Bond™ Ready-to-Use Primary Antibody
Melanoma Marker (HMB45)
Catalog No: PA0027
Leica Biosystems Newcastle Ltd
Balliol Business Park West
Benton Lane
Newcastle Upon Tyne NE12 8EW
United Kingdom EN FR IT DE ES PT SV EL DA
( +44 191 215 4242
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PA0027
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Bond™ Ready-To-Use Primary Antibody
Melanoma Marker (HMB45)
Catalog No: PA0027
Intended Use
This reagent is for in vitro diagnostic use.
Melanoma Marker (HMB45) monoclonal antibody is intended to be used for the qualitative identification by light microscopy of human HMB45 antigen in formalin-fixed, paraffin-embedded tissue by immunohistochemical staining using an automated Bond system.
The clinical interpretation of any staining or its absence should be complemented by morphological studies and proper controls and should be evaluated within the context of the patient’s clinical history and other diagnostic tests by a qualified pathologist.
Summary and Explanation
Immunohistochemical techniques can be used to demonstrate the presence of antigens in tissue and cells (see “Using Bond Reagents” in your Bond user documentation). Melanoma Marker (HMB45) primary antibody is a ready-to-use product that is recommended for use with either the Bond Polymer Refine Detection or Bond Polymer Refine Red Detection. The demonstration of human HMB45 antigen is achieved by first allowing the binding of Melanoma Marker (HMB45) to the section, and then visualizing this binding using the reagents provided in the detection system. The use of these products, in combination with an automated Bond system, reduces the possibility of human error and inherent variability resulting from individual reagent dilution, manual pipetting and reagent application.
Reagents Provided
Melanoma Marker (HMB45) is a mouse anti-human monoclonal antibody produced as a tissue culture supernatant, and supplied in Tris buffered saline with carrier protein, containing 0.35% ProClin™ 950 as a preservative.
Total volume = 7 mL.
Clone
HMB45.
Immunogen
Extract of pigmented melanoma metastases from lymph nodes.
Specificity
Human HMB45 antigen.
Subclass
IgG1, Kappa.
Total Protein Concentration
Approx 10 mg/mL.
Antibody Concentration
Greater than or equal to 1.3 mg/L as determined by ELISA.
Dilution and Mixing
Melanoma Marker (HMB45) primary antibody is optimally diluted for use on the automated Bond system. Reconstitution, mixing, dilution or titration of this reagent is not required.
Materials Required But Not Provided
Refer to “Using Bond Reagents” in your Bond user documentation for a complete list of materials required for specimen treatment and immunohistochemical staining using the automated Bond system.
Storage and Stability
Store at 2–8 °C. Do not use after the expiration date indicated on the container label.
The signs indicating contamination and/or instability of Melanoma Marker (HMB45) are: turbidity of the solution, odor development, and presence of precipitate.
Return to 2–8 °C immediately after use.
Storage conditions other than those specified above must be verified by the user1.
Precautions
•This product is intended for in vitro diagnostic use.
•The concentration of ProClin™ 950 is 0.35%. It contains the active ingredient 2-methyl-4-isothiazolin-3-one, and may cause irritation to the skin, eyes, mucous membranes and upper respiratory tract. Wear disposable gloves when handling reagents.
•To obtain a copy of the Material Safety Data Sheet contact your local distributor or regional office of Leica Biosystems, or alternatively, visit the Leica Biosystems Web site, www.LeicaBiosystems.com
•Specimens, before and after fixation, and all materials exposed to them, should be handled as if capable of transmitting infection and disposed of with proper precautions2. Never pipette reagents by mouth and avoid contacting the skin and mucous membranes with reagents or specimens. If reagents or specimens come in contact with sensitive areas, wash with copious amounts of water. Seek medical advice.
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•Consult Federal, State or local regulations for disposal of any potentially toxic components.
•Minimize microbial contamination of reagents or an increase in non-specific staining may occur.
•Retrieval, incubation times or temperatures other than those specified may give erroneous results. Any such change must be validated by the user.
