Hoefer HB1000 User Manual [de, en, pl]

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ben utzerhandbuch

Deutsch

Hoefer HB1000

Hybridisierungsofen

b HB1000-IM/German/Rev.D0/12-12

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Inhalts

Wichtige Informationen .......................................... ii

Elektro-und Elektronikgerätegesetz (ElektroG) ........viii

Einführung ............................................................1

Technische Daten ..................................................3

Set-up Anleitung ...................................................4

Bedienungsanleitung .............................................6

Pﬂege und Wartung .............................................10

Kundendienstinformationen ..................................10

Hybridisierungstechniken .....................................11

Versuchsprotokolle ...............................................13

Referenzen..........................................................20

Bestellinformationen ............................................ 21

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•

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Wichtige Informationen – Deutsch

• Wenn diese Ausrüstung gewissermaßen nicht angegeben durch Hoefer, Inc verwendet wird, kann der durch die Ausrüstung zur Verfügung gestellte Schutz verschlechtert werden.

• Dieses Instrument wird für den Innenlaborgebrauch nur dafür entworfen.

• Nur Zusätze und Teile genehmigten oder lieferten durch Hoefer, Inc kann für das Funktionieren, das Aufrechterhalten, und die Wartung dieses Produktes verwendet werden.

• Die Warnung! Weil dieses Instrument genügend Stromspannung und Strom entwickeln kann, um einen tödlichen Stoß zu erzeugen, muss Sorge in seiner Operation ausgeübt werden.

• Dieses Instrument wird in Übereinstimmung mit dem EN61010-1:2001 elektrischen Sicherheitsstandard dafür entworfen. Dennoch sollte es nur von richtig erzogenen Maschinenbedienern verwendet werden. Lesen Sie dieses komplette Handbuch vor dem Verwenden des Instrumentes und verwenden Sie nur gemäß den Instruktionen.

• Das Instrument muss immer mit der Erdleitung der Macht-Schnur richtig niedergelegt zur Erde am Hauptausgang verwendet werden.

• Nur unbeschädigte elektrische Leitung und Ausrüstung spezisch für die Stromspannungen verwenden, die Sie verwenden werden. Die ganze mit der Hochspannung verbundene Ausrüstung sollte in Übereinstimmung mit EN61010-1:2001 sein.

• Das Instrument ebenso trocken halten und reinigen wie möglich. Wischen Sie regelmäßig mit einem weichen, befeuchten Sie Sto. Lassen Sie das Instrument trocken völlig vor dem Gebrauch.

• Das Instrument in der äußersten Feuchtigkeit (über 80 %) nicht bedienen. Vermeiden Sie Kondensation, die Einheit equilibrate zur Umgebungstemperatur laßend, wenn Sie das Instrument von einem kälteren bis eine wärmere Umgebung nehmen.

• Um das genügend Abkühlen zu erlauben, stellen Sie sicher, dass die Önungen des Instrumentes nicht bedeckt werden.

Duležité Informace – Czech

• Pokud by toto zařízení je použito způsobem, který není podle Hoefer, ochrana poskytovaná na základě Inc. zařízení může být narušena.

• Tento nástroj je určen pro vnitřní použití v laboratořipouze.

• Pouze příslušenství a části schválen, nebo poskytnutých Hoefer, Inc. mohou být použity pro provoz, údržbu, a údržbě tohoto výrobku.

• Pozor! Protože tento nástroj může vyvinout dostatečný napětí a proud, který má vyrábět a smrtiacej šok, péče musí být vykonávána v jeho provoz.

• Tento nástroj je určen v souladu s EN61010-1:2001 elektrické bezpečnostní normy. Přesto, že by měly být použity pouze řádně vyškolený operátorů. Číst celé toto ruční před použitím nástroje a použití pouze v souladu s pokyny.

• Přístroj musí být vždy používají se na výkonu zemi vést šňůra správně zemněny k zemi na síti výústce.

• Využití pouze nepoškozené elektrické dráty a vybavení pro napětí budete používat. Všechna zařízení spojené s vysokým napětím by měla být v souladu s EN61010-1:2001.

• Si ponechá nástroje jako suchý a čistý jako možné. Otřete pravidelně s a měkké, vlhkým hadříkem. Nechť je nástroj nenastavený úplně před použitím.

• Nejsou provozována na nástroj v extrémní vlhkost (nad 80%). Předešlo kondenzaci o pronájmu jednotky na okolní teplotu nechá při přijímání nástroj z chladnější do teplého prostředí.

• Pro umožnění dostatečné chlazení, zajistit, aby otvory nástroje jsou nevztahuje.

Vigtig Information – Danish

• Hvis dette udstyr bruges i en måde ikke speciceret ved Hoefer, Inc. den beskyttelse, som er blevet forsynet af udstyret kan måske svækkes.

• Dette instrument er designet for indendørs laboratoriumbrug bare.

• Bare tilbehør og del godkendede eller forsynede ved Hoefer, Inc. kan måske bruges for drive, funktionsfejl, og betjening dette produkt.

• Advare! Fordi dette instrument kan udvikle tilstrækkelig spænding og strøm at fremstille et

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•

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dødbringende chok, skal pleje bruges i dets drift.

• Dette instrument er designet i overensstemmelse med EN61010-1:2001 elektrisk sikkerhedstandard. Alligevel, skulle det bruges bare af passende trænede operatører. Læs denne hel håndbog før bruging instrumentet og brug bare i henhold til instruktionerne.

• Instrumentet skal altid bruges med jordblyet af netledningen rigtigt jordede til jord på hovedledningsudløbet.

• Bruger bare uskadt elektrisk tråd og udstyr, som være specik for spændingerne du vil bruge. Alt udstyr forbundet til høj spænding skulle være i overensstemmelse med EN61010-1:2001.

• Beholder instrumentet så tør og ren som mulig. Tør regulært med et blødt, fugtigt stof. Lad instrumenttørken komplet før brug.

• Driver ikke instrumentet i yderst fugtighed (ovenfor 80%). Undgå kondensation ved lade enheden equilibrate til omgivende temperatur ved tageen instrumentets fra et koldere til et varmere miljø.

• At tillade tilstrækkelig afkøling, forsikrer, at lufthullerne af instrumentet er ikke dækket.

Belangrijke Informatie – Dutch

• Indien deze uitrusting in een manier wordt gebruikt die niet door Hoefer is gespeciceerd, Nv. de bescherming die door de uitrusting is verzorgd kan worden geschaad.

• Dit instrument is voor binnenlaboratoriumgebruik enkel ontworpen.

• Enkel onderdelen en delen keurden goed of leverden door Hoefer, Nv. kan voor het bedienen worden gebruikt, handhavend en onderhouden van ditproduct.

• Waarschuwend! Omdat dit instrument voldoende spanning en stroom kan ontwikkelen om een dodelijke schok te produceren, moet zorg in zijn operatie worden geoefend.

• Dit instrument is in overeenstemming met de EN61010-1:2001 elektrische veiligheidsstandaard ontworpen. Niettemin zou het enkel door goed getrainde bedieningslieden moeten worden gebruikt. Lees dit volledige handboek voor het gebruik het instrument en gebruik enkel volgens de instructies.

