E.coli BMH71-18 mutS Service Manual
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Competent Cells
BMH71-18
mutS
使 用 说 明 书
Takara Code
D9054
包 装 量
保 存 :
制品说明
Genotype
细胞种类
细胞浓度 :
质量标准
使用方法
质粒 DNA 的转化方法
M13 phage 载体 DNA 的转染方法
注意事项
备 注
SOC 培养基的组成
V2011.09
Competent Cells BMH71-18
Control DNA（pUC119，0.1 ng/μl） 10 μl × 1 支
大肠杆菌经Ca离子处理后可摄取外源DNA（Plasmid、Phage DNA），
处于这种状态的细胞称作感受态细胞（Competent Cells）。在进行
基因重组实验时，使用感受态细胞的转化实验应用十分广泛。制作
基因文库、重组质粒体以及进行亚克隆实验时，特别是在目的基因
含量十分低的情况时，使用高效的感受态细胞十分重要。
Takara公司在Hanahan方法的基础上进行了改良，制备出了高效的
感受态细胞（都为EK1系列的宿主大肠杆菌）。
△(
lac-proAB ), thi-1, supE, mutS
proAB+ ,lacIq , lacZ
错配序列修复能力缺陷宿主
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缺陷。利用点突变进行基因改造时，选用本宿主可以保持突变的DNA
不被修复，这对于基因改造是有利的。本宿主含有F’质粒，也可作
为M13 phage载体DNA的宿主菌，制备单链DNA。此外，本宿主在
使用pUC系列质粒载体或M13 phage载体进行转化或转染时，具有α
-互补性，可以进行蓝白筛选。
1. 使用 1 ng 的质粒 DNA 进行转化时：
100 μ l Competent Cells BMH71-18
Plasmid进行转化时产生的菌落数＞1×10
pUC119 Plasmid。
2. 100 μl 的
μg/ml 的 Ampicillin L-琼脂平板培养基上过夜培养 40 hr 不产生
菌落。
1. 把感受态细胞置于冰中融化。
2. 把 100 μl 的感受态细胞移至灭菌处理的试管内。
3. 加入用于转化的 DNA（10 ng 以下）。
4. 冰中放置 30 分钟。
5. 42℃放置 45～60 秒。
6. 冰中放置 2～3 分钟。
7. 加入 37℃预温好的 SOC 培养基，使终体积为 1 ml。
8. 37℃振荡培养 1 小时（160～225 rpm）。
9. 取适量涂布琼脂平板培养基。
10. 37℃过夜培养。
:
-80℃
△M15
BMH71-18
mutS是mutS
1～2×109 Bacteria/ml
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mutS
100 μl × 10 支
215::Tn
10 ( tetr
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变异的菌株，DNA错配序列修复能力
) / F
traD
mutS
mutS
/1 ng pUC119
7
transformants/ μ g
mutS
在含有 100
36 ,
1. 与质粒 DNA 的转化方法 1.～8.操作方法相同。
2.
在 3.5 ml 的 YT-soft agar（预先 46℃～48℃保温）中，加入 200 μ
的宿主菌（
3. 取适量 1.与 2.混合，迅速铺于 L-plate 上。
4. 平板置于室温放置 10～15 分钟后，37℃过夜培养。
1. 一定要用干冰运输。
2. 不立即使用的感受态细胞请在-80℃下保存（融化后的感受态细
胞不能再冻结保存）。
3. 转化时请使用传热性能较好的试管。一般的 1.5 ml 微型离心管
也可使用，但转化效率会有所下降（此时请在使用方法 5.的 42
下放置 60 秒）。
4.
对 100 μl 的感受态细胞，用于转化的质粒 DNA 量请控制在 10
以下，并保证 DNA 溶液的体积在 20 μl 以下。否则会影响转化
效率。
5. 使用 SOC 培养基的地方也可使用 LB 培养基，但此时转化效率
会有所下降。
6. 包装中附有 0.1 ng/μl 的 pUC119 DNA，供作对照实验使用。
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2％ Bacto tryptone
0.5％ Bacto yeast extract
10 mM NaCl
2.5 mM KCl
10 mM MgSO
10 mM MgCl
20 mM Glucose
mutS
，A600=0.8～1.0）。
4
2
l
℃
ng
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