Instructions for Use
Melanoma Marker (HMB45) primary antibody is recommended for use on an automated Bond system in combination with either Bond Polymer Refine Detection (DS9800) or Bond Polymer Refine Red Detection (DS9390). The recommended staining protocols for Melanoma Marker (HMB45) primary antibody are IHC Protocol F when using Bond Polymer Refine Detection and IHC Protocol J when using Bond Polymer Refine Red Detection. Enzyme pretreatment is recommended using Bond Enzyme 1 for 5 minutes.
Results Expected
Normal Tissues
Melanoma Marker (HMB45) showed positive granular, cytoplasmic staining in melanocytes in the basal layer of epidermis. All other normal tissues were negative. (Total number of cases stained = 99).
Tumor Tissues
Melanoma Marker (HMB45) stained 13/13 malignant melanomas. No staining was observed in a variety of other tumors. (Total number of cases stained = 101).
Melanoma Marker (HMB45) is recommended for use as part of a panel of antibodies for the diagnosis of melanomas.
Product Specific Limitations
Melanoma Marker (HMB45) is recommended for use with either Bond Polymer Refine Detection or Bond Polymer Refine Red Detection and Bond ancillary reagents. Users who deviate from recommended test procedures must accept responsibility for interpretation
of patient results under these circumstances. The protocol times may vary, due to variation in tissue fixation and the effectiveness of antigen enhancement, and must be determined empirically. Negative reagent controls should be used when optimizing retrieval conditions and protocol times.
Troubleshooting
Refer to reference 3 for remedial action.
Contact your local distributor or the regional office of Leica Biosystems to report unusual staining.
Further Information
Further information on immunostaining with Bond reagents, under the headings Principle of the Procedure, Materials Required, Specimen Preparation, Quality Control, Assay Verification, Interpretation of Staining, Key to Symbols on Labels, and General Limitations can be found in “Using Bond Reagents” in your Bond user documentation.
Bibliography
1.Clinical Laboratory Improvement Amendments of 1988, Final Rule 57 FR 7163 February 28, 1992.
2.Villanova PA. National Committee for Clinical Laboratory Standards (NCCLS). Protection of laboratory workers from infectious diseases transmitted by blood and tissue; proposed guideline. 1991; 7(9). Order code M29-P.
3.Bancroft JD and Stevens A. Theory and Practice of Histological Techniques. 4th Edition. Churchill Livingstone, New York. 1996.
4.Kapur RP, Bigler SA, Skelly M, et al. Anti-melanoma monoclonal antibody HMB45 identifies an oncofetal glycoconjugate associated with immature Melanoma Markers. The Journal of Histochemistry and Cytochemistry. 1992; 40(2):207-212.
5.Gown AM, Vogel AM, Hoak D, et al. Monoclonal antibodies specific for melanocytic tumours distinguish subpopulations of melanocytes. American Journal of Pathology. 1986;123(2):195-203.
ProClin™ 950 is a trademark of Supelco, a part of Sigma-Aldrich Corporation.
Date of Issue
09 May 2013
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Anticorps Primaire Prêt À L’Emploi Bond™
Melanoma Marker (HMB45)
Référence: PA0027
Utilisation Prévue
Ce réactif est destiné au diagnostic in vitro.
L’anticorps monoclonal Melanoma Marker (HMB45) est destiné à l’identification qualitative par microscopie optique de l’antigène humain HMB45 dans des tissus fixés au formol et enrobés de paraffine par coloration immunohistochimique à partir d’un système Bond automatisé.
L’interprétation clinique de tout marquage ou de son absence doit être complétée par des études morphologiques utilisant des contrôles appropriés et évaluée dans le contexte des antécédents cliniques du patient et des autres tests diagnostiques par un pathologiste qualifié.