• Het instrument moet altijd met de aardeleiding van het stroomsnoer correct grondde naar aarde aan het hoofdafzetgebied worden gebruikt.

• Gebruik enkel onbeschadigde elektrische draad en uitrustings speciek voor de spanningen u zult gebruiken. Alle uitrustingen sloten aan aan hoogspanning zou in overeenstemming met EN610101:2001 moetenzijn.

• Houd het instrument zo droge en schone zoals mogelijk Bij. Wis regelmatig met een zacht, temper doek. Verhuur het instrument droogt volledig voor hetgebruik.

• Bedien niet het instrument in extreme vochtigheid (bovenstaande 80%). Vermijd condensatie door het verhuren van de eenheid in evenwicht brengt naar omgevingstemperatuur wanneer nemen het instrument van een kouder naar een lievere omgeving.

• Om toe te staan voldoende afkoelen, verzeker dat de luchtopeningen van het instrument niet bedektzijn.

Important Information – English

• If this equipment is used in a manner not specied by Hoefer, Inc. the protection provided by the equipment may be impaired.

• This instrument is designed for indoor laboratory useonly.

• Only accessories and parts approved or supplied by Hoefer, Inc. may be used for operating, maintaining, and servicing this product.

• Warning! Because this instrument can develop sucient voltage and current to produce a lethal shock, care must be exercised in its operation.

• This instrument is designed in accordance with the EN61010-1:2001 electrical safety standard. Nevertheless, it should be used only by properly trained operators. Read this entire manual before using the instrument and use only according to the instructions.

• The instrument must always be used with the earth lead of the power cord correctly grounded to earth at the mains outlet.

• Use only undamaged electrical wire and equipment specic for the voltages you will use. All equipment connected to high voltage should be in

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•

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accordance with EN61010-1:2001.

• Keep the instrument as dry and clean as possible. Wipe regularly with a soft, damp cloth. Let the instrument dry completely before use.

• Do not operate the instrument in extreme humidity (above 80%). Avoid condensation by letting the unit equilibrate to ambient temperature when taking the instrument from a colder to a warmer environment.

• To permit sucient cooling, ensure that the vents of the instrument are not covered.

Tärkeää Tietoa – Finnish

• Jos tätä varusteita käytetään tavassa ei määritetty Hoeferille, Inc. suojelu ehkäisty varusteille saattaa ollaavuton.

• Tämä väline suunnitellaan sisälaboratoriokäytölle vain.

• Vain lisävarusteet ja osat hyväksyivät tai toimitti Hoeferin oheen, Inc.:ää voi käyttää käyttämiselle, valvoalle, ja servicing tämä tuote.

• Varoittaminen! Koska tämä väline voi kehittää riittävä jännitteen ja virran tuottaa kuolettavan järkytyksen, huolta täytyy harjoittaa toiminnossaan.

• Tämä väline suunnitellaan EN61010-1:2001 sähköturvallisuusstandardin mukaisesti. Silti pitäisi käyttää vain ohi oikeasti koulutetut käyttäjät. Lue tämä kokonainen manuaalinen ennen välinettä ja käyttö vain ohjeidenmukaan.

• Välinettä täytyy käyttää aina valtanuoran maalyijystä perusti oikein maadoittaa sähköverkkoaukossa.

• Käyttää vain undamaged sähkömetallilankaa ja varusteita, täsmällinen jännitteille käyttää. Kaikki varusteet yhdistetty korkeaan jännitteeseen pitäisi olla EN61010-1:2001IN mukaisesti.

• Pitää välineen yhtä kuiva ja puhdas kuin mahdollinen. Pyyhi säännöllisesti pehmeällä, kostealla kankaalla. Anna väline kuivua täysin ennen käyttöä.

• Ei käytä välinettä extreme-ilmankosteudessa (80%)n yläpuolella. Vältä tiivistymistä antamalla yksikön equilibrate ympäröivään lämpötilaan kun ottaminen väline kylmempi lämpimämpään ympäristöön.

• Sallia riittävän jäähdyttäminen, varmistaa että välineen ilmareiät peitetään.

Information Importante – French

• Si cet équipement est utilisé dans une manière pas spécié par Hoefer, Inc. la protection fourni par l’équipement pourrait être diminuée.

• Cet instrument est conçu pour l’usage de laboratoire intérieur seulement.

• Seulement les accessoires et les parties ont approuvé ou ont fourni par Hoefer, Inc. pourrait être utilisé pour fonctionner, maintenir, et entretenir ce produit.

• Avertissant! Parce que cet instrument peut développer la tension et le courant susants pour produire un choc mortel, le soin doit être exercé dans son opération.

• Cet instrument est conformément conçu à l’EN61010-1:2001 norme de sécurité électrique. Néanmoins, il devrait être seulement utilisé par les opérateurs convenablement entraînés. Lire ce manuel entier avant utiliser l’instrument et l’usage seulement selon les instructions.

• L’instrument toujours doit être utilisé avec l’avance de terre du cordon d’alimentation correctement a fondé à la terre à la sortie principale.

• Utiliser le l et l’équipement électriques seulement intacts spéciques pour les tensions que vous utiliserez. Tout équipement connecté à haute tension devrait être conformément à EN610101:2001.

• Garder l’instrument aussi sec et propre comme possible. Essuyer régulièrement avec un doux, étouer du tissu. Laisser l’instrument sèche complètement avant l’usage.

• Ne pas fonctionner l’instrument dans l’extrême humidité (au-dessus de 80%). Eviter la condensation en laissant l’equilibrate d’unité à la température ambiante en prenant l’instrument d’un plus froid à un environnement plus chaud.

• Permettre le refroidissement susant, garantir que les conduits de l’instrument ne sont pas couverts.

Informazioni Importanti – Italiano

• Se quest’apparecchiatura è usata in un modo specicato da Hoefer, Inc. la protezione fornito dall’apparecchiatura potrebbe essere indebolita.

• Questo strumento è disegnato per l’uso di labora-

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•

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torio interno solo.

• Solo gli accessori e le parti hanno approvato o hanno fornito da Hoefer, Inc. potrebbe essere usato per operare, per mantenere, e per revisionare questo prodotto.

• Avvertendo! Perché questo strumento può sviluppare il voltaggio suciente e la corrente di produrre una scossa letale, la cura deve essere esercitata nella sua operazione. Questo strumento è disegnato conformemente all’EN61010-1:2001 la norma di sicurezza elettrica. Tuttavia, dovrebbe essere usato degli operatori solo correttamente addestrati. Leggere questo manuale intero prima di usare lo strumento e l’uso solo secondo le istruzioni.

• Lo strumento deve essere sempre usato col piombo di terra della spina di alimentazione correttamente hanno messo a terra alla terra alla presa di corrente principale.

• Usa il lo metallico e l’apparecchiatura solo intatti elettrici specici per i voltaggi che lei userà. Tutta l’apparecchiatura collegata all’alto voltaggio dovrebbe essere conformemente a EN610101:2001.

• Tiene lo strumento come secco e pulito come possibile. Pulire regolarmente con un morbido, per spegnere il panno. Lasciare lo strumento asciuga completamente prima dell’uso.

• Non opera lo strumento nell’umidità estrema (al di sopra di 80%). Evitare la condensazione lasciando l’unità equilibra alla temperatura ambiente quando portare lo strumento da un più freddo a un ambiente più caldo.

