GMO 18S User Manual
GMO
荧光反应试剂
11.2
DNA模板 X
无菌去离子
水 8.8 - X
总体积
20
数据收集位点
(FAM染料/ 530nm
)
1
个循环
50oC 2 分钟 -
95oC 10 分钟 -
40
个循环
95oC 15 秒 -
60oC 60 秒
中国大陆地区
其它国家
/地区
电话： +（86）10-5802 2828
+（
852）2111 212
3
办公
时间
周一至五
：
09:00
-
17:45
09:00
-
17:30
周六： ￚ
09:00
-
13:00
GMO
GMOGMO
Hunter 18S
Hunter 18S
Hunter 18SHunter 18S
操作手冊
操作手冊
操作手冊操作手冊
产品編号
产品編号:
产品編号产品編号
: FFFF02
02----01
: :
0202
01----111
1114444RRRR
0101
111111
18S 基因序列定性荧光实时 PCR
包括 100 个扩增反应所需的 Roche
Roche LightCycler®
LightCycler®试剂
Roche Roche
LightCycler®LightCycler®
修订
修订 2222
修订修订
20
2011
11 年年年年 1111 月月月月
2020
1111
海康生命科技有限公司
海康生命科技有限公司
海康生命科技有限公司海康生命科技有限公司
请在使用前通读操作手册
1.
1. 试剂盒组成
试剂盒组成
1.1.
试剂盒组成试剂盒组成
3 x 400 µl 18S 荧光反应试剂 (18S Real-time Mastermix; -20oC 保存)
1 x 50 µl 阳性对照 (Positive Control; -20oC 保存)
保存条件
保存条件
保存条件保存条件
荧光 PCR 反应试剂及阳性对照需保存在-20oC。荧光反应试剂中的成
分对光敏感，因此建议避光保存（用铝箔纸包住试管）。
注意
注意::::
注意注意
反复冻融试剂可能降低试剂盒灵敏度。请按你检测的频密度将反应试剂
以适当体积分管保存，以避免反复冻融。
2.
2. 操作程序
操作程序
2.2.
操作程序操作程序
注意
注意::::
注意注意
使用前在冰上溶解各试剂并充分混合，不要旋涡振荡含酶的扩增反应试
剂。
反应
反应试剂
试剂
反应反应
试剂试剂
1. 在冰上解冻 PCR 反应试剂。解冻时试管需要保持避光。
2. 按照下表准备反应试剂：
反应组分
反应组分
反应组分反应组分
每个反应体积
每个反应体积 ((((µl)
每个反应体积每个反应体积
l)
l)l)
4. 将准备好的 PCR 管放置在实时 PCR 仪中，按照下面的循环条
件运行：
PCR 循环:
(于标示位点收集 FAM 读数)
3.
3. 实验数据分析
实验数据分析
3. 3.
实验数据分析实验数据分析
详细的仪器操作说明请向您的 LightCycler ® Real-Time PCR System
供应商索取。(此试剂盒用 LightCycler ® 2.0 Real-Time PCR System
研发)
计算能够充分 区分真正阳性和阴性 样品之间差别的最合适的临界值
(cut-off limit)是一个相对简单的过程。但是对每一个实验都应该小心计
算临界值。
总的来说，同一个样品的重复反应临界值都为 40，则代表被检测的样
品中目的模版为阴性。如果同一样品的重复反应得出一个临界值小于
40、另一个为 40，则不能判定结果，需要重复实验。只有当重复反应
的临界值都小于 40 时，才能说明被检测的样品中含有目的模版。
如果您需要更详细的资料，请与海康生命科技有限公司的技术支持联
系。
*Spiking
*Spiking 对照
*Spiking *Spiking
对照
对照对照
阴性的实验结果有几个可能性：1. 样本中不存在目的片段；2. 样本中
目的片段的量低于检测值；3. 样本中存有 PCR 抑制物。实验过程中
设计 spiking 对照 (spiking control) 是为了确定没有发生 PCR 抑制。
如果样本中加了阳性对照以后扩增结果的 Ct 值接近 40 （或者接近阴
性对照的 Ct 值），说明样本中存在 PCR 抑制物，那么此次阴性的实
验结果就不能作为正确的结果，需要重新开始样本 RNA 的提取和 PCR
扩增。
如果您需要详细的资料，请与海康生命科技有限公司的技术支持联系。
4444.... 技术支持
技术支持
技术支持技术支持
如果您对此试剂盒有任何技术查询，可在办公时间内致电：
注意
注意:
:
注意注意
: :
每个实时 PCR 反应都应该设置阳性对照（2 µl）和阴性对照（2 µl 水）。
每个检测样品应该设置两个 PCR 重复反应。
为了验证阴性实验结果不是由于样本中存有 PCR 抑制物而导致 PCR
呈阴性反应，我们建议实验过程中设置 spiking 对照*(spiking control)：
在测试样本中加 1 µl 的阳性对照作为 spiking 对照，同时进行 PCR 反
应。
3. 加入适当份量的 DNA 模版和双蒸水。每个 PCR 反应加入约
100-200 ng DNA 模版。（DNA 浓度应在提取后用分光光度计测
量）
注意: 建议使用与您的实时 PCR 仪器配套的 PCR 管及相关消耗
品。
工作日外的时间可以选择电话留言，或发传真、电邮与我们的技术人员
联系。
传真号码： +（86）10-5802 2500（中国大陆地区）
+（852）2111 9762（其它国家/地区）
电邮地址： technical@haikanglife.com
公司网址： http://www.haikanglife.com
5555.... 担保和责任
担保和责任
担保和责任担保和责任
海康生命科技有限公司担保当使用方遵循以下条款时，本公司生产的产品原料和工艺不存在任何质量问题：1.产
品在出货日期一年或更短时间内使用，或在产品外包装上注明的有效期内使用；2.产品储存条件完全符合技术指
导和（或）包装上的说明；3.产品使用依照使用说明进行。海康生命科技有限公司发布的操作手册是指导产品购
买者的唯一指定使用说明。每位产品购买者务必确保所获得的操作手册与其购买的产品配套。除此之外，海康生
命科技有限公司不做其它明确或隐含的担保，如其它商业性或特殊用途。
前述担保的相关条款中，海康生命科技有限公司的唯一责任是：仅当购买者发现在遵循担保条款的情况下产品存
在原料或生产工艺上的质量问题，并且及时通知海康生命科技有限公司后，公司将视情况而定，替换有缺陷的产
品，或部分或全部退购物款。海康生命科技有限公司不对购买者或产品使用人的任何因产品缺陷、间接破坏而导
致经济损失和财产损失负责。
注意：
注意：
注意：注意：
PCR技术采用罗氏公司（F. Hoffman-La Roche, Inc.）的美国专利技术。采用PCR技术需要获得许可，未经授权
不得使用罗氏公司的任何专利技术。
修订 2 (2011 年 1 月) | F02-01-1114R | 中文版本
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