Résumé et Explications
Les techniques immunohistochimiques peuvent être utilisées pour la mise en évidence d’antigènes sur tissus ou cellules (voir “Utilisation des réactifs Bond” dans votre manuel d’utilisation Bond). L’anticorps primaire Melanoma Marker (HMB45) est un produit prêt à l’emploi recommandé pour être utilisé soit avec le Bond Polymer Refine Detection ou le Bond Polymer Refine Red Detection. La démonstration de l’antigène humain HMB45 s’effectue d’abord par la liaison du Melanoma Marker (HMB45) à la coupe, et par la visualisation de cette liaison via les réactifs fournis dans le système de détection. L’utilisation de ces produits, en association avec l’automate Bond, réduit l’éventualité d’une erreur humaine et la variabilité intrinsèque résultant de la dilution, du pipetage manuel et de l’application à titre individuel des réactifs.
Réactifs Fournis
Melanoma Marker (HMB45) est un anticorps monoclonal anti-humain de souris, produit par surnageant de culture de tissu et conditionné dans du tampon salin Tris contenant une protéine de transport et 0,35 % de ProClin™ 950 (conservateur).
Volume total = 7 ml.
Clone
HMB45.
Immunogène
Extrait de métastases de mélanomes pigmentés des noeuds lymphoïdes.
Spécificité
Antigène humain HMB45.
Sous-classe
IgG1, Kappa.
Concentration Totale en Protéine
Environ 10 mg/ml.
Concentration en Anticorps
Supérieure ou égale à 1,3 mg/l, déterminée par ELISA.
Dilution et Mélange
L’anticorps primaire Melanoma Marker (HMB45) est à dilution optimale pour utilisation dans l’automate Bond. Reconstitution, mélange, dilution ou titration de ce réactif non nécessaire.
Matériel Nécessaire Mais Non Fourni
Voir “Utilisation des réactifs Bond” dans votre manuel d’utilisation Bond pour obtenir la liste complète du matériel nécessaire au traitement des échantillons et au marquage immunohistochimique avec le système Bond.
Conservation et Stabilité
Conserver à une température comprise entre 2–8 °C. Ne pas utiliser après la date de péremption indiquée sur l’étiquette du récipient.
Les signes indicateurs d’une contamination et/ou d’une instabilité de Melanoma Marker (HMB45) sont les suivants : une turbidité de la solution, la formation d’odeurs et la présence d’un précipité.
Remettre à 2–8 °C immédiatement après usage.
Des conditions de stockage différentes de celles ci-dessus doivent être contrôlées par l’utilisateur1.
Précautions
•Ce produit est conçu pour le diagnostic in vitro.
•La concentration en ProClin™ 950 est de 0,35%. Contient du 2-méthyl-4-isothiazoline-3-one (ingrédient actif) et peut entraîner des irritations de la peau, des yeux, des muqueuses et des voies aériennes supérieures. Porter des gants jetables lors de la manipulation des réactifs.
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•Pour obtenir un exemplaire de la fiche technique des substances dangereuses (Material Safety Data Sheet), contactez votre distributeur local ou le bureau régional de Leica Biosystems, ou consultez le site Web de Leica Biosystems : www.LeicaBiosystems.com
•Les échantillons, avant et après fixation, et tous les matériels ayant été en contact avec eux, doivent être manipulés comme s’ils étaient à risque infectieux et éliminés avec les précautions adéquates2. Ne jamais pipeter les réactifs à la bouche et éviter le contact de la peau et des muqueuses avec les réactifs ou les échantillons. Si des réactifs ou des échantillons entrent en contact avec des zones sensibles, rincer abondamment à l’eau. Consultez un médecin.
•Renseignez-vous sur les règlements fédéraux, nationaux et locaux pour l’élimination des composés potentiellement toxiques.
•Éviter une contamination microbienne des réactifs, qui peut favoriser un marquage non spécifique.
•Des durées ou des températures de démasquage ou d’incubation autres que celles spécifiées peuvent entraîner des résultats erronés. Tout changement doit être validé par l’utilisateur.