• Di permettere rareddare suciente, assicura che gli sbocchi dello strumento non sono coperti.

Viktig Informasjon – Norwegian

• Hvis dette utstyret blir brukt i en måte ikke spesisert ved Hoefer, Inc. beskyttelsen som ha blitt git av utstyret kan bli svekket.

• Dette instrumentet er utformet for innendørs laboratoriumbruk bare.

• Bare tilbehør og deler godkjente eller forsynte ved Hoefer, Inc. kan bli brukt for drive, vedlikeholde, og betjene dette produktet.

• Varsler ! Fordi dette instrumentet kan utvikle

tilstrekkelig spenning og strøm til å produsere et dødelig sjokk, må bli øvd bekymring i dets drift.

• Dette instrumentet er utformet i samsvar med EN61010-1:2001 elektrisk sikkerhetsstandard. Likevel burde bli brukt det bare av skikkelig utdannede operatører. Les denne hele håndboken før bruking instrumentet og bruken bare gi til instruksjonene.

• Instrumentet må alltid bli brukt med jorden blyet av kraftkabelen som riktig ha blitt jordet til jord på hovedledningen utløp.

• Bruker bare uskadd elektrisk ledningsfremføring og utstyr som er spesikk for spenningene du vil bruke. All utstyr koplet til høyspenning burde være i samsvar med EN61010-1:2001.

• Beholder instrumentet som tørker og rengjør som mulig. Visk regulært med et mykt, fuktig sto. La instrumentet tørker komplett før bruk.

• Driver instrumentet i ekstrem fuktighet ikke (ovenfor 80%). Unngå kondensasjon ved å la enheten equilibrate til omgivelsestemperatur ved taen instrumentets fra et kaldere til et varmere miljø.

• Til å tillate tilstrekkelig kjølig, sikrer at ventilasjonsåpningene av instrumentet er ikke dekket.

Wazne Informacje – Polish

• Jeżeli ten sprzęt jest wykorz ystywany w sposób nie określone przez Hoefer, Inc. do ochrony przewidzianej przez urządzenie może zostać obniżony.

• Instrument ten jest przeznaczony do użytku w laboratoriach kryty tylko.

• Tylko akcesoriów i części zatwierdzone lub dostarczone przez Hoefer, Inc. mogą być wykorzystane do eksploatacji, utrzymania i obsługi tego produktu.

• Uwaga! Ponieważ ten akt prawny może być rozwinięcie odpowiednich napięcie i bieżących do wyprodukowania śmiertelnego szoku, opiekę musi być wykonywane w działaniu.

• Ten instrument został zaprojektowany zgodnie z tym EN61010-1: 2001 Bezpieczeństwo elektryczne standard. Niemniej jednak, należy stosować jedynie przez odpowiednio przeszkoleni operatorów. Znajdą państwo to cały podręcznika przed zastosowaniem instrumentu i stosować jedynie zgodnie z instrukcjami.

• Instrument musi zawsze być wykorz ystane z ziemi

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doprowadzić do zasilania detonującego właściwie uzasadnione na ziemię w sieci wodociągowej rynkuzbytu.

• Wykorzystanie tylko nieuszkodzona elektrycznych drutów i urządzenia specjalne do napięć zapłacą wykorzystania. Wszystkie urządzenia podłączone do wysokiego napięcia powinny być zgodne z EN61010-1: 2001.

• Kontrolować instrumentu jako suche i czyste jak to możliwe. Wytrzeć regularnie przy pomocy miękkiego wilgotnej szmatki. Niech się instrumentem całkowicie wysuszyć przed użyciem.

• Nie prowadzą do instrumentu w skrajnych wilgotności (powyżej 80%). Zapobiec kondensacji najmu przez jednostkę równoważyć do temperatury pokojowej przy podejmowaniu instrumentu z chłodniejsze w cieplejszych środowiska.

• Aby umożliwić wystarczające chłodzenia, zapewniają, że rozcięcia of the instrument nie objęte ubezpieczeniem.

Informações Importantes – Portuguese

• Se este equipamento é usado numa maneira não especicada por Hoefer, Inc. que a protecção fornecida pelo equipamento pode ser comprometida.

• Este instrumento é projectado para uso de interior de laboratório só. Só acessórios e par tes aprovaram ou forneceu por Hoefer, Inc. pode ser usada para operar, manter, e servicing este produto.

• Advertindo! Porque este instrumento pode desenvolver voltagem suciente e corrente produzir um choque letal, cuidado deve ser exercitado em suaoperação.

• Este instrumento é projectado de acordo com o EN61010-1:2001 condição de segurança eléctrica. Não obstante, deve ser usado só por operadores adequadamente treinados. Leia este manual inteiro antes de usar o instrumento e use só de acordo com as instrucções.

• O instrumento sempre deve ser usado com o chumbo de terra do cordão de poder corretamente baseou a terra nos canos saída principais.

• Usa o eléctrico só intacto e equipamento especíco para as voltagens que você usará. Todo equipamento conectado a voltagem alta deve ser de

acordo com EN61010-1:2001.

• Mantem o instrumento tão seco e limpo como possível. Limpe regularmente com um pano húmido macio. Deixe o instrumento secar completamente antes de uso.

• Não opera o instrumento em humidade extrema (acima de 80%). Evite condensação deixando o equilibrate de unidade a temperatura ambiental quando tomar o instrumento de um mais frio a um ambiente mais quente.

• Permitir esfriar suciente, assegura que as aberturas do instrumento não são cobertas.

Información Importante – Spanish

• Si este equipo es utilizado en una manera no especicado por Hoefer, S.a. la protección proporcionado por el equipo puede ser dañada.

• Este instrumento es diseñado para el uso interior del laboratorio sólo. Sólo accesorios y partes aprobaron o suministraron por Hoefer, S.a. puede ser utilizado para operar, para mantener, y para atender a este producto.

• Advirtiendo! Porque este instrumento puede desarrollar voltaje y corriente sucientes para producir un golpe mortal, el cuidado debe ser ejercitado en suoperación.

• Este instrumento es diseñado de acuerdo con el EN61010-1:2001 estándar eléctrico de seguridad. No obstante, debe ser utilizado sólo por operarios adecuadamente capacitados. Lea este manual entero antes de utilizar el instrumento y el uso sólo según las instrucciones.

• El instrumento siempre debe ser utilizado con el plomo de la tierra del cable de alimentación molió correctamente a la tierra en la salida de red.

• Utiliza alambre y equipo eléctricos sólo ilesos especícos para los voltajes que usted utilizará. Todo equipo conectado al voltaje alto debe ser de acuerdo con EN61010-1:2001.

• Mantiene el instrumento tan seco y limpio como posible. Enjugue regularmente con un suave, el trapo húmedo. Permita que el instrumento seque completamente antes de uso.

• No opera el instrumento en la humedad extrema (encima de 80%). Evite condensación permitiendo

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•

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la unidad equilibra a la temperatura ambiente al tomar el instrumento de un más frío a un ambiente más tibio.

• Permitir refrigeración suciente, asegure que las aberturas del

Viktig Information – Swedish

• om denna utrustning används i ett sätt som inte har speciceras av Hoefer, Inc. skyddet tillhandahöll vid utrustningen kan skadas.

