promega FL-JOE-TMR-CXR service manual

5

Matrix FL-JOE-TMR-CXR

原英文技术手册号码：TBD015

本说明书用于产品 DG2860

所有的技术文献均可从公司网站www.promega.com

请访问公司网站以证实您所使用的技术手册为最新版本

I． 介绍 ………………………………………………………………………………

II． 产品组分 …………………………………………………………………………

III．用 ABI PRISM® 310 遗传分析仪测定扩增片段…………………………………

A. 仪器准备………………………………………………………………………
B. 样品准备………………………………………………………………………
C. 毛细管电泳及检测……………………………………………………………

D. Matrix 生成……………………………………………………………………

IV. 用 ABI PRISM

®

377 DNA 测序仪测定扩增片段………………………………

A. 聚丙稀酰胺凝胶制备…………………………………………………………

B. 仪器准备………………………………………………………………………
C. 凝胶预电泳……………………………………………………………………
D. 样品准备及上样………………………………………………………………
E. 凝胶电泳及检测………………………………………………………………
F. Matrix 生成……………………………………………………………………
G. 玻璃板的重复使用……………………………………………………………

V. Matrix 的优化 ……………………………………………………………………

A. 设计新的 Project………………………………………………………………
B. Matrix 校正……………………………………………………………………
C. 应用 Matrix 校正………………………………………………………………

VI. 疑难解答 …………………………………………………………………………

得到

1

2

2
3

3
3

3

4
5

6
6
7
7
7

8

8
9

9
9
10

VII. 缓冲液和溶液的组成 ……………………………………………………………

12

I. 介绍

用 ABI PRISM

®

310 遗传分析仪和 ABI PRISM® 377 DNA 测序仪评估多色

系统时，正确生成 matrix 文件非常关键。为了制备 matrix, 使用与样品及等位点
梯度相同的毛细管电泳（CE ）或胶的条件运行 4 个标准样品。Matrix
FL-JOE-TMR-CXR 含有用 4 种荧光素标记的 DNA 片段：1 个管中的 DNA 片段
用荧光素 (Fluorescein) 标记，1 个管中的 DNA 片段用羧基-4 甲基罗丹明（TMR）
标记，1 个管中的 DNA 片段用 6-羧基-4’，5’-二氯-2’，7’-二甲氧基荧光素(JEO) 标
记，1 个管中的 DNA 片段用羧基-X-罗丹明 (CXR) 标记。

Fluorescein Matrix，JOE Matrix，TMR Matrix，CXR Matrix 分别用作蓝色、

绿色、黄色、和红色标准。每台仪器需要独立生成一个 Matrix 。 Matrix

®

FL-JOE-TMR-CXR 设计用于 PowerPlex

16 系统， PowerPlex®1.2 系统（荧光

素和 TMR 标记），或任一个 Promega 荧光 STR 系统（荧光素-标记）。

注意：本中文操作手册仅供实验参考，在实际使用中请详细对照原英文技术手册 TBD015。如遇到问题请与 Promega 公司北

京办事处联系，TEL: [phone]；E-mail: [e-mail]

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技术手册号码：CTBD01

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荧光检测仪器的操作流程可从仪器制造商处获取。

    

l

l

l

l

获取 Promega 公司其他荧光 STR 系统的资料，参照 GenePrint®荧光 STR 系统

技术手册 TMD006，PowerPlex
统技术手册 TMD009， PowerPlex
系统技术手册 TMD012。这些技术手册和更多的产品信息获取请登陆网站：

www.promega.com，或与 Promega 公司联系。

II. 产品组分

产品 目录号

Matrix FL-JOE-TMR-CXR DG2860

包括：



20μ
20μ
20μ
20μ

Flurescein Matrix
JOE Matrix
TMR Matrix
CXR Matrix

1ml

Blue Dextran Loading Solution

1

Protocol

保存条件：所有组分保存在-20℃, Matrices 中的片段是光敏感的，必须保存在黑暗
中。建议这些试剂和扩增后试剂保存在一起（远离扩增前试剂）并使用不同的加样
头、试管架等。

