BIOTREND T11411, T11412 User Manual

引物

Oligo(dT)

12-18

0.5-1μg

random
primers

50-250ng

gene-specific

primer

2pmol

模板

total RNA

1ng-5μg

mRNA

1ng-500ng

dNTP Mix

—

0.2μM

Add to

—

12μl

5×反应缓冲液

4μl

DTT（0.1M）

2μl

Rnase 抑制剂（40U/μl）

1μl

M-MLV RT

1μl

订购信息

目录号

规格

T11411

10,000U

T11412

50,000U

M-MLV Reverse Transcriptase

产品简介

M-MLV Reverse Transcriptase（M-MLV RT）是一
种依赖于 RNA 的 DNA 聚合酶，以 RNA 为模板在
引物存在的情况下可合成 cDNA 第一条链。M-MLV
Reverse Transcriptase是来源于大肠杆菌的重组表达
蛋白，在野生型 M-MLV 的氨基酸框架的基础上，
进行了基因优化，去除了核糖核酸酶 H(RNase H)
的活性，提高了酶与模板-引物结合力，具有良好持
续合成能力并获得高产量的 cDNA。
产品特点
持续合成能力强，可获得 8kb 的 cDNA
灵敏度高，模板浓度范围 1ng-5μg
产品组成

M-MLV Reverse Transcriptase（200U/μl）
5×M-MLV Buffer

活性单位定义
1 个活性单位（U）M-MLV Reverse Transcriptase 定

使用实例

cDNA第一条链的合成：

1. 向无RNA酶的离心管中加入以下组分：

2. 65℃加热5min后，立即冰浴5min，短暂离心后

依次加入以下组分：

义为在 37℃条件下，10 分钟内将 1nmol dTTP 合成
核酸的酶量。
酶储存液

20mM Tris-HCl（pH7.5）， 100mM NaCl，0.1mM
EDTA，1Mm DTT，0.01% NP40（v/v）， 50% glycerol
（v/v）

5×反应缓冲液:

250mM Tris-HCl（pH8.3）， 375mM KCl，15mM
MgCl2，100mM DTT

质量控制

1. 每批 M-MLV Reverse Transcriptase 活性均≥

200U/μl，批间差≤5%；

2. PCR 方法检测无宿主残余 DNA；

3. 无外源 DNase、RNase 污染。

3. 用移液器轻轻混匀后于37℃保温30min；

4. 70℃加热15min以终止反应；

5. 上述产物可立即进行后续的PCR反应或者于

-20℃保存。

保存条件

-20℃保存一年。
注意事项

1. 亚精胺会抑制该酶的活性；

2. 操作过程中需避免 RNase 污染；

3. 为减少对产品稳定性的影响，建议分装使用。