• Detta instrument formges för inomhuslaboratorium användning bara.

• Bara medhjälpare och delar godkände eller levererade vid Hoefer, Inc. kan användas för fungera, underhålla, och servicing denna produkt.

• varna! Därför att detta instrument kan utveckla tillräcklig spänning och ström att producera en dödlig stöt, måste övas omsorg i dess funktion.

• Detta instrument formges i överensstämmelse med EN61010-1:2001 elektriska säkerheten standarden. Icke desto mindre, bör det användas bara av riktigt utbildade operatörer. Läs denna hela handbok före använda instrumentet och använd bara enligt undervisningarna.

• Instrumentet måste alltid användas med jorden blyet av kraften repet riktigt grounded till jorden på det huvudutloppet.

• Använder bara undamaged elektrisk tråd och utrustning specik för spänningarna du ska använda. All utrustning kopplats som till hög spänning skulle vara i överensstämmelse med EN610101:2001.

• Håller instrumentet då torkar och rengör som möjlig. Torka regelbundet med en mjuk, fuktig trasa. Låt instrumentet torka fullständigt före användningen.

• Fungerar inte instrumentet i extrem fuktighet (över 80%). Undvik kondensering vid låta enheten equilibrate till omgivande temperatur när ta instrumentet från en kallare till en varmare miljö.

• Att tillåta tillräcklig kyla, ser till att hålen av instrumentet inte täcks.

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Elektro-und Elektronikgerätegesetz (ElektroG)

Deutsch

English

French

Italian

Spanish

Dieses Symbol kennzeichnet elektrische und elektronische Geräte, die nicht mit dem gewöhnlichen, unsortierten Hausmüll entsorgt werden dürfen, sondern separat behandelt werden müssen. Bitte nehmen Sie Kontakt mit einem autorisierten Beauftragten des Herstellers auf, um Informationen hinsichtlich der Entsorgung Ihres Gerätes zu erhalten.

This symbol indicates that the waste of electrical and electronic equipment must not be disposed as unsorted municipal waste and must be collected separately. Please contact an authorized representative of the manufacturer for information concerning the decommissioning of your equipment.

Ce symbole indique que les déchets relatifs à l’équipement électrique et électronique ne doivent pas être jetés comme les ordures ménagères non-triées et doivent être collectés séparément. Contactez un représentant agréé du fabricant pour obtenir des informations sur la mise au rebut de votre équipement.

Questo simbolo indica che i riﬁuti derivanti da apparecchiature elettriche ed elettroniche non devono essere smaltiti come riﬁuti municipali indifferenziati e devono invece essere raccolti separatamente. Per informazioni relative alle modalità di smantellamento delle apparecchiature fuori uso, contattare un rappresentante autorizzato del fabbricante.

Este símbolo indica que el equipo eléctrico y electrónico no debe tirarse con los desechos domésticos y debe tratarse por separado. Contacte con el representante local del fabricante para obtener más información sobre la forma de desechar el equipo.

•

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Swedish

Denna symbol anger att elektriska och elektroniska utrustningar inte får avyttras som osorterat hushållsavfall och måste samlas in separat. Var god kontakta en auktoriserad tillverkarrepresentant för information angående avyttring av utrustningen.

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WICHTIG! Bitte lesen Sie diese Anleitung vor dem Betrieb Hybridization Oven, um sich mit der Bedienung vertraut zu machen.

Einführung

Die Hoefer® HB1000 Hybridization Oven ist eine kostengünstige, hochleistungsfähige 10-Flasche Hybridisierungsofen mit state-of-theart-Mikroprozessor Temperatur und variabler Drehzahl steuert.

Die HB1000 Hybridisierungsofen können überall betrieben 10-18 RPM werden, wodurch konsistente Sättigung von Proben, ob es zum Waschen oder Hybridisieren sein. Mit der Fähigkeit, den Flaschenhalter Karussell zu entfernen und ersetzen Sie es mit einem austauschbaren Wippe ermöglicht allen Hybridisierung Protokolle in ein zuverlässiges Tischgerät. Ein leicht abziehbaren Schutzfolie Schale unter dem Karussell ermöglicht eine einfache Säuberung von verschüttet Medien.

Ein berührungsempﬁndliches Tastenfeld und Mikroprozessor genaue Temperaturregelung von 10 °C über Umgebungstemperatur bis zu 99,9 °C. Die Tastatur ist gerade unter einer großen LED-Anzeige beﬁndet. Sobald die gewünschte Hybridisierungstemperatur eingegeben wird, zeigt die Anzeige der aktuellen Temperatur in der Kammer. Die Kammer Umwelt 68,0 °C kalibriert ist; bei dieser Temperatur ist die Genauigkeit ±0,5 °C. Eine interne Umwälzgebläse hilft gleichmäßige Verteilung der Heizung in der gesamten Kammer.

Zwei unterschiedliche Hybridisierung Flaschengrößen sind für den Einsatz innerhalb der Züchter mit dem Standard-Flaschenhalter Karussell mit dem Gerät geliefert. Der Flaschenhalter Karussell kann bis zu 20 (20) 35 × 150 mm Flaschen oder zehn (10) 35 × 300 mm Flaschen. Zusätzlich können Kombinationen der beiden Flaschenhöhen gleichzeitig verwendet werden.

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WARNUNG!

Es kann aus Druckaufbau innerhalb der Hybridisierung Flaschen, wenn sie von der Umgebungstemperatur auf Hybridisierungstemperatur getroffen werden. Um bei der Linderung einige diesem Druck vorzuwärmen die Lösungen und Flaschen helfen. Außerdem sicher Flaschen bei der gleichen Temperatur, bei der die Hybridisierung wurde durchgeführt werden geöffnet. Lassen Sie die Flaschen vor dem Öffnen kühlen.

Um sicherzustellen, Hybridisierungsﬂaschen bleiben dicht und druckfest, nicht bei Temperaturen über 70 °C hybridisieren Wenn Temperaturen über diese ohne zuerst entlastet den Druck innerhalb der Flasche verwendet werden, besteht die Gefahr, dass Flaschen auslaufen und/oder brechen aufgrund des inneren Druckaufbau.

Wenn die Flaschen versehentlich über 70 °C ohne Druckentlastung entnommen, öffnen Sie nicht die Züchter Tür. Schalten Sie den Züchter und lassen Sie es vor dem Öffnen der Tür und Überprüfung der Inhalte der Ofen abkühlen. Sollte die Flaschen über 70 °C eingesetzt werden, den Druck durch Lösen und wieder Anziehen der Kappe.

Bei der Verwendung von radioaktivem Material siehe Dekontamination (Seite 8).

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Technische Daten

Leistungsaufnahme: 115 VAC / 60 Hz oder 230 VAC / 50

Nettogewicht: 19,5 kg Temperatur: Umgebungstemperatur

+ 10 °C to 99,9 °C Heizelement: 1250 Watt Temperaturanzeige: LCD Drehzahl: Aus, 10 bis 18 RPM Flascheninhalt: (20) 35 × 150 mm,

(10) 35 × 300 mm Maße (B × H × T): Äußere 44,5 × 40,6 × 40,6 cm Innere 35,6 × 27,3 × 27,3 cm

•

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Hinweis: Verwenden einer geraden Anzahl von Flaschen und Last Flaschen an entgegengesetzten Punkten, um die Räder des Flaschenhalters Karussell auszugleichen. Dies verhindert einen übermäßigen Verschleiß der Lager und Antriebsmotor.