警告：甲酰胺是

一种有刺激性的
和致崎的试剂；
避免吸入及与皮
肤接触。在您使
用此试剂时请阅
读警示标记并采
取必要的防护措
施。在使用甲酰
胺进行工作时，
通常需要戴双层
手套及防护眼
镜。

若需要获取进一步的产品资料，附加组分及相关产品的定货信息，可登陆网站：

www.promega.com

，或与 Promega 公司联系。

III、 用 ABI PRISM® 310 遗传分析仪检测扩增片段

用户提供的材料：

 加热块、水浴箱或热循环仪
 冰
 310 毛细管，47cm×50μm
 Performance Optimized

Polymer 4 (POP-4)

 玻璃针筒（1 ml）

注意：甲酰胺的质量非常重要，用去离子的电导率<100μS/ cm 的甲酰胺。可以
将甲酰胺分装并-20℃冻存。多次冻融或在 4℃长期保存会使甲酰胺降解。电导率
>100μS/ cm 的甲酰胺含有离子，在进样时和 DNA 竞争。这会导致低的峰值，
降低灵敏度。延长进样时间不会增加信号强度。

®

1.1 系统技术手册 TMD008， PowerPlex® 1.2 系

®

2.1 系统技术手册 TMD011 及 PowerPlex® 16

 样品管和隔片
 防污染加样头
 10×遗传分析仪缓冲液
 电导率<100μS/ cm 的去离子甲酰胺

（Amresco 超纯级，目录号 0606）

注意：本中文操作手册仅供实验参考，在实际使用中请详细对照原英文技术手册 TBD015。如遇到问题请与 Promega 公司北

京办事处联系，TEL: [phone]；E-mail: [e-mail]

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A. 仪器准备

1． 参照 ABI PRISM

®

310 遗传分析仪用户手册指南，进行泵的清洗，安装毛细管，

校准自动进样器及向注射器中添加 Polymer（POP-4）。

2． 打开 ABI PRISM

3． 按照 ABI PRISM

“Sample info”栏输入适当的样品信息。建立新的 GeneScan

®

310 收集软件。

®

310 遗传分析仪用户手册指南，准备 GeneScan® 样品页。在

®

进样单，从下拉

菜单选择合适的样品页。

4． 用下拉菜单选择“GS STR POP4（1ml）A”模式。将电泳时间改为 30 分钟，

按下面所示保留其余参数设置：

Inj. Secs: 5
Inj. kV: 15.0
Run kV: 15.0
Run ℃ 60

Run time（minutes） 30

5． 对 Matrix 文件选“none”。

B. 样品准备

1. 对每一个 matrix 样品，将 2μl matrix 样品和 25μl 去离子甲酰胺或水混合。

2. 95℃变性 3 分钟， 立即放在冰上冷却 3 分钟。

步骤 4，

对不同的仪器进
样时间可能需要
优化

3. 将管子放在合适的样品架中（48 管或 96 管）。

4. 将样品架放入仪器，关闭仪器门。

C. 毛细管电泳和检测

1. 放好样品架，关闭仪器门，点击“Run”键开始毛细管电泳系统。

2. 通过观察“raw data”和”status windows” 窗口来监测电泳状况。

3. 对每一个样品，运行注射器泵、样品进样及样品电泳共需要大约 40 分钟。

D. Matrix 生成

1. 打开 GeneScan

2. 观察每一个 matrix 样品中的“raw data”。标出样品文件名，然后在“sample ”

菜单中选择“raw data ”。将光标移至引物峰内侧，使光标十字位于基线的平滑
部分。记录在视窗底部显示的 X 值数字。选择一个至少包含 5 个各种色谱峰的区
域； 产生 matrix 需要至少 5 个峰。见第八页图 1。

3. 在 File 菜单中选择“New”，然后点击 Matrix 图标。“points ”扫描域的默认值
为 100，000。点击每个 matrix 的色谱颜色以表明对应于该色谱的样品文件。在
“start at”域输入步骤 2 所记录的 X 值。