Mode d’Emploi
L’anticorps primaire Melanoma Marker (HMB45) est recommandé pour être utilisé sur un système Bond automatisé en combinaison avec le Bond Polymer Refine Detection (DS9800) ou le Bond Polymer Refine Red Detection (DS9390). Les protocoles de coloration recommandés pour l’anticorps primaire Melanoma Marker (HMB45) sont l’IHC Protocol F pour l’utilisation du Bond Polymer Refine Detection et l’IHC Protocol J pour l’utilisation du Bond Polymer Refine Red Detection. Un prétraitement enzymatique est recommandé en utilisant Bond Enzyme 1 pendant 5 minutes.
Résultats Attendus
Tissus Sains
Le Melanoma Marker (HMB45) a présenté une coloration cytoplasmique granulaire positive dans les mélanocytes de la couche basale de l’épiderme. Tous les autres tissus normaux étaient négatifs. (Nombre total de cas colorés = 99).
Tissus Tumoraux
Le Melanoma Marker (HMB45) a coloré 13/13 mélanomes malins. Aucune coloration n’a été observée dans les autres tumeurs. (Nombre total de cas colorés = 101).
Melanoma Marker (HMB45) est recommandé pour être utilisé en tant que composant d’un panel d’anticorps pour le diagnostic de mélanomes.
Limites Spécifiques du Produit
Melanoma Marker (HMB45) est recommandé pour être utilisé soit avec le Bond Polymer Refine Detection ou le Bond Polymer Refine Red Detection et les réactifs auxiliaires Bond. Les utilisateurs qui s’écartent des procédures recommandées prennent la responsabilité de l’interprétation des résultats des patients dans ces conditions. Les durées du protocole peuvent varier, en raison des variations de fixation des tissus et de l’efficacité de la facilitation de l’antigène, et doivent être déterminées empiriquement. Des contrôles réactif négatifs doivent être testés lors de l’optimisation des conditions de démasquage et des durées du protocole.
Identification des Problèmes
Voir la référence 3 pour connaître les mesures correctives.
Prenez contact avec votre distributeur local ou avec le bureau régional de Leica Biosystems pour signaler tout marquage inattendu.
Informations Complémentaires
Des informations complémentaires sur l’immunomarquage avec les réactifs Bond, les principes de la méthode, le matériel nécessaire, la préparation des échantillons, le contrôle qualité, les vérifications d’analyse, l’interprétation du marquage, les légendes et symboles sur les étiquettes et les limites générales, peuvent être obtenues dans “Utilisation des réactifs Bond” dans votre manuel d’utilisation Bond.
Bibliographie
1.Clinical Laboratory Improvement Amendments of 1988, Final Rule 57 FR 7163 February 28, 1992.
2.Villanova PA. National Committee for Clinical Laboratory Standards (NCCLS). Protection of laboratory workers from infectious diseases transmitted by blood and tissue; proposed guideline. 1991; 7(9). Order code M29-P.
3.Bancroft JD and Stevens A. Theory and Practice of Histological Techniques. 4th Edition. Churchill Livingstone, New York. 1996.
4.Kapur RP, Bigler SA, Skelly M, et al. Anti-melanoma monoclonal antibody HMB45 identifies an oncofetal glycoconjugate associated with immature Melanoma Markers. The Journal of Histochemistry and Cytochemistry. 1992; 40(2):207-212.
5.Gown AM, Vogel AM, Hoak D, et al. Monoclonal antibodies specific for melanocytic tumours distinguish subpopulations of melanocytes. American Journal of Pathology. 1986;123(2):195-203.
ProClin™ 950 est une marque commerciale de Supelco, membre du groupe Sigma-Aldrich Corporation.
Date de Publication
09 mai 2013
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Anticorpo Primario Pronto All’Uso Bond™
Melanoma Marker (HMB45)
N. catalogo: PA0027
Uso previsto
Reagente per uso diagnostico in vitro.
L’anticorpo monoclonale Melanoma Marker (HMB45) deve essere utilizzato per l’identificazione qualitativa tramite microscopio ottico dell’antigene umano HMB45 in tessuto fissato in formalina, incluso in paraffina tramite colorazione immunoistochimica con un sistema Bond automatizzato.
