bedeutet keinen Verlust der Probe.

5. Die Probe ist jetzt für downstream-Applikationen bzw. zur
Archivierung bereit.

Sammeln und Auftragen von bukkalen Zellproben:

1. Legen Sie die FTA-Karte (wir empfehlen die FTA­Farbindikatorkarte) auf eine saubere, trockene und flache
Oberfläche. Markieren Sie die Karte mit der jeweiligen
Probenbezeichnung.

2. Entnehmen Sie den Schwammapplikator laut Anweisung
aus der Schutzverpackung.

3. Halten Sie den Kunststoffgriff des Applikators, legen Sie
den Schwammkopf in den Mund und reiben Sie die
Innenwange 30 Sekunden lang mit einer Seite des
Schwammkopfes. Wiederholen Sie diesen Vorgang,
indem Sie die andere Seite des Schwammkopfes für die
zweite Wangeninnenseite benutzen. Führen Sie den
Schwammkopf am Zahnfleisch und an den Wangenfalten
entlang sowie unter der Zunge. Saugen Sie so viel
Speichelflüssigkeit wie möglich auf. Entnehmen Sie den
Applikator aus dem Mund.

4. Heben Sie das Papierdeckblatt der FTA­Farbindikatorkarte an, um den rosaroten Probenbereich
freizulegen. Drücken Sie die flache Oberfläche des
Applikatorenkopfes innerhalb des Probenkreises auf die
Karte. Ohne den Schwammkopf von der Karte anzuheben,
drücken Sie den Kopf aus, indem Sie den Griff von einer
Seite zur anderen drehen (90° in jeder Richtung). Drücken
Sie dreimal, um das Probenfeld vollständig

durchzutränken. Drehen Sie den Applikator jetzt um und
wiederholen Sie den Vorgang mit der anderen Seite des
Kopfes im selben Kreis. Das Probenfeld wird sich weiß
verfärben und die Position der Probe anzeigen.

5. Werden keine Farbindikatorkarten eingesetzt, so kreisen
Sie die Position der Probe mit einem Kugelschreiber oder
Bleistift ein.

6. Entsorgen Sie den Applikator gemäß den Laborrichtlinien.
Führen Sie das Schwammstäbchen nach Berührung mit
der FTA-Karte nicht wieder in den Mund ein.

7. Werden bukkale Zellen auf mehrere FTA-Kreise
auftragen, benutzen Sie bitte immer einen neuen
Applikator und wiederholen Sie die Schritte 1 bis 6.

8. Die auf FTA-Karten aufgetragenen Proben können direkt
bei Zimmertemperatur gelagert werden.

Hinweis: Werden die Proben kurz nach dem Auftragen

auf FTA-Karten analysiert, so lassen Sie diese vor der
Ausstanzung eine Stunde bei Zimmertemperatur trocknen.
Bitte nicht erhitzen um die Trocknungsdauer zu verkürzen.

9. Die Probe ist jetzt für downstream-Applikationen bzw. zur
Archivierung bereit.

Auftragen von Gewebe- und Zellkulturproben:

1. Bei Gewebekulturzellen wird eine Konzentration von >100
Zellen / µl für die DNA-Analyse und >1000 Zellen / µl für
die RNA-Analyse in Medium, Trypsin oder PBS-Puffer auf
die FTA-Karten aufgetragen. Ca. 65 µl der Probe wird
benötigt, um einen 2,5 cm Kreis auf der FTA-Karte zu
füllen.

2. Die auf FTA-Karten aufgetragenen Proben können direkt
bei Zimmertemperatur gelagert werden.

Hinweis: Werden die Proben kurz nach dem Auftragen

auf FTA-Karten analysiert, so lassen Sie diese vor der
Ausstanzung eine Stunde bei Zimmertemperatur trocknen.
Bitte nicht erhitzen um die Trocknungsdauer zu verkürzen.