®

Project。

注意：本中文操作手册仅供实验参考，在实际使用中请详细对照原英文技术手册 TBD015。如遇到问题请与 Promega 公司北

京办事处联系，TEL: [phone]；E-mail: [e-mail]

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色谱颜色 对应的 Matrix
蓝色
绿色
黄色
红色

Fluorescein Matrix DG288A
JOE Matrix DG284A
TMR Matrix DG289A
CXR Matrix DG290A

Part#

4. 选择“OK”，则 matrix 文件生成。

5. 将 Matrix 文件保存于 GeneScan

®

文件夹中的 Matrix Standard 文件夹内，

此 matrix 文件的拷贝应保存于系统文件夹中的 ABI 文件夹内。

6. 通过标出 GeneScan

®

Project 中的样品，新生成的 matrix 可用于已走胶的

样品。在“sample”菜单下，选择“install new matrix”, 标出新的 matrix
并点击“open”, 则新的 matrix 可以用于样品文件，样品可以用新的 matrix
进行分析。

7. Matrix 的质量可以确认。 将新生成的 matrix 文件应用于生成 matrix 的样品，
用所有 4 种色谱颜色来分析 matrix 样品。 对于在步骤 3 所列出的色谱颜色，
matrix 样品的峰值应该在 400-3,000rfu 之间。其余 3 种色谱颜色的基线应相
对平滑。在 CXR（红色）孔道可能会观察到少量 TMR（黄色）拉升现象。

注意：用 PowerPlex

TM

16 系统扩增的样品，一种色谱颜色的等位基因峰在

另一种色谱颜色的测定值应低于 10%。但下面的情况除外：

 除性别基因外，在所有位点都可能观察到多至 15%的从 TMR 到 CXR 的

拉升现象。

 在性别基因位点（大约 104 和 110 个碱基），可以观察到高于 15%的从

TMR 到 CXR 的拉升现象。

IV. 用 ABI PRISM

®

377 DNA 测序仪来检测扩增片段

用户提供的材料
（溶液组分在第 VII 章节列出）

 加热块、水浴箱、热循环仪
 冰

®

 Long Ranger

录号#50611）或 Long Ranger

TM

Singel

凝胶液（BMA 目

pack for ABI

sequencers 377-36cm (BMA 目
录号#50691)

 10%过硫酸铵（目录号#V3131）
 TEMED（目录号#V3136）
 尿素（目录号#V3171）

 TBE 10×buffer
 Nalgene

®

tissue culture filter (0.2

微米)

 防污染加样头
 凝胶上样头
 36 cm 前后玻璃板
 36 cm 凝胶垫片（0.2mm 厚）
 36- 孔鲨鱼齿梳或 34- 孔方齿梳

（0.2mm 厚）

 夹子（大的办公室夹子）

®

 Liqui-Nox

或其它去污剂

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A. 制备聚丙烯酰胺凝胶

制备 ABI PRISM

®

377 DNA 测序仪的凝胶时，需要使用有毒试剂。这些试剂和

它们的毒性列在表 1。

表 1. 有毒试剂

用于 ABI PRISM
丙烯酰胺（Long Range

®

377 DNA 测序仪的试剂 毒性

®

凝胶溶液） 致癌剂、有毒
过硫酸铵 氧化剂、腐蚀剂
甲酰胺（包含在 Blue Dextran Loading Solutyion 中） 刺激性、致畸

TEMED

腐蚀剂、挥发

尿素 刺激性

丙烯酰胺（Long Range

®

凝胶溶液）是一种神经毒，并怀疑是致癌剂，避免吸
入和与皮肤接触。在操作这一物质时要阅读警示标记并做好必要的防护。当用丙烯酰
胺溶液时，通常带上双层手套和防护眼镜。

