GeneCopoeia A0202A User Guide

使用说明书

phi29 DNA Polymerase

产品套装编号：A0202A

GeneCopoeia

Expressway to Discovery

GeneCopoeia Inc.
19520 Amaranth Drive
Germantown, Maryland 20874
USA
Tel: [phone]
Fax: [phone]
Web: www.genecopoeia.com

TM

产品内容

phi29 DNA Polymerase
10×phi29 Buffer

产品编号

A02020A
A02021A

包装规格

100 μl（10 U/μl）
1 ml

储存条件：-20℃保存

产品概述

■

有特殊的链置换和连续合成特性

■ 来源：

表达和纯化phi29 DNA聚合酶。

反应条件

■

DTT。

活性单位

■

位。

纯

■

储存条件

■

0.5% NP-40和50%甘油，-20℃贮存。

：

phi29 DNA聚合酶具有高效的DNA合成能力

Bacillus subtilis

从

噬菌体phi29中克隆出的嗜温DNA聚合酶，利用基因重组技术，使用大肠杆菌

（3）

。

（1）

，同时具有3'→5'外切酶校读功能

：

1×Buffer：50 mM Tris-HCl (pH7.5 25℃)、10 mM MgCl

、10 mM (NH4)SO4、4 mM

2

：

30℃条件下，10分钟内使0.5 pmol的dCMP掺入酸不溶性沉淀物所需要的酶量定义为1个活性单

度

：

以考马斯蓝染色SDS-PAGE检测纯度大于90％，并无核酸内切酶、外切酶及RNase污染。

：

100 mM KCl、10 mM Tris-HCl(pH 7.4)、0.1mM EDTA、1 mM DTT、0.5% Tween 20、

（2）

，另外还具

热失活

■

：

65℃ 10 分钟失活。

■

应用：

1. 滚环复制

1) 样品准备：菌液或质粒

2) 混合样品和其他反应物

（4）

a. 菌液准备：挑取琼脂板上的菌落（尽量避免挑取到培养基）移至10 µl 的ddH

匀。

b. 质粒准备：扩增已纯化的环状质粒，稀释至10 µg/ml。

O中，混

2

反应物

样品

10×phi29 Buffer

随机引物

dNTP

总体积

3) 90度变性3分钟，冰上冷却。

4) 加入phi29 DNA Polymerase 1 ul。

5) 扩增反应：37℃，反应16小时。

6) 失活反应：65℃，反应10分钟。

7) 检测扩增效果：选用酶切位点唯一的内切酶进行酶解反应，再用琼脂糖凝胶电泳检测扩

增效果。

2. DNA测序

3. 恒温protein-primed DNA扩增

参考文献

■

1. L. Blanco and M. Salas (1984)

2. L. Blanco, A. Bernad, J. M. Lazaro, G. Martin, C. Garmendia and M
(1989)

3. C. Garmendia, A. Bernad, J. A. Esteban, L. Blanco and M. Salas (1992)

Biol. Chem.

4. P.M. Lizardi, X. Huang, Z. Zhu, P. Bray-Ward, D. C. Thomas and D. C. Ward
(1998)

5. L. Blanco, A. Bernard and M. Salas (1996) U.S. Patent No. 5,576,204.

（5）

：

J. Biol. Chem.

Nat. Genet.

267, 2594-2599.

19, 225-232.

浓度

100 pmol/μl

10 pmol/μl

Proc. Natl. Acad. Sci.

264, 8935-8940.

体积

1 μl
2 μl
1 μl

2.5 μl
19 μl

USA 81, 5325-5329.

. Salas

J.

该产品仅限于实验科学研究用，若有任何单位或个人将该产品用于临床诊断、治疗等其他国家专门规定的特殊用途，本公司概不承
担任何责任。

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