Set-up Anleitung

Zwei verschiedene Flaschengrößen sind für den Einsatz in der Hybridisierungsofen. Der Flaschenhalter Karussell kann bis zu 20 (20) 35 × 150 mm Flaschen oder zehn (10) 35 × 300 mm Flaschen. Zusätzlich können Kombinationen der beiden Flaschenhöhen gleichzeitig verwendet werden.

Räder Stange

Abb. 1. Installieren Flaschenhalter Karussell.

Rändelschraube

Abb. 2. Einstellen für verschiedene Flaschen Längen.

• Um den Flaschenhalter Karussell (Abb. 1) zu instal-

lieren, schieben Sie die Flasche Räder (2) auf die Stange und ziehen Sie die Rändelschrauben. Legen Sie den Stab in die Halterung an der rechten Wand. Schieben der Stange in die Halterung an der linken Wand der Kammer.

• Um für verschiedene Flaschen Längen (Abb. 2)

einzustellen, lösen Sie die Rändelschrauben auf der Flasche Räder und positionieren sie auf der Stange, um die gewünschte Flasche Länge unterzubringen.

• Wenn schiefe Flasche Positionierung erforderlich

ist, lösen Sie die Rändelschraube an nur eine Flasche Rad (Abb. 2). Etwas das Rad drehen, bis der gewünschte Winkel erreicht ist. Ziehen Sie die Rändelschraube.

• Um Flaschen in die Flasche Clips einzufügen,

drücken Sie vorsichtig Flasche in den Clips (Abb. 3).

Abb. 3. Einsetzen Flaschen.

•

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Installieren des optionalen Wippe tray

Kupplungshülse

Abb. 4. Die optionale Wippe Fach.

Entfernen Sie den Flaschenhalter Karussell aus der Kammer.

Positionieren der Wippe Ablage in der Kammer, so dass der Kupplungsarm auf der rechten Seite beﬁndet.

Zeigen die Kupplungshülse über den Motor-Antriebswelle, so daß die Stifte an der Innenseite der Kupplungshülse die Schlitze in der Motorantriebswelle der Kammer eingreifen.

Drehen Sie die Hülse gegen den Uhrzeigersinn 30° bis einrasten.

Um das Fach zu entfernen, den Prozess umzukehren.

•

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RPM Control Motor ON/OFF

Bedienungsanleitung

Mit dem Hybridisierungsofen

Stellen Sie das Gerät auf eine ebene Fläche und bieten ausreichend Platz vor der Tür für einfachen Zugang, sowie den Rücken für Belüftung.

Stecken Sie den Stecker des Stromkabels an der Rückseite des Ofens.

Um das Stromnetz schalten, drücken Sie die Power ON/OFF auf der rechten Seite des Bedienfelds auf die Position ON Schalter beﬁndet.

Um die Einstellung der Temperatur, drücken Sie entweder die UP-oder DOWN-Pfeiltasten unterhalb des Temperature Control Display zu heben oder zu senken den angezeigten Wert (in Grad Celsius) liegt einzustellen. Diese Einstellung ist einstellbar von +10 °C über Umgebungstemperatur bis zu 99,9 °C. Siehe “Einstellen der Temperaturregler” (Seite 7) für weitere Details.

Um den Motor für den Flaschenhalter Karussell drehen, drücken Sie die Motor Control ON/OFF-Schalter auf die Position ON.

Temp setting Main ON/OFF

•

Um den Flaschenhalter Karussell auf die gewünschte Drehzahl einstellen, drehen Sie den Motor Control Regler im Uhrzeigersinn, um das RPM zu erhöhen und gegen den RPM zu verringern.

Minimum RPM = OFF/10 Maximum RPM = 18

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Einstellen der Temperaturregler

Wenn die Stromversorgung zum Controller angewendet wird, wird die Software-RevisionNummer für einige Sekunden angezeigt. Während die Software-Revisionsnummer angezeigt wird, die Intensität der Anzeigestellen wechselt zwischen vollen und halben Helligkeit und bei einigen Modellen die beiden außerhalb Dezimalstellen Punkte blinken und ausgeschaltet. Nach einigen Sekunden kehrt der angezeigte Wert auf die eingestellte Temperatur. In diesem Modus wird allenfalls eine einzige Dezimalstelle beleuchtet und die Anzeige Intensität unveränderlich ist.

Änderung des Sollwertes

Der aktuelle Sollwert kann verändert mit der UP-und DOWN-Tasten, während der Sollwert wird angezeigt wird. Um den Sollwert von normalen Modus zu ändern, wie folgt vorgehen:

Momentan drücken Sie dann befreit den UP oder die Taste DOWN. Die LED-Intensität blinkt, um anzuzeigen, dass der angezeigte Wert der aktuelle Sollwert ist.

Erhöhen oder verringern Sie den Sollwert durch Drücken der UP-oder DOWN-Taste bzw.. Wenn eine der Tasten länger als einige Sekunden gedrückt halten, wird der Sollwert erhöhen oder verringern kontinuierlich.

Wenn der gewünschte Sollwert erreicht ist, warten Sie etwa 5 Sekunden ohne Drücken der beiden Tasten, das Display in den normalen Modus zeigt die aktuelle

Temperatur zurück.

Der neue Sollwert wird wirksam und in dem nicht-ﬂüchtigen Speicher, wenn die Anzeige in den normalen Modus zurückkehrt gespeichert.

•

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Wichtig! Fordern Sie eine Kopie des Hoefer, Inc. “Health and Safety Erklärung” Form vor Rücksendung der Sache widerrufen. Keine Artikel kann zur Wartung oder zurückgenommen werden, wenn diese Form ordnungsgemäß abgeschlossen ist. Wenn radioaktive oder biologisches Material wurde innerhalb der Einheit, radioaktive Dekontamination und Gegenwart biogefährdendes clean-up nach aktuellen Bundes-, Landes-und lokalen Richtlinien und Biologische Protokolle müssen vor der Rückgabe des Gerätes durchgeführt werden.

Kalibrieren des Temperaturanzeige

Der Züchter wird im Werk kalibriert. Hoefer, Inc. empﬁehlt Temperatur Neukalibrierung im Werk als Neukalibrierung durch den Anwender durchgeführt werden können zum Erlöschen der Garantie. Besorgen Sie sich eine RA (Return Authorization) aus Hoefer, Inc. vor der Rücksendung eine Einheit in die Fabrik.

Dekontamination

Flaschen und Verschlüsse

• Einweichen Artikel in einer verdünnten Reinigung-

slösung Nacht.*

• Entfernen von Elementen aus Reinigungsmittel und

mit destilliertem Wasser spülen.*

• Wenn Elemente noch kontaminiert sind, vorsichtig

mit einem weichen Tuch oder einer Bürste schrubben. Falls erforderlich, um Elemente in der Reinigungslösung für eine längere Zeit einwirken lassen.*

Ofenkammer

• Der Garraum und Auffangwannen durch Abwischen

mit einem Dekontaminationsmittel kann dekontaminiert werden, dann mit destilliertem Wasser zu wiederholen.*

* Diese Dekontaminationsverfahren nicht entfernen Sie alle

Verunreinigungen. Siehe Bundes-, Landes-und lokalen Richtlinien und Biologische Protokolle der Dekontamination zu gewährleisten.