用下面操作步骤制备 ABI PRISM

®

377 DNA 测序仪上的 36cm 变性聚丙烯酰胺

凝胶。建议使用低荧光玻璃板，可向仪器制造商购买。

1． 用热水和 1% Liqui-Nox

®

溶液，或其它稀释的实验室去污剂彻底清洗玻璃板。然

后用去离子水彻底清洗，让玻璃板在无尘埃环境中空气干燥。

2． 将 0.2mm 厚的凝胶垫片放在前后玻璃板中间。用夹子（每边 4 个）将前后玻璃

板固定在一起。将安装好的玻璃板平放在托架或相似的支撑物上。

3． 将表 2 所列的组分混合(总共 50ml)，制备 5% Long Ranger

®

丙烯酰胺凝胶。不

断搅动溶液直到尿素完全溶解。

表 2。制备 5% Long Ranger

®

聚丙烯酰胺凝胶

组分 5%凝胶 终浓度

尿素
去离子水

10×TBE
50% Long Ranger

®

凝胶溶液

总体积

注意：可使用 Long Ranger Singel

TM

Packs

4． 将丙烯酰胺溶液用 0.2μm 滤膜（如 Nalgene

18g 6M

26ml -

5ml

1×

5ml 5%

50ml

®

tissue culture filter）过滤，并去

气泡 5 分钟。

5． 向 50 ml 丙烯酰胺溶液中加入 35μl TEMED 和 250μl 新配制的 10%过硫酸铵，

温和混匀。

6. 用一次性 30cc 针筒，从玻璃板的梳孔端开始，小心地将丙烯酰胺溶液注入两块

平放的玻璃板间。让溶液灌满玻璃板的上端，保持稳定的流速，轻敲玻璃板使溶
液流到玻璃板的底端。

7. 在玻璃板间插入 36-孔鲨鱼齿梳或 34-孔方齿梳。也可使用 64 孔或 96 孔的鲨鱼
齿梳。

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8. 用 3 个均匀分布的夹子固定梳子。

9. 剩余的丙烯酰胺溶液作为聚合反应的对照物。

10. 使聚合反应延续 2 小时以上，检查聚合反应对照物以确保聚合反应完全。

B. 准备仪器

®

1． 打开 ABI PRISM

377 收集软件

®

2． 按照 GeneScan

分析软件用户手册，准备样品页。在“sample info ”栏输入

适当的样品信息。

®

3． 使用以下的设置建立新的 GeneScan

运行：

Plate Check Module(平板检测模式) Plate Check A
Prerun Module（预运行模式） PR GS 36A-2400
Run Module: （运行模式) GS 3600-2400
Collect Time :（收集时间） 3小时
Well-to-Read Distance（孔读数距离） 36cm

4． 用 pull-down 菜单选择合适的样品页和梳子。

5． 对于凝胶 matrix 文件选择“none ”