3. Die Probe ist jetzt für downstream-Applikationen bzw. zur
Archivierung bereit.

Auftragen von pflanzlichen Proben:
Direktes Pressen der Blätter:

1. Legen Sie das Blattmaterial direkt auf die FTA-Karte.
Bedecken Sie das Blatt mit etwas Parafilm.

2. Drücken bzw. schlagen Sie das Blatt leicht mit einem
stumpfen Gegenstand, z.B. einem Hammer oder Pistill.

3. Wenn der Extrakt auf der Rückseite der FTA-Karte
sichtbar wird, ist der Sammelprozess beendet.

4. Die auf FTA-Karten aufgetragenen Proben können direkt
bei Zimmertemperatur gelagert werden.

Hinweis: Werden die Proben kurz nach dem Auftragen

auf FTA-Karten analysiert, so lassen Sie diese vor der
Ausstanzung eine Stunde bei Zimmertemperatur trocknen.
Bitte nicht erhitzen um die Trocknungsdauer zu verkürzen.

5. Die Probe ist jetzt für downstream-Applikationen bzw. zur
Archivierung bereit.

Pflanzengewebehomogenat:

1. Verwenden Sie ca. 10-20 mg Pflanzengewebe für das
Homogenat.

2. Fügen Sie dem Pflanzengewebe ca. 5 Volumina PBS­Puffer zu. Zermahlen sie das Gewebe mit einem Pistill bis
ein Teil der Pflanzengewebe deutlich homogenisiert wird.
Das Homogenat braucht in der Konsistenz nicht glatt zu
sein.

3. Mit einer Pipette tragen Sie ca. 25 µl des
Pflanzenhomogenates auf jeden Kreis der FTA-Karte auf.

4. Die auf FTA-Karten aufgetragenen Proben können direkt
bei Zimmertemperatur gelagert werden.

Hinweis: Werden die Proben kurz nach dem Auftragen

auf FTA-Karten analysiert, so lassen Sie diese vor der
Ausstanzung eine Stunde bei Zimmertemperatur trocknen.
Bitte nicht erhitzen um die Trocknungsdauer zu verkürzen.

5. Die Probe ist jetzt für downstream-Applikationen bzw. zur
Archivierung bereit.

Auftragen bakteriellen Proben (für bakterielle genomische
DNA)

1. Nehmen Sie eine Agarkolonie und lösen Sie diese in
5-10 µl bakteriellem Kulturmedium, PBS- oder TE-1-Puffer
(10 mM Tris-HCl, 0,1 mM EDTA, pH 8,0).

2. Tragen Sie 5-10 µl bakterieller Suspension auf die FTA­Karte auf, (wir empfehlen Farbindikatorenkarten). Werden
keine Farbindikatorkarten eingesetzt, so kreisen Sie die
Position der Probe mit einem Kugelschreiber oder Bleistift
ein.

3. Die auf FTA-Karten aufgetragenen Proben können direkt
bei Zimmertemperatur gelagert werden.

Hinweis: Werden die Proben kurz nach dem Auftragen

auf FTA-Karten analysiert, so lassen Sie diese vor der
Ausstanzung eine Stunde bei Zimmertemperatur trocknen.
Bitte nicht erhitzen um die Trocknungsdauer zu verkürzen.

4. Die Probe ist jetzt für downstream-Applikationen bzw. zur
Archivierung bereit.

Bakterielle über-Nacht-Kulturen:

1. Nehmen Sie ca. 65 µl einer über Nacht vorbereiten Kultur
and und tragen Sie diese auf die FTA-Karte auf (wir
empfehlen Farbindikatorenkarten). Werden keine
Farbindikatorkarten eingesetzt, so kreisen Sie die Position
der Probe mit einem Kugelschreiber oder Bleistift ein.

2. Die auf FTA-Karten aufgetragenen Proben können direkt
bei Zimmertemperatur gelagert werden.

Hinweis: Werden die Proben kurz nach dem Auftragen

auf FTA-Karten analysiert, so lassen Sie diese vor der
Ausstanzung eine Stunde bei Zimmertemperatur trocknen.
Bitte nicht erhitzen um die Trocknungsdauer zu verkürzen.

3. Die Probe ist jetzt für downstream-Applikationen bzw. zur
Archivierung bereit.

Archivierung der Proben auf FTA-Karten:

Die auf FTA-Karten aufgetragenen biologischen Proben
werden bei Zimmertemperatur in einer Multi-Barrier Tasche
mit einem Trockenmittel archiviert bzw. in einer Feuchte­kontrollierten, kühlen und trockenen Umgebung gelagert.
Proben für die RNA-Analyse sollen bei -20 °C (bzw. -70 °C
bei Langzeitlagerung) gelagert werden.