•

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Flasche

Hybridisierung Flaschen werden von bleifreien Borosilikatglas, die ausgezeichnete langfristige Zuverlässigkeit sorgt. Jede Flasche enthält eine Polypropylenverschluss und Teﬂon®-Dichtung.

• Es ist wichtig, Ihre Flaschen regelmäßig für Chips,

Stress Frakturen und Risse. Wenn diese auftreten, muss die Flasche entsorgt werden.

• Zwischen Nutzung, Speicherung Flaschen entweder

in einem Rack oder mit Kappen angebracht. Dies schützt die Flasche und Dichtung.

• Schutzhandschuhe, um Ihre Hände im Falle eines

versehentlichen Bruch zu schützen.

• Nie fest Kappen auf Flaschen. Hand Anziehen ist

ausreichend.

• Wenn die Kappe ist schwer zu lösen, versuchen

Sie niemals zwingen die Flasche Kappe geöffnet. Lassen Sie die Flasche zu kühlen und zu wiederholen. Wenn die Kappe bleibt stecken, entsorgen Sie die Flasche.

• Flaschen nicht bei Temperaturen oberhalb 70 °C

eingesetzt werden

•

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Achtung! Ziehen Sie immer Gerät vom Stromnetz, bevor Reinigen oder Trocknen Sie das Gerät.

Pﬂege und Wartung

Reinigung

Die Geräte sind gebaut, um Ihnen einen störungsfreien Betrieb zu gewährleisten. Um einen korrekten Betrieb zu gewährleisten:

• Wischen Sie Wasser von innen und außen am Gerät

mit einem weichen Tuch oder Schwamm.

• Verwenden Sie Wasser und Seife mit einem weichen

Tuch oder Schwamm reinigen.

• Nicht Chemikalien am Gerät Oberﬂächen bleiben.

• Niemals mit abrasive Pads oder Reinigungsmittel.

• Niemals mit Aceton oder Chloroform.

Kundendienstinformationen

Wichtig! Fordern Sie eine

Kopie des Hoefer, Inc. “Health and Safety Erklärung” Form vor Rücksendung der Sache widerrufen. Keine Artikel kann zur Wartung oder zurückgenommen werden, wenn diese Form ordnungsgemäß abgeschlossen ist.

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•

Technische Wartung und Reparatur

Hoefer, Inc. bietet eine komplette technische Unterstützung für alle unsere Produkte. Wenn Sie Fragen dazu, wie Sie dieses Produkt verwenden, oder möchten zu ordnen, um es zu reparieren haben, rufen Sie an oder faxen Sie Ihre Hoefer, Inc. Vertreter.

Überprüfen Sie die Hoefer, Inc. Website www.hoeferinc.com für den Händler in Ihrer Nähe. Oder wenden Sie sich direkt an uns:

Hoefer, Inc.

84 October Hill Road Holliston, MA 01746

Toll Free: 1-800-227-4750 Telefon: 1-508-893-8999 Fax: 1-508-893-0176 E-mail: support@hoeferinc.com

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Hybridisierungstechniken

Es gibt zwei wesentliche Schritte auf eine Hybridisierungsreaktion: 1) Hybridisierung beiden Stränge der DNA tragenden komplementären Sequenzen, und 2) Detektion der hybridisierten DNA. Nahe bei der DNA-Stränge bestimmt die Frequenz des Bindungsereignisses und daher ist der Erfolg hängt von den DNA-Konzentrationen.

Da die Konzentration der Zielnukleinsäure in der Regel bekannt ist, ist es ein Überschuß an markierter Sonden-DNA, die nach vorne treibt der Hybridisierungsreaktion. Das ist einfach die Erhöhung der Chancen einer Sonde stößt ein Ziel. Jedoch mit einem enormen Menge der Sonde vorhanden sind (in Lösung oder an der Oberﬂäche einer Membran) das Hintergrundsignal wird auch enorm. Der typische Ansatz für überschüssiges Hintergrund auf einer Membran oder Folie Hybridisierung zu korrigieren ist, in einem Puffer mit niedrigem Salzgehalt waschen wie dies begünstigt die Dissoziation von ungebundener Sonde von der Membran/Folie und von nicht komplementären DNA. In Lösungen kann eine Sonde enzymatisch abgebaut werden durch Verwendung einer einsträngigen speziﬁschen Nuklease.

•

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Mechanismen der NukleinsäureHybridisierung

Hybridisierung erfolgt mit einem Verfahren genannt Keimbildung wobei die beiden separaten Nukleinsäurestränge in enge Nähe zueinander kommen. Ein Duplex-Region ausgebildet ist, wo mindestens drei Basen von einem Strang mit denen auf dem zweiten Strang ergänzen. Wenn der Rest der Stränge komplementär sind, werden die beiden Stränge anlagern oder Reißverschluss sehr schnell zusammen (Abb. 5). Der geschwindigkeitsbestimmende Schritt in der NukleinsäureHybridisierung ist die Duplex-Bildung, was wiederum erklärt, warum Sonde auf Zielkonzentrationen kritisch sind.

Abb. 5.

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•

Schritt 1: Keimbildung (langsam)

Schritt 2: Zippering (schnell)

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Abb. 6. Analysis für

Sonde Überschuss in Hybridisierungsreaktionen.

Versuchsprotokolle

Es gibt viele verschiedene Protokolle zur Verfügung, die im Internet, in Zeitschriften und in den Lehrbüchern. Wir verweisen mehrere am Ende dieses Abschnitts.

1. Konzentration der Spezies

Ziel: Die optimale Menge von Zielmolekül abhängig von der Komplexität der Zielnukleinsäure. Das ampliﬁzierte DNA beispielsweise kann in großen oder kleinen Mengen ausgedrückt worden. Daher ist der Trick, um mit ausreichender Ziel (~25 ug) beginnen und legt eine ideale Menge experimentell.

Probe: Plan mehr Sonde als erwarteten Ziel haben. Um dies zu ermitteln, führen Sie eine vom Aussterben Experiment: seriell erhöhen die Menge des Ziels durch 2-fach gegen einen festen Betrag der Sonde. Hybridisieren für eine kurze Zeitspanne und zu quantiﬁzieren die Menge der Sonde, hybridisiert hat. Solange die Signal steigt und zeigt Linearität gibt es überschüssige Sonde vorhanden ist (Abb. 6 links). Wenn die Signalpegel ab, dann die Sonde nicht im Überschuss vorliegt (Abb. 6 rechts).

Sonde hybridisierte (%)

Menge an Zielnukleinsäure (willkürliche Einheiten)

Sonde hybridisierte (%)

Menge an Zielnukleinsäure (willkürliche Einheiten)

•

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2. Länge der Sonde

Ziel ist es, die Efﬁzienz zu steigern Hybridisierung unter Minimierung Hintergrund. Je größer die Sonde, desto efﬁzienter bindet Ziel. Je kleiner der Sonde, jedoch eine immer größere Anzahl von Sondenmolekülen vorliegenden pro Einheitsmenge (ng). In den meisten Fällen Sonden reichen von 20 bis 1000 bps.

