Agtc SARS N User Manual

本元正阳基因技术股份有限公司

863 计划生物领域病毒基因载体研发基地

SARS N 抗原 ELISA 检测试剂盒使用说明书

前言：

N 蛋白（nucleocapsid protein 核衣壳蛋白）是冠状病毒中一种重要的结构蛋白。在冠状病

毒颗粒中，N 蛋白处于病毒颗粒的核心部分，以与基因组 RNA 结合的形式存在。N 蛋白在病

毒的包装中起着重要的作用。病毒 RNA 在细胞质中复制完成以后和 N 蛋白结合，结合产物可

以被 M 蛋白（small membrane protein）识别并被包装到病毒颗粒中。已知 SARS-CoV 病毒的

测序结果分析表明该基因保守性很强，极少发生突变。研究表明大多数 SARS 病毒感染者血

清中都存在 N 蛋白。目前对动物冠状病毒感染的检测也是采用对 N 蛋白的检测。

本试剂盒采用双抗体夹心法检测人或动物血清中的 SARS 病毒 N 蛋白，通过检测 N 蛋白

的存在与否来直接判断被检者是否被感染 SARS 病毒。其原理是用抗 SARS 病毒 N 蛋白单克

隆抗体包被酶标板，形成固相抗体，加入待检标本（被检标本含有 SARS 病毒），N 蛋白与 N

蛋白单克隆抗体结合形成抗原—抗体复合物，再加入抗 SARS 病毒 N 蛋白的多克隆抗体使之

与前抗原—抗体复合物结合，再加入第二抗体即酶标抗体，当加入与酶标抗体的酶所对应的

底物时，酶催化底物显色，根据颜色的有无和深浅来对 SARS 病毒 N 蛋白进行定性定量分析。

应用范围：

本产品适用于实验室检测人或动物血清中 SARS 病毒 N 蛋白。
试剂盒组成：

① 预包被抗 SARS N 蛋白单克隆抗体酶标板 1块
② 抗 SARS 病毒 N 蛋白多克隆抗体 (1：5000～
③ 酶标抗体 (1：12000) 1管
④ SARS N 蛋白标准品（500ug/ml） 1管
⑤ PBS-T 洗液（20×） 1瓶
⑥ 样品/抗体稀释液（10×） 1瓶

10000) 1 管

⑦ 底物溶液(TMB)A,B 各 1 瓶
⑧ 终止液 1瓶

检测方法：

1 加样：SARS N 蛋白标准品用 1×稀释液稀释成如下浓度梯度：50、25、12.5、6.25、3.125、

1.56、0.78、0ng/ml（由于稀释倍数高，请通过多步稀释达到稀释目的，确保稀释的准确）；供

北京经济技术开发区永昌中路 6 号

TEL：[phone] FAX：[phone] Web: www.agtc.com.cn

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试样品根据需要适当用 1×稀释液稀释。100µl /孔，置 37℃孵育 1h。洗板三次。

2 加抗 SARS 病毒 N 蛋白多克隆抗体：用 1×稀释液 1：5000~10000 稀释多抗，100µl/孔，置

37℃孵育 1h，洗板三次。

3 加酶标抗体：用 1×稀释液 1：12000 稀释酶标抗体，100µl /孔，置 37℃孵育 1h，洗板三次。

4 显色：底物溶液（TMB）A、B 按 1：1 比例混合后为底物使用液。每孔加底物使用液 100µl，

置室温显色 5~10min(可根据显色情况而定)。

5 终止：显色适度，每孔加终止液 50ul 终止显色反应。

6 测 OD 值： 用酶联免疫检测仪在波长 450nm 下进行比色测定，记录 OD 值。

7 结果计算：利用 CurveExpert1.3 或其他软件绘制标准曲线，根据标准曲线和样品的吸光度

计算待测样品的 SARS N 蛋白浓度。

注意事项：

1 本试剂盒仅限于实验室检测人或动物血清中 SARS 病毒 N 蛋白。

2 使用前，请先将溶液 平衡至室温。如浓缩液 有结晶，待结晶溶解完 全后使用。浓缩液均用

双蒸水稀释。请将瓶中内容物混匀，启用后应尽快用完。

3 由于 SARS N 标准蛋白、多克隆抗体和酶标抗体体积较少， 使用前请先于低温离心机短暂

离心。

4 试剂盒中抗体的最佳稀释度，需要根据各实验室不同条件自行调整。

5 用微量取样器加所有组分，洗板时，每孔注液量应不少于 200ul，洗板次数不少于 3 次，浸

泡时间不短于 30 秒，每次洗板后尽量拍干。

6 用底物溶液显色温度 过高或时间过长，可能 会出现非特异背景。建 议室温显色，显色时间

最长不宜超过 20 分钟。用终止液终止后请尽快完成比色测定。

7 本公司试剂盒勿与其他公司试剂盒混合使用，如出现异常情况不负责任。

保存条件：

① ② ③ ④ 贮于—20℃， ⑤ ⑥ ⑦ ⑧ 贮于 2－8℃ 有效期：6 个月

生产批号：见包装盒 生产日期：见包装

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