C. 凝胶预电泳

1. 从聚合的丙烯酰胺凝胶上取下夹子。如果需要，用沾有去离子水的纸巾擦净玻板

上溢出的丙烯酰胺。

2. 除去梳子上多余的聚丙烯酰胺并移去梳子。若用鲨鱼齿梳，小心地将梳齿插入胶

中约 1-2 毫米。

3. 将胶/玻板装入 377 卡槽并固定。

®

4. 依据 ABI PRISM

377 DNA 测序仪用户手册推荐的方法保护仪器的卡槽并检查

玻板，如果水平线图标不平滑，须将玻板从卡槽中取出并重新擦试玻板表面,重
新检查玻板。

5. 将 TBE 1×缓冲液加入到仪器的上下缓冲液槽中。

6. 用充满缓冲液的 30cc 注射器吹去梳齿内的气泡及未凝固的丙烯酰胺，盖好上缓

冲液槽的盖子，用弯头注射器移去胶底部的气泡。

7. 装上加热板，接好水管，连接所有电极，关上仪器门，点击“PreRun”键开始预

电泳 15-20 分钟或预电泳至胶的温度达到 40℃。

8. 预电泳期间准备 matrix 样品。

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D. 样品准备及上样

1． 将 1.5μl 每一 matrix 样品和 1.5μl Blue Dextran 载样液混合。

2． 将每一样品 95℃变性 2 分钟，立即放在冰上冷却 3 分钟。

注意：由于仪器的检测底限不同，matrix 样品和 Blue Dextran 载样溶液的量可
增加或减少。

3． 预电泳 15-20 分钟，点击“Pause” 键暂停仪器运行，这时继续水循环保持上

样期间胶的温度。

4． 用充满缓冲液的注射器吹去加样孔内的尿素。

5． 将 1.5μl 变性样品加入到各加样孔中。

6． 盖好上缓冲液槽的盖子并关上仪器门。

E. 凝胶电泳和检测

1． 上样结束后，点击“Cancel” 取消预电泳。确定电泳时间设置为 3 小时，然后

点击“Run”开始电泳。

2． 通过观察胶图及状态窗监测电泳状况。

3． 电泳 3 小时后，最大的片段通过激光扫描窗。

4． 追踪、提取胶道。

F. Matrix 的生成

1． 打开 GeneScan

®

Project

2． 观察每一个 matrix 样品中的“raw data”。标出样品文件名，然后在“sample ”

菜单中选择“raw data ”。将光标移到引物峰右侧，使十字位于基线的平滑部
分。记录在视窗底部显示的 X 值数字。选择一个至少包含 5 个各种色谱峰的区
域， 产生 matrix 需要至少 5 个峰值，见第八页图 1。

3． 在“File”菜单中选择“New”，然后点击 Matrix 图标。“points ”扫描域的默

认值为 100，000。点击每个 matrix 的色谱颜色以表明对应于该色谱的样品文
件。在“start at”域输入步骤 2 所记录的 X 值。

色谱颜色 对应的 Matrix
蓝色
绿色
黄色
红色

Fluorescein Matrix DG288A
JOE Matrix DG284A
TMR Matrix DG289A
CXR Matrix DG290A

Part#

4．选择“OK”，生成 matrix 文件。

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5. 将 Matrix 文件保存于 GeneScan

®

文件夹中的 Matrix Standard 文件夹内，此

matrix 文件的拷贝应保存于系统文件夹中的 ABI 文件夹内。

6. 通过标出 GeneScan

在“sample”菜单中，选择“install new matrix”, 标出新的 matrix 并点击
“open”, 则新的 matrix 可以用于样品文件，样品可以用此新的 matrix 来分

®

Project 中的样品，新的 matrix 可用于已走胶的样品。

析。

7. Matrix 的质量可以确认。 将新生成的 matrix 文件应用于产生 matrix 的样品，
用所有 4 种色谱颜色来分析 matrix 样品。 对于在步骤 3 所列出的色谱颜色，
matrix 样品的峰值应该在 400-3,000rfu 之间。 评估每一个样品时，其余 3 种
色谱颜色的基线应相对平滑。

注意：在使用本节
所述的步骤进行
matrix 优化前，需
确定样品的峰高已
调节到杂合峰大约
1000rfu（参见 VI
节和 PowerPlex



16 系统技术手册
#TMD012,
Section IX.A.）

图 1. TMR Matrix 原始数据 TMR Matrix 样品在 ABI PRISM 310 遗传分析仪

®

上运行。用 GeneScan

分析软件来阅览“raw data”（在“Sample”下打开）。

将光标放在基线上，“Start at” 值 3529 是视窗左下角读出栏中测出的值。

G. 玻璃板重新使用

分开玻璃板，去除胶。用热水和类似 1%Liguid-Nax 的去污剂清洗玻璃板，用去
离子水彻底冲洗干净，空气中干燥玻璃板。在清洗过程中，不要用磨蚀材料刮玻
璃板。

由于残留物的堆积，可能发生凝胶挤出。如发生这种情况，在 2N HCl 中浸泡
玻板 15 分钟，然后彻底清洗。

V. Matrix 优化



有些实验室已经注意到 Promega 的 Powerplex

16 系统中蓝色和绿色孔道的
背景升高。标准 matrix 产生过程中可能会产生来自于相邻孔道的消减信号（图
2）。可以通过对 matrix 覆盖值进行手工优化来解决这个问题，用这种方法可降