3. Salzkonzentration und Temperatur

Nukleinsäurehybridisierung erfordert sowohl Salz (einwertigen Kationen, wie Na+), um die Wirkungen der Ladung Phosphatrückgrat entgegenzuwirken, und Wärme, um nicht-denaturierenden kinetische Energie, die das langsame Keimbildungsstufe antreibt bereitzustellen. Da die Wirkungen der einzelnen Variablen beeinﬂussen die andere, zu wissen, die Thermostabilität der Sonde-Ziel-Hybrid ist hilfreich. Die Hybridisierungsrate ändert sich direkt mit der Natrium-Ionen-Konzentration zwischen 0,03 und 1,2 M. Die meisten Protokolle erfordern eine Umgebung zwischen 0,5 und 1,1 M Na+.

Situation Antwort

G+C = 45 – 55% Folgen normalen Protokoll. G+C < 45% Lower Salz und Temperatur. G+C > 55% Heben Sie Salz-und Tempera-

Der Nachweis der Lower Salz und Temperatur. Prüfziel Fehlanpassung.

Target und Sonde sind Hybridisieren in einem abgebaute in einer Formamid-basierten wässrigen Umgebung. Pufferüberlauf Lösung.

Unzulässig hohe Verwenden Sie weniger Sonde. Hintergrund. Hybridisieren bei niedrigeren

Waschen mit niedrigeren Salz/

Inkubieren mit sehr niedrigen

Verwenden Sie einen kleineren

Reinigen Sonde von

turbedingungen.

Salz/höherer Temperatur.

höherer Temperatur.

Salz; Änderung Nuklease (Lösung).

Sonde oder eine andere Sonde.

Verunreinigungen vor der Verwendung.

•

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4. Wässrige oder Denaturierung Hybridisierungspuffer

Wenn Hybridisierung ﬁndet in einer wässrigen Umgebung Salz von 0,8 bis 1,2 M Salz, kann die Tm½ (die Temperatur, bei der die Hälfte der Duplex-Moleküle unter einer gegebenen Reihe von Bedingungen dissoziieren wird) 90 °C sein, Dies ist hoch genug, um DNA, RNA und einige Proteine abzubauen. Es kann notwendig sein, Formamid als denaturierende/ Temperatur senkenden Mittel hinzuzufügen. Für jedes Prozent Formamid zu der Reaktion hinzugefügt wird die Tm½ um 0,65 °C reduziert Daher wird in 80% Formamid, können die Reaktionen in der 40 durchgeführt werden -55 °C Bereich. Auf der anderen Seite erfordert die Anwesenheit von Formamid mehr Inkubationen, da die Geschwindigkeit der Formamidbasierten Hybridisierung ist mindestens drei-mal niedriger als die des wässrigen Hybridisierung.

Protokoll

Random Priming Verfahren zur DNA-Markierung mit Fluorescein-markierten Nukleotid oder anderen markierten Nukleotiden.

Diese Methode nutzt die DNA-Polymerase an Fluorescein-11-dUTP in doppelsträngige DNA-Sonden zu integrieren. Dieses Protokoll kann auch verwendet werden, um alle markierten Nukleotiden einzubauen.

Ausrüstung

• Mikropipetten und Tipps

• Mikrozentrifuge

• 1,5 ml Reaktionsgefäße

• Cap-Sperre für Mikrozentrifugenröhrchen

• Kochendes Wasserbad

• Wasserbad auf 37 °C

•

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Reagenzien

• Deionisiertes, steriles Wasser

• EDTA, 0,5 M

• DNA-Polymerase, Klenow-Fragment, 4-5 Einheiten/µL

• Nucleotide Mix (300 uM dATP, dCTP, dGTP und

60 uM dTTP)

• Zufallsbild Nonamer (9-mer) Primer, 2,5 µg/µL in

Wasser

• Reaktionspuffer, 10X (50 mM MgCl2, 10 mM

2-Mercaptoethanol, 500 mM Tris-HCl, pH 7,5)

• Tagged Nukleotid: Fluorescein-11-dUTP

• Template DNA in Wasser (5 ng/ml)

Verfahren

1. Je 10 µL der Template-DNA plus 10 µL Wasser

in ein Mikrozentrifugenröhrchen und fest verschließen. Sichere Kappe mit einer Kappe oder einen Verschluss Büroklammer um sicherzustellen, dass die Kappe nicht öffnet, wenn der Inhalt gekocht werden.

2. Legen Sie das Rohr in den kochenden Wasserbad

für 5 Minuten.

3. Unmittelbar platzieren Röhrchen auf Eis für 5

Minuten.

4. Zentrifuge für 15 Sekunden in Mikrozentrifuge.

5. Fügen Sie die Reagenzien unten in ein frisches

Röhrchen auf Eis sind in der folgenden Reihen-

folge: a. 10 µL Nucleotide Mix b. 5 µL Tagged Nukleotid c. 5 µL Reaktionspuffer (10X) d. 5 µL Zufallsprimern e. 10 µL Boiled DNA f. 14 µL Wasser g. 1 µL DNA-Polymerase, Klenow-Fragment

6. Vorsichtig mischen und bei 37 °C für 1 Stunde.

7. Stoppen der Reaktion durch Zugabe von 2 µL EDTA.

8. Shop-Sonden bei -20 °C im Dunkeln.

•

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Protokoll

Hybridisierung mit Nylon-oder Nitrocellulose

Hybridisierung der Sonde an Nukleinsäure, die zuvor auf Nylon oder Nitrozellulose-Membranen transferiert gezielt durch Zugabe von einzelsträngigen Sonde auf die Membranen, das zuerst mit Vorhybridisierungslösung wurden inkubiert bewerkstelligt. Sowohl die Prähybridisierung und Hybridisierung Lösungen enthalten Puffern zur zufälligen Bindung der Sonde an die Filter zu verhindern.

Hinweis: Bei der Vorbereitung Prähybridisierung/ Hybridisierungslösungen, fügen Trockenreagenzien direkt an den Formamid/SSC-Lösung. Inkubieren unter Mischen bei 40-50 °C für 2 Stunden oder bis zur Auﬂösung. Lagerung bei -20 °C. SDS wird bei Raumtemperatur auszufällen, sondern bleiben in Lösung bei 37 °C.

Reagenzien und Ausrüstung

• Prähybridisierung/Hybridisierungslösung

[45% Formamid, 5X SSPE (0,9 M NaCl, 50 mM Natriumphosphatpuffer, pH 7,4, 5 mM EDTA), 0,1% SDS, 5X Denhardt-Lösung (0,1% jeweils Ficoll, Polyvinylpyrrolidon und bovinen Serum Albumin), und 100 mg/mL denaturierte Lachssperma-DNA]. Gut mischen und zu entfernen Aggregate vor dem Gebrauch.

• Hoefer Hybridisierung Flasche (n) und Kappen

• 15 mL Plastikröhrchen

• Kochendes Wasserbad

• Eimer mit Eis

• Handschuhe

• Beta Blockierung Schild

• Hoefer HB1000 Hybridisierungsofen

•

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Verfahren

1. 15 mL Prähybridisierungslösung jeder Hybridisier-

ung Flasche mit dem Blot. Entfernen Sie Luftbla-

sen zwischen dem Glas und Blot. Verschließen Sie

die Flaschen, legen die Flaschen an den Rädern

der Flaschenhalter Karussell, und schließen Sie die

Hybridisierung Backofentür.