L’interpretazione clinica di un’eventuale colorazione, o della sua assenza, deve avvalersi di studi morfologici e di opportuni controlli ed essere effettuata da patologi qualificati, nel contesto dell’anamnesi clinica del paziente e di altri test diagnostici.
Sommario e spiegazione
Grazie alle tecniche di immunoistochimica è possibile dimostrare la presenza di antigeni nel tessuto e nelle cellule (vedere “Uso dei reagenti Bond” nella documentazione per l’utente Bond). L’anticorpo primario Melanoma Marker (HMB45) è un prodotto pronto per l’uso che si raccomanda di utilizzare con Bond Polymer Refine Detection o Bond Polymer Refine Red Detection. La dimostrazione dell’antigene umano HMB45 si ottiene in primo luogo consentendo il legame del Melanoma Marker (HMB45) con la sezione, e quindi visualizzando il legame stesso per mezzo dei reagenti forniti nel sistema di rilevazione. L’impiego di questi prodotti, insieme al sistema automatizzato Bond, riduce la possibilità di un errore umano e la relativa variabilità che deriva dalla diluizione individuale del reagente e dal pipettamento e dall’applicazione del reagente eseguiti manualmente.
Reagenti forniti
Il Melanoma Marker (HMB45) è un anticorpo monoclonale murino anti-umano prodotto come surnatante di coltura tissutale e fornito in soluzione salina tamponata Tris con proteina carrier, contenente 0,35% di ProClin™ 950 come conservante.
Volume totale = 7 ml.
Clone
HMB45.
Immunogeno
Estratto di metastasi di melanoma pigmentato da linfonodi.
Specificità
Antigene umano HMB45.
Sottoclasse
IgG1, Kappa.
Concentrazione proteica totale
Circa 10 mg/ml.
Concentrazione dell’Anticorpo
Uguale o superiore a 1,3 mg/l, determinata mediante ELISA.
Diluizione e miscelazione
La diluizione dell’anticorpo primario Melanoma Marker (HMB45) è stata ottimizzata per l’uso con il sistema Bond. Non è necessario ricostituire, miscelare, diluire o titolare il reagente.
Materiale necessario non fornito
Per un elenco completo del materiale necessario per il trattamento del campione e la colorazione immunoistochimica con il sistema Bond, consultare l’”Uso dei reagenti Bond” nella documentazione per l’utente Bond.
Conservazione e stabilità
Conservare a 2–8 °C. Non utilizzare dopo la data di scadenza indicata sull’etichetta del contenitore.
I segni di contaminazione e/o instabilità del Melanoma Marker (HMB45) sono: torbidità della soluzione, formazione di odori e presenza di un precipitato.
Dopo l’uso riportare immediatamente a 2–8 °C.
L’utente deve verificare eventuali condizioni di conservazione diverse da quelle specificate1.
Precauzioni
•Il prodotto è destinato all’uso diagnostico in vitro.
•La concentrazione del ProClin™ 950 è 0,35%. Esso contiene il principio attivo 2-metil-4-isotiazolin-3-one e può causare irritazione alla cute, agli occhi, alle mucose e alle alte vie respiratorie. Per la manipolazione dei reagenti usare guanti monouso.
•Una copia della Scheda di sicurezza può essere richiesta al distributore locale o all’ufficio di zona di Leica Biosystems o, in alternativa, visitando il sito di Leica Biosystems www.LeicaBiosystems.com
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•I campioni, prima e dopo la fissazione, e tutti i materiali esposti ad essi devono essere manipolati come potenziali vettori di infezione e smaltiti con le opportune precauzioni2. Non pipettare mai i reagenti con la bocca ed evitare il contatto dei reagenti e dei campioni con la cute e le mucose. Se un reagente o un campione viene a contatto con zone sensibili, lavare abbondantemente con acqua.
Consultare un medico.
•Consultare la normativa nazionale, regionale o locale per lo smaltimento dei componenti potenzialmente tossici.