Vorbereitung von DNA-Proben für die downstream­Analyse:

1. Stechen Sie eine Probenscheibe aus dem Probenfeld
heraus. Eine 1,2 mm Scheibe wird für Blutproben und
bakteriell genomische DNA-Proben empfohlen. Benutzen
Sie eine 2,0 mm Scheibe für sonstige Proben. Legen Sie
die Probenscheibe in ein PCR-Röhrchen.

2. Fügen Sie in das PCR-Röhrchen 200 µl FTA­Aufreinigungsreagenz hinzu.

3. Inkubieren Sie für 5 Minuten bei Raumtemperatur, der
Inhalt des Röhrchens kann bei Bedarf leicht gemischt
werden.

4. Entfernen und entsorgen Sie das verbrauchte
Aufreinigungsreagenz mit einer Pipette.

5. Wiederholen Sie die Schritte 2-4 zweimal, für insgesamt
drei Waschgänge mit FTA-Aufreinigungsreagenz.

6. Fügen Sie 200 µl TE-1-Puffer (10 mM Tris-HCl, 0,1 mM
EDTA, pH 8,0) in das PCR-Röhrchen hinzu.

7. Inkubieren Sie für 5 Minuten bei Raumtemperatur.

8. Entfernen und entsorgen Sie das verbrauchte
Aufreinigungsreagenz mit einer Pipette.

9. Wiederholen Sie Schritte 6-8 einmal für insgesamt zwei
Waschgänge mit TE-1-Puffer.

10. Lassen Sie die Scheibe bei Zimmertemperatur für ca. eine
Stunde trocknen. Sie können den Trocknungsvorgang der
Scheibe durch Wärme bei 56 °C auf 10 Minuten
beschleunigen. Die FTA-Scheibe ist jetzt einsatzfähig für
die PCR.

Wird die Probenscheibe von einer pflanzlichen oder
bakteriellen Kultur aufgereinigt, sind lediglich zwei
Waschgänge mit dem FTA-Aufreinigungsreagenz notwendig.

Downstream-PCR-Aufwendungen:

Die gewaschene, getrocknete Scheibe kann jetzt für die PCR­Analyse eingesetzt werden. Für eine 25 µl Reaktion
empfehlen wir eine 1,2 mm Scheibe bei Blutproben und eine
2,0 mm Scheibe für bukkale und bakterielle Proben. Die
Scheibe wird direkt als Template in die PCR-Reaktion
eingesetzt. Keine Änderungen der PCR-Reaktionsmischung
bzw. der Zyklusbedingungen sind erforderlich.

Weitere Protokollinformationen erhalten Sie unter
[e-mail].

FTA

®

Karten MINI CL90.1

FTA

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Karten MINI mit Farbindikator CL91.1

FTA

®

Tasche MINI CL92.1

FTA

®

Karten CLASSIC CL93.1

FTA

®

Karten CLASSIC mit Farbindikator CL94.1

FTA

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Tasche MAXI CL95.1

FTA

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Aufreinigungsreagenz CL99.1

FTA

®

Schwammapplikator HP14.1

Harris Uni-Core Stanzen 1 mm 25 Stck 6729.1
Harris Uni-Core Stanzen 1.2 mm 4 Stck* HP15.1

25 Stck HP15.2
Harris Uni-Core Stanzen 2 mm 4 Stck* HP16.1

25 Stck HP16.2
Harris Uni-Core Stanzen 3 mm 4 Stck* 6798.1
25 Stck 6798.2
Harris Uni-Core Stanzen 6 mm 4 Stck* 6799.1
25 Stck 6799.2

* inkl. 2 Schneidematten

Carl Roth GmbH + Co. KG

Schoemperlenstraße 3-5 • 76185 Karlsruhe
Postfach 100121 • 76231 Karlsruhe

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Fax: [phone]
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GmbH mit Sitz in Karlsruhe, Reg. Gericht Mannheim HRB 100428.
Geschäftsführer: André Houdelet