2. Inkubieren des Blots bei 42 °C für 1 Stunde.

3. Entfernen Sie die Prähybridisierungslösung und

ersetzen mit 10 ml Hybridisierungslösung.

4. Bei Verwendung radioaktiv markierten Sonden arbe-

iten sicher von der anderen Seite eines Beta-block-

ierende Abschirmung. Pipette 1 × 106 Zählungen

pro Minute der radioaktiv markierten Sonde, oder

200 ng biotinylierter Sonde, in einem 15 ml

Plastikröhrchen. Verschließen Sie den Schlauch

mit einer Kunststoff-Kappe und stecken ein Loch

in der Spitze mit einer Spritze Nadel Druck zu

verhindern Aufbau während des Kochens.

5. Denaturieren die Sonde, indem die Proben im

kochenden Wasserbad und Heizung für 10 Minuten.

Sofortüberweisung das Rohr auf Eis für 5 Minuten

(Renaturierung zu verhindern). 5 mL Hybridisier-

ungspuffer auf die Sonde und Transfer zum Hybrid-

isierung Flasche mit dem Blot. VERMEIDEN Gießen

die Sonde direkt auf dem Blot.

6. Inkubieren im Hoefer HB1000 Hybridisierungsofen

für 6 bis 8 Stunden bei 42 bis 56 °C.

•

Waschen des Blots

• Tupperware Behälter (bemessen, um den Fleck nicht

enthalten)

• 0,1X SSC, 0,1% SDS (bis 50 °C vorgewärmt)

• 2X SSC, 0,1% SDS (bei Raumtemperatur)

• 2X SSC (Raumtemperatur)

• 0,15X SSC, 0,1% SDS (bis 50 °C vorgewärmt)

• Handschuhe

• Filterpapier

• Karton

• Plastikfolie

• Tape

Für radioaktive Sonden, müssen Sie auch:

• X-ray Filmhalter

• X-ray-Film

• Intensivierung Bildschirm

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Nicht radioaktiver Sonden

1. Wash Blots in 2X SSC, 0,1% SDS für 3 Minuten

bei Raumtemperatur (repeat one).

2. Wash Filter 0.15X SSC, 0,1% SDS für 15 Minuten

bei 50 °C (einmal wiederholen).

3. Speichern Blots in 2X SSC bei Raumtemperatur.

Radioaktive Sonden

1. Entfernen Blot aus der Hybridisierung Flasche und

Transfer zum Tupperware-Behälter.

2. Spülen kurz in 50 °C 0,1X SSC, 0,1% SDS.

3. Entfernen dieser Lösung und entsorgen radioaktive

Abfälle.

4. Waschen auslöschen drei weitere Male in der glei-

chen Lösung.

5. Nach dem letzten Waschen, trocknen Blot auf

Filterpapier für 10 Minuten. Dies ist ein guter Zeit-

punkt, um schnell vergehen Hand gehalten Radio-

isotop reader (beta-oder gamma-Zähler) über Ihre

blot eine allgemeine Vorstellung von der Belich-

tungszeit Sie für die X-ray Film benötigen bekom-

men. Hot-Blots können gegen Folie für 20 Minuten

bis 2 Stunden abgegeben werden. Andernfalls kann

die Belichtung weiterhin über Nacht (8 Stunden).

6. Band der Blot mit einem Karton Rückhalt.

7. Abdeckung mit Plastikfolie um die Blots von Fest-

halten an der X-ray-Film zu verhindern.

8. Den Karton mit den Flecken in der X-ray-Film-

Ordner.

9. In der Dunkelkammer, legen Sie ein Blatt X-ray

Film über die blot (s).

10. Ein Verstärkungsschirm auf der Oberseite der

Folie.

11. Schließen Sie den Filmhalter und festklemmen.

12. Shop bei -70 °C. Die niedrige Temperatur reduzi-

ert Streulicht und erhöht die Länge der Belichtungszeit. Setzen Sie den Blot für 20 Minuten bis 24 Stunden.

•

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Protokoll

Chemolumineszenz-Detektion: HRP-markierten, alkalische Phosphatase (AP)-Sonden oder AntikörperKonjugaten.

Ausrüstung

• Klare Kunststoff Frischhaltefolie wickeln oder

löschen transparent Klarsichthülle.

• Hoefer ULTima Pro Imaging-System mit gekühlten

CCD-Kamera.

• Pipette

Reagenzien (Chemilumineszenz)

• ECL™ (oder andere) Nachweisreagenz 1

• ECL (oder eine andere, wenn erforderlich) Nach-

weisreagenz 2

• Membrane nach Hybridisierung

Verfahren

1. Mix gleichen Volumina von Nachweisreagenzien 1

und 2.

2. Pipette die Mischung über die Oberﬂäche der

Membran und leave bei Raumtemperatur für 1 Min.

3. Befolgen Sie die Wäsche Anweisungen des Kit-

Herstellers. Entfernen Sie die letzten Waschen und

decken die Membran in Plastikfolie.

4. Bild mit dem Hoefer ULTima Pro chemilumines-

cence Imaging-System.

•

Referenzen

Ross, J (1998). Nucleic Acid Hybridization:

Essential Techniques. John Wiley and Sons, ISBN

0-471-97125-1.

Sambrook, J (2001). Molecular Cloning: A Laboratory

Manual (Third Edition). Cold Spring Harbor Laboratory Press, ISBN 0-87969-577-3.

Current Protocols in Molecular Biology (1987). John

Wiley and Sons; ISBN 0-471-50338-X.

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Bestellinformationen

Produkt Menge Kennziffer

HB1000 Hybridisierungsofen 1 HB1000-115V 115 VAC, 60 Hz

HB1000 Hybridisierungsofen 1 HB1000-230V 230 VAC, 50 Hz

Flasche, klein, 35 × 150 mm 1 HB1110X Beinhaltet: Borosilikatglas Flaschen

mit Polypropylenverschluss und Teﬂon Dichtung.

Flasche, große, 35 × 300 mm 1 HB1111X Beinhaltet: Borosilikatglas Flaschen

mit Polypropylenverschluss und Teﬂon Dichtung. Wippe 1 HB1140X Auffangwannen 2 HB1141X Carousel Kit, für kleine oder große Flaschen 1 HB1109X Verstellbare Füße 4 HB1150X Netzkabel, 115 V 1 PSCORD-115V Netzkabel, 230 V, Eurostecker Schuko 1 PSCORD-230V Sicherungen, 10 amp, 250 V, 3AG, SB, Cer 5 PSF10A-SB-3AG

•

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Hoefer, Inc.

84 October Hill Road Holliston, MA 01746

Toll Free: 1-800-227-4750 Telefon: 1-508-893-8999 Fax: 1-508-893-0176 E-mail: support@hoeferinc.com Web: www.hoeferinc.com

Hoefer ist ein eingetragenes Warenzeichen von Hoefer, Inc.

ECL ist ein Warenzeichen von GE Healthcare (früher Amersham Biosciences).

Gedruckt in den USA.