•Ridurre al minimo la contaminazione microbica dei reagenti per non incrementare il rischio di una colorazione non specifica.
•Tempi o temperature di incubazione o di riconoscimento diversi da quelli specificati possono fornire risultati erronei. Ogni eventuale modifica deve essere convalidata dall’utente.
Istruzioni per l’uso
Si raccomanda di utilizzare l’anticorpo primario Melanoma Marker (HMB45) su un sistema Bond automatizzato in associazione con Bond Polymer Refine Detection (DS9800) o Bond Polymer Refine Red Detection (DS9390). I protocolli di colorazione raccomandati per l’anticorpo primario Melanoma Marker (HMB45) sono IHC Protocol F se si utilizza Bond Polymer Refine Detection e IHC Protocol J se si utilizza Bond Polymer Refine Red Detection. Si consiglia il pretrattamento enzimatico con il Bond Enzyme 1 per 5 minuti.
Risultati attesi
Tessuti normali
Il Melanoma Marker (HMB45) ha mostrato colorazione citoplasmatica, granulare positiva in melanociti nello strato basale dell’epidermide. Tutti i tessuti normali erano negativi. (Numero totale di casi colorati = 99).
Tessuti tumorali
Il Melanoma Marker (HMB45) ha colorato melanomi maligni (13/13). Non si è osservata nessuna colorazione in una serie di altri tumori. (Numero totale di casi colorati = 101).
Si raccomanda di utilizzare il Melanoma Marker (HMB45) come parte di un pannello di anticorpi per la diagnosi di melanomi.
Limitazioni specifiche del prodotto
Si raccomanda di utilizzare il Melanoma Marker (HMB45) con Bond Polymer Refine Detection o Bond Polymer Refine Red Detection e reagenti sussidiari Bond. Gli utenti che modificano le procedure raccomandate devono assumersi la responsabilità dell’interpretazione dei risultati relativi ai pazienti in tali circostanze. I tempi del protocollo possono variare in base alle variazioni nella fissazione del tessuto e nell’efficienza del potenziamento dell’antigene e devono essere definiti in modo empirico. Nell’ottimizzazione delle condizioni di riconoscimento e dei tempi del protocollo si devono impiegare dei controlli negativi del reagente.
Soluzione problemi
Per i provvedimenti consultare il riferimento bibliografico n. 3.
Per riferire una colorazione inusuale rivolgersi al distributore locale o all’ufficio di zona di Leica Biosystems.
Ulteriori informazioni
Ulteriori informazioni sull’immunocolorazione con i reagenti Bond si trovano in “Uso dei reagenti Bond” nella documentazione per l’utente Bond, ai titoli Principio della procedura, Materiali necessari, Preparazione del campione, Controllo di qualità, Verifica del saggio, Interpretazione della colorazione, Leggenda dei simboli e delle etichette e Limitazioni generali.
Bibliografia
1.Clinical Laboratory Improvement Amendments of 1988, Final Rule 57 FR 7163 February 28, 1992.
2.Villanova PA. National Committee for Clinical Laboratory Standards (NCCLS). Protection of laboratory workers from infectious diseases transmitted by blood and tissue; proposed guideline. 1991; 7(9). Order code M29-P.
3.Bancroft JD and Stevens A. Theory and Practice of Histological Techniques. 4th Edition. Churchill Livingstone, New York. 1996.
4.Kapur RP, Bigler SA, Skelly M, et al. Anti-melanoma monoclonal antibody HMB45 identifies an oncofetal glycoconjugate associated with immature Melanoma Markers. The Journal of Histochemistry and Cytochemistry. 1992; 40(2):207-212.
5.Gown AM, Vogel AM, Hoak D, et al. Monoclonal antibodies specific for melanocytic tumours distinguish subpopulations of melanocytes. American Journal of Pathology. 1986;123(2):195-203.
ProClin™ 950 è un marchio di fabbrica di Supelco, società del gruppo Sigma-Aldrich.
Data di pubblicazione
09 maggio 2013
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