低或消除蓝色和绿色孔道中噪音的常见起因。

图 2. 具有倒置峰的升高的基线. 举例说明从蓝色孔道中过份消减绿色信号，产
生的倒置峰和升高的基线，出现倒置峰表明从另一个孔道中消减了太多的信号。

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A. 设立新的 Project

a). 打开由于消减信号而导致的基线升高样品的运行文件夹。

b). 为了方便，可多次复制样品文件到桌面上，对每个复制文件分别命名。

c). 在 GeneScan



内打开“New Project”。

d). 在”Project”下，选择“Add Samples Files”添加上每个复制的文件。

B. Matrix 校正

1. 在 GeneSacan



内，打开当前使用的 matrix 文件。

2. 确认有疑难覆盖值的颜色孔道。如图 2 标出，带有升高的基线和倒置的峰。

绿色孔道中升高的基线可以通过改变图 3 中第 2 行、第 3 栏中的数值来调整
（图 3 中 0.3233）。蓝色孔道中升高的基线可以通过改变图 3 中第 1 行、第

2 栏中的数值来调整（图 3 中 0.6269）。

3. 最好先调整绿色孔道中的噪音，如有必要，再调整蓝色基线。将疑问覆盖值

减小 2%（现有值-[现有值×0.02]），通过标出图 3 中的数值并输入新的数值
（图 3）。用“Save As”来贮存改变的 matrix 文件，并重新命名。

4. 重复步骤 3，将原始值调整为-4%，-6%，-8%和-10%。

注意：不同的仪器

有不同的起始值。

图 3. Matrix 文件. 此图示中两个圈起来的数值 0.3233 和 0.6269，为分别被减
小以校正绿色和蓝色孔道中升高的基线

C. 应用 Matrix 校正

1. 在新建立的 Project 中，标出第一个样品的文件，从工具栏选择”Sample”和
“Install New Matrix”，并从显示单中选择原来的 matrix 文件。

2. 选择第二个样品文件（章节 V.A ，步骤 2 的一个复制文件），并安装第一个改
变的 matrix。

3. 选择第三个样品文件，并安装下一个改变的 matrix。

4. 继续这些步骤直到完成了所有的校正。

5. 分析样品并比较绿色基线。理想的校正噪音小且无拉升现象（图 4，Panel B）。
过份校正会产生图 4，Panels C 和 D 的拉升现象。

6. 记录下绿色的理想校正因子，然后重复章节 B 和 C 的步骤进行蓝色孔道校正。

因为蓝色孔道的校正因子通常小于绿色，故可选择更低的校正因子，比如
1%，2%，3%和 4%。

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7. 将确认的蓝色和绿色孔道的理想校正因子保存在一个新的 matrix 文件
中。

8. 将新的 matrix 用于样品文件并重新分析，不同的仪器会有特定的不同
的校正值。

图 4. 从蓝色孔道中消减绿色信号的优化. 在蓝色覆盖值中消减少量绿色信号
以校正本底（Panels A 和 B），对过分信号消减的过度校正产生了不足消减，导
致拉升（Panels C 和 D）。

VI. 疑难解答

现象 可能的原因 评论
不能产生
matrix( 由于峰
弱或无峰)

样品没变性 确保进样到凝胶或毛细管前，加热变性样

品。

过弱的毛细管电

进样

泳

重新加样品，检查针筒是否漏，检查激光电
源。

所用甲酰胺质量差 在 ABI PRISM® 310 遗传分析仪上运行样品

时，要保证使用高质量的甲酰胺，去离子甲
酰胺的电导率应小于 100µS/CM

不适当贮存导致

将 matrix 在黑暗中，-20oC 保存。
样品降解
峰值太低 峰值应该在 400-3000rfu，增加进样时间或

进样体积。
峰的数目不够 使用至少包括 5 个峰的区域做 matrix 标准。无法产生

matrix（混杂）

给色谱标错了颜色 确认色素和颜色的选择

Fluorescein：蓝色

JOE：绿色

TMR：黄色

CXR：红色

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matirx 质量差（在

一个或所有颜色孔
道中可见到额外的
峰）

在分析的样品内基
线升高或峰倒置
（见图 5）

matrix 基线有倒置
峰（见图 6）

与 CE 相关的伪峰
（“尖刺峰”）

微小的电压变化或尿素结晶通过激光
光源时会导致“尖刺峰”或意外的峰。
尖刺峰有时仅出现在一种色谱峰，但
通常出现在多种色谱峰而容易鉴别。
需重新进样确认。

®

与 CE 相关的伪峰
（污染）

当用于 ABI PRISM
上的水和稀释 10×遗传分析仪缓冲液

310 遗传分析仪

的水被污染时，在蓝色和绿色色谱内
会产生峰。使用高压灭菌的水，更换

瓶子，并清洗缓冲液槽。
与 CE 相关的伪峰
（甲酰胺）

用水替代甲酰胺稀释 matrix。在 ABI

PRISM310 遗传分析仪上运行水稀释

的 matrix 样品的方法与甲酰胺稀释的

matrix 样品的方法相同。
所用的 matrix 是在

每一台仪器必须产生各自的 matrix。
另一台仪器上产生
的
Matrix 不再有效 在仪器维修后需要产生新的 matrix。
使用了错误的 色素 产生 matrix 时，必须用同样品中一样

的色素。
来自其它孔道的过
份消减去信号

在制备 matrix 样品的过程中，用水替

代甲酰胺，可微弱地改善样品蓝色和

绿色孔道的升高基线。

通过用水稀释 matrix 样品（章节 III B

步骤 1 或章节 IV.D 步骤 1 前）可以改

善样品的分析。

需要手工优化 matrix（见章节 V）
输入不正确或没输

“Start at”值应有平滑的基线。
入“Start at”值

®

图 5. 基线升高. 样品在 ABI PRISM

310 遗传分析仪上运行，并用 GeneScan®分

析软件分析。电泳结果的图谱显示在小于 270 base 的范围产生了升高的基线。基线
升高的可能原因有，使用了另外一台仪器生成的 matrix；在仪器维修后还在使用以前
生成的同一个 matrix，使用了不同色谱产生的 matrix。

注意：本中文操作手册仅供实验参考，在实际使用中请详细对照原英文技术手册 TBD015。如遇到问题请与 Promega 公司北

京办事处联系，TEL: [phone]；E-mail: [e-mail]

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技术手册号码：CTBD01

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图 6. 基线倒置. 将来源于 Matrix FL-JOE-TMR-CXR 试剂盒的 4 个 matrix

样品，在 ABI PRISM

®

310 遗传分析仪上运行。用 GeneScan® 分析软件生

成了一个 matrix。但未输入 matrix 样品的“start at”点。所制备的 matrix
用于 JOE Matrix 样品文件并用所有 4 种颜色作了分析。导致在蓝色、黄色
和红色孔道中产生了倒置峰。

VII．缓冲液和溶液的组分

10%过硫酸铵

将 0.05g 过硫酸铵溶于 500µl 去离了水中。 每 50ml 丙烯酰胺溶液中加入

250µl 10%过硫酸铵。

去离子甲酰胺

用超纯级甲酰胺(Amresco Cat.#0606)。用电导计检测电导率。甲酰胺的电

导率应当<100μS/cm。分装去离子甲酰胺并冻存，避免多次冻融。

Blue Dextran 上样缓冲液

88.25%甲酰胺
15mg/ml Blue Dextran

4.1mM EDTA（PH8.0）

TBE 10×缓冲液

107.8g Tris base

7.44g EDTA (Na

EDTA·2H2O)

2

~55.0g 硼酸
将 Tris base 和 EDTA 溶于 800ml 灭菌水中，缓慢加入硼酸并监测溶液的

PH 至期望值 8.3。用灭菌水补足至溶液终体积为 1 升。

注意：本中文操作手册仅供实验参考，在实际使用中请详细对照原英文技术手册 TBD015。如遇到问题请与 Promega 公司北

京办事处联系，TEL: [phone]；E-mail: